CC BY
20
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2018 - V. 25, № 3 - P. 101-106
УДК: 599.323.4-114.44.044 DOI: 10.24411/1609-2163-2018-16118
ВЛИЯНИЕ ЦИКЛОФЕРОНА НА РАСПРЕДЕЛЕНИЕ НЕЙРОАМИНОВ В БИОАМИНСОДЕРЖАЩИХ СТРУКТУРАХ СЕЛЕЗЕНКИ
Н.Е. ГИМАЛДИНОВА*, Е.Н. ИГНАТЬЕВА*, Л.А. ЛЮБОВЦЕВА*, Р.Ф. ГИМАЛДИНОВ**, О.В. ВОРОБЬЕВА*
**ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет имени И.Н. Ульянова», Московский просп., д. 15, Чебоксары, Чувашская Республика, 428010, Россия **БУ «Президентский перинатальный центр МЗ ЧР», Московский просп., д. 9, к. 1, Чебоксары, Чувашская
Республика, 428018, Россия
Аннотация. В статье описывается распределение нейроаминов в биоаминсодержащих гранулярных люминесцирующих клетках и тучных клетках разных зон селезенки белых крыс при введении широко применяемого иммуномодулятора - циклоферона в разном временном аспекте. Циклоферон является индуктором синтеза эндогенных интерферонов. Лабораторным животным вводили циклоферон в хвостовую вену кратностью пять и десять инъекций. Криостатные срезы селезенки обрабатывали люминесцентно-гистохимическими методами на выявление биогенных аминов (гистамина, серотони-на, катехоламинов). После пяти кратного введения циклоферона содержание гистамина и серотонина в гранулярных люминесцирующих клетках разных зон белой пульпы имеет тенденцию к снижению, с одновременным накоплением этих биоаминов в гранулярных люминесцирующих клетках красной пульпы селезенки. Такое число инъекций способствует активации в основном В-зон белой пульпы селезенки, отвечающих за гуморальное звено иммунитета. После 10-ти кратного введения циклоферона содержание гистамина и серотонина в гранулярных люминесцирующих клетках белой и красной пульпы изменяется однонаправленно, при этом наблюдаются изменения в Т- и В-зонах селезенки, что приводит к одновременной активации клеточного и гуморального иммунитета. Показатель серотони-нового индекса при пяти кратном и десяти кратном введении циклоферона меньше единицы, что определяет большее содержание в клеточных структурах катехоламинов по сравнению с серотонином и может свидетельствать о сильном контроле процессов иммуногенеза в селезенке со стороны адренер-гического звена вегетативной нервной системы.
Ключевые слова: гранулярные люминесцирующие клетки, тучные клетки, нейроамины, гиста-мин, катехоламины, серотонин, серотониновый индекс.
Введение. В последнее время в детской практике часто назначаются иммуномодулято-ры - препараты, имеющие ряд преимуществ: обладают широким спектром действия, высокой эффективностью, доступностью. В связи с чем, это приводит к частому, бесконтрольному их применению среди всех слоев населения и развитию, как следствие, вторичных иммунодефи-цитных состояний. Особый интерес вызывает применение циклоферона, так как он оказывает не только иммуномодулирующее действие, но обладает противовоспалительным и противовирусным воздействием [3]. Как известно, важное место в формировании иммунного ответа занимают нейроамины (гистамин, серотонин, кате-холамины) [1,2]. Они контролируют деление, созревание и дифференцировку лимфоцитов в центральных и периферических органах иммуногенеза и кроветворения [4].
Цель исследования - изучение влияния
циклоферона на распределение нейроаминов в нейроаминсодержащих структурах разных зон селезенки во временном аспекте.
Задачи исследования:
1. Определить локализацию нейроаминов: гистамина, серотонина (СТ), катехоламинов (КА) и выявить их динамику в биоаминсодер-жащих структурах селезенки крыс в зависимости от кратнолсти его применения.
2. Вычислить серотониновые индексы, позволяющие судить о влиянии кратности применения иммунных препаратов на интегральную биоаминную обеспеченность исследуемого органа и как следствие - на иммуногенез.
Материалы и методы исследования. Объектом исследования служила селезенка 30 белых крыс-самок, которые были разделены на 3 группы: первую группу составили интактные животные - без введения. Второй и третьей группе животных ежедневно вводили раствор
ВЕСТНИК НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ - 2018 - Т. 25, № 3 - С. 101-106 JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2018 - V. 25, № 3 - P. 101-106
циклоферона в дозе 0,1 мг/кг в хвостовую вену в течение 5 и 10 дней соответственно. Селезенку изымали на 5 и 10 сутки после экзогенного введения циклоферона. Органы изымались после гильотинирования (табл. 1).
Таблица 1
Распределение животных по экспериментальным группам
Все процедуры по уходу за крысами осуществлялись согласно «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приказ МЗ РФ от 19.06.2003 № 267).
Методы: криостатные срезы свежезамороженных органов толщиной 15 мкм исследовались: люминесцентно-гистохимическим методом Кросса, Евена, Роста (1971) для выявления гистамин; люминесцентно-гистохимическим методом Фалька-Хилларпа в модификации Е.М. Крохиной, П.П. Александрова (1969) для избирательного выявления: КА и СТ; метод спектрофлуометрии использовался для количественного измерения содержания СТ, КА и гис-тамина в структурах тимуса. Количественное измерение веществ проводили на люминесцентном микроскопе ЛЮМАМ-4 с применением фотометрической насадки ФМЭЛ-1А с применением фотометрической насадки ФМЭЛ-1а. Для определения гистамина служил интерференционный фильтр 7 (515 нм), КА - 6 (480 нм), СТ - (525 нм). Наблюдение велось при напряжении 900 вольт с зондом 0,5. Показания снимались с измерительной части усилителя вольтметра в условных единицах (у.е.) (Карнаухов В.Н., 1978). Вычисление серотонинового индекса осуществлялось для стабилизации полученных результатов, а также для определения ведущей роли определенного БА в конкретной ситуации. Соотношение СТ и КА принято называть серотониновым индексом (Js). Когда Js больше единицы, можно говорить о преобладании в структуре СТ. Если серотониновый индекс меньше единицы, то в структуре преобладают КА. Статистическую обработку материала производили с помощью персонального компьютера Pentium 200 MMX с использованием стандартного пакета программ. Количественное распределение гранулярных клеток
проводилось методом подсчета их в 5 полях зрения микроскопа при увеличении об. 40. ок. 10. Статистическую достоверность определяли критерием Стьюдента (¿).
Результаты и их обсуждение. Основными нейроаминсодержащими структурами селезенки являются гранулярные люминесцирующие клетки (ГЛК), тучные клетки (ТК), адренерги-ческие нервные волокна, макрофаги красной пульпы [5]. У интактных животных ГЛК выявляются в периартериальной зоне, центре размножения, мантийной зоне, маргинальной зоне и в красной пульпе селезенки (табл. 2).
После 5 дней введения циклоферона в периартериальной зоне содержание гистамина в ГЛК снижается в 1,8 раза по сравнению с нормой, а моноаминсодержащие ГЛК не выявлялись (рис. 1).
В ГЛК центра размножения содержание гистамина, КА и СТ снижается в 2,1 раза, 0,3 раза и 2,3 раза соответственно по сравнению с интактными животными. Здесь определялось максимальное содержание КА и СТ в ТК.
В мантийной зоне содержание гистамина и СТ в ГЛК одинаково снижается после введения циклоферона в среднем в 6,3 раза, а количество КА в ГЛК остается без динамики.
В маргинальной зоне содержание изучаемых биогенных аминов в ГЛК имеет тенденцию к снижению по сранению с интактными животными: гистамина - в 9,8 раз, КА - в 1,2 раза, СТ - в 8,9 раза. Катехоламинсо-держащие ТК после 5 введений циклоферона определялись во всех исследуемых зонах, кроме периартериальной. В зоне центра размножения появляются гистаминсодержащие тучные клетки. В других зонах тучные клетки не определялись.
Содержание нейроаминов в ГЛК красной пульпы увеличивается после 5-ти кратного введений циклоферона. Так, значения гистамина и СТ в них увеличено в 1,2 раза. Содержание КА в ТК красной пульпы не отличалось от интактных.
Таким образом, после 5 кратного введения циклоферона содержание гистамина и СТ в ГЛК разных зон белой пульпы имеет тенденцию к снижению, с одновременным накоплением этих биоаминов ГЛК красной пульпы селезенки. Колебания КА в ГЛК красной и белой пульпы незначительные (табл. 2). Отмечается появление ТК в структурах белой пульпы селе-
Интактные животные Введение циклоферона №5 Введение циклоферона №10
Число животных 10 10 10
10иКМЛЬ ОБ ОТШ МЕБТСЛЬ ТЕСЫШШС1Е8 - 2018 - V. 25, № 3 - Р. 101-106
зенки. В основном определяются серотонин- и катехоламинсодержащие тучные клетки. Максимальное свечение этих биоаминов регистрируется в центре размножения (рис. 2).
увеличении КА в 2,5 раза по сравнению с нормой.
Таблица 2
Интенсивность люминесценции нейроаминов в цитоструктурах селезёнки (у.е.)
Цитоструктуры Контрольная группа Опытная группа Введение циклоферона №5 Опытная группа введение циклоферона №10
Г СТ КА Г СТ КА Г СТ КА
ГЛК периар. зоны 8,1 ±0,1 9,2±0,2 4,3±0,1 5,0±0,23* - - 27,8±0,3 28,3±0,2 83,1±0,23
ГЛК центра размнож. 9,8±0,2 10,8±2,2 9,8±2,0 2,5±1,1* 2,5±0,23* 8,8±0,1 6,9±0,23 7,4±0,13 20,2±0,3
ГЛК мант. зоны 32,4±0,02 31,2±0,6 7,1±0,25 2,6±0,2* 2,6±0,5* 7,1±0,2 6,9±0,23 6,9±0,3 24,2±0,2
ГЛК марг. зона 32,2±0,1 31,2±0,6 7,2±0,1 2,6±0,23 2,4±0,23 3,8±0,13 - - -
ГЛК красной пульпы 4,7±0,25 4,8±2,2 5,7± 1,2 6,3±0,9* 5,1±0,7** 5,9±0,2 5,1±0,2 5,3±0,03 10,1±0,12
ТК центра размн. 9,1±1,2* 7,2±0,1 6,1±0,12
ТК мантийной зоны - 3,1±0,12 5,7±0,3
ТК маргин. зона - 3,3±0,2 5,7±0,01
ТК красной пульпы 7,3±0,21 4,9±0,2 2,1±0,15 - 4,7±0,4 3,4±0,2 34,5±0,01 75,2±0,2
Примечание: Г - гистамин, СТ - серотонин, КА - катехоламины ГЛК - гранулярные люминесцирующие клетки. Р£0,05* - по сравнению с контрольной группой. Р£0,001**- по сравнению с контрольной группой. Курсивом отмечено увеличение нейроаминов, полужирным - снижение
В ГЛК мантийной зоны изменения биоаминов сопоставимы с центром размножения. Отмечается уменьшение в ГЛК гистамина и СТ, при количественном повышении КА.
После 10 кратного введения ГЛК в маргинальной зоне не выявлялись. В ГЛК красной пульпы колебания гистамина и СТ были незначительны. Однако, люминесценция КА в ГЛК в 2 раза превышало значения интактных животных.
Гистаминсодержащие тучные клетки не выявлялись в структурах селезенки.
Рис. 1. ГЛК в структурах красной и белой пульпы селезенки после 5 дневного введения циклоферона.
Метод. Кросса. Ув. 200
После 10 дней введения циклоферона отмечается появление увеличенного числа лим-фоидных узелков, однако число ГЛК в них оказалось сниженным, но содержание всех исследуемых биогенных аминов в них увеличено. В ГЛК периартериальной зоны содержание гистамина увеличивается в 3,1 раза, КА - в 20 раз превышают показатели интактных крыс, СТ - в 3,2 раза (рис. 3).
В ГЛК центра размножения регистрируется снижение люминесценции гистамина и СТ в 1,2 и 1,3 раза соответственно, при одновременном
Рис. 2. ТК и ГЛК в красной и белой пульпе селезенки после 5 дней введения циклоферона. Метод Фалька. Ув. 200
10иКМЛЬ ОБ ОТШ МЕБТСЛЬ ТЕСЫШШС1Е8 - 2018 - V. 25, № 3 - Р. 101-106
Рис. 3. ГЛК красной и белой пульпы селезенки белых крыс после 10 кратного введения циклоферона. Метод Кросса. Ув. 200
Рис. 4. ТК в красной пульпе селезенки белых крыс после 10 кратного введения циклоферона.
Метод Фалька. Ув. 900
После 10-ти кратного введения циклоферона содержание КА и СТ определялось в ТК только красной пульпы, превышая показатели нормы в 7,5 и в 8 раз соответственно (рис. 4).
Таким образом, после 10-ти кратного введения циклоферона содержание гистамина и СТ в ГЛК белой и красной пульпы изменяется параллельно, либо количественным повышением, либо накоплением, либо снижением нейроаминов. Наибольшие количественные колебания отмечаются по КА, достигающим максимального значения в ГЛК периартериальной зоны. (табл. 2).
Серотониновый индекс (СИ): Значение СИ у интактных животных в ГЛК всех исследуемых зон белой пульпы селезенки и в ТК красной пульпы больше единицы, что говорит о преоб-
ладании в биоаминсодержащих структурах этого органа СТ над КА. При 5 кратном и 10 кратном введении циклоферона показатели СИ становятся меньше единицы, что по условиям метода свидетельствует о сильном контроле процессов иммуногенеза в селезенке со стороны адренергического звена ВНС (табл. 3).
Таблица 3
Серотониновый индекс в цитоструктурах селезёнки
Цитост-руктуры ГЛК ТК
Ин-такт введе ние №5 введе ние №10 Ин-такт введе ние №5 Введе ние №10
Периар-тер. зоны 1,8 - 0,32
центр размножения 1,1 0,4 1,2
мантийная зоны 4,6 0,4 0,6
маргинальная зона 4,5 0,6 0,6
красная пульпа 0,75 1,0 0,45 1,3 0,8 0,47
Примечание: Р£0,05* - по сравнению с контрольной группой. Р£0,001* *- по сравнению с контрольной группой. Курсивом отмечено преобладание в клеточных структурах СТ, полужирным - преобладание КА
Выводы:
1. Максимальное содержание гистамина, КА, СТ в ГЛК регистрируется после 10 кратного введения циклоферона в периартериальной зоне белой пульпы селезенки.
2. Максимальное содержание гистамина в тучных клетках определяется в центре размножения белой пульпы селезенки после 5 кратного введения циклоферона, а максимальное содержание КА и СТ определяется после 10 кратного введения циклоферона в тучных клетках, локализованных в красной пульпе селезенки.
Таким образом, при пятикратном введении циклоферона наблюдается активация в основном Б-зон белой пульпы селезенки, отвечающих за гуморальное звено иммунитета. При 10-и кратном введении препарата наблюдаются изменения в Т- и Б-зонах селезенки, что приводит к одновременной активации клеточного и гуморального иммунитета.
ВЕСТНИК НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ - 2018 - Т. 25, № 3 - С. 101-106 JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2018 - V. 25, № 3 - P. 101-106
THE EFFECTS OF CYCLOFERON ON THE DISTRIBUTION OF NEUROAMINES IN BIOAMINE-CONTAINING STRUCTURES OF THE SPLEEN
N.E. GIMALDINOVA*, E.N. IGNATIEVA*, L.A. LYUBOVTSEVA*, R.F. GIMALDINOV**, O.V. VOROBEVA*
*FGBOU VPO "Chuvash State I.N. Ulyanov University", Moskovsky Av., 15, Cheboksary, Chuvash Republic, 428010, Russia **Presidential Perinatal Center, "Ministry of Health of the Chuvash Republic", Moskovsky Av., 9, building 1, Cheboksary, Chuvash Republic, 428018, Russia
Abstract. The article describes the distribution of neuroamines in bioamine-containing granular luminescent cells and mast cells of different zones of the spleen when a widely used immunomodulator, cyclofe-ron, is administered in a different temporal aspect. Cycloferon is the inducer of the synthesis of endogenous interferons. Laboratory animals were injected with cycloferon into the tail vein with a multiplicity of five and ten injections. Cryostat sections of the spleen were treated with luminescent histochemical methods to detect biogenic amines (histamine, serotonin, catecholamines). After a five-fold administration of cyclofe-ron, the content of histamine and serotonin in the granular luminescent cells of different areas of the white pulp tends to decrease, while the accumulation of these bioamines of the granular fluorescent cells of the red spleen pulp. This number of injections contributes to the activation of mainly in-zones of the white pulp of the spleen, responsible for the humoral link of immunity. After a 10-fold administration of cycloferon, the content of histamine and serotonin in the GLA of the white and red pulp changes unidirectionally, while there are changes in the T - and In-zones of the spleen, which leads to the simultaneous activation of cellular and humoral immunity. With a fivefold administration of cycloferon, activation of mainly the B-zones of the white pulp of the spleen responsible for the humoral immunity unit is observed. With a tenfold administration of the drug, changes are observed in the T and B zones of the spleen, which leads to simultaneous activation of cellular and humoral immunity. The index of the serotonin index at 5-fold and 10-fold administration of cycloferon is less than one, which determines the higher content of catecholamines in the cellular structures in comparison with serotonin and can be evidence of a strong control of the immunogenesis processes in the spleen from the side of the adrenergic link of the ANS.
Key words: granular luminescent cells (GLC), mast cells (MC), neuroamines, histamine (H), catechola-mines (CA), serotonin (S), serotonin index (SI).
Литература
References
1. Воробьева О.В., Любовцева Е.В., Плюхин С.В., Любовцева Л.А. Сравнительный анализ влияния ауто- и аллогенной трансплантации костного мозга на структуры костного мозга // Морфология. 2016. Т. 149, №3. С. 127.
1. Vorob'eva OV, Lyubovceva EV, Plyuhin SV, Lyubovceva LA. Sravnitel'nyj analiz vliyaniya auto- i allogennoj transplantacii kostnogo mozga na struk-tury kostnogo mozga [Comparative analysis of the influence of auto - and allogeneic bone marrow transplantation on bone marrow structures]. Morfologiya. 2016;149(3):127. Russain.
2. Ефремова О.А., Любовцева Л.А., Бычкова И.А., Сергеева К.А., Гамзалиева Ш.Я. Эффект воздействия красного светодиодного излучения на био-аминсодержащие структуры селезенки экспериментальных мышей // Современные проблемы науки и образования. 2016. № 4. С. 97.
2. Efremova OA, Lyubovceva LA, Bychkova IA, Sergeeva KA, Gamzalieva SHYA. EHffekt vozdejstviya krasnogo svetodiodnogo izlucheniya na bioaminso-derzhashchie struktury selezenki ehksperimen-tal'nykh myshej [Effect of red led radiation on the bioamine-containing structures of the spleen of experimental mice]. Sovremennye problemy nauki i obrazovaniya. 2016;4:97. Russian.
3. Исаков В.А., Романцов М.Г. Эффективность циклоферона в терапии и профилактике гриппа и ОРЗ // РМЖ. Болезни дыхательных путей. 2011. T. 23. C. 1420-1425.
3. Isakov VA, Romancov MG. EHffektivnost' ciklofe-rona v terapii i profilaktike grippa i ORZ [The effectiveness of cycloferon in the treatment and prevention of influenza and ARI]. RMZH. Bolezni dykha-tel'nykh putej. 2011;23:1420-5. Russian.
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2018 - V. 25, № 3 - P. 101-106
4. Любовцева Л.А., Любовцева Е.В., Воробьева О.В., Гималдинова Н.Е., Ефремова О.А. Возрастные и видовые различия нейроаминных структур тимуса крыс, кошек и человека // Актуальные вопросы клинической медицины. Сборник материалов региональной научно-практической конференции (к 65-летию бюджетного учреждения Чувашской Республики «Вторая городская больница» г. Чебоксары). Чебоксары, 2017. С. 177-184.
4. Lyubovceva LA, Lyubovceva EV, Vorob'eva OV, Gimaldinova NE, Efremova OA. Vozrastnye i vidovye razlichiya nejroaminnykh struktur timusa krys, ko-shek i cheloveka. Aktual'nye voprosy klinicheskoj mediciny. Sbornik materialov regional'noj nauchno-prakticheskoj konferencii (k 65-letiyu byudzhetnogo uchrezhdeniya CHuvashskoj Respubliki «Vtoraya go-rodskaya bol'nica» g. CHeboksary) [Age and species differences of neuroamine thymus structures in rats, cats and humans. Actual issues of clinical medicine. Collection of materials of the regional scientific and practical conference (to the 65th anniversary of the budget institution of the Chuvash Republic "Second city hospital" Chebok-sary)]. CHeboksary; 2017. Russain.
5. Табаева Н.Н., Любовцева Л.А., Любовцева Е.В., Гурьянова Е.А., Гималдинова Н.Е. Влияние ауто- и изогенной пересадки костного мозга на качественное и количественное изменение биоаминсо-держащих структур селезенки. // «Морфология в теории и практике» Материалы всероссийской конференции с международным участием посвященной 85-летию со дня рождения Д.С.Гордон, 2008. С. 125-126.
5. Tabaeva NN, Lyubovceva LA, Lyubovceva EV, Gur'yanova EA, Gimaldinova NE. Vliyanie auto- i izogennoj peresadki kostnogo mozga na kachestvennoe i kolichestvennoe izmenenie bioaminsoderzhashchikh struktur selezenki. «Morfo-logiya v teorii i praktike» Materialy vserossijskoj kon-ferencii s mezhdunarodnym uchastiem posvyash-chennoj 85-letiyu so dnya rozhdeniya D.S.Gordon [The impact of auto - and isogenic transplantation of bone marrow qualitative and quantitative changes in biomesotherapy structures of the spleen. "Morphology in theory and practice" Proceedings of the all-Russian conference with international participation dedicated to the 85th anniversary of the birth of D. S. Gordon]; 2008. Russian.
