CC BY
35
ластов, позволяет добиться скорейшего очище- ния является высокоинформативным, доступ-ния гнойной раны, сократить 1 фазу раневого ным способом мониторинга раневого процесса, процесса, подготовить рану для наложения вто- позволяет проследить стадии раневого процес-ричных швов, позволяет сократить срок пребы- са, дает возможность спрогнозировать сроки вания больных в стационаре. наложения вторичных швов с целью скорейшего
Ультразвуковое исследование с применени- «закрытия» гнойной раны. ем энергетического доплеровского сканирова-
Реферат
МОЖЛИВОСТ1 УЗД 13 ЗАСТОСУВАННЯМ ЕНЕРГЕТИЧНОГО ДОППЛЕРОВСЬКОГО СКАНУВАННЯ У ВИВЧЕНН1 ДИНАМ1КИ ЗАПАЛЬНОГО ПРОЦЕСУ В ГН1ЙНИХ РАНАХ ПРИ ПРОВЕДЕНН1 МАГН1ТОТЕРАП11 Кондратенко П.Г.,Соболев В.В., Конькова М.В., Смирнов М.Л., Соболев Д.В. Ключов1 слова: лкування гншних ран, ультразвуковий мошторинг, магытотератя
Метою справжньоТ роботи з'явилося вивчення можливост1 УЗ-моыторЫга переб1гу раневого процесу при застосуваны роз -робленого в клшщ1 способу лкування п-лйних ран.
Впроваджений в клУчну практику споаб лкування гншних ран ¡з застосуванням змшного електромагштного поля \ введен -ням в нього ферропластов, дозволяе добитися швидкого очищения п-лйноТ рани, скоротити 1 фазу раневого процесу, пщготува-ти ранудля накпадення вторинних шв1в, дозволяе скоротити термЫ перебування хворих в стацюнарг
УДК 576.3/.7.086.83:616.147.3-007.64.2-002.44-092.4
ВОЗМОЖНОСТЬ СТИМУЛЯЦИИ ПРОЛИФЕРАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ФИБРОБЛАСТОВ ХРОНИЧЕСКИХ ВЕНОЗНЫХ ЯЗВ НИЖНИХ КОНЕЧНОСТЕЙ N VITRO*
Корчак О.М.
Институт неотложной и восстановительной хирургии им. В.К. Гусака АМН Украины, г. Донецк
В работе проведен сравнительный анализ показателей пролиферативной активности культур фибробластов хронических венозных язв, здоровой кожи и фетальных фибробластов. Фибробла-сты длительно существующих язвенных дефектов пролиферируют значительно медленнее, чем фибробласты здоровой кожи независимо от методов получения клеточной культуры. При сравнении скорости пролиферации клеток культуры фетальных фибробластов, фибробластов здоровой кожи и хронического язвенного дефекта было показано значительное отставание темпов увеличения клеточности культуры язвенных фибробластов при одинаковых условиях культивирования. Создание клеточной модели для совместного культивирования фибробластов, полученных из венозной хронической язвы, с фетальными фибробластами позволило стимулировать пролиферативную активность патологически измененной клеточной линии фибробластов хронического язвенного дефекта.
Ключевыеслова: хронические венозныеязвы, культура фибробластов, микс-культура, пролиферативная активность.
Вступление
В настоящее время проблема совершенствования существующих и поиска новых способов лечения длительно незаживающих язв нижних конечностей различного генеза является актуальной в силу большой распространенности данного заболевания.
Хронические язвенные дефекты встречаются у 13% взрослого населения с венозной патологией, при этом 6% составляют активные, открытые язвы, а 7% составляет группа пациентов с язвенными дефектами в стадии временной эпи-телизации. У 40% пациентов первая язва возникает в трудоспособном возрасте и эти состояния сопровождаются стойкой и продолжительной инвалидизацией. Трофические нарушения при хронической венозной недостаточности провоцирует флебогипертензия, что приводит к каскаду разнообразных патологических реакций на
молекулярном, клеточном и тканевом уровнях [3,9].
В последние годы большое количество работ посвящено изучению популяции фибробластов язвенного дефекта - одного из основных клеточных типов, играющих критическую роль в процессах репарации ран. В экспериментах доказано, что в условиях хронического воспаления пролиферативный потенциал этих клеток резко снижен, нарушен ответ на действие регулятор-ных сигналов, изменена биохимическая и секреторная активность фибробластов, снижена степень пролиферативного ответа на действие ми-тогенных факторов, в частности, факторов роста и интерлейкинов. В язвенном дефекте отмечаются изменения в тканевом микроокружении, в частности, на уровне количественного содержания факторов роста и дисбаланса между про-теазами и их ингибиторами, которые могут приводить к изменению состава и структуры межк-
* НИР „Разработка клеточно-тканевых технологий для хирургической профилактики и лечения хронических язвенно-раневых дефектов нижних конечностей", регистрационный № 0104и006347, утверждена Постановлением Президиума АМН Украины № 1/5 от 12 января 2004 года.
леточного матрикса, нарушению процесса миграции и пролиферации клеток [4,7,11,13,14,15,17-19].
Совокупность этих изменений, возможно, является одной из причин длительного заживления хронических ран, а также их резистентности к традиционным методам терапии. Это предопределяет поиск новых подходов в терапии трофических язв венозной этиологии, которые учитывали бы данные аспекты патогенеза. Как известно, одним из ведущих направлений терапии хронических язв есть переключение воспалительного процесса в фазу пролиферации и репарации, когда основной задачей становится стимуляция роста и созревания соединительной ткани [2,3,9].
Одним из наиболее перспективных направлений в области создания адекватных терапевтических схем является применение трансплантатов культур клеток и тканевых эквивалентов при лечении данной патологии, причем существует достаточно большой интерес к использованию фетальних тканевых препаратов, который основывается на их способности к восстановлению процессов физиологической регенерации как за счет стволовых клеток разного уровня потентности, так и восстановления тканевых дефектов за счет стимуляции пролиферации сохраненных клеточных популяций [2,16,20].
В этом направлении особое значение приобретает изучение взаимодействий между фета-льными клетками как клетками-индукторами ре-паративных процессов и клеточными популяциями ткани-мишени.
Цель исследования
Изучение особенностей пролиферативной активности фибробластов хронического язвенного дефекта нижних конечностей in vitro и возможности стимуляции и/или восстановления пролиферативного потенциала данного клеточного типа при совместном культивировании с фетальными фибробластами
Материалы и методы
Пациенты. Фибробласты трофических язв были получены от 6-ти пациентов (возраст от 46 до 62 лет, в том числе 4 женщин) с хроническими венозными язвами нижних конечностей Длительность существования хронических язв была у всех пациентов более 12-ти месяцев, язвенные дефекты имели среднюю площадь более 45 см2 и были полностью или частично иссечены для последующего аутологичного закрытия дефектов с использованием различных вариантов дермопластики. Биопсийный материал был получен в момент иссечения язвенных дефектов. В эту группу были включены пациенты, у которых в момент получения биопсийного материа-
ла не было отмечено клинических признаков инфицирования. Ни один из пациентов не имел диабетического анамнеза, не принимал антибиотики, глюкокортикостероиды или химиотерапе-втические препараты. Исследования проводились на добровольцах в соответствии с положениями о биоэтике.
Клеточные культуры. Культура фибробластов хронического язвенного дефекта (ФХЯД): гранткани были получены из центральных не эпителизированных частей язвенных дефектов. Получение клеточной культуры производили методом эксплантатов. Образцы тканей были многократно промыты в растворе Хэнкса (Биолот, Россия), затем замачивались на 24ч в среде Игла (Биолот, Россия) с антибиотиками (пенициллин 2500МЕ в мл, стрептомицин 2,5 мг в мл) Данные манипуляции были проведены не позднее 4 часов после забора. Образцы были измельчены до размеров приблизительно 1 мм2 и помещены в культуральные флаконы 25 см2 (Costar, США) в среду Игла содержащую 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) (Биолот, Россия). Смена среды проводилась каждые 3-4 сутки культивирования. После визуальной оценки возможности переноса мигрировавших и/или пролиферирующих клеток по плотности клеток вокруг эксплантата, ФХЯД снимались с культурального флакона с использованием трипсин / этилендиамин-тетрауксусной кислоты (ЭДТА) - смеси (Sigma, США) в соотношении 0,05% : 0,02% в ФСБ (рН=7,4) и использовались для проведения экспериментов.
Культура фетальных фибробластов (ФФ): ФФ человека выделяли из абортивного материала, полученного в ходе плановых операций по прерыванию беременности при сроках гестации до 12 недель. В эксперименте использовали культуры ФФ, полученные в ходе одного выделения. Выделение фибробластов производили путем ступенчатой трипсинизации 0,25% раствором трипсина (Институт полиомиелитов и вирусных энцефалитов, Москва) фрагментов кож-но-мышечной ткани эмбриона при температуре 37°С. Ингибирование трипсина производили сывороткой крупного рогатого скота («Биолот», Санкт-Петербург). Культивирование проводили с использованием питательной среды Игла (Институт полиомиелитов и вирусных энцефалитов, Москва) с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки («Биолот», Санкт-Петербург) в CO2-HHKy6aTope при 370С и 5 % CO2. Пассирование проводилось с использованием трипсин / этилендиамин-тетрауксусной кислоты (ЭДТА) -смеси ( Sigma, USA ) в соотношении 0,05% : 0,02% в ФСБ (рН=7,4). Коэффициент пассирования составлял 1:2.
Культура фибробластов здоровой кожи (ФЗК): культуру ФЗК получали методом экспла-
нтатов из биоптатов, полученных в ходе плановых операций грыжесечения по поводу вентральных грыж у 6 пациентов в возрасте от 45 до 56 лет. Культивирование проводили с использованием питательной среды Игла (Институт полиомиелитов и вирусных энцефалитов, Москва) с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки («Биолот», Санкт-Петербург) в CO2-инкубаторе при 370С и 5 % CO2. Пассирование проводилось с использованием трипсин / этиле-ндиамин-тетрауксусной кислоты (ЭДТА) - смеси (Sigma, USA) в соотношении 0,05% : 0,02% в ФСБ (рН=7,4). Коэффициент пассирования составлял 1:2.
Микроскопический контроль культивирования проводился с помощью инвертированного микроскопа LEICA DM IL и системы видеодокументации изображения LEICA QWin500 Standart (Germany).
Микс-культура фетальных фибробластов и фибробластов хронического язвенного дефекта (mix-культура):
- для проведения МТТ-анализа: ФФ 5-го пассажа смешивали с ФХЯД в соотношении к 1:2. Совместное культивирование проводили в течение 5-ти суток;
- для окраски витальными красителями и микроскопии: ФФ 5-го пассажа, предварительно окрашенные красителем РКН67 Green, смешивали с предварительно окрашенными ФХЯД красителем РКН 26 Red в соотношении к 1:2. Окраска витальными красителями клеточных культур проводилась согласно инструкции фирмы-производителя Sigma-Aldrich, Inc., США. Далее культивирование проводили в культураль-ных флаконах 25 см2 (Costar, США) по стандартной методике, оценку степени пролиферации проводили визуально с использованием флуоресценции на микроскопах LEICA DM IL и LEICA DM LS.
МТТ-анализ:
Для сравнения динамики роста и пролиферации культур клеток ФФ, ФЗК и ФХЯД, нами был проведен МТТ-анализ клеточной пролиферации (MTT-Cell Proliferation Assay). Это количественный колориметрический анализ для измерения клеточной пролиферации, жизнеспособности и цитотоксичности, который базируется на преобразовании желтой соли тетразолия, МТТ (3-[4,5-диметилиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия бромида) в нерастворимые в воде темно-синие кристаллы формазана. Такое преобразование возможно только в живых клетках в присутствии митохондриального фермента сукцинат-дегидрогеназы [12]. Нерастворимый в воде формазан может быть визуализирован с помощью изопропанола или другого органического растворителя. Оптическая плотность жидкости измеряется спектрофотометри-
чески, определяя поглощение как функцию от концентрации преобразованного красителя, количество которого прямо пропорционально зависит от количества метаболически активных клеток в культуре.
В эксперименте был использован краситель МТТ (Sigma, США), изопропанол (Merck, Германия). Совместное культивирование ФХЯД и ФФ проводилось в 24-луночных полистироловых планшетах Costar (США), оптическая плотность полученного раствора измерялась с использованием фотометра для многофункционального анализа Synergy HT Bio-Tek® Instruments, США.
Результаты и их обсуждение
Морфология и пролиферативная активность ФХЯД и ФЗК.
При получении культуры ФХЯД и ФЗК из эксплантатов было отмечено, что скорость миграции и/или пролиферации клеток из биоптата хронической язвы значительно ниже по сравнению с таковой клеток из биоптата здоровой кожи. Снятие и перенос клеток для дальнейшего культивирования фибробластов здоровой кожи были возможны уже на 14 сутки с момента помещения биоптата в ростовую среду, в то время как фибробласты хронического язвенного дефекта достигали допустимой плотности миграции и/или пролиферации только на 21-24 сутки (Рис.1 а, б).
После перемещения суспензии полученных из эксплантатов клеток в ростовую среду для дальнейшего культивирования так же были отмечены существенные различия между ФХЯД и ФЗК как по степени пролиферации и времени достижения культурой монослоя, так и в морфологии самих клеток.
а) ФЗК из эксплантата, 14 сутки сутки культивирования
б) ФХЯД из эксплантата,16 сутки культивирования Рис.1. Миграция и/или пролиферация клеток из биоптатов здоровой кожи и хронических язвенных дефектов. Инвертированная микроскопия, ув. х40.
Фибробласты, полученные из хронической язвы, были несколько больших размеров, имели неправильную форму, многоядерность, отмечалось накопление большого количества детрита в культуре. Формирование монослоя в культуре ФХЯД происходило на 14-16 сутки, в то время как полноценный монослой в культуре ФЗК был на 7-8 сутки при одинаковых условиях культивирования (Рис.2 а, б)
Клинически доказано, что при использовании в комплексном лечении хронических раневых дефектов мягких тканей трансплантатов с фе-тальными фибробластами, процессы эпители-зации ран значительно ускоряются, восстанавливаются процессы репарации в ране за счет сохранившихся придатков кожи, обеспечивая более быстрое и стабильное заживление раны [1,5,6,8,10].
Для проведения эксперимента была создана клеточная модель, которая наглядно продемонстрировала, что при совместном культивировании поврежденной клеточной линии фиброблас-тов язвенного дефекта и фетальних фибробла-стов возможно ускорение пролиферации первых в условиях культивирования.
а) культура ФХЯД, 10-е суткикультивирования
б) культура ФЗК, 8-е сутки культивирования Рис.2. Различия морфологии клеток и скорости образования монослоя в культурах фибробластов хронического язвенного дефекта и здоровой кожи, инвертированная фазо-во-контрастная микроскопия, ув.х 100.
Учет результатов coвмecтнoгo культивирования ФФ и ФХЯД осуществлялся количественно в случае проведения МТТ-анализа, когда измерялась оптическая плотность раствора при отложении кристаллов формазана в митохондриях клеток (Рис.3), а так же визуально в динамике при использовании окраски витальными красителями PKH 67 и РКН26 (Рис.7).
Рис.3. Перинуклеарное отложение кристаллов формазана в митохондриях клеток микс-культуры, фазово-контрастная микроскопия, ув.х400.
Для построения стандартных МТТ-кривых был проведен одновременный эксперимент для ФФ, ФЗК и ФХЯД в 5-ти сериях с целью определения зависимости поглощения желтой соли те-тразолия от количества клеток каждого типа (Рис.4). Кривые строились путем измерения оптической плотности раствора серий двойного разведения первичной концентрации каждого клеточного типа, начиная с 400 тысяч на лунку (400, 200, 100, 50, 25 и 12,5 тысяч).
ш
л н и
0
1
н о
ч =
№
«
X
и щ
Т Н
н =
О
0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0
-—I-1-1-1-1
12500 25000 50000 100000 200000 400000
Количество клеток
—♦— ФФ стандарт —■— ФЗК стандарт ФХЯД стандарт
Рис.4. МТТ-стандартные кривые для эмбриональных (ФФ), дермальних (ФЗК) иязвенных (ФХЯД) фибробластов. Количество клеток (инкубация на протяжении 2 ч. в присутствии 0,5 мг/мл МТТ) в зависимости от спектрофотометриче-ского измерения концентрации МТТ-преобразованного красителя (формазана).
Сравнение динамики пролиферации изучаемых клеточных типов проводилось в процессе культивирования до 5-х суток включительно.
Первичная посевная концентрация клеток всех трех типов составляла 25 тысяч на лунку. Данные измерений представлены на рис. 5
н о
ч
В К
Я
а
У
V
V =
н е О
0,16 0,14 0,12 0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0
0,144
0,121 0,124
0,099 ^^^^
^— 0,096
0,062^^ 0,084
0,041 0 054
"02S--?0,036 4 -А
0,021 0,022 0,024 0,024 0,025
2 3 4
Сутки культивирования
ФФ
ФЗК
ФХЯД
Рис.5. Динамика пролиферации эмбриональных (ФФ), дермальних (ФЗК) иязвенных (ФХЯД) фибробластов, отображенная как оптическая плотность в зависимости от суток культивирования.
На графике четко прослеживается различие в темпах роста и пролиферации изучаемых клеточных типов. Пролиферативная активность
клеток культур ФФ и ФЗК отличается незначительно (возрастание значений концентрации клеток по сравнению с исходной в 4,3 и 4,1 раза соответственно), исходя из значений расчетной концентрации клеток по отношению к полученным стандартным значениям оптической плотности для заданной кпеточности (Табл.1).
Табл.1.
Показатели клеточности культур ФФ, ФЗК, ФХЯД и
ФФ+ФХЯД.
Сутки Расчетная концент эация клеток, тыс.
ФФ ФЗК ФХЯД ФФ+ФХЯД
0 26,2 24,1 25,8 23,6
1 38,8 30,4 24,6 26,4
2 59.4 57,6 26,1 30,1
3 84,1 79,1 27,4 42,5
4 98,8 89,9 27,6 57,2
5 114,5 98,8 27,9 64,9
В отличие от них, кпеточность культуры фибробластов хронического язвенного дефекта на протяжении данного времени культивирования практически не изменилась (увеличение количества клеток лишь в 1,1 раза) (Рис.5, табл.1).
Для изучения возможности стимуляции фе-тальными фибробластами пролиферативной активности клеток культуры ФХЯД in vitro был проведен сравнительный МТТ-анализ клеточной пролиферации ФФ, ФХЯД и микс-культуры ФФ+ФХЯД.
Полученные значения приведены на рис. 6, а значения расчетной концентрации клеток культур изучаемых линий в табл.1.
5
н и о а н о
4 1=
к
я и
и щ
у
5 н в О
0,2 0,15 0,1 0,05 0
22 °,°3г021 ^'0?О22 * 0,024 * 0,024 ¿0
0
1 2 3 4 5
Сутки культивирования _Ф_фф -я— ФФ+ФХЯД -А— ФХЯД
Рис.6. Динамика пролиферации эмбриональных (ФФ), язвенных (ФХЯД) и микс-культуры (ФФ+ФХЯД) фибробластов, отображенная как оптическая плотность в зависимости от суток культивирования.
График наглядно демонстрирует увеличение скорости пролиферации микс-культуры, по сравнению с ФХЯД, которые культивируются изолированно. Расчетные значения клеточности культур изучаемых клеточных линий, представленные в таблице 1, свидетельствуют, что при совместном культивировании ФФ и ФХЯД возможно увеличение клеточности культуры в 2,7 раза по сравнению с показателем 1,1 для изолированной культуры ФХЯД, что по количеству клеток на 5-е сутки культивирования микс-культуры превосходит в 2,3 раза кпеточность культуры ФХЯД.
При визуальном мониторинге микс-культуры, элементы которой были разделены при помощи окраски красителями РКН, также было отмечено ускорение пролиферации язвенных фиброблас-тов в присутствии фетальных клеток в культуре (Рис.7) по сравнению с изолированно культиви-
а) 1-есуткикультивирования
б) 3-й сутки культивирования
в) 5-е сутки культивирования
г) 7-е сутки культивирования
Рис.7. Динамика роста элементов смешанной культуры фетальных фибробластов (окраска PKH67 Green) и фиб-робластов хронического язвенного дефекта (окраска PKH26 Red), флуоресцентная микроскопия, х400.
Выводы
Результаты эксперимента свидетельствуют о возможности стимуляции и/или восстановления пролиферативного потенциала фибробластов хронического язвенного дефекта при совместном культивировании с фетальными фибробла-стами in vitro.
Можно предположить, что одновременное культивирование ФФ с ФХЯД положительно влияет на запуск механизмов паракринной регуляции клеточной пролиферации популяции ФХЯД. Вероятно, можно экстраполировать эти данные на клеточные популяции фибробластов хронических язвенных дефектов in vivo. Аппликация клеточных трансплантатов фетальных фибробластов на раневую поверхность с целью стимуляции процессов пролиферации резидентных клеточных популяций хронической раны, нормализации микроокружения и секреции элементов физиологически активного матрикса может привести к более эффективному заживлению хронической раны.
Литература
1. Алексеев A.A., Кашин Ю.Д., Яшин А.Ю., Рахаев A.M. Тактика лечения тяжелообожженных на основе применения культивированных аплофибробластов // Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи. Саратов, 1998, с.9-12.
10.
Богачев В.Ю., Богданец Л.И., Кириенко А.И., Брюшков 11. А.Ю., Журавлева О.В. Местное лечение трофических язв // Consilium medicum.- tom3.-N11.-2001. Васютков В.Я., Проценко H.B. Трофические язвы стопы и голени. - М:. Медицина.-1993.-с.160. Гринь B.K., Попандопуло А.Г., Штутин A.A., Корчак О.М., Казаков Г.В. Биологическая активность фиброб-ластов хронических венозных язв нижних конечностей. Арх1вкпш1чноТмедицини, №1(5).-2004, с.14-18. Кузнецов Н.М., Мазка О.Н., Шанина Л.Н., Белянский Н.В., Степанов С.А., Якунин Г.С., Лукин А.Н. Применение культивированных клеток для закрытия дефектов кожи // Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи. Саратов, 1998, с.20. Матчин E.H., Потапов В.П., Огольцова В.А., Кузько Ю.Н. Клинико- гистологические результаты кожной аутопластики традиционными методами с использованием клеточной культуры фибробластов // В кн. Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи. Саратов, 1998, с.25. Попандопуло А.Г., Корчак O.M., Казаков Г.В., Штутин A.A., Зубов Д.А. особенности пролиферативной акив-ности культуры фибробластов хронических венозных яза нижних конечностей. Вестник неотложной и восстановительной хирургии. T.4, №4.- 2003, с.585-589. Рахаев A.M. Лечение пограничных ожогов и донорских ран с применением культивированных аллофибробла-стов. Дисс. канд. мед. наук, M., 2000, с.96. Савельев B.C., Гологорский В.А., Кириенко А.И. и др. Флебология. Руководство для врачей.- M.: Медицина.-2001.-c.664.
Туманов В.П. Морфологический анализ клеточного состава ожоговой раны при трансплантации культивированных аллофибробластов. Международный симпозиум. Саратов, 1998,с.40.
Реферат
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
Agren MS, Steenfos HH, Dabelsteen S, et al. Proliferation and mitogenic response to PDGF-BB of fibroblasts isolated from chronic venous leg ulcers is ulcer-age dependent. J Invest Dermatol 1999;112:463-9.
Cell Biology. A Laboratory Handbook / Ed. Julio E. Celis.-Academic Press.-London.-1998.-Vol.1.- p.16-19. Clark RA, Lin F, Greiling D, An J, Couchman JR. Fibroblast invasive migration into fibronectin/fibrin gels requires a previously uncharacterized dermatan sulfate-CD44 pro-teoglycan. J Invest Dermatol. 2004 Feb;122(2):266-77. Falanga V. The chronic wound: Failure to heal. In: Falanga V (ed). Cutaneous Wound Healing. London: Martin Dunitz Publishers, 2001:155-64.
Hasan A, Murata H, Falabella A, et al. Dermal fibroblasts from venous ulcers are unresponsive to the action of transforming growth factor-ß 1. J Dermatol Sci 1997;16:59-66. Harding KG, Morris HL, Patel GK. Healing chronic wounds. BMJ 2002;324:160-163.
Norgauer J, Hildenbrand T, Idzko M, Panther E, Bandemir E, Hartmann M, Vanscheidt W, Herouy Y. Elevated expression of extracellular matrix metalloproteinase inducer (CD147) and membrane-type matrix metalloproteinases in venous leg ulcers. Br J Dermatol. 2002 Dec;147(6):1180-6. Raffetto JD, Mendez MV, Marien BJ, et al. Changes in cellular motility and cytoskeletal actin in fibroblasts from patients with chronic venous insufficiency and in neonatal fi-broblasts in the presence of chronic wound fluid. J Vasc Surg 2001;33:233-41.
Stanley A, Osler T. Senescence and the healing rates of venous ulcers. J Vasc Surg 2001;33:1206-11. Veves A, Falanga V, Armstrong DG, Sabolinski ML. Graft-skin, a human skin equivalent is effective in the management of non infected neuropathic diabetic foot ulcers. Diabetes Care 2001; 24: 290-295.
МОЖЛИВЮТЬ СТИМУЛЯЦ11 ПР0Л1ФЕРАТИВН01 АКТИВНОСТ1 Ф1БРОБЛАСТ1В ХРОНИЧНИХ ВЕНОЗНИХ ВИРАЗОК НИЖН1Х К1НЦ1ВОК IN VITRO Корчак O.M.
Ключов1 слова: хроычы венозш виразки, культура ф1бробласт1в, мкс-культура, прол1феративна активнють.
У po6oTi проведений пор1вняльний анал1з показнигав прол1феративноТ активное^ культур ф1бробласт1в хрошчних венозних виразок, здоровоТ шфи i фетальних ф1бробласт1в. Ф1бробласти довгостроково ¡снуючих виразкових дефеклв прол1ферують значно повгпьыше, ыж ф1бробласти здоровоТ шфи незалежно вщ метод1в одержання кл1тинноТ культури. При пор1вняны швид-KOCTi прол1ферацп кп1тин культури фетальних ф1бробласлв, ф1бробласт1в здоровоТ шфи i хрошчного виразкового дефекту було показано значне вщставання темтв збгпьшення кл1тинност1 культури виразкових ф1бробласлв при однакових умовах культиву-вання. Створення кп1тинноТ модел1 для сптьного культивування ф1бробласт1в, отриманихз венозноТ хроычноТ виразки, з фета-льними ф1бробластами дозволило стимулювати прол1феративну активнють патолопчно змшеноТ кп1тинноТ л¡HiV ф1бробласт1в хрошчного виразкового дефекту.
УДК 617.586-002.4-08:616.379
М1СЦЕВБ Л1КУВАННЯ ГН1ЙН0-НЕКР0ТИЧНИХ УРАЖЕНЬ «Д1АБЕТИЧН01СТУПН1»
Краснов О.Г.
УкраТнська медична стоматолопчна академ1я (м. Полтава), 2 мюька клУчна лкарня.
Обгрунтоваш основт принципи мжцевого лтування гнтно-некротичних ураженъ д1абетичног ступт з урахуванням клт1чног форми, стадп раневого процесу, бактерюлог1чних, цитолог1чних досл1дженъ та РН-метрп ран.
Ключов1 слова: «д1абетична ступня», гшйно-некротичы ураження, кл1шчний переб1г, рановий процес, бактерюлопчы та цитолоп-чы дослщження, РН - метр1я ран, мюцевелкування.
Вступ
MicueBi 3m¡hh при виникнены гнмно-некротичних(Г-Н) ураженнях д1абетичноТ ступ-ы(ДС)характеризуються розвитком поширеного процесу без тенденци до обмеження з неч1тко вираженою реакцию запалення. Тканини на границ! з некротичними перебувають у стаы не-Kpo6io3y та napa6io3y, що призводе до Тх некрозу
при несприятливих умовах [4]. Чим довше ¡снуе рана, тим бтьше вфогщысть прогресування процесу та септичних ускладнень[2, 3].
При лкуваны Г-Н уражень ДС поряд з х1рург1-чною обробкою, розвантаженням ступы та системною тератею суттсвим е мюцеве медикаме-нтозне лкування рани. Цей споаб лкування е важливим, бо забезпечус стабтьну концентра-
