CC BY
42
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
NATURAL SCIENCE. 2017. No. 3-2
УДК 577.21:616-092.6:618.14-006.6:618.14-065.873 DOI 10.23683/0321-3005-2017-3-2-11-21
ВЛИЯНИЕ ВОЗРАСТНОГО И ТЕНДЕРНОГО СТАТУСА ПАЦИЕНТОВ ЮГА РОССИИ С КОЛОРЕКТАЛЬНЫМ РАКОМ НА МУТАЦИОННЫЙ СТАТУС ГЕНА KRAS
© 2017г. Д.И. Водолажский1, К.А. Куцын1, С.Б. Панина1, Я.С. Енин1, О.И. Кит1, Н.В. Солдаткина1,
Д.В. Бурцев2, А.В. Шапошников1
1Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, Ростов-на-Дону, Россия, 2 Областной консультативно-диагностический центр, Ростов-на-Дону, Россия
THE INFLUENCE OF AGE AND GENDER ON MUTATIONAL STATUS OF KRAS GENE IN PATIENTS WITH COLORECTAL CANCER IN THE SOUTH OF RUSSIA
D.I. Vodolazhsky1, K.A. Kutsyn1, S.B. Panina1, Ya.S. Yenin1, O.I. Kit1, N. V. Soldatkina1,
D.V. Burtsev2, A.V. Shaposhnikov1
1Rostov Research Institute of Oncology, Rostov-on-Don, Russia, 2 Regional Consultative and Diagnostic Center, Rostov-on-Don, Russia
Водолажский Дмитрий Игоревич - кандидат биологических наук, руководитель лаборатории молекулярной онкологии, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: dvodolazhsky@gmail.com
Куцын Ксения Андреевна - младший научный сотрудник, лаборатория молекулярной онкологии, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: jozhka@bk.ru
Панина Светлана Борисовна - старший научный сотрудник, лаборатория молекулярной онкологии, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: tailana703@gmail.com
Енин Ярослав Сергеевич - биолог, лаборатория вирусологии, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: Dendro51@yandex.ru
Кит Олег Иванович - доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАН, заслуженный врач РФ, генеральный директор, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия.
Солдаткина Наталья Васильевна - доктор медицинских наук, старший научный сотрудник, отделение абдоминальной онкологии № 2, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: snv-rnioi@yandex.ru
Бурцев Дмитрий Владимирович - доктор медицинских наук, главный врач, Областной консультативно-диагностический центр, ул. Пушкинская, 127, г. Ростов-на-Дону, 344000, Россия, e-mail: dr-burtsev@mail.ru
Шапошников Александр Васильевич - доктор медицинских наук, профессор, главный научный сотрудник, отделение общей онкологии, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: rnioi@list.ru
Dmitry I. Vodolazhsky - Candidate of Biological Sciences, Head of the Laboratory of Molecular Oncology, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: dvodolazhsky@gmail.com
Ksenia A. Kutsyn - Junior Researcher, Laboratory of Molecular Oncology, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: jozh-ka@bk.ru
Svetlana B. Panina - Senior Researcher, Laboratory of Molecular Oncology, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: taila-na 703 @gmail. com
Yaroslav S. Enin - Biologist, Laboratory of Virology, Rostov Research Institute of Oncology, 14 Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: Dendro51@yandex.ru
Oleg I. Kit - Doctor of Medicine, Professor, Corresponding Member, RAS, Honored Doctor of the Russian Federation, General Director, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia.
Natalia V. Soldatkina - Doctor of Medicine, Senior Researcher, Department of Abdominal Oncology No. 2, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: snv-rnioi@yandex.ru
Dmitry V. Burtsev - Doctor of Medicine, Chief Doctor, Regional Consultative and Diagnostic Center, Pushkinskaya St., 127, Rostov-on-Don, 344000, Russia, e-mail: dr-burtsev@mail.ru
Alexander V. Shaposhnikov - Doctor of Medicine, Professor, Chief Researcher, General Oncology Department, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: rnioi@list.ru
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2017. No. 3-2
Цель - анализ частоты соматических мутаций гена KRAS в опухолевых образцах пациентов Юга России с колорек-тальным раком, а также оценка потенциальной взаимосвязи между мутациями KRAS и риском развития метастазов у пациентов.
Процедура экстракции ДНК из залитых парафином блоков тканей (FFPE) включала в себя стандартную депарафи-низацию срезов в ортоксилоле. Из полученных срезов получали препараты суммарной ДНК. При помощи набора реагентов Real-Time-PCR-KRAS-7M («Биолинк», Россия) проводили детекцию 7 SNP-мутаций (Single Nucleotide Polymorphism) в 12-м и 13-м кодонах гена KRAS: G12C, G12S, G12R, G12V, G12D, G12A, G13D с использованием термоциклера Bio-Rad FX96 (Bio-Rad, США). Все статистические анализы проводились в пакете IBM SPSS Statistics v.23, Microsoft Excel 2013 и STATISTICA 8.0.
Обнаружена статистически достоверная связь с метастазированием мутации G12D в гене KRAS, а именно тенденция к снижению риска метастазирования (OR = 0,625, 95 % CI 0,389-1,006, p = 0,053). Прогрессирование колоректального рака достоверно связано с увеличением стадии заболевания (OR = 2,061, 95 % CI 1,790-2,373, p < 0,0001), с увеличением возраста пациента (науровне тенденции, OR = 1,010, 95 % CI 0,999-1,022, p = 0,080).
Выводы
1. Наличие мутации G12D в гене KRAS снижает риск метастазирования (OR = 0,625, 95 % 10,389-1,006, p = 0,05).
2. Вероятность образования метастазов колоректального рака достоверно связана с увеличением стадии развития опухолей (OR = 2,061, 95 % CI 1,790-2,373, p<0,0001) и с увеличением возраста пациента (на уровне тенденции, OR = 1,010, 95 % CI 0,999-1,022, p = 0,080).
3. С возрастом у пациентов (особенно женского пола) увеличивается частота проявляемости мутантного типа гена KRAS. Можно сделать вывод, что наличие мутантного варианта гена KRAS является предиктором образования метастазов.
Ключевые слова: колоректальный рак, метастатический колоректальный рак, таргетная терапия, KRAS, Юг России.
Aim - to analyze the frequency of somatic mutations in the KRAS gene in tumor samples of Southern Russia patients with colorectal cancer, and also to assess the potential relationship between KRAS mutations and the risk of metastatic development in patients.
The procedure for DNA extraction from paraffin-embedded tissue blocks (FFPE) included standard dewaxing of sections in or-thoxylene. From the presence of sections of registration of total DNA preparations. Using the Real-Time-PCR-KRAS-7M reagent kit (Biolink, Russia), 7 SNP mutations (Single Nucleotide Polymor-phism) were detected in the 12 and 13 codons of the KRAS gene: G12C, G12S, G12R, G12V, G12D , G12A, G13D using the Bio-Rad CFX96 thermal cycler (Bio-Rad, USA). All statistical analyzes were carried out in the package IBM SPSS Statistics v. 23.0, Microsoft Excel 2013 and STATISTICA 8.0.
A statistically significant association with metastasis was observed in the presence / absence of G12D in the KRAS gene, namely, the tendency to decrease the risk of metastasis (OR = 0.625, 95 % CI 0.389-1,006, p = 0.053). Progression of colorectal cancer is significantly associated with an increase in the stage of the disease (OR = 2.061, 95 % CI 1.790-2.373, p <0.0001), with an increase in the patient's age (at the trend level, OR = 1.010, 95 % CI 0.999-1.022, p = 0.080).
Conclusions
1. The presence of the G12D mutation in the KRAS gene reduces the risk of metastasis (OR = 0.625, 95 % CI 0.389-1.006, p = 0.05).
2. The probability offormation of metastases of colorectal cancer is significantly associated with an increase in the stage of development of tumors (OR = 2.061, 95 % CI 1.790-2.373, p <0.0001) and with the age of the patient (at the trend level, OR = = 1.010, 95 % CI 0.999-1.022, p = 0.080).
3. With age, in patients (especially females) the incidence of the mutant type of the KRAS gene increases, which leads to the conclusion that the presence of a mutant variant of the KRAS gene is a predictor of metastasis formation.
Keywords: colorectal cancer, metastatic colorectal cancer, targeted therapy, KRAS, South of Russia.
Введение
Колоректальный рак (КРР) - распространенное злокачественное заболевание желудочно -кишечного тракта, занимающее по показателю заболеваемости 4-е место среди мужчин и 3-е место среди женщин по всему миру, что составляет более 1,2 млн новых случаев заболевания и 0,6 млн смертей в год [1].
По данным статистики в России на 2014 г., количество заболеваний раком толстой кишки составило 22,9 % от общего числа онкологических заболеваний [2].
Вирусный онкогенный гомолог (KRAS) саркомы крысы V-Ki-ras2 Кирстен является важным участником метаболического пути, который часто нарушается при КРР. Он участвует в модуляции нескольких нижестоящих эффекторов, которые включают в себя: Raf/Mek/Erk, PI3K/Akt, RalGDS/p38MAPK и Rac/Rho, и тем самым влияет на онкогенез, инва-зивное поведение опухолевой клетки и устойчивость к терапии. Растет число исследований, изучающих использование лекарственных препаратов для лечения КРР, которые нацелены на эти метаболические пути. Цетуксимаб был одобрен для пациентов с КРР без мутаций KRAS или с EGFR-
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
экспрессирующим метастатическим КРР (мКРР), хотя у большинства пациентов имеется мутация KRAS и NRAS [3].
Мутации KRAS и NRAS определяют популяцию, резистентную к анти-EGFR-таргетным препаратам, применяемым либо как отдельные агенты, либо в комбинации со стандартной химиотерапией. Высокочувствительное расширенное тестирование RAS в настоящее время является необходимым условием для выбора терапии ингибиторами EGFR независимо от линии лечения, что сокращает время и расходы для пациентов, у которых вряд ли будет ответ на такую терапию. Было описано множество генетических изменений, повышающих устойчивость к моноклональным антителам против EGFR, со значительным перекрытием первичных и приобретенных механизмов устойчивости. Некоторые из них были подтверждены в качестве мишеней для терапевтического вмешательства в клинических испытаниях, таких как амплификация ERBB2. Благодаря достижениям в разработке лекарств и лучшему пониманию динамики ингибирования мишени дополнительные генные изменения в настоящее время являются перспективными позитивными прогностическими маркерами для таргетной терапии [4].
У половины пациентов с КРР развиваются отдаленные метастазы, которые могут быть обнаружены на ранней или более поздней стадии диагностики. Новые фармакологические агенты таргети-руют главным образом два сигнальных пути: опухолевый рост, опосредованный проангиогенными факторами, и сигнальный путь рецептора эпи-дермального фактора роста (EGFR), запускающего клеточную пролиферацию [5]. Прогностические биомаркеры, имеющие клиническое значение для чувствительности к антиангиогенным препаратам, пока не определены [6]. Напротив, моноклональ-ные антитела (moAbs) против EGFR эффективны у тех пациентов, опухоли которых не имеют активирующих мутаций в генах KRAS и NRAS [1, 7]. Приблизительно 40-60 % пациентов, не имеющих активирующих мутаций во 2-м экзоне гена KRAS, получают преимущество от применения таргет-ных препаратов. Это указывает на потенциальное вовлечение генетических изменений в пути KRAS/BRAF и PI3K/AKT, расположенных «ниже по течению» EGFR. Все эти гены связаны с регуляцией роста и прогрессирования опухоли. Исследования указывают на то, что дополнительные мутации в KRAS и NRAS, а также BRAF или PIK3CA обеспечивают резистентность к анти-EGFR-терапии [8].
Установление прогностической роли этих и других биомаркеров позволило идентифицировать
NATURAL SCIENCE. 2017. No. 3-2
одних пациентов, подходящих для таргетной терапии, и избавить других (имеющих противопоказания) от бесполезной (и даже вредной) анти-EGFR-терапии [4, 9]. В нескольких рандомизированных контролируемых исследованиях было продемонстрировано, что соматические однонуклеотидные точечные мутации (SNP) в 12-м и 13-м кодонах гена KRAS определяют конститутивную активацию сигнальных путей MAPK (митоген-активируемые протеинкиназы), что приводит к устойчивости к анти-EGFR-терапии. Активирующие мутации в гене KRAS являются отрицательными прогностическими маркерами, и отбор пациентов для лечения анти-EGFR-препаратами зависит от мутационного статуса RAS. Результаты свидетельствуют о том, что для пациентов с метастатическим КРР с диким типом гена KRAS (WT KRAS) весьма эффективными являются сочетанная терапия анти-EGFR-агентами и химиотерапия [10]. Около 35^60 % пациентов с КРР имеют мутации RAS [5].
Онкогены RAS (KRAS, NRAS, HRAS) кодируют семейство GTP-регулируемых переключателей, которые рекуррентно мутированы при КРР. Четыре фермента, кодируемые тремя генами RAS, гомологичны друг другу. Мутации приводят белок RAS в активированную GTP-связанную форму, предотвращая гидролиз GTP и тем самым препятствуя переходу в неактивное состояние, связанное с GDP. Онкогенные мутации RAS наблюдаются в консервативных горячих точках в кодонах 12, 13, 61, 117 и 146. Активация белков RAS приводит к плейотроп-ным эффектам в клетках, включая клеточную пролиферацию, выживание и дифференцировку. При КРР мутации RAS преимущественно встречаются в гене KRAS. 45 % мКРР содержат активирующие мутации в гене KRAS. Мутации в гене NRAS встречаются только в 2V7 % случаев мКРР. В настоящее время мутации NRAS идентифицируются при клиническом лечении мКРР как часть рутинного тестирования перед терапией ингибиторами EGFR (рецепторами эпидермального фактора роста). Мутации в гене KRAS ассоциированы чаще всего с правосторонними опухолями толстой кишки, в то время как мутации в гене NRAS ассоциированы с левосторонними первичными опухолями и женским полом пациентов, что предполагает несколько различную биологию происхождения KRAS- и NRAS-мутантных молекулярных клонов мКРР [6].
Наличие мутаций в генах KRAS и NRAS у пациентов с КРР связано с отсутствием ответа на тар-гетную анти-EGFR-терапию. Считается, что мутации в этих генах являются взаимоисключающими, однако в отчетах описываются случаи КРР с двумя мутациями RAS. Возникает вопрос, являются ли эти мутации результатом внутриопухолевой гете-
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
рогенности или же они происходят совместно в одном и том же клоне. Анализ образцов с помощью лазерного микродиссектора и NGS-секвенирования исключил возможность наличия нескольких мутаций RAS в одном и том же клоне, что свидетельствует о внутриопухолевой гетерогенности мутаций [7]. Результаты полногеномного секвенирования показали, что мутации RAS присутствовали в 51,4 %; мутации RAF были замечены у 7,2 % пациентов с мККР. Была обнаружена новая мутация KRAS R68S1, связанная с агрессивным фенотипом [11].
Целью нашего исследования были анализ частоты соматических мутаций гена KRAS в опухолевых образцах пациентов Юга России с КРР, оценка потенциальной взаимосвязи между мутациями KRAS и риском развития метастазов у пациентов.
Материалы и методы
В исследование включено 800 пациентов Юга России, проходивших плановое лечение в ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» МЗ РФ в 2011-2016 гг. с диагнозом «коло-ректальная аденокарцинома T2-4N0-2M0-1». Среди больных было 426 (53,2 %) женщин и 374 (46,8 %) мужчины. Распределение по возрасту больных: до 55 лет - 271 пациент (33,9 %), старше 55 лет - 529 (66,1 %), старше 60 лет - 378 (47,3 %), моложе 60 лет - 422 пациента (52,7 %). У всех больных гистологически опухоли характеризовались как адено-карциномы различной степени дифференцировки. Всем больным выполнены циторедуктивные и радикальные оперативные вмешательства. Большинство пациентов (78,2 %) характеризовалось поздними стадиями прогрессии КРР (III-IV стадии). Из всей группы пациентов 81,5 % имели прогрессирующий КРР с метастазами. Медиана возраста пациентов составляла 60 лет с размахом варьирования от 10 до 89 лет.
Из фиксированных в 10%-м забуференном формалине и залитых в парафин образцов тканей опухолей (парафиновые блоки) получали срезы толщиной 3-5 мкм. Гистологические препараты, полученные из залитых парафином блоков тканей (FFPE), после окрашивания изучались методом световой микроскопии. Каждый препарат был паспортизирован в соответствии со стандартами pTNM-классификации.
Процедура экстракции ДНК включала в себя стандартную депарафинизацию срезов в орто-ксилоле. Из полученных срезов получали препараты суммарной ДНК [8]. Концентрацию выделенной из образцов ДНК измеряли на флюоромет-
NATURAL SCIENCE. 2017. No. 3-2
ре Qubit 2.0® с использованием набора Quant-iT™ dsDNA High-Sensitivity (HS) Assay Kit (Invitrogen, США). Концентрация ДНК нормализовывалась до величины 2 нг/мкл. При помощи набора реагентов Real-Time-PCR-KRAS-7M («Биолинк», Россия) проводили детекцию 7 SNP-мутаций (Single Nucleotide Polymorphism) в 12-м и 13-м кодонах гена KRAS: G12C, G12S, G12R, G12V, G12D, G12A, G13D с использованием термоциклера BioRad CFX96 (Bio-Rad, США) для 5%-го уровня чувствительности согласно инструкции производителя. Для оценки потенциального влияния мутационного статуса гена KRAS на риск развития метастазов у пациентов с КРР был использован метод бинарной логистической множественной регрессии (вариант - пошаговая регрессия с принудительным включением потенциальных предикторов). Оценку достоверности различий проводили с использованием Х2-критерия для порогового уровня статистической значимости р<0,05. Все статистические анализы проводились в пакете IBM SPSS Statistics v.23.0, Microsoft Excel 2013 и STATISTICA 8.0.
Результаты исследования и обсуждение
Мутации в гене KRAS были обнаружены у 38,6 % больных объединенной выборки, при этом наиболее распространенной мутацией была замена G12D в гене KRAS (44,3 %). Менее распространенными детектируемыми мутациями в гене KRAS были G13D (17,4 %), G12V (16,5 %), G12A (8,7 %), G12C (7,1 %), G12S (3,8 %), G12R (2,2 %). Частота проявления мутаций в гене KRAS при распределении объединенной выборки пациентов (без гендерных различий) по возрастным группам представлена в табл. 1.
При анализе представленных в табл. 1 данных обращает на себя внимание факт различий в частоте проявления мутантного типа гена KRAS у пациентов различных возрастных групп. У пациентов возраста моложе 60 лет частота встречаемости мутантного типа гена KRAS приблизительно на 5 % меньше аналогичного показателя для возрастной группы пациентов старше 60 лет. Аналогичное распределение частот проявления мутантного типа гена KRAS наблюдается для пациентов возрастных групп моложе и старше 55 лет: у пациентов моложе 55 лет частота встречаемости мутантных вариантов гена KRAS приблизительно на 7 % меньше аналогичного показателя для группы пациентов старше 55 лет. Эти различия статистически достоверны для уровня значимости p<0,05 по непараметрическому критерию X2.
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2017. No. 3-2
Таблица 1
Статус гена KRAS у пациентов с КРР (мужчины и женщины) в разных возрастных группах / Status of the KRAS gene in patients with colorectal cancer (men and women) in different age groups
Возраст Общее число пациентов, n=800 (100 %) Статус гена KRAS Значение критерия X2 Значение p, статистическая значимость
Дикий тип, n=491 (61,3 %) Мутантный тип, n=309 (38,6 %)
< 60 лет 422 (52,75 %) 269 (63,7 %) 153 (36,2 %) 2,11 0,1459
> 60 лет 378 (47,25 %) 222 (58,7 %) 156 (41,2 %)
< 55 лет 271 (33,8 %) 179 (66,05 %) 92 (33,9 %) 3,78 0,05
>55 лет 529 (66,1 %) 312 (58,9 %) 217 (41,02 %)
Мутации в гене КЯЛБ были обнаружены в целом у 34,2 % пациентов мужского пола (табл. 2). При анализе представленных в табл. 2 данных обращает на себя внимание факт отсутствия статистически значимых различий в частоте проявления мутантного типа гена КЯЛБ у пациентов мужского пола различных возрастных групп. У пациентов в возрасте моложе 60 лет частота встречаемости мутантного типа гена КЯЛБ приблизительно на 8 % меньше аналогичного показателя для возрастной группы пациентов старше
Как показано в табл. 3, частота проявления мутаций в гене КЯЛБ у пациентов женского пола с КРР в возрастных группах моложе 60 лет и старше 60 лет различается между собой приблизительно на 3 %, причем у пациенток старшей возрастной
60 лет, однако эти различия статистически недостоверны. Аналогичное, но менее выраженное распределение частоты проявления мутантного типа гена КЯЛБ наблюдается для пациентов возрастных групп моложе и старше 55 лет: у пациентов моложе 55 лет частота встречаемости мутант-ных вариантов гена КЯЛБ приблизительно на 3 % меньше аналогичного показателя для группы пациентов старше 55 лет. Эти различия также статистически недостоверны для уровня значимости р<0,05 по непараметрическому критерию X.
Таблица 2
группы этот показатель (44,2 %) приблизительно на 3 % больше аналогичного показателя младшей возрастной группы (41,1 %). Однако эти различия статистически недостоверны для 5%-го уровня значимости.
Таблица 3
Статус гена KRAS у пациентов женского пола с КРР в разных возрастных группах / Status of the KRAS gene in female patients with colorectal cancer in different age groups
Возраст Общее число пациентов, n=426 (100 %) Статус гена KRAS Значение критерия X2 Значение p, статистическая значимость
Дикий тип, n= 245(57,5 %) Мутантный тип, n= 181 (42,4 %)
< 60 лет 236 (55,4 %) 139 (58,9 %) 97 (41,1 %) 0,42 0,5188
> 60 лет 190 (44,6 %) 106 (55,7 %) 84 (44,2 %)
< 55 лет 163 (38,2 %) 106 (65 %) 57 (35 %) 6,11 0,0135
> 55 лет 263 (61,7 %) 139 (52,8 %) 124 (47,1 %)
Статус гена KRAS у пациентов с КРР (мужчины) в разных возрастных группах / Status of the KRAS gene in patients with colorectal cancer (men) in different age groups
Общее число Статус гена KRAS Значение критерия X2 Значение p, статистическая значимость
Возраст пациентов, n=374 (100 %) Дикий тип, n=246(65,7%) Мутантный тип, n=128 (34,2 %)
< 60 лет 186 (49,7 %) 130 (69,9 %) 56 (30,1 %) 0,52 0,4481,
> 60 лет 188 (50,2 %) 116 (61,7 %) 72 (38,3 %) не значимо
< 55 лет 108 (28,8 %) 73 (67,6 %) 35 (32,4 %) 0,22 0,6370,
> 55 лет 266 (71,1 %) 173 (65 %) 93 (35 %) не значимо
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
NATURAL SCIENCE.
2017. No. 3-2
Наоборот, у пациенток старше 55 лет частота проявляемости мутаций в гене KRAS приблизительно на 12 % выше аналогичного показателя для пациенток более молодого возраста (моложе 55 лет): соответственно, эти показатели составляют 47,1 и 35 %. Эти различия статистически достоверны для 5%-го уровня значимости (X2 = 6,11, р = 0,0135).
Суммируя полученные данные, можно сделать вывод, что основной вклад в проявляемость различных частот мутантного варианта гена KRAS в различных возрастных группах пациентов вносят пациенты женского пола. Наибольшие различия проявлялись между пациентками возрастных групп моложе и старше 55 лет. Мы не исключаем, что это может объясняться значимым изменением гормонального статуса в эти возрастные периоды.
Наше предположение подтверждается тем, что у пациентов мужского пола подобных закономерностей в рамках данного исследования не выявлено (табл. 2).
Проведенный в рамках данного исследования регрессионный анализ влияния только мутаций в гене KRAS без учета других клинико-патологических характеристик пациентов не выявил статистически достоверной связи различных вариантов мутаций с риском развития метастазов у пациента (табл. 4), хотя наличие мутации G12C почти в 2 раза уменьшало вероятность метастази-рования опухолей. Однако ввиду того, что показатель р для этого фактора равен 0,163, это утверждение можно отнести к тенденции, требующей дальнейшего изучения.
Таблица 4
Влияние различных вариантов мутаций KRAS на риск развития метастазов у пациентов с КРР без/с учетом клинических особенностей пациентов / Effect of different variants of KRAS mutations on the risk of developing metastases in patients with colorectal cancer without / taking into account the clinical features of patients
Мутации KRAS / клинический показатель OR Р 95 % CI
Нижняя граница Верхняя граница
Без поправки на пол, возраст пациента, стадию и степень дифференцировки
G12A 0,972 0,943 0,442 2,134
G12C 0,552 0,163 0,239 1,272
G12D 0,725 0,154 0,466 1,128
G12R 0,840 0,790 0,234 3,019
G12S 0,756 0,587 0,276 2,073
G12V 0,917 0,803 0,464 1,812
G13D 0,945 0,857 0,514 1,738
С поправкой на пол, возраст пациента, стадию и степень дифференцировки
Возраст 1,010 0,080^ 0,999 1,022
Пол: мужчины vs. женщины 1,151 0,390 0,835 1,587
Стадия 2,061 <0,0001 1,790 2,373
Стадия дифференцировки (G)* 0,985 0,857 0,831 1,166
G12A 0,850 0,705 0,367 1,968
G12C 0,509 0,130 0,213 1,221
G12D 0,625 0,05^ 0,389 1,006
G12R 0,701 0,617 0,174 2,827
G12S 0,694 0,504 0,237 2,030
G12V 0,655 0,247 0,320 1,341
G13D 0,926 0,817 0,484 1,772
' - снижение уровня дифференцировки (G1^G2^G3); • - 0,05 < p < 0,1; p < 0,05.
Как продемонстрировано в табл. 4, регрессионная модель с мутациями в гене KRAS в качестве потенциальных предикторов прогрессирования КРР не показала статистически достоверного влияния ни одного из вариантов мутаций. Однако после учета доступных в рамках данного исследования клинико-патологических характеристик пациентов (пол, возраст, стадия развития и степень диффе-ренцировки опухолей) была обнаружена статисти-
чески достоверная связь с метастазированием мутации G12D в гене KRAS: снижение риска метаста-зирования ДО = 0,625, 95 % С1 0,389-1,006, р = 0,05). Наоборот, вероятность образования метастазов КРР достоверно связана с увеличением стадии развития опухолей (OR = 2,061, 95 % С1 1,7902,373, р < 0,0001) и с увеличением возраста пациента (на уровне тенденции, OR = 1,010, 95 % С1 0,999-1,022, р = 0,080). Если сопоставить эти дан-
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
ные с нашим наблюдением, что с возрастом у пациентов (особенно женского пола) увеличивается частота проявляемости мутантного типа гена KRAS, можно сделать вывод, что наличие мутант-ного варианта гена KRAS является предиктором образования метастазов.
Исследования молекулярного патогенеза КРР показали, что активация множественных сигнальных путей играет важную роль в регуляции пролиферации клеток, ангиогенеза, подвижности клеток и апоптоза [12, 13]. KRAS, NRAS и BRAF являются расположенными ниже EGFR в сигнальном пути онкогенами, и их мутации могут привести к активации пути митоген-активируемых протеинкиназ (MARK) независимо от состояния вышележащего рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) [14-16]. Клинически их мутации являются важными прогностическими маркерами при определении кандидатуры анти-EGFR-терапии [17-19]. Помимо пути MARK, другим важным сигнальным путем является путь фосфатидилинозитол-3-OH (PI3K), часто активируемый мутацией в гене PIK3CA [20, 21]. PIK3CA также рассматривается как прогностический маркер в отношении анти-EGFR-терапии [22, 23]. В многочисленных отчетах зафиксирована частота мутаций KRAS, BRAF и PIK3CA в КРР [24-26]. Приводится все больше доказательств полезности полного молекулярного профилирования при разработке стратегии лечения пациентов с КРР.
В настоящее время пропагандируется расширенное RAS-тестирование, которое тестирует не только 2-й экзон (как было принято ранее), но и экзоны 3-й (кодон 61) и 4-й (кодоны 117, 146) гена KRAS и экзоны 2, 3, 4 гена NRAS. Любая мутация RAS ассоциируется со статистически значимым ухудшением ВБП (HR =1,31, 95 % CI 1,07-1,60) [27]. Пациенты без мутаций RAS, которые были обнаружены с использованием расширенного протокола RAS (расширенный дикий тип), с наибольшей вероятностью получали преимущество от тар-гетной терапии (HR 0,72, 95 % CI 1,04-1,62). При сравнении эффективности протоколов FOLFIRI + + цетуксимаб с FOLFIRI + бевацизумаб ВБП и ОВ были выше для цетуксимаба в популяции с расширенным диким типом. Эти абсолютные различия были выше, чем при оценке всей популяции, предназначенной для лечения, которая включала более ограниченную оценку мутационного статуса
KRAS.
Расширение анти-EGFR-терапии до адъювант-ной терапии при неметастатическом КРР не продемонстрировало преимущества даже в случаях КРР дикого типа [28, 29]. Это наводит на мысль о различии в биологии опухолей на III стадии по сравнению с пациентами IV стадии. Имеются данные о
NATURAL SCIENCE. 2017. No. 3-2
том, что первая линия панитумумаб + FOLFOXIRI эффективна у пациентов с диким типом KRAS, HRAS, NRAS и BRAF со средним значением ВБП 11,3 месяца [30]. Остается спорным вопрос, могут ли пациенты с мутациями KRAS G13D получить пользу от терапии анти-EGFR. В настоящее время роль тестирования сигнального пути EGFR при неметастатическом КРР не установлена, поскольку терапия анти-EGFR не показала эффективности у пациентов с КРР II и III стадии. Учитывая развивающиеся знания о пути RAS, клинические испытания, включающие анти-EGFR-терапию, должны быть критически оценены в контексте критериев включения / исключения и стратегий тестирования RAS, в том числе с учётом популяционных особенностей.
Возрастающая сложность профилирования мутаций для таргетной анти-EGFR-терапии указывает на необходимость более широкой молекулярной характеристики опухолей до и после начала лечения. Будущие испытания должны лучше адаптироваться к тому, кто, по прогнозам, будет реагировать на таргетную терапию. Кроме того, комбинация таргетных терапий и двойное ингибирование нижестоящих механизмов резистентности может оказаться ещё более успешной.
В недавнем исследовании было выявлено увеличение доли мутантных опухолей, как KRAS, так и NRAS, у афроамериканских пациентов по сравнению с европеоидами, что было более выраженным для NRAS. В соответствии с анализом Yoon и соавт. у североамериканских пациентов было обнаружено, что мутантные опухоли KRAS являются наиболее распространенным молекулярным подтипом среди афроамериканских пациентов. Около 68 % афро-американских пациентов с КРР имеют мутацию RAS, что способствует худшим результатам применения таргетной терапии. В Италии обнаружена значимая связь между мутацией NRAS и более короткой ОВ по сравнению с опухолями дикого типа [6].
При исследовании китайской популяции мутации во 2-м, 3-м, 4-м экзонах KRAS, NRAS и BRAF V600E была обнаружена у 36, 7,5, 3,5 и 2,5 % соответственно, что совпадает с данными, полученными в нашем исследовании. Частота встречаемости мутаций RAS была значительно выше в исследованиях популяций европейских пациентов при метастатическом КРР (56,4 %, p = 0,015) и правостороннем КРР (62,5 %, p = 0,003) [11].
В другом исследовании в 35,9 % (242/674) опухолей была выявлена мутация в гене KRAS, в 6,96 % (47/675) - мутация BRAF, в 9,9 (62/625) - мутация PIK3CA и в 4,19 % (26/621) - мутация NRAS. У женщин и пациентов старшей возрастной группы
наблюдалась более высокая частота встречаемости мутаций в гене KRAS (p = 0,018 и p = 0,031 соответственно), что также хорошо согласуется с результатами, полученными в рамках настоящего исследования [31].
Общий показатель мутаций в генах KRAS, NRAS или BRAF имели 49 % опухолей. Из них 33 % находились в 12-м или 13-м кодонах гена KRAS. Интересно отметить, что мутации в генах KRAS, NRAS и BRAF не были взаимоисключающими с мутациями в генах PIK3CA и TP53 [32].
Таким образом, в рамках настоящего исследования, направленного на повышение качества тар-гетной терапии пациентов Юга России с метастатическим КРР, установлена большая неоднородность исследованной выборки пациентов с точки зрения частоты проявления мутаций в гене KRAS в зависимости от гендерной и возрастной стратификации пациентов. У пациентов женского пола и у пациентов старшей возрастной группы наблюдается более высокая частота проявления активирующих мутаций в гене KRAS, что согласуется с ранее полученными нами данными [33, 34]. Из всех регистрируемых в настоящем исследовании мутаций статистически достоверно на вероятность образования метастазов оказывает влияние мутация G12D. Прогрессирование развития опухоли у пациентов статистически достоверно увеличивает вероятность образования метастазов.
Литература
1. Li Z.Z., Wang F., Zhang Z-C., Wang F., Zhao Q., Zhang D-S, Wang F.H., Wang Z.Q., Luo H.Y., He M.M., Wang D.S., Jin Y., Ren C., Qiu M.Z., Ren J., Pan Z.Z., Li Y.H., Shao J.Y., Xu R.H. Mutation profiling in Chinese patients with metastatic colorectal cancer and its correlation with clinico-pathological features and anti-EGFR treatment response // On-cotarget. 2016. Vol. 7, № 19. P. 28356-28368.
2. Каприн А.Д., Старинский В.В., Петрова Г.В. Злокачественные новообразования в России в 2014 году (заболеваемость и смертность). М. : МНИОИ им. П.А. Герцена, филиал ФГБУ «НМИРЦ» Минздрава России, 2016. 250 с.
3. Bahrami A., Hassanian S.M., Shahidsales S., Farjami Z., Hasanzadeh M., Anvari K., Aledavood A., Maftouh M., Ferns G.A., Khazaei M., Avan A. Targeting the RAS signaling pathway as a potential therapeutic target in the treatment of colorectal cancer // J. Cell Physiol. 2017. March 6.
4. Dienstmann R., Tabernero J. Spectrum of gene mutations in colorectal cancer: implications for treatment // Cancer J. 2016. Vol. 22, № 3. Р. 149-155.
5. Bronte G., Silvestris N., Castiglia M., Galvano A., Passiglia F., Sortino G., Cicero G., Rolfo C., Peeters M., Bazan V., Fanale D., Giordano A., Russo A. New findings on primary and acquired resistance to anti-EGFR therapy in metastatic colorectal cancer: do all roads lead to RAS? // Oncotarget. 2015. Vol. 6, № 28. Р. 24780-24796.
6. Cercek A., Braghiroli M.I., Chou J.F., Hechtman J.F., Kemeny N.E., Saltz L., Capanu M., Yaeger R. Clinical features and outcomes of patients with colorectal cancers harboring NRAS mutations // Clin. Cancer. Res. 2017. April 26.
7. Lunke S., Lee B., Kranz S., Gibbs P., Waring P., Christie M. Intratumorous heterogeneity for RAS mutations in a treatment-naive colorectal tumour // J. Clin. Pathol. 2017. March 17.
8. Hsu H.C., Thiam T.K., Lu E-J, Yeh C.Y., Tsai W.S., You J. F., Hung H.Y., Tsai C.N., Hsu A., Chen H.C., Chen S.J., Yang T.S. Mutations of KRAS/NRAS/BRAF predict cetuximab resistance in metastatic colorectal cancer patients // Oncotarget. 2016. Vol. 16. P. 22257-22270.
9. Peng J., Huang D., Poston G., Ma X., Wang R., Sheng W., Zhou X., Zhu X., Cai S. The molecular heterogeneity of sporadic colorectal cancer with different tumor sites in Chinese patients // Oncotarget. 2017. March 14. DOI 10.18632/oncotarget.16176.
10. Vladimirova L.Y., Kit O.I., Nikipelova E.A. Results of monoclonal antibodies against EGFR-receptors application in patients with metastatic colorectal cancer // J. of Clinical Oncology. 2013. Vol. 31, № 15S. P. 19047.
11. Gong J., Cho M., Sy M., Salgia R., Fakih M. Molecular profiling of metastatic colorectal tumors using next-generation sequencing: A single-institution experience // Oncotarget. 2017. Vol. 7, № 41. P. 66880-66891.
12. De Roock W., De Vriendt V., Normanno N., Ciardiello F., Tejpar S. KRAS, BRAF, PIK3CA, and PTEN mutations: implications for targeted therapies in metastatic colorectal cancer // Lancet Oncol. 2011. № 12. P. 594-603.
13. Berg M, Soreide K. EGFR and downstream genetic alterations in KRAS/BRAF and PI3K/AKT pathways in colorectal cancer: implications for targeted therapy // Discov. Med. 2012. № 14. P. 207-214.
14. Scheffzek K., Ahmadian M.R., Kabsch W., Wiesmuller L., Lautwein A., Schmitz F., Wittinghofer A. The Ras-RasGAP complex: structural basis for GTPase activation and its loss in oncogenic Ras mutants // Science. 1997. № 277. P. 333-338.
15. Trahey M., McCormick F.A cytoplasmic protein stimulates normal N-ras p21 GTPase, but does not affect oncogenic mutants // Science. 1987. № 238. P. 542-545.
16. Wan P.T., Garnett M.J., Roe S.M., Lee S., Niculescu-Duvaz D., Good V.M., Jones C.M., Marshall C.J., Springer C.J., BarfordD., Marais R. Cancer Genome P. Mechanism of activation of the RAF-ERK signaling pathway by oncogenic mutations of B-RAF // Cell. 2004. № 116. P. 855-867.
17. De Roock W., Lambrechts D., Tejpar S. K-ras mutations and cetuximab in colorectal cancer // N. Engl. J. Med. 2009. № 360. P. 834-836.
18. De Roock W., Claes B., Bernasconi D., De Schutter J., Biesmans B., Fountzilas G., Kalogeras K.T., Kotoula V., Papamichael D., Laurent-Puig P., Penault-Llorca F., Rougier P., Vincenzi B., Santini D., Tonini G., Cappuzzo F., Frattini M., Molinari F., Saletti P., De Dosso S., Martini M., Bardelli A., Siena S., Sartore-Bianchi A., Tabernero J., Macarulla T., DiFiore F., Gangloff A.O., CiardielloF., PfeifferP., Qvortrup C., Hansen T.P., Van Cutsem E., Piessevaux H., Lambrechts D., Delorenzi M., Tejpar S. Effects of KRAS, BRAF, NRAS, and PIK3CA mutations on the efficacy of cetuximab plus chemotherapy in chemotherapy-refractory metastatic colorectal cancer: a retrospective consortium analysis // Lancet Oncol. 2010. № 11. P. 753-762.
19. Di Nicolantonio F., Martini M., Molinari F., Sartore-Bianchi A., Arena S., Saletti P., De Dosso S., Mazzucchelli L., Frattini M., Siena S., Bardelli A. Wild-type BRAF is required
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
for response to panitumumab or cetuximab in metastatic colorectal cancer // J. Clin. Oncol. 2008. № 26. P. 5705-5712.
20. Engelman J.A. Targeting PI3K signalling in cancer: opportunities, challenges and limitations // Nat. Rev. Cancer. 2009. № 9. P. 550-562.
21. Samuels Y., Diaz L.A., Schmidt-Kittler O., Cummins J.M., Delong L., Cheong I., Rago C., Huso D.L., Lengauer C., Kinzler K.W., Vogelstein B., Velculescu V.E. Mutant PIK3CA promotes cell growth and invasion of human cancer cells // Cancer Cell. 2005. № 7. P. 561-573.
22. Sartore-Bianchi A., Martini M., Molinari F., Veronese S., Nichelatti M., Artale S., Di Nicolantonio F., Saletti P., De Dosso S., Mazzucchelli L., Frattini M., Siena S., Bardelli A. PIK3CA mutations in colorectal cancer are associated with clinical resistance to EGFR-targeted monoclonal antibodies // Cancer Res. 2009. № 69. P. 1851-1857.
23. Barault L., Veyrie N., Jooste V., Lecorre D., Chapusot C., Ferraz J.M., Lièvre A., Cortet M., Bouvier A.M., Rat P., Roignot P., Faivre J., Laurent-Puig P., Piard F. Mutations in the RAS-MAPK, PI(3)K (phosphatidylinositol-3-OH kinase) signaling network correlate with poor survival in a population-based series of colon cancers // Int. J. Cancer. 2008. № 122. P. 22552259.
24. Davies H., Bignell G.R., Cox C., Stephens P., Edkins S., Clegg S., Teague J., Woffendin H., Garnett M.J., Bottomley W., Davis N., Dicks E., Ewing R., Floyd Y., Gray K., Hall S., Hawes R., Hughes J., Kosmidou V., Menzies A., Mould C., Parker A., Stevens C., Watt S., Hooper S., Wilson R., Jayatilake H., Gusterson B.A., Cooper C., Shipley J., Hargrave D., Pritchard-Jones K., Mait-land N., Chenevix-Trench G., Riggins G.J., Bigner D.D., Palmieri G., Cossu A, Flanagan A., Nicholson A., Ho J. W., Leung S. Y., Yuen S. T., Weber B.L., Seigler H.F., Darrow T.L., Paterson H., Marais R., Marshall C.J., WoosterR., Stratton M.R., Futreal P.A. Mutations of the BRAF gene in human cancer // Nature. 2002. № 417. P. 949-954.
25. Wood L.D., Parsons D.W., Jones S., Lin J., Sjoblom T., Leary R.J., Shen D., Boca S.M., Barber T., Ptak J., Silliman N., Szabo S., Dezso Z., Ustyanksky V., Nikolskaya T., Nikolsky Y., Karchin R., Wilson P.A., Kaminker J.S., Zhang Z., Croshaw R., Willis J., Dawson D., Shipitsin M., Willson J.K., Sukumar S., PolyakK., ParkB.H., Pethiyagoda C.L., PantP.V., BallingerD.G., Sparks A.B., Hartigan J., Smith D.R., Suh E., Papadopoulos N., Buckhaults P., Markowitz S.D., Parmigiani G., Kinzler K.W., Velculescu V.E., Vogelstein B. The genomic landscapes of human breast and colorectal cancers // Science. 2007. № 318. P. 1108-1113.
26. Velho S., Oliveira C., Ferreira A., Ferreira A.C., Suriano G., Schwartz S., Duval A., Carneiro F., Machado J.C., Hamelin R., Seruca R. The prevalence of PIK3CA mutations in gastric and colon cancer // Eur. J. Cancer. 2005. № 41. P. 16491654.
27. Douillard J.Y., Oliner K.S., Siena S., Tabernero J., Burkes R., BarugelM., Humblet Y., Bodoky G., Cunningham D., Jassem J., Rivera F., Kocàkova I., Ruff P., Blasinska-Morawiec M., Smakal M., Canon J.L., Rother M., Williams R., Rong A., Wie-zorek J., Sidhu R., Patterson S.D. Panitumumab-FOLFOX4 treatment and RAS mutations in colorectal cancer // N. Engl. J. Med. 2013. № 369. P. 1023-1034.
28. Alberts S.R., Sargent D.J., Nair S., Mahoney M.R., Mooney M., Thibodeau S.N., Smyrk T.C., Sinicrope F.A., Chan E., Gill S., KahlenbergM.S., Shields A.F., Quesenberry J.T., Webb TA., Farr G.H. Jr., Pockaj B.A., Grothey A., Goldberg R.M. Effect of oxaliplatin, fluorouracil, and leucovorin with or without ce-tuximab on survival among patients with resected stage III colon
NATURAL SCIENCE. 2017. No. 3-2
cancer: a randomized trial // JAMA. 2012. № 307. Р. 1383-1393.
29. Taieb J., Tabernero J., Mini E., Subtil F., Folprecht G., Van Laethem J.L., Thaler J., Bridgewater J., Petersen L.N., Blons H., Collette L., Van Cutsem E., Rougier P., Salazar R., Bedenne L., Emile J.F., Laurent-Puig P., Lepage C. Oxaliplatin, fluorouracil, and leucovorin with or without cetuximab in patients with resected stage III colon cancer (PETACC-8) : an open-label, randomised phase 3 trial // Lancet Oncol. 2014. № 15. Р. 862-873.
30. Fornaro L., Lonardi S., Masi G., Loupakis F., Bergamo F., Salvatore L., Cremolini C., Schirripa M., Vivaldi C., Aprile G., Zaniboni A., Bracarda S., Fontanini G., Sensi E., Lupi C., Mor-villo M., Zagonel V., Falcone A. FOLFOXIRI in combination with panitumumab as first-line treatment in quadruple wild-type (KRAS, NRAS, HRAS, BRAF) metastatic colorectal cancer patients: a phase II trial by the Gruppo Oncologico Nord Ovest (GONO) // Ann. Oncol. 2013. № 24. Р. 2062-2067.
31. Shen Y., Wang J., Han X., Yang H., Wang S., Lin D., Shi Y. Effectors of epidermal growth factor receptor pathway: The genetic profiling of KRAS, BRAF, PIK3CA, NRAS mutations in colorectal cancer characteristics and personalized medicine // PLoS One. 2013. Vol. 8, № 12. e81628.
32. Janakiraman M., Vakiani E., Zeng Z., Pratilas C.A., Taylor B.S., Chitale D., Halilovic E., Wilson M., Huberman K., Ricarte Filho J.C., Persaud Y., Levine D.A., Fagin J.A., Jhanwar S.C., Mariadason J.M., Lash A., Ladanyi M., Saltz L.B., Heguy A., Paty P.B., Solit D.B. Genomic and biological characterization of exon 4 KRAS mutations in human cancer // Cancer Res. 2010. Vol. 70, № 14. Р. 5901-5911.
33. Кит О.И., Водолажский Д.И. Молекулярная биология колоректального рака в клинической практике // Молекулярная биология. 2015. Т. 4, № 4. С. 531.
34. Кит О.И., Водолажский Д.И., Двадненко К.В., Гудуе-ва Е.Н., Кутилин Д.С., Геворкян Ю.А., Владимирова Л.Ю. Частота мутаций в гене KRAS в различных клинических группах пациентов Юга России c колоректальным раком // Медицинская генетика. 2014. Т. 13, № 12. С. 35-41.
References
1. Li Z.Z., Wang F., Zhang Z-C., Wang F., Zhao Q., Zhang D-S., Wang F.H., Wang Z.Q., Luo H.Y., He M.M., Wang D.S., Jin Y., Ren C., Qiu M.Z., Ren J., Pan Z.Z., Li Y.H., Shao J.Y., Xu R.H. Mutation profiling in chinese patients with metastatic colorectal cancer and its correlation with clinicopathological features and anti-EGFR treatment response. Oncotarget, 2016, vol. 7, No. 19, pp. 28356-28368.
2. Kaprin A.D., Starinskii V.V., Petrova G.V. Zlo-kachestvennye novoobrazovaniya v Rossii v 2014 godu (zabolevaemost' i smertnost') [Malignant neoplasms in Russia in 2014 (morbidity and mortality)]. Moscow: MNIOI im. P.A. Gertsena, filial FGBU «NMIRTs» Minzdrava Rossii, 2016, 250 p.
3. Bahrami A., Hassanian S.M., Shahidsales S., Farjami Z., Hasanzadeh M., Anvari K., Aledavood A., Maftouh M., Ferns G.A., Khazaei M., Avan A. Targeting the RAS signaling pathway as a potential therapeutic target in the treatment of colorectal cancer. J. Cell Physiol. 2017, March 6.
4. Dienstmann R., Tabernero J. Spectrum of gene mutations in colorectal cancer: implications for treatment. Cancer J. 2016, vol. 22, No. 3, pp. 149-155.
5. Bronte G., Silvestris N., Castiglia M., Galvano A., Passiglia F., Sortino G., Cicero G., Rolfo C., Peeters M., Bazan V., Fanale D., Giordano A., Russo A. New findings on primary and acquired resistance to anti-EGFR therapy in metastatic colorectal cancer: do all roads lead to RAS? Oncotarget. 2015, vol. 6, No. 28, pp. 24780-24796.
6. Cercek A., Braghiroli M.I., Chou J.F., Hechtman J.F., Kemeny N.E., Saltz L., Capanu M., Yaeger R. Clinical features and outcomes of patients with colorectal cancers harboring NRAS mutations. Clin. Cancer. Res. 2017, April 26.
7. Lunke S., Lee B., Kranz S., Gibbs P., Waring P., Christie M. Intratumorous heterogeneity for RAS mutations in a treatment-naive colorectal tumour. J. Clin. Pathol. 2017, March 17.
8. Hsu H.C., Thiam T.K., Lu E-J., Yeh C.Y., Tsai W.S., You J. F., Hung H.Y., Tsai C.N., Hsu A., Chen H.C., Chen S.J., Yang T.S. Mutations of KRAS/NRAS/BRAF predict cetuximab resistance in metastatic colorectal cancer patients. Oncotarget. 2016, vol. 16, pp. 22257-22270.
9. Peng J., Huang D., Poston G., Ma X., Wang R., Sheng W., Zhou X., Zhu X., Cai S. The molecular heterogeneity of sporadic colorectal cancer with different tumor sites in Chinese patients. Oncotarget. 2017, March 14. DOI 10.18632/oncotarget.16176.
10. Vladimirova L.Y., Kit O.I., Nikipelova E.A. Results of monoclonal antibodies against EGFR-receptors application in patients with metastatic colorectal cancer. J. of Clinical Oncology. 2013, vol. 31, No. 15S, p. 19047.
11. Gong J., Cho M., Sy M., Salgia R., Fakih M. Molecular profiling of metastatic colorectal tumors using next-generation sequencing: A single-institution experience. Oncotarget. 2017, vol. 7, No. 41, pp. 66880-66891.
12. De Roock W., De Vriendt V., Normanno N., Ciardiello F., Tejpar S. KRAS, BRAF, PIK3CA, and PTEN mutations: implications for targeted therapies in metastatic colorectal cancer. Lancet Oncol. 2011, No. 12, pp. 594-603.
13. Berg M., Soreide K. EGFR and downstream genetic alterations in KRAS/BRAF and PI3K/AKT pathways in colorectal cancer: implications for targeted therapy. Discov. Med. 2012, No. 14, pp. 207-214.
14. ScheffZek K., Ahmadian M.R., Kabsch W., Wiesmuller L., Lautwein A., Schmitz F., Wittinghofer A. The Ras-RasGAP complex: structural basis for GTPase activation and its loss in oncogenic Ras mutants. Science. 1997, No. 277, pp. 333-338.
15. Trahey M., McCormick F. A cytoplasmic protein stimulates normal N-ras p21 GTPase, but does not affect oncogenic mutants. Science. 1987, No. 238, pp. 542-545.
16. Wan P.T., Garnett M.J., Roe S.M., Lee S., Niculescu-Duvaz D., Good V.M., Jones C.M., Marshall C.J., Springer C.J., Barford D., Marais R. Cancer Genome P. Mechanism of activation of the RAF-ERK signaling pathway by oncogenic mutations of B-RAF. Cell. 2004, No. 116, pp. 855-867.
17. De Roock W., Lambrechts D., Tejpar S. K-ras mutations and cetuximab in colorectal cancer. N. Engl. J. Med. 2009, No. 360, pp. 834-836.
18. De Roock W., Claes B., Bernasconi D., De Schutter J., Biesmans B., Fountzilas G., Kalogeras K.T., Kotoula V., Papamichael D., Laurent-Puig P., Penault-Llorca F., Rougier P., Vincenzi B., Santini D., Tonini G., Cappuzzo F., Frattini M., Molinari F., Saletti P., De Dosso S., Martini M., Bardelli A., Siena S., Sartore-Bianchi A., Tabernero J., Macarulla T., Di Fiore F., Gangloff A.O., Ciardiello F., Pfeiffer P., Qvortrup C., Hansen T.P., Van Cutsem E., Piessevaux H., Lambrechts D., Delorenzi M., Tejpar S. Effects of KRAS, BRAF, NRAS, and PIK3CA mutations on the efficacy of cetuximab plus chemotherapy in chemotherapy-refractory metastatic colorectal cancer:
a retrospective consortium analysis. Lancet Oncol. 2010, No. 11, pp. 753-762.
19. Di Nicolantonio F., Martini M., Molinari F., Sartore-Bianchi A., Arena S., Saletti P., De Dosso S., Mazzucchelli L., Frattini M., Siena S., Bardelli A. Wild-type BRAF is required for response to panitumumab or cetuximab in metastatic colo-rectal cancer. J. Clin. Oncol. 2008, No. 26, pp. 5705-5712.
20. Engelman J.A. Targeting PI3K signalling in cancer: opportunities, challenges and limitations. Nat. Rev. Cancer. 2009, No. 9, pp. 550-562.
21. Samuels Y., Diaz L.A., Schmidt-Kittler O., Cummins J.M., Delong L., Cheong I., Rago C., Huso D.L., Lengauer C., Kinzler K.W., Vogelstein B., Velculescu V.E. Mutant PIK3CA promotes cell growth and invasion of human cancer cells. Cancer Cell. 2005, No. 7, pp. 561-573.
22. Sartore-Bianchi A., Martini M., Molinari F., Veronese S., Nichelatti M., Artale S., Di Nicolantonio F., Saletti P., De Dosso S., Mazzucchelli L., Frattini M., Siena S., Bardelli A. PIK3CA mutations in colorectal cancer are associated with clinical resistance to EGFR-targeted monoclonal antibodies. Cancer Res. 2009, No. 69, pp. 1851-1857.
23. Barault L., Veyrie N., Jooste V., Lecorre D., Chapusot C., Ferraz J.M., Lièvre A., Cortet M., Bouvier A.M., Rat P., Roignot P., Faivre J., Laurent-Puig P., Piard F. Mutations in the RAS-MAPK, PI(3)K (phosphatidylinositol-3-OH kinase) signaling network correlate with poor survival in a population-based series of colon cancers. Int. J. Cancer. 2008, No. 122, pp. 22552259.
24. Davies H., Bignell G.R., Cox C., Stephens P., Edkins S., Clegg S., Teague J., Woffendin H., Garnett M.J., Bottomley W., Davis N., Dicks E., Ewing R., Floyd Y., Gray K., Hall S., Hawes R., Hughes J., Kosmidou V., Menzies A., Mould C. Parker A., Stevens C., Watt S., Hooper S., Wilson R., Jayatilake H., Gusterson B.A., Cooper C., Shipley J., Hargrave D., Pritchard-Jones K., Maitland N., Chenevix-Trench G., Riggins G.J., Bigner D.D., Palmieri G., Cossu A., Flanagan A., Nicholson A., Ho J.W., Leung S.Y., Yuen S.T., Weber B.L., Seigler H.F., Darrow T.L., Paterson H., Marais R., Marshall C.J., Wooster R., Stratton M.R., Futreal P.A. Mutations of the BRAF gene in human cancer. Nature. 2002, No. 417, pp. 949-954.
25. Wood L.D., Parsons D.W., Jones S., Lin J., Sjoblom T., Leary R.J., Shen D., Boca S.M., Barber T., Ptak J., Silliman N., Szabo S., Dezso Z., Ustyanksky V., Nikolskaya T., Nikolsky Y., Karchin R., Wilson P.A., Kaminker J.S., Zhang Z., Croshaw R., Willis J., Dawson D., Shipitsin M., Willson J.K., Sukumar S., Polyak K., Park B.H., Pethiyagoda C.L., Pant P.V., Ballinger D.G., Sparks A.B., Hartigan J., Smith D.R., Suh E., Papadopoulos N., Buckhaults P., Markowitz S.D., Parmigiani G., Kinzler K.W., Velculescu V.E., Vogelstein B. The genomic landscapes of human breast and colorectal cancers. Science. 2007, No. 318, pp. 1108-1113.
26. Velho S., Oliveira C., Ferreira A., Ferreira A.C., Suriano G., Schwartz S., Duval A., Carneiro F., Machado J.C., Hamelin R., Seruca R. The prevalence of PIK3CA mutations in gastric and colon cancer. Eur. J. Cancer. 2005, No. 41, pp. 1649-1654.
27. Douillard J.Y., Oliner K.S., Siena S., Tabernero J., Burkes R., Barugel M., Humblet Y., Bodoky G., Cunningham D., Jassem J., Rivera F., Kocakova I., Ruff P., Blasinska-Morawiec M., Smakal M., Canon J.L., Rother M., Williams R., Rong A., Wie-zorek J., Sidhu R., Patterson S.D. Panitumumab-FOLFOX4 treatment and RAS mutations in colorectal cancer. N. Engl. J. Med. 2013, No. 369, pp. 1023-1034.
28. Alberts S.R., Sargent D.J., Nair S., Mahoney M.R., Mooney M., Thibodeau S.N., Smyrk T.C., Sinicrope F.A., Chan E.,
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
Gill S., Kahlenberg M.S., Shields A.F., Quesenberry J.T., Webb TA., Farr G.H. Jr., Pockaj B.A., Grothey A., Goldberg R.M. Effect of oxaliplatin, fluorouracil, and leucovorin with or without cetuxi-mab on survival among patients with resected stage III colon cancer: a randomized trial. JAMA. 2012, No. 307, pp. 1383-1393.
29. Taieb J., Tabernero J., Mini E., Subtil F., Folprecht G., Van Laethem J.L., Thaler J., Bridgewater J., Petersen L.N., Blons H., Collette L., Van Cutsem E., Rougier P., Salazar R., Bedenne L., Emile J.F., Laurent-Puig P., Lepage C. Oxaliplatin, fluorouracil, and leucovorin with or without cetuximab in patients with resected stage III colon cancer (PETACC-8): an open-label, randomised phase 3 trial. Lancet Oncol. 2014, No. 15, pp. 862-873.
30. Fornaro L., Lonardi S., Masi G., Loupakis F., Bergamo F., Salvatore L., Cremolini C., Schirripa M., Vivaldi C., Aprile G., Zaniboni A., Bracarda S., Fontanini G., Sensi E., Lupi C., Mor-villo M., Zagonel V., Falcone A. FOLFOXIRI in combination with panitumumab as first-line treatment in quadruple wild-type (KRAS, NRAS, HRAS, BRAF) metastatic colorectal cancer patients: a phase II trial by the Gruppo Oncologico Nord Ovest (GONO). Ann. Oncol. 2013, No. 24, pp. 2062-2067.
31. Shen Y., Wang J., Han X., Yang H., Wang S., Lin D., Shi Y. Effectors of epidermal growth factor receptor pathway: The
NATURAL SCIENCE. 2017. No. 3-2
genetic profiling of KRAS, BRAF, PIK3CA, NRAS mutations in colorectal cancer characteristics and personalized medicine. PLoS One. 2013, vol. 8, No. 12, e81628.
32. Janakiraman M., Vakiani E., Zeng Z., Pratilas C.A., Taylor B.S., Chitale D., Halilovic E., Wilson M., Huberman K., Ricarte Filho J.C., Persaud Y., Levine D.A., Fagin J.A., Jhanwar S.C., Mariadason J.M., Lash A., Ladanyi M., Saltz L.B., Heguy A., Paty P.B., Solit D.B. Genomic and biological characterization of exon 4 KRAS mutations in human cancer. Cancer Res. 2010, vol. 70, No. 14, pp. 5901-5911.
33. Kit O.I., Vodolazhskii D.I. Molekulyarnaya biologiya kolorektal'nogo raka v klinicheskoi praktike [Molecular biology of colorectal cancer in clinical practice]. Molekulyarnaya bi-ologiya. 2015, vol. 4, No. 4, p. 531.
34. Kit O.I., Vodolazhskii D.I., Dvadnenko K.V., Gudueva E.N., Kutilin D.S., Gevorkyan Yu.A., Vladimirova L.Yu. Chastota mutatsii v gene KRAS v razlichnykh klinicheskikh gruppakh patsientov Yuga Rossii c kolorektal'nym rakom [The frequency of mutations in the KRAS gene in different clinical groups of patients in Southern Russia with colorectal cancer]. Med-itsinskaya genetika. 2014, vol. 13, No. 12, pp. 35-41.
Поступила в редакцию /Received_5 июня 2017 г. / June 5, 2017
