CC BY
70
Воспроизведение лейкоза крупного рогатого скота у кроликов в экспериментальных условиях
Г.А. Горячева, ст.н.с, А.А. Грицын, к.с.-х.н, СевероКавказский зональный НИВИ РАСХН
Лейкоз крупного рогатого скота — хроническое инфекционное заболевание, характеризующееся появлением новообразований в лимфоидной, кроветворной и других тканях. Возбудителем лейкоза крупного рогатого скота является РНК-содержащий вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС). По своему строению и функциональным особенностям ВЛКРС подобен вирусу Т-клеточного лейкоза человека, только поражает В-лимфоциты. В результате однократно произошедшего инфицирования ВЛКРС присутствует в организме животного пожизненно в форме провируса, интегрированного в ДНК клеток хозяина [1].
Существует два пути передачи вируса лейкоза крупного рогатого скота: вертикальный (пренатальный) — от матери к плоду и горизонтальный (постнатальный) — от животного к животному Вертикальный путь передачи вируса лейкоза крупного рогатого скота не является основным в эпизоотическом процессе. Горизонтальный путь является основным. Перезаражение животных ВЛКРС происходит через кровь и секреты, содержащие контаминированные возбудителем лимфоциты.
Лейкоз крупного рогатого скота в настоящее время распространён во всех субъектах Российской Федерации, уровень инфицированности составляет около 15%, а в некоторых регионах значительно выше. Лейкоз крупного рогатого скота с 1997 г. занимает первое место в структуре инфекционной патологии КРС, достигая 53,9%, и продолжает оставаться наиболее сложно решаемой проблемой в животноводстве РФ [2].
Лейкоз причиняет животноводству огромный экономический ущерб, который складывается из недополучения молока и приплода, ухудшения качества продукции, преждевременной выбраковки коров, утилизации туш больных животных, ограничения племенной работы.
Известно, что животные, инфицированные вирусом лейкоза, имеют на 12,7% ниже молочную продуктивность и на 0,09% меньше содержание жира в молоке, чем серонегативные. Омоложение оздоравливаемого стада, за счёт выведения из товарного производства полновозрастных коров и замены их нетелями, снижает валовое производство молока на 6,0% [3].
Помимо экономического ущерба лейкоз имеет и социальную значимость. Установлено, что молоко и мясо больных лейкозом животных содержат метаболиты триптофана и других циклических аминокислот и являются экологически опасными для людей.
Доказана возможность преодоления вирусом лейкоза крупного рогатого скота межвидовых барьеров. В условиях эксперимента удалось воспроизвести инфицирование ВЛКРС у овец, кроликов, свиней, обезьян [4].
С вопросами межвидовой передачи тесно связаны поиски чувствительного лабораторного животного для воспроизведения инфекции, индуцированной ВЛКРС. Из опытов, проведённых рядом исследователей, следует, что биологической моделью для изучения вируса лейкоза крупного рогатого скота и одновременно чувствительным лабораторным животным для проведения биологической пробы могут служить кролики. При введении последним (по разработанной методике) крови коров, инфицированных вирусом лейкоза, в 100% случаев
удавалось воспроизвести инфекцию, характеризующуюся выработкой антител к антигенам вируса. Воспроизвести инфекцию, вызванную ВЛКР^ удалось и при кормлении этих животных молоком инфицированной ВЛКРC и больной лимфолейкозом коровы [б].
Приведены результаты исследований антигенного родства вируса лейкоза крупного рогатого скота с вирусом иммунодефицита человека путём изучения активности противолейкозных антител в пробах сывороток крови коров к антигенам вируса иммунодефицита человека в тест-системе ИФA. Из отобранных 2б проб сыворотки крови коров, положительно реагирующих в ИФA на лейкоз, 16 проб показали положительную реакцию в тест-системе ИФA к ВИЧ. Делается вывод, что в организме больных лейкозом коров образуются антитела, перекрёстно реагирующие с белками ВИЧ. Aнтитела против антигена ВЛКРC перекрёстно реагируют как с неструктурными (рбб, р4О), так и структурными (р24/2б) белками гена gag ВИЧ, что свидетельствует о том, что белки генов gag ВЛКРC и ВИЧ обладают высокой степенью гомологичности [6].
Цель работы — изучить возможность передачи ВЛКРC инфекции геторологичным видам животных.
Материалы и методы. Cхема опыта была разработана сотрудниками Всероссийского института экспериментальной ветеринарии. Для постановки опыта использовали 2З кролика, из которых сформировали четыре группы: три опытные по
6 особей в каждой и одну контрольную из б кроликов. Кролики I гр. получали два раза в день внутрь в течение ЗО сут. по бО мл молока от коровы-донора, инфицированной вирусом лейкоза КР^ и больной лейкозом. Кролики
II гр. получали также два раза в день в течение ЗО сут. внутрь б О мл молока коровы-донора, но с добавлением б мл крови той же коровы. Разовая доза лимфоцитов составляла 1ОООООО, дневная 2ОООООО, суммарная 6ООООООО. Кроликам III гр. вводили внутривенно однократно 1 мл крови той же коровы-донора, содержащей 2ОООО лимфоцитов. Кролики IV (контрольной) гр. получали два раза в день внутрь по бО мл молока, коровы свободной от ВЛКРС
Кровь кроликов исследовали в динамике: первый месяц еженедельно, затем ежемесяч-
но с использованием серологических реакций иммунодиффузии в агаровом геле (РИД) и им-муноферментного анализа (ИФА), гематологического и молекулярно-биологического (ПЦР) методов.
Реакцию иммунодиффузии (РИД), имму-ноферментный анализ (ИФА) и гематологические исследования проводили по стандартной методике.
Молекулярно-биологическое исследование крови кроликов (ПЦР) осуществляли сотрудники Всероссийского института экспериментальной ветеринарии.
Результаты исследований. Работа проводилась под координацией Всероссийского института экспериментальной ветеринарии.
Первые признаки развития инфекционного процесса наблюдали у кроликов № 1, 2 и 5 в
III гр. через 30 суток от начала опыта при исследовании РИД (табл.). У кролика № 4 образование антител к вирусу лейкоза КРС по результатам РИД наблюдали через 60 суток (табл.). Следовательно, признаки развития инфекционного процесса в этой группе начались на 30-е сутки у кроликов № 1, 2, 5 и у особи № 4 на 60-е сутки. У кролика № 6 положительный результат в РИД получили на 120-е сутки, а у особи № 3 признаков инфекционного процесса не наблюдали.
Положительных результатов при исследовании методом ИФА не зарегистрировано.
У кроликов II гр. при исследовании в РИД первые признаки развития инфекционного процесса наблюдали у особи № 5 через 60 суток, у особей № 3 и 6 — через 90 суток. Остальные три кролика (№ 1, 2, 4) оставались серонегативными в течение всего периода исследований.
Сероконверсию по результатам РИД у кроликов I гр., начиная с первого исследования через
7 суток от начала эксперимента и до исследования через 300 суток, не наблюдали.
Результаты исследований в ИФА через 7, 14, 21, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 240, 270 и 300 суток по всем опытным группам были отрицательными.
Кролики IV, контрольной гр. реагировали отрицательно в течение всех серологических исследований, как в РИД, так и в ИФА.
Через 30 суток от начала опыта у пяти кроликов III гр. наблюдался относительный лим-
Результаты серологического (РИД) исследования крови экспериментальных кроликов
Группа Сутки от начала опыта
7 14 21 З0 60 90 120 150 180 240 270 З00
I (n=6) отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр.
II (n=6) отр. отр. отр. отр. 1 пол. З пол. З пол. З пол. З пол. З пол. З пол. З пол.
III (n=6) отр. н/с н/с З пол. 4 пол. 4 пол. 5 пол. 5 пол. 5 пол. 4 пол. 4 пол. 5 пол.
IV (n=5) отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр.
Примечание: отр. — отрицательная реакция; пол. — положительная реакция; н/с — неспецифическая реакция
фоцитоз в границах 65—82%, у трёх особей он сохранялся на протяжении всего опыта.
Во II гр. у трёх кроликов лимфоцитоз проявился на 150-е сутки от начала опыта и сохранялся у одной особи до окончания эксперимента.
Выводы. Таким образом, первые признаки развития инфекционного процесса наблюдали уже через 30 суток у кроликов III гр., которая получила однократно внутривенно кровь коровы, больной лейкозом, что свидетельствует о возможности заражения гетерологичных видов животных, в данном случае кроликов, вирусом лейкоза крупного рогатого скота.
Не исключается возможность инфицирования ВЛКРС через молоко, содержащее инфекционный материал. Так, развитие инфекционного процесса у животных опытной группы, получавших молоко больной лейкозом коровы с
добавлением крови этой же коровы, было зарегистрировано на 60-е сутки.
Литература
1. Гулюкин М.И., Замараева Н.В., Абрамов В.Н. и др. Состояние и перспективы борьбы с лейкозом крупного рогатого скота // Ветеринария. 1999. № 12. С. 23—28.
2. Смирнов А.М. Борьба с лейкозом крупного рогатого скота — важнейший элемент системы обеспечения ветеринарного благополучия российского животноводства // Сборник науч. тр. Екатеринбург, 2005. С. 5—9.
3. КузинА.И., Закрепила Е.Н. Влияние лейкоза на продуктивность коров и качество молока // Ветеринария. 1997. № 2. С, 19-21.
4. Гулюкин М.И., Симонян Г.А., Мироненко А.К. Особенности противолейкозных мероприятий, обеспечивающих высокую молочную продуктивность // Сборник науч. тр. Екатеринбург, 2005. С. 4—5.
5. Іулюкин М.И., Иванова Л.А., Шишкина Е.А. идр. Экспериментальное заражение кроликов вирусом лейкоза крупного рогатого скота // Ветеринария. 2008. № 11. С. 23—27.
6. Якупов Т.Р., Хазипов Н.З., Коксин В.П. Изучение зависимости между активностью противолейкозных антител в тест-системе ИФА на ВИЧ и спектром этих антител в иммуноблоте на ВИЧ // Ветеринарный врач. 2008. № 2. С, 13-15.
