CC BY
41
Л.А. Кузнецова1,
С.А. Плеснева1, А.О. Шпаков1,
Е.В. Омельянюк2,
В.М. Болотских2, М.Н. Перцева1
'Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН; 2Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.И. Отта РАМН, Санкт-Петербург
ВЛИЯНИЕ РЕЛАКСИНА И ИНСУЛИНА НА АКТИВНОСТЬ АДЕНИЛАТЦИКЛАЗЫ В МИОМЕТРИИ БЕРЕМЕННЫХ С САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ 1 ТИПА
Ш Изучение влияния релаксина и инсулина на активность аденилатциклазы (АЦ) в миометрии беременных показало, что релаксин 2 человека (10"'—10"8 М) вызывает более сильный, чем инсулин, стимулирующий эффект на активность фермента. Активирующее действие релаксина и инсулина потенцировалось негидролизуемым аналогом ГТФ — гуанилилимидодифосфатом (ГИДФ) в миометрии беременных, что свидетельствует об участии стимулирующего ГТФ-связываюшего белка (выбелка) в реализации эффекта пептидов. В миометрии беременных с сахарным диабетом 1 типа при действии релаксина, инсулина и изопротеренола было обнаружено снижение чувствительности к этим гормонам активности АЦ по сравнению с этими показателями в миометрии беременных. При совместном влиянии пептидов и ГИДФ в миометрии беременных с сахарным диабетом 1 типа наблюдалось ослабление потенцирования ГИДФ действия гормонов на активность АЦ, что может указывать на уменьшение сопряжения между рецепторами, С5-белком и АЦ. Проведенные исследования позволяют сделать заключение о том, что у беременных с сахарным диабетом 1 типа падение стимуляции АЦ под влиянием этих гормонов связано с ослаблением функции Отбелка.
■ Ключевые слова: релаксин, инсулин, аденилатциклаза, диабет, миометрий
Введение
В наших предыдущих исследованиях впервые была обнаружена способность инсулина, инсулиноподобного фактора роста 1 (ИФР-1) активировать аденилатциклазу (АЦ) в мышечных тканях млекопитающих [1—3]. Было установлено, что АЦ-активирующий эффект этих пептидов инсулинового суперсемейства реализуется через следующую сигнальную цепь: рецептор-тирозинкиназа —> G¡ белок (Ру-субъеди н ицы) => фосфатидилинозитол 3-киназа => протеин-киназа С (zeta) => 05-белок => АЦ. Согласно выдвинутой нами гипотезе [3], этот аденилатциклазный сигнальный механизм (АЦСМ) вовлечен в митогенное, а не метаболическое действие гормонов и ростовых факторов инсулинового ряда. Релаксин также относится к пептидам инсулинового суперсемейства, являясь гормоном, регулирующим функции репродуктивной системы у позвоночных [4— 5]. Согласно современным представлениям, эти пептиды имеют общее эволюционное происхождение и обладают структурной гомологией [6]. По общей молекулярной организации релаксин заметно не отличается от инсулина: его молекула состоит из двух полипептидных цепей (А и В), соединенных двумя дисульфидными связями [6]. В то же время он существенно различается по аминокислотной последовательности (примерно на 75%) и обладает видовой специфичностью в пределах релаксинового семейства [7]. Следует отметить, что структурно-функциональная организация рецептора релаксина и механизмы регуляторного действия гормона мало изучены, а о роли аденилатциклазной системы в регулятор-ных эффектах релаксина в миометрии человека имеются лишь немногочисленные данные. Имеются сведения, что увеличение уровня цАМФ при активации АЦ стимулирует активность протеинкиназы А (ПКА), что приводит к фосфорилированию киназы легких цепей миозина, снижая сродство этого фермента к комплексу кальмоду-лин-ионы кальция и вызывая расслабление миометрия. В литературе имеются сведения, что в ходе беременности содержание Са2+/КМ-стимулируемых АЦ снижается, а Са2+-ингибируемых увеличивается [8]. Кроме того, можно привести данные, показывающие инги-бирующее влияние гормона на сократимость матки, которое связано с увеличением цАМФ в клетке [9]. Действительно, после введения релаксина в организм было обнаружено небольшое и кратковременное увеличение уровня цАМФ в матке крысы [9], вследствие чего авторы работы не рассматривали цАМФ в качестве главного посредника ингибирующего действия гормона на активность АЦ в миометрии крыс. Позднее в другой работе [10] были получены доказательства участия ПКА в расслабляющем эффекте релаксина. Наши исследования [4, 5] впервые выявили активирующее действие релаксина на АЦ. В то же время повышение уровня цАМФ, индуцированное этим гормоном, было обнаружено не только в тка-
отшьшшрст » жейскихь щтшей
том liii выпуск 2/2004
issn 1684-0461
нях репродуктивного тракта, но и в культуре клеток аденогипофиза [11], а также в МСР-7 клетках раковой опухоли грудной железы человека [12]. Наряду с регуляторным влиянием на сократительную функцию матки, релаксин при низких концентрациях обладает ростстимулирующим эффектом в МСР-7 клетках [12]. Необходимо отметить, что это митогенное действие гормона сопровождалось изменениями внутриклеточной концентрации цАМФ.
В этой связи исследование функционального состояния инсулин- и релаксинрегулируемой аде-нилатциклазной сигнальной системы (АЦС) в миометрии беременных позволит идентифицировать факторы, вовлеченные в регуляцию активности АЦ. Недостаточность сведений, касающихся изучения функционального состояния АЦС при различных гормональных воздействиях, является одним из факторов, тормозящих изучение пате-ногенеза нарушений функций миометрия при беременности. Эти данные могут послужить основой разработки фармакологических подходов для предотвращения преждевременных родов.
Цель настоящего исследования — сравнительное изучение функциональных характеристик АЦС, регулируемой релаксином и инсулином, в сравнении с катехоламинами в миометрии беременных с доношенной беременностью и у беременных при диабете 1 типа, получающих инсулиновую терапию. Известно, что рецепторы пептидов инсулиновой группы и катехола-минов имеют разное строение. Так, рецепторы катехоламинов пронизывают мембрану семь раз и сопряжены с С5-белком и АЦ. В то же время рецептор инсулина один раз пронизывает мембрану, обладает тирозинкиназной активностью и его сопряжение с АЦ проходит целый ряд этапов [3]. В отношении рецептора релаксина в литературе имеются лишь отрывочные сведения и некоторые авторы склоняются к мнению, что рецептор релаксина семь раз пронизывает мембрану [13], но окончательного решения по этому вопросу в литературе нет.
Исследования АЦС включают несколько методических подходов, позволяющих оценивать функциональное состояние отдельных компонентов системы. Так, изучение базальной (без каких-либо воздействий) активности АЦ миометрия дает возможность судить о функции собственно фермента, т. е. каталитического компонента системы, а «функциональным зондом», стимулирующим активность фермента, является форсколин. Для изучения функции другого компонента системы О-белка, способного выступать как в роли регулятора АЦ, так и быть сопрягающим компонентом между рецептором и АЦ, ис-
пользовали целый ряд «функциональных зондов». Один из них NaF — самый сильный регулятор активности АЦ. Другое вещество — не-гидролизуемый аналог гуанинового нуклеотида гуанозинтрифосфата — гуанилилимидодифосфат (ГИДФ). Для характеристики в целом гормон-регулируемой АЦС применяли разные гормоны: аналог биогенного амина — изопротеренол (10~б М, время действия 10 мин), инсулин и релаксин, оказывающими стимулирующий эффект на АЦ при коротких сроках действия (2,5 минуты). Полноценное функционирование АЦС можно выявить при совместном влиянии гормонов и ГИДФ на активность АЦ (потенцирующее влияние ГИДФ на эффект гормонов).
Для исследований взяты две группы беременных: 1) беременные с неосложненной беременностью — 20 женщин (условный контроль); 2) беременные, больные диабетом 1 типа — 10 женщин. Для каждой группы проведены биохимические исследования влияния перечисленных веществ на активность АЦ в миометрии.
Материал и методы
В работе были использованы следующие реактивы и пептиды, полученные из разных фирм. Креатинфосфат, креатинфосфокиназа (3500 ЕД/мг белка), ГИДФ, форсколин, трис-НС1, окись алюминия для колоночной хроматографии, АТФ, цАМФ, изопротеренол и ими-дазол фирмы Sigma (США), а также [ог32Р] АТФ (4 Ки/ммоль) фирмы Amersham (Англия). Кристаллический инсулин человека (24 UE, Lilly, Indianapolis, США). Кристаллический релаксин 2 человека, любезно предоставленный доктором Кристианом Швабе (Медицинский университет штата Южная Каролина), пептид с мол. массой 6000 Да.
Образцы ткани миометрия были получены из нижнего сегмента матки беременных в процессе операции кесарева сечения. Для получения частично очищенной мембранной фракции ткань гомогенизировали, гомогенат центрифугировали при 1000 g в течение 10 мин. Полученный супернатант центрифугировали при 20 000 g в течение 20 мин и осадок использовали для определения активности АЦ. Эффекты пептидов и активаторов изучали в условиях in vitro, агенты были добавлены к пробам для определения активности АЦ (2,5 и 10 мин). В контрольные пробы вместо используемых агентов добавляли растворители гормонов или активаторов [4].
Определение активности АЦ проводили согласно методу Соломона и соавт. [14] с некоторыми модификациями. Реакционная смесь (ко-
■ ¡WliiTbШ'ИЕРСШ"Ж£НШ1Х1> БО.ТШЙ том lim выпуск 2/2004
issn 1684-0461
нечный объем 50 мкл) была следующего состава (мМ): 50 трис-НС1 (рН 7,5), 5 МбС12, 0,1 АТФ, 1 цАМФ, 20 креатинфосфата, 1 мкКи [ог32Р]АТФ, 0,2 мкг/мл креатинфосфокиназы с активностью 3500 ЕД и 15—20 мкг мембранного белка. Инкубацию проводили при 37 °С в течение 2,5 и 10 мин. Активность АЦ оценивали по количеству образовавшегося в результате реакции цАМФ, который определяли методом колоночной хроматографии с окисью алюминия. Каждый эксперимент выполнен в 4 параллельных пробах.
Содержание белка определяли методом Лоу-ри с использованием бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта.
Все данные представлены в виде средней ± стандартная ошибка средней (М±ш). Метод парных сравнений Стьюдента был применен для сравнения контрольных и экспериментальных данных (действие гормонов). Достоверными считали различия при р<0,05.
Результаты
Исследования базальной активности АЦ в ми-ометрии беременных показали, что при проведении реакции в течение 2,5 мин или 10 мин величины активности фермента были сходны и составляли 4,3±0,33 и 4,5±0,8 мкмоль цАМФ на 1 мг мембранного белка за 1 мин соответственно (табл. 1).
В миометрии беременных, страдающих диабетом 1 типа, базальная активность АЦ была выше примерно в 2 раза (2,5 мин — 10,4±1,1 мкмоль цАМФ/мг белка/мин, а 10 мин — 9,2±1,0
мкмоль цАМФ/мг белка/мин). Эти данные могут свидетельствовать о том, что каталитический компонент АЦС у беременных, страдающих диабетом 1 типа, уже стимулирован за счет влияния увеличенного уровня глюкозы в крови, что показали и другие авторы [15].
Стимулирующий эффект форсколина на АЦ несколько снижался в миометрии беременных с диабетом 1 типа (табл. 1). Активирующее влияние №Р и ГИДФ на АЦ, выраженное в процентах от контроля (принятого за 100%), уменьшалось примерно на половину (см. табл. 1). Исходя из представленных данных, можно отметить, что взаимодействие С5-белка и АЦ в условиях диабета в миометрии было в значительной степени снижено.
Четкие различия между активностью АЦ в контроле и при диабетической патологии, несмотря на лечение инсулином, выявляются как при действии 10~б М изопротеренола (синтети-теческого аналога адреналина, взаимодействующего с р-адренорецепторами), так и при совместном влиянии ГИДФ и изопротеренола (табл. 2). Чувствительность к изопротеренолу снижается на 50%. Потенцирование ГИДФ его эффекта также уменьшается на 45% (см. табл. 2).
При изучении влияния человеческого релаксина 2 и инсулина концентрации пептидов и время их действия было выбрано с учетом наших данных, полученных при изучении стимулирующего влияния на АЦ инсулина и релаксина [1, 4]. Релаксин (10~9 М) в миометрии человека вызывал сильную стимуляцию базальной активности АЦ (увеличение на 409% по сравнению с
Таблица 1
Влияние форсколина, фторида натрия и ГИДФ на активность АЦ миометрия у беременных и у беременных, страдающих диабетом 1 типа
Активность АЦ (пмоль цАМФ/мин/г)
Без воздействий +форсколин +фторид натрия +ГИДФ
- Диабет - Диабет - Диабет - Диабет
4,5+0,8 10,4+1,8 14,5+1,9 21,8+1,6 95,5±2,3 122,3+5 13+2,5 19,8±3
% - 322±33 210+25 2122±29 1179+81 288+21 190+15
Действие ГИДФ, изопротеренола и совместное их влияние на активность АЦ миометрия у беременных при отсутствии диабета и в присутствии диабета
Активность АЦ (пмоль цАМФ/мин/г) и % от контроля
Контроль ГИДФ Изопротеренол Изо+ГИДФ
- Диабет - Диабет - Диабет - Диабет
4,5+0,8 10,4+0,7 9,4+1,9 14+1,6 8,3+1,3 14,4+1,5 19,512 2612
% 100 100 209+23 135114 184+19 13816 433+40 250115
%* (140)* (77)*
Цифры в скобках — потенцирование ГИДФ эффекта изопротеренола.
Таблица 2
ЗДадШУШТО«"ЖЕНеШЪШШ!ЕЙ том 1111 ВЫПУСК 2/2004
11634-0461
базальной активностью). Инсулин при той же концентрации имел сходный по направленности, но менее выраженный эффект (244%) (рис. 1). При более высокой концентрации пептидов (Ю-8 М) эффект был выражен слабее: стимуляция активности АЦ релаксином 286%, а инсулином — 185% (см. рис. 1). Таким образом, релаксин был более эффективен по сравнению с инсулином. Из этого следует, что АЦ-эффект релаксина 2 человека соответствует его видо-специфичности, что характерно и для ряда пептидов инсулинового суперсемейства [3, 4].
При диабете 1 типа активирующее влияние релаксина и инсулина на АЦ миометрия было ниже как при оптимальной их концентрации (Ю-9 М), так и при более высокой дозе гормона (см. рис. 1). В соответствии с нашими ранними исследованиями [1,4] стимулирующий АЦ эффект релаксина и инсулина усиливается (потенцируется) в присутствии ГИДФ. Изучение влияния ГИДФ на АЦ-активирующий эффект релаксина в сравнении с аналогичным эффектом инсулина показало, что он (10 6 М) усиливает этот эффект пептидов в миометрии (рис. 2). Потенцирование ГИДФ эффекта релаксина (10~9 М) было максимальным (554%), а при действии инсулина оно было значительно ниже (115%). Потенцирующее влияние ГИДФ на эффект Ю-8 М релаксина составляло 317%, а на эффект Ю-8 М инсулина — 212 %. В миометрии беременных, страдающих диабетом 1 типа, потенцирование ГИДФ эффекта Ю-9 М релаксина составляло 298%, а при дозе на порядок выше (10~8 М) было резко снижено (до 56%) (см. рис. 2). При совместном действии инсулина (Ю-9 М) и ГИДФ эффект потенцирования практически отсутствовал (10%), а при совместном влияние ГИДФ и 10~8 М инсулина эффект составлял 273%. Известно, что потенцирующее действие гуани-новых нуклеотидов на эффект гормона является критерием участия в нем в белков. Эти данные указывают на участие С5-белка в АЦ-эффекте релаксина и инсулина, что совпадает с нашими данными, полученными для других пептидов инсулинового суперсемейства [1—3] и на ослабление влияния релаксина в миометрии при диабете.
Обсуждение результатов
Проведенное исследование показало, что релаксин, подобно другим пептидам инсулинового суперсемейства (инсулин, ИФР-1 и др.) [1—3], способен оказывать активирующее влияние на активность АЦ в миометрии беременных. Полученные данные показывают, что эффектив-
ность действия пептидов находится в соответствии с данными о наибольшей силе действия релаксина на АЦ миометрия человека — ткань-мишень, гомологичную человеческому релаксину (видовая специфичность) [4]. В связи с обнаружением нами АЦ-стимулирующего действия релаксина на классическую ткань-мишень — миометрий и другие ткани, и в соответствии с нашей гипотезой о вовлеченности системы АЦ— цАМФ в ростстимулирующее действие пептидов инсулинового суперсемейства [3] мы имеем основания предложить релаксин на роль потенциального митогенного фактора, действие которого может опосредоваться через АЦС.
Рецепторы, специфичные к релаксину, были идентифицированы не только в тканях репродуктивной системы, но и в мозгу, сердце и т. д. [16—17]. Специфичность взаимодействия релаксина и его рецептора была подтверждена неспособностью вытеснения связанного меченого гормона другими пептидами, принадлежащими к тому же инсулиновому суперсемейству — инсулином и ИФР-1 [16]. С другой стороны, было показано, что релаксин не способен взаимодействовать с инсулиновым рецептором [16]. Таким образом, в проведенном исследовании получены доказательства участия АЦСМ в действии релаксина, подобно тому как это было установлено нами ранее для других пептидов инсулинового суперсемейства [3].
Проведенное экспериментальное исследование показало, что релаксин и инсулин in vitro активирует АЦ в миометрии беременных. Ранее нами было обнаружено, что в скелетных мышцах кур и крыс [1—3] этот гормон вызывает такой же эффект. Полученные факты указывают на распространенность этих регуляторных действий релаксина и инсулина в тканях позвоночных. Согласно нашим данным [3], АЦ-активирующий эффект инсулина реализуется через АЦСМ, который обеспечивает передачу инсулинового сигнала к конкретным мишеням регуляторного действия гормона. Как мы предполагаем, в условиях целого организма инсулин является важным фактором, необходимым для поддержания в функционально активном состоянии АЦСМ путем регуляции активности его отдельных сигнальных блоков, возможно даже через изменение синтеза входящих в него белков. В настоящем исследовании, проведенном на миометрии беременных с диабетом 1 типа со сниженной продукцией инсулина в организме, были получены данные, свидетельствующие в пользу нарушений в функционировании АЦСМ при этой патологии.
Обнаружено, что при диабете 1 типа базаль-ная активность АЦ в миометрии возрастает.
■ »тит.АОШЮТА«ЖЕНСШЪНИШЕЙ том liii выпуск 2/2004
issn 1684-0461
Сходный факт был установлен и другими авторами [13]. В наших исследованиях действие инсулина (108 М) in vitro как своего рода функционального зонда на реактивность АЦС к этому гормону в миометрии при инсулинзависимом диабете даже при лечении инсулином было обнаружено уменьшение стимулирующего эффекта гормона, а также его совместного действия с ГИДФ на активность АЦ. Эти эффекты являются результирующей действия инсулина на весь АЦ сигнальный каскад, включающий не менее семи сигнальных блоков.
Данные, полученные с использованием негормональных активаторов как функциональных зондов на отдельные компоненты АЦС в миометрии при диабете, выявили изменения каталитической активности АЦ (снижение влияния форсколина) и взаимодействия выбелка с АЦ (снижение эффектов фторида натрия, ГИДФ и инсулина совместно с ГИДФ).
^ л 5
| в а Is s
, я о
* £ * 5 £ «
500 400 300 200 100
Контроль
Диабет
■ релаксин 10'' М
■ релаксин 10"8 М
□ инсулин Ю 'М
□ инсулин 108М
Рис. 1. Стимулирующее влияние релаксина (Ю-9—10"8 М) и инсулина (10~9—10"8 М) на активность аденилатциклазы в миометрии беременных контрольной группы и группы больных диабетом 1 типа
га _г
S3-
s < g
<-> л ё
* £ о
«5а
ß о ь
Й * Z
и 5 *
ff) I
1200 1000 800-600-400-200-
■III
шИ
llli
■
Контроль
Диабет
■ релаксин 10" М + ПИДФ @ релаксин Ю'8М+Орр[МН]р
□ инсулин 10"'М
□ инсулин 10'8М
Рис. 2. Действие ГИДФ (Ю-6 М) на АЦ-активирующие эффекты релаксина и инсулина в миометрии беременных контрольной группы и группы больных диабетом 1 типа
Из установленных фактов следует, что в условиях инсулиновой недостаточности при диабете 1 типа возникает нарушение в самой АЦ, выражающееся в возрастании базальной активности и снижении каталитических потенций фермента. Далее, ослабляются функции выбелка и, в частности, его способность взаимодействовать с АЦ (снижение эффектов NaF, ГИДФ, инсулина совместно с ГИДФ). Изменение функций АЦС при диабете обнаружено и другими авторами [12, 13, 15]. В частности, в миокарде диабетических крыс наблюдалось четкое снижение (примерно на 48%) стимулирующего действия ГИДФ на активность АЦ [12].
Таким образом, при оценке функционального состояния отдельных молекулярных блоков АЦСМ в миометрии беременных, рассматриваемых в качестве контроля, по сравнению с беременными, страдающими диабетом 1 типа, было обнаружено, что при диабете: 1) увеличивается базальная активность АЦ и снижаются эффекты негормональных активаторов АЦ (форсколина, ГИДФ и NaF); 2) понижается чувствительность к изопротеренолу и уменьшается потенцирующее влияние ГИДФ на его эффект; 3) снижается реактивность АЦС к релаксину и инсулину и к совместному действию этих пептидов и ГИДФ.
Проведенные исследования позволяют сделать заключение о том, что у беременных с диабетом 1 типа по сравнению с контролем выявляются изменения в функционировании АЦС на уровне как каталитического компонента — АЦ, так и выбелка. Снижение стимуляции АЦ гормонами — изопротеренолом, релаксином и инсулином указывает на значительные нарушения функционирования АЦС на этапе сопряжения рецептора, активированного гормоном, и гетеротримерных G белков. Эти факты свидетельствуют о снижении чувствительности не только к инсулину и релаксину, но и к р-агони-сту — изопротеренолу в миометрии человека при диабете.
Литература
1. Pertseva M.N., Plesneva S.A., Shpakov А.О., Rusakov Yu.L, Kuznetsova L.A. Involvement of adenylyl cyclase signalling system in the action of insulin and mollusc insulin-like peptide. Сотр. Biochem. Physiol. - 1995. -Vol. 112. - P. 689-695.
2. Pertseva M.N., Plesneva S.A., Kuznetsova L.A., Shpakov A.O., Derkach K.V. On the tyrosine kinase mechanism of the novel effect of insulin and insulin-like growth factor-l: Stimulation of adenylyl cyclase system in muscle tissues. Biochem. Pharmacol. - 1996. - Vol. 52. - P. 1867-1874.
3. Pertseva M.N., Shpakov A.O., Plesneva S.A., Kuznetsova L.A. A novel view on the mechanism of action of insulin and other insulin superfamily peptides: involvement of adenylyl cyclase signaling system. Сотр. Biochem. Physiol. - 2003. -Vol. 134. - P. 11-34.
жт1шаш11ш:щ><ж£нс№'ьбшшнв1 tom им выпуск 2/2004
issn 1684-0461
4. Kuznetsova L., Plesneva S., Derjabina N.. Omeljaniuk E., Pertseva M.N. On the mechanism of relaxin action: the involvement of adenylyl cyclase signalling system. Regul. Peptides. - 1999. - Vol. 80. - P. 33-39.
5. Плеснева C.A., Кузнецова JI.A. Омельянюк E.B., Шпаков А. О., Перцева М.Н. Аденилатциклазный сигнальный механизм действия релаксина //Ж. эвол. биох. физиол. -2000. - Т. 36. - С. 562-568.
6. Bryant-Greenwood G.D. and Schwabe С. Human relaxins: chemistry and biology. End. Rev. - 1994. - Vol. 15. - P. 5~26.
7. Bullesbach E.E., Yang S., Schwabe С. The receptor - binding site of human relaxin 2. A dual prong - binding mechanism. J. Biol. Chem. - 1992. - Vol. 267. - P. 22957-22960.
8. Кузнецова JI.A. Регуляторные свойства изоформ аденилатциклаз // Ж. эвол. биох. физиол. - 2002. -Т. 38.-С. 289-304.
9. Mcllwrath A., Downing S. J., Hollingsworth М. Relaxin and cAMP in rat uterus in vivo, Biochem. Soc. Transact. - 1991. -Vol.19.-P. 356S.
10. Hughes S.J., Hollingsworth M., Elliot K.R. The role
of a cAMP-dependent pathway in the uterine relaxant action of relaxin in rats // J. Reprod. Fertil. - 1997. - Vol. 109. -P. 289-296.
11. Cronin M. J., Malaska Т., Bakhit C. Human relaxin increases cyclic AMP levels in cultured anterior pituitary cells 11 Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1987. - Vol. 148. -
P. 1246-1251.
12. Bigazzi M., Brandl M.L., Bani G., Bani Sacchi T. Relaxin influences the growth of MCF-7 brast cancer cells. Mitogenic and antimitogenic action depends on peptide concentration // Cancer. - 1992. - Vol. 70. - P. 639-643.
13. Hsu SY, Nakabayashi K, Nishi S, Kumagai J, Kudo M, Sherwood OD, Hsueh AJ. Activation of orphan receptors by the hormone relaxin // Science. - 2002. - Vol. 295. - P. 671-4.
14. Salomon Y, Londons C., Rodbell M. A highly sensitive adenylate cyclase assay // Anal. Biochem. - 1974. -Vol. 58. - P. 541-548.
15. Kawabe J., Aizawa Y, Takehara N., Hasebe N., Kikuchi K. Glucose modifies the cross-talk between insulin and the beta-adrenergic signaling system in vascular smooth muscle cells // J. Hypertens. - 2000. - Vol. 18. - P. 1457-1464.
16. Yang, S., Rembiesa, B., Bullesbach, E.E., Schwabe C. Relaxin receptors in mice: Demonstration of ligand binding in symphyseal tissues and uterine membrane fragments // Endocrinology. - 1992. - Vol. 130. - P. 179-185
17. Greenbaum C.J. Insulin resistance in type 1 diabetes. Diabetes Metab. Res. Rev. - 2002. - Vol. 18. - C. 192-200.
18. Fu L.X., Bergh C H., Liang Q.M., Sjogren KG., Xu X., Eriksson P., Hoebeke J., Hjalmarson A. Diabetes-induced changes in the Gi-modulated muscarinic receptor-adenylyl cyclase system in rat myocardium // Pharmacol. Toxicol. -1994.-Vol.75.-P. 186-193.
19. Anand-Srivastava M.B., McNeill J.H., YangX.P. Reversal of defective G-proteins and adenylyl cyclase/cAMP signal transduction in diabetic rats by vanadyl sulphate therapy // Mol. Cell Biochem. - 1995. - Vol. 153. - P. 113-119.
20. Lin S., Kajimura M., Takeuchi K., Kodaira M., Hanai H., Nishimura M., Kaneko E. Alterations of GTP-binding proteins (Gsalpha and Gq/llalpha) in gastric smooth muscle cells from streptozotocin-induced and WBN/Kob diabetic rats // Dig. Dis. Sei. - 2000. - Vol. 15. - P. 1517-1524.
21. Le Marchand-Brüste! G. Molecular mechanism of insulin action in normal and insulin-resistant states // Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes. - 1999. - Vol. 107. - P. 126-132.
22. Le Roith D., Kim H., Fernandez A.M., Accili D. Inactivation of muscle insulin and IGFI receptors and responsiveness // Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. - 2002. - Vol. 5. -
P. 371-375.
■ Ш11ШОТ1ГОВИЖШтКЬБ0,ЭДНЕЙ том lui выпуск 2/2004
issn 1684-0461
