CC BY
84
ВОЗМ ОЖНОСТИ ИСП ОЛЬЗОВАН ИЯ ФИТОСБ ОРА «АЛФ ИТ» В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ
Т.Г. Разина, Е.П. Зуева, Е.Н. Амосова, С.Г. Крылова, С.В. Корепанов
ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН
В экспериментах на мышах с перевиваемыми опухолями показана возможность повышения противоопухолевой активности циклофосфана и снижение его токсичности фитопрепаратом «Алфиг».
THE POSSIBILITY OF HERB DRUG «ALPHYT» USING IN COMPLEX THERAPY OF NEWBORN TUMOURS
T.G. Razina, E.P. Zueva, E.N. Amosova, S.G. Krylova, S.V. Korepanov
Institute of Pharmacology of Tomsk Scientific Centre of Sibirian Branch, RAMS
In experiments in mice with transplantable tumours was shown the possibility of antitumor cyclosphosphamide effects increasing and simultaneously decreasing its toxicity by original medcine herb drug «Alphyt».
Применение противоопухолевых препаратов для лечения онкологических больных часто является единственным методом воздействия на распространенный опухолевый процесс. Однако токсичность в отношении здоровых клеток организма и быстрое развитие химиорезистентности опухоли в процессе лечения лимитируют использование цитостатиков. Кроме того, применение современных антибластомных средств, являющихся мощным стрессорным фактором, ещё более усугубляет уже существующее истощение системы резистентности организма, вследствие чего активируется процесс метастазирования [4,10]. Присоединяются новые и усугубляются имеющиеся сопутствующие заболевания. Поэтому актуальным является поиск препаратов-корректоров цитостати-ческой терапии опухолей [7].
Растительные препараты, обладающие широким спектром действия, в значительной степени определяемым большим набором биологически активных веществ с высокой биодоступностью, могут занять свое полноправное место в схеме комплексного лечения онкологических больных [8]. Несомненный интерес в этом плане вызывают комплексный реабилитационный фитосбор «Алфит-1» - утренний (содержащий родиолу розовую, чагу, солодку голую, крапиву двудомную), обладающий мягким тонизирующим действием, и «Алфит-2» - вечерний (содержащий пион уклоняющийся, чагу, солодку голую, крапиву двудомную), оказывающий седативный эффект. Они разработаны научно-практическим объединением «Алтайский краевой фитоцентр» [5].
Цель настоящей работы - изучение возможности использования реабилитационного фитосбора «Алфит» в комплексной терапии злокачественных новообразований.
Материал и методы
Эксперименты проведены на 68 беспородных и 80 линии СВА мышах-самках с аденокарциномой Эрлиха (АКЭ) и 40 мышах-самцах линии С57В1/6 с карциномой легких Льюис (3LL) массой 20 г в возрасте 3 мес, содержащихся на обычном режиме вивария. Перевивку опухолей проводили согласно общепринятым методикам [9].
Лечение растительным препаратом «Алфит» (фармзавод «Г ален», г. Барнаул) начинали через 24 ч после перевивки АКЭ и через 96 ч после имплантации 3LL, продолжая в течение 8 и 14 сут соответственно. Фитосбор вводили зондом в желудок, растворяя в дистиллированной воде: «Алфит-1» - утром, «Алфит-2» - вечером, суммарные дозы составляли 100, 200 и 300 мг/кг и состояли из равных частей каждого. Для проведения цитостатической терапии использовали циклофосфан (ЦФ): мышам с АКЭ вводили через 72 ч после перевивки однократно внутримышечно в дозе 150 мг/кг, мышам с 3LL - на 12-е сут после трансплантации бластомы однократно внутрибрюшинно в той же дозе. Контрольные животные получали эк-виобъемные количества растворителя в дни введения препаратов.
В конце экспериментов мышей умерщвляли, соблюдая «Правила работы с лабораторными животными». Определяли объем и массу первичной опухоли, подсчитывали количество и площадь метастазов в легких, вычисляли торможение роста опухоли (ТРО), частоту метастазирования, индекс ингибирования метастазирования (ИИМ), количество погибших животных в процентах. Кроме того, после введения ЦФ мышам с АКЭ на 3-и сут и через 48 ч мышам с 3ЬЬ проводили подсчет гемограмм, количества лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов в периферической крови. Результаты обрабатывали с применением непараметрических критериев Вилкоксона - Манна - Уитни и точного метода Фишера [6].
Результаты и обсуждение
Применение ЦФ в выбранном режиме для лечения мышей с АКЭ привело к достоверному (р<0,05) торможению роста опухоли - объем опухолевых клеток уменьшился в 2 раза по сравнению с этим показателем в контроле. Совместное использование цитостатика с «Алфитом» в дозе 200 мг/кг увеличило противоопухолевый эффект лечебных воздействий: торможение роста опухоли возросло с 49 % в группе мышей, получавших ЦФ, до 69 % в группе комбинированного лечения (табл. 1). Сочетание ЦФ с остальными изучаемыми дозами «Алфита» лишь повысило уровень достоверности противоопухолевого действия цитостатика. При изолированном введении «Алфита» мышам с АКЭ в дозе 100 мг/кг достоверно (р<0,05) уменьшился
объем опухолевых клеток (в 1,3 раза) по сравнению с контролем, торможение роста опухоли составило 25 %. В группах животных, получавших «Алфит» в остальных изучаемых дозах, наблюдалась тенденция к уменьшению объема опухолевых клеток.
Следует подчеркнуть, что к концу эксперимента погибло 70 % мышей, леченных только цитостатиком, что свидетельствует о высоком токсическом действии ЦФ. Если же в схему лечения включали «Алфит», гибель животных наблюдалась лишь в 10-20 % случаев и достоверно отличалась от показателей соответствующего контроля (табл. 1).
Во второй серии опытов на беспородных мышах с АКЭ, проведенных в аналогичных условиях, подтверждено достоверное (р=0,01) противоопухолевое действие «Алфита» в дозе 100 мг/кг (ТРО=22 %), а также выявлено усиление антибластомного эффекта цитостатика, ТРО увеличилось с 10 % в группе ЦФ до 25 % в группе комбинированного лечения. На 3-и сут после введения ЦФ общее количество лейкоцитов в периферической крови мышей, получавших только цитостатик, снизилось в 9,6 раза по сравнению с контролем, преимущественно за счет резкого уменьшения числа сегментоядерных нейтрофилов (в 6,9 раза) и лимфоцитов (в 13,3 раза). В то же время при использовании цитостатика совместно с «Алфитом» общее количество лейкоцитов было достоверно больше, причем этот показатель повышался с увеличением дозы «Алфита». Анализ формулы крови показал, что во всех группах комбинированного лечения количество
Таблица 1
Влияние «Алфита» и циклофосфаиа (ЦФ) на развитие аденокарциномы Эрлиха у мышей-самок линии
СВА
Группа наблюдения (количество животных) Доза, мг/кг /интервал (ч)х число введений Объем асцита (Х±ш), мл Объем опухолевых клеток (Х±т), мл Торможение роста опухоли, % Число погибших мышей, %
1.Контроль (10) 6,40±0,54 1,97±0,18 - 0
2. ЦФ (3) 150 х 1 3,17±0,69 1-2р<0,05 1,0±0,2 1-2р<0,05 49 70 1-2р<0,001
3. ЦФ + Алфит (9) 150 х 1 100/24 х 7 3,98±0,44 1-3р<0,05 0,94±0,12 1-3р<0,01 52 10 2-3р<0,044
4. ЦФ + Алфит (8) 150 х 1 200/24 х 7 2,10±0,54 1—4р<0,01 0,61±0,15 1-4р<0,01 69 20 2-4р=0,006
5. ЦФ + Алфит (9) 150 х 1 300/24 х 7 2,63±0,27 1-5р<0,01 0,84±0,11 1-5р<0,01 57 10 2-5р<0,044
6. Алфит (9) 100/24 х 7 4,67±0,41 1,48±0,13 1-6р<0,05 25 0
7. Алфит (10) 200/24 х 7 5,72±0,23 1,78±0,12 10 0
8. Алфит (10) 300/24 х 7 5,84±0,45 1,69±0,11 14 0
Примечание. Здесь и в табл. 2, 3, 4 перед уровнем значимости р указаны номера сравниваемых групп.
Возможности использования фитосбора «Алфит» в комплексной терапии злокачественных
новообразований 49
лимфоцитов было достоверно выше (в 2,5-3,0 раза) по сравнению с этими данными у мышей, получавших только ЦФ. При введении цитостатика совместно с «Алфитом» в дозах 200 и 300 мг/кг, кроме того, повышалось число сегментоядерных нейтрофилов (в 1,5 и 2,1 раза соответственно по сравнению с этими показателями у мышей группы ЦФ).
Общее количество эритроцитов в периферической крови мышей, получавших ЦФ, оказалось в 1,7 раза меньше, чем в контроле. Если же цитостатичес-кое лечение комбинировали с «Алфитом» в дозах 200 и 300 мг/кг, общее количество эритроцитов в крови животных было достоверно выше, чем в группе, получавших монохимиотерапию. Лечение мышей ЦФ привело также к тромбоцитопении - общее количество тромбоцитов в крови оказалось в 1,3 раза меньше, чем в контроле. В то же время при использовании цитостатика совместно с «Алфитом» в дозе 300 мг/кг количество тромбоцитов было достоверно (р<0,01) выше, чем у получавших только ЦФ животных, и приближалось к контрольному уровню (табл.2)
Лечение мышей с 3ЬЬ «Алфитом» в дозе 300 мг/кг привело к достоверному (р<0,01) торможению роста опухоли (16 %), масса опухоли оказалась в 1,2 раза меньше, чем в контроле. У животных этой группы несколько ниже были такие показатели, как среднее количество метастазов на 1 мышь и масса легких, однако эти изменения не были статистически значимыми. ЦФ в используемом режиме проявил настолько выраженное действие на развитие опухоли, что добавление в схему лечения «Алфита» достоверно не изменило эффекта цитостатика. Исключение составил такой показатель, как масса легких, который оказался достоверно (р<0,05) меньше, чем у животных, леченных только ЦФ (табл. 3).
Подсчет количества лейкоцитов в периферической крови показал, что введение животным «Алфи-та» приводит к ослаблению токсического действия цитостатика. Так, у мышей, получавших ЦФ, наблюдалась выраженная лейкопения: уровень лейкоцитов снизился в 7,4 раза по сравнению с контрольной группой. При сочетанном применении цитостатика с «Ал-
Таблица 2
Показатели периферической крови у беспородных мышей с АКЭ, получавших «Алфит» на фоне химиотерапии
Группа наблюдения, доза препарата Общее число лейкоцитов, Г/л Нейтрофилы, Г/л Лимфоциты, Г/л Моноциты, Г/л Эозинофилы, Г/л Эритроциты, Т/л Тромбоциты, Г/л
Палочко- ядерные Сегменто- ядерные
1. Контроль 15,87±1,04 0,13±0,4 6,5±0,7 8,0±0,6 1,3±0,1 0 6,32±0,18 520±19
2. ЦФ 1,65±0,10 1-2р<0,01 0,04±0,01 1-2р<0,05 0,94±0,05 1-2р<0,01 0,6±0,05 1-2р<0,05 0,06±0,01 1-2р<0,01 0,003±0,003 3,65±0,28 1-2р<0,01 411±14 1-2р<0,01
3. ЦФ + Алфит 100 мг/кг 2,53± 0,29 2-3р< 0,05 0,01±0,005 0,7±0,1 1,8±0,1 2-3р<0,01 0,03±0,02 0 3,66±0,25 384±21
4. ЦФ + Алфит 200 мг/кг 3,03±0,25 2-4р<0,01 0,04±0,02 1,4±0,1 2-4р<0,01 1,5±0,1 2-4р<0,01 0,1± 0,02 0,009±0,006 4,82±0,21 2-4р<0,01 461±18
5. ЦФ + Алфит 300 мг/кг 3,75±0,21 2-5р<0,01 0,05±0,02 2,0±0,2 2-5р<0,01 1,6±0,3 2-5р<0,01 0,1± 0,03 0,008±0,007 5,85±0,25 2-5р<0,01 489±8 2-5р<0,01
Примечание: Кровь на анализ брали у шести мышей в каждой группе.
Таблица 3 Влияние «Алфита» в дозе 300 мг/кг и циклофосфана на развитие ЭЬЬ
Группа наблюдения Масса опухоли, г (Х±ш) Торможение роста опухоли, % Частота метастазирован ия, % Количество метастазов на 1 мышь, (Х±т) Площадь метастазов на 1 мышь, мм2 (Х±т) Масса легких, мг (Х±т)
1. Контроль 6,3±0,3 100 19,0±3,10 22,2±4,0 224,1±8,6
2. ЦФ 3,2±0,3 1-2р<0,01 50 30 1-2р<0,001 0,4±0,20 1-2р<0,01 0,4±0,3 1-2р<0,01 262,9±5,8
3. ЦФ + «Алфит» 2,8±0,30 55 50 0,7±0,18 0,53±0,32 172,6±3,8 2-3р<0,05
4. «Алфит» 5,3±0,2 1-4р<0,01 16 100 14,4±1,6 26,1±4,4 202,7±9,04
Таблица 4
Показатели периферической крови у мышей линии С57В1/6 с ЭЬЬ, получавших «Алфит» в дозе 300 мг/кг
на фоне химиотерапии (Х±ш)
Группа наблюдения Общее число лейкоцитов Нейтрофилы
Палочко- ядерные Сегменто- ядерные Лимфоциты Моноциты Эозинофилы
1. Контроль 15,1± 1,0 0,54±0,2 4,6±0,58 9,16±0,6 0,75±0,200 0,0З±0,028
2. ЦФ 2,0З±0,15 1-2р<0,01 0,07±0,02 1-2р<0,01 0,59±0,1З 1-2р<0,01 1,28±0,1 1-2р<0,01 0,06±0,015 1-2р<0,01 0
3. ЦФ + «Алфит» 4,6±0,59 2-Зр<0,05 0,09±0,0З 1,98±0,16 2-Зр<0,01 2,40±0,2 2-Зр<0,01 0,11±0,025 0,01±0,009
Примечание: кровь на анализ брали у пяти мышей в каждой группе.
фитом» количество лейкоцитов оказалось достоверно (р<0,05) выше (в 2,3 раза) по сравнению с этим показателем у мышей, леченных только ЦФ. Необходимо отметить, что это повышение происходило, как и в эксперименте на мышах с АКЭ, за счет увеличения числа сегментоядерных нейтрофилов в 3,4 раза и лимфоцитов - в 1,9 раза (р<0,05) по сравнению с этими данными в группе ЦФ (табл. 4).
Таким образом, реабилитационный сбор «Алфит» ингибирует рост АКЭ и 3ЬЬ у мышей, повышает анти-бластомный эффект ЦФ у животных с АКЭ и уменьшает токсические проявления цитостатика, судя по количеству лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов в периферической крови, а также уменьшению гибели мышей. Учитывая состав сбора, в который входят хорошо изученные растения с адаптогенными свойствами, а влияние смеси из двух и более адаптогенов нередко превышает действие одного, следует констатировать, что в механизме реализации данных эффектов лежит способность изучаемого средства вводить организм с опухолью в состояние неспецифически повышенной сопротивляемости (зона активации), судя по относительному содержанию лимфоцитов - 35 % [3]. Имеются также экспериментальные данные о возможности повышения эффективности специфических методов лечения злокачественных опухолей с помощью растений, входящих в сбор «Алфит» [1, 2, 8].
Природное происхождение препарата, его безвредность, физиологичность, возможность длительного использования и доступность позволяют рекомендовать его для широкого применения в комплексном лечении злокачественных новообразований с целью снижения повреждающего действия цитоста-тической терапии на здоровые ткани организма и повышения эффективности лечения.
Выводы
1. В экспериментах на мышах с аденокарциномой Эрлиха и карциномой легких Льюис выявлена способность фитосбора «Алфит» ингибировать рост первичной опухоли.
2. Реабилитационный сбор «Алфит» повышал эффективность лечения циклофосфаном мышей с аденокарциномой Эрлиха.
3. Лечение мышей с аденокарциномой Эрлиха и карциномой легких Льюис фитосбором «Алфит» снижало токсические проявления циклофосфана.
ЛИТЕРАТУРА
1. Амосова Е.Н., Зуева Е.П., Разина Т.Т., Крылова С.Г. Лекарственные растения как средства дополнительной терапии для лечения опухолей // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2003. Прил. 2. С. 24-34.
2. Бочарова О.А. Адаптогены как средства профилактической онкологии // Вестн. РАМН. 1999. № 5. С. 49-53.
3. Гаркави ЛХ., Квакина Е.Б., Уколова М.А. Адаптационные реакции и резистентность организма. Ростов н/Д, 1979. 126 с.
4. Гершанович М.Л., Филов ВА., Акимов МА. и др. Введение в химиотерапию злокачественных опухолей. СПб., 1999. 152 с.
5. Корепанов С.В. Лекарственные растения в комплексной терапии местнораспространенного рака молочной железы: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. Томск, 2003. 23 с.
6. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1980. 293 с.
7. Птушкин В.В. Совершенствование методов поддерживающей терапии при проведении цитостатического лечения // Современная онкология. 2002. Т. 4, № 2. С. 28-30.
8. Разина Т.Г., Зуева Е.П., Амосова Е.Н. и др. Препараты из лекарственных растений как средства дополнительной терапии в экспериментальной онкологии // Эксперим. и кли-нич. фармакол. 2000. Т. 63, № 5. С. 59-61.
9. Софьина З.П., Сыркин А.Б., Голдин А., Кляйн А. Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США. М.: Медицина, 1980. 296 с.
10.Katoh C., Kitajima S., Saga Y. et al. Assessment of quantitative dualparameter flow cytometric analysis for the evaluation of testicular toxicity using cyclophosphamide- and ethinylestradiol-treated rats // J. Toxicol Sci. 2002. Vol. 27, № 2. Р. 87-96.
Поступила 12.10.05
