CC BY
22
|80 ТЕЗИСЫ МАТЕРИАЛЫ БЕЛОРУССКО-РОССИЙСКОЙ...
А.В. Самойлов1, А.З. Кесян1, Н.М. Сураева2
ИЗУЧЕНИЕ ФАКТОРОВ, ВЛИЯЮЩИХ НА РОСТОВЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПТИЦЫ ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ IN VITRO
1Научно-исследовательский институт биологии развития им. Н.А. Кольцова РАН, Москва 2ФГБУ «РОНЦ им.Н.Н. Блохина» РАМН, Москва
Эмбриональные клетки кур представляют огромный интерес в плане получения генетически модифицированной птицы. Очевидно, что трансфекция будет более результативной, если эмбриональные донорские клетки будут трансфецированы in vitro и будут отобраны клоны с хромосомным встраиванием чужеродного гена. Эта задача может быть выполнена в случае разработки метода долгосрочного культивирования эмбриональных стволовых клеток (ЭСК), способных к пролиферации после трансфекции.
Задача исследования. Изучение различных факторов, влияющих на пролиферативные свойства ЭСК при их длительном культивировании.
Материалы и методы. ЭСК были получены из бластодисков индивидуальных эмбрионов птицы. Клетки культивировали в среде Knockout DMEM с добавками.
Результаты и выводы. В наших ранних экспериментах ЭСК культивировались в аналогичной среде, но без эмбрионального экстракта и с добавлением мышиного LIF. На 5-6 сутки культивирования бластодермальных клеток наблюдали появление ЭСК, которые представляли собой маленькие клетки с большим ядром и хорошо различимыми ядрышками, росли колониям в виде монослоя с четко различимыми границами между клетками и демонстрировали признаки плюропотентности - давали положительное окрашивание щелочную фосфатазу и SSEA-1. Аналогичные сроки появления и морфологические характеристики ЭСК были выявлены нами и при культивировании на эмбриональном экстракте. ЭСК также удалось пассировать только два раза. Вновь были обнаружены значительные индивидуальные различия в ростовых характеристиках бластодермальных клеток из разных бластодисков. Однако в данном случае рост клеток не зависел от числа клеток и, скорее всего, был связан с качеством приготовленного экстракта, т.к. отмечался разный рост клеток при применении эмбрионального экстракта от разных партий. Значительное увеличение числа пассажей (до 10) с использованием эмбрионального экстракта удалось получить после покрытия плашек коллагеном.
Л.В. Татьяненко, Р.А. Котельникова, Д.А. Полетаева, И.И. Файнгольд, О.В. Доброхотова, И.Ю. Пихтелева,
А.Б. Корнев, Е.А. Хакина, П.А. Трошин, А.И. Котельников
ВЛИЯНИЕ ВОДОРАСТВОРИМЫХ ПОЛИЗАМЕЩЕННЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ФУЛЛЕРЕНА НА АКТИВНОСТЬ Са2+-АТФазы САРКОПЛАЗМАТИЧЕСКОГО РЕТИКУЛУМА И ФОСФОДИЭСТЕРАЗЫ ЦИКЛИЧЕСКОГО ГУАНОЗИНМОНОФОСФАТА
Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка kotel@icp.ac.ru
Цель исследования. Изучение влияния водорастворимых полизамещенных производных фуллеренов (ППФ) на каталитическую активность гидролаз: Са +-АТФазы саркоплазматического ретикулума (Са2-АТФазы СР) и фосфодиэстеразы циклического гуанозинмонофосфата (ФДЭцГМФ).
Материалы и методы. Фермент Са2+-АТФазу СР выделяли из белых мышц задних конечностей кроликов по методу (В.Б. Ритов, 1977). Активность Са+ -АТФазы определяли по кинетике изменения pH образцов. ФДЭцГМФ выделяли из коры головного мозга крыс. Активность ФДЭцГМФ определяли по количеству образовавшегося в процессе ферментативной реакции ГМФ.
Результаты и выводы. Показано, что большинство исследованных производных фуллерена моделируют активность исследуемых ферментов. Так, соединения N£-205; КВ-318 и ТР-1105 полностью тормозят активный транспорт Са2+ в 0,009мМ концентрации и лишь на (55±6)%, (42±8)% и (60±6)% соответственно ингибируют гидролиз АТФ, тем самым разобщая гидролитическую и транспортную функции фермента. Это вызывает изменения соотношения вне и внутриклеточного содержания ионов Са2+ и влияет на адгезию метастатических клеток к эндотелию капилляров. Соединение ТР-1105 неконкурентно и обратимо действует на гидролитическую функцию Са2+-АТФазы СР, с К1=1,6^10-6 М. Все исследованные производные фуллерена тормозят функцию ФДЭцГМФ. Большинство из них намного более эффективны, чем препарат сравнения никорандил, способный вызывать антиагрегационный эффект за счет накопления субстрата ФДЭцГМФ - цГМФ вторичного мессенже-ра живых организмов. Полученные данные позволяют прогнозировать возможный антиметастатический эффект изучаемых производных фуллерена.
№ 2/том 12/2013
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
