CC BY
18
Для корреспонденции
Аверьянова Елена Витальевна - кандидат химических наук, доцент, доцент кафедры биотехнологии БТИ АлтГТУ Адрес: 659305, г. Бийск, ул. имени Героя Советского Союза Трофимова, д. 27, каб. 410Б Телефон: (3854) 43-53-05 E-mail: averianova.ev@bti.secna.ru https://orcid.org/0000-0003-2144-1238
Аверьянова Е.В.1, Школьникова М.Н.1, 2, Чугунова О.В.2, Мазко О.Н.3
Влияние тритерпеноидов в составе жиросодержащих продуктов на состояние печени лабораторных животных с острым токсическим гепатитом
Бийский технологический институт (филиал) федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Алтайский государственный технический университет им. И.И. Ползунова», 659305, г. Бийск, Российская Федерация
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Уральский государственный экономический университет», 620144, г. Екатеринбург, Российская Федерация
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Алтайский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 656038, г. Барнаул, Российская Федерация
Biysk Technological Institute (branch) of the Altay State Technical University, Altai Region, 659305, Biysk, Russian Federation
Ural State University of Economics, 620144, Yekaterinburg, Russian Federation Altai State Medical University, Ministry of Health of the Russian Federation, 656038, Barnaul, Russian Federation
Effects of triterpenoids in fatty products on liver condition of laboratory animals with acute toxic hepatitis
Averyanova E.V.1, Shkolnikova M.N.1, 2, Chugunova O.V.2, Mazko O.N.3
2
3
2
3
Финансирование. Работа выполнена в рамках госзадания Минобрнауки России (мнемокод 0611-2020-013; номер темы FZMM-2020-0013, ГЗ № 075-00316-20-01).
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие конфликта интересов.
Вклад авторов. Концепция и дизайн исследования - Аверьянова Е.В., Школьникова М.Н.; сбор и обработка данных - Мазко ОН.; статистическая обработка данных - Чугунова О.В.; написание текста - Школьникова М.Н., Аверьянова Е.В.; редактирование, утверждение окончательного варианта статьи, ответственность за целостность всех частей статьи - все авторы.
Для цитирования: Аверьянова Е.В., Школьникова М.Н., Чугунова О.В., Мазко ОН. Влияние тритерпеноидов в составе жиросодержащих продуктов на состояние печени лабораторных животных с острым токсическим гепатитом // Вопросы питания. 2023. Т. 92, № 4. С. 81-91. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2023-92-4-81-91 Статья поступила в редакцию 14.03.2023. Принята в печать 30.06.2023.
Funding. This work was supported by the project 075-00316-20-01 (FZMM-2020-0013, mnemocode 0611-2020-013) from the Ministry of Science and
Higher Education of the Russian Federation.
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Contribution. The concept and design of the study - Averyanova E.V., Shkolnikova M.N.; data collection and processing - Mazko O.N.; statistical data processing - Chugunova O.V.; writing the text - Shkolnikova M.N., Averyanova E.V.; editing, approval of the final version of the article, responsibility for the integrity of all parts of the article - all authors.
For citation: Averyanova E.V., Shkolnikova M.N., Chugunova O.V., Mazko O.N. Effects of triterpenoids in fatty products on liver condition of laboratory animals with acute toxic hepatitis. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2023; 92 (4): 81-91. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2023-92-4-81-91 (in Russian)
Received 14.03.2023. Accepted 30.06.2023.
Одним из принципов профилактики и немедикаментозного лечения заболеваний печени, в том числе гепатитов различной этиологии, является нормализация рациона питания за счет ежедневного потребления пищевых продуктов с физиологически активными ингредиентами, в частности бетулином, который способствует устранению причин нарушения обменных и окислительных процессов внутри клеток печени.
Цель работы - оценка влияния in vivo выделенного из бересты березы Betula pendula Roth. тритерпенового спирта бетулина в составе жиросодержащих продуктов (на примере майонеза) на биохимические показатели крови и морфологическую структуру печени крыс с инициированным острым токсическим гепатитом.
Материал и методы. Исследована гепатопротекторная и антиоксидантная активность бетулина в составе образцов майонеза in vivo на модели токсического гепатита, инициированного тетрахлорметаном у крыс-самцов линии Вистар с массой тела 210-265 г. Животные были разделены на 4 группы по 10 особей в каждой: КГ-1 - интактные, КГ-2, ОГ-1 и ОГ-2 - с инициированным тетрахлорметаном токсическим гепатитом. Крысам основных групп перорально вводили майонез 1 раз в сутки в дозировке 1 мл в течение 21 дня после формирования модельной патологии: животным ОГ-1 -с добавлением бетулина (1 мг на 1 кг массы тела), ОГ-2 - без добавления бетулина. Нарушение обменных и окислительных процессов в клетках печени животных оценивали по биохимическим показателям плазмы крови (концентрация глюкозы, альбуминов, общего холестерина, триглицеридов и мочевины) и активности ферментов печеночной пробы (аланин-и аспартатаминотрансферазы, щелочной фосфатазы и у-глутамилтрансферазы). Показатели окислительного стресса у крыс оценивали по активности каталазы и супероксиддисмутазы в гемолизате крови (в разведении 1:200 и 1:10 соответственно); общую прооксидантную (в плазме крови) и общую антиоксидантную (в гемолизате крови в разведении 1:10) активность определяли спектрофотометрически по образующимся в результате цветной реакции окрашенным комплексам продуктов окисления ТВИН-80 с тиобарбитуровой кислотой. Морфологическую структуру печени крыс оценивали микроскопированием подготовленных срезов печеночной ткани.
Результаты. На основании биохимических исследований плазмы крови крыс установлено, что введение животным майонеза с бетулином предупреждает развитие цитолитического синдрома и подавляет процесс пероксидации посредством прямой нейтрализации свободных радикалов: статистически значимо (p<0,05) снизилась активность аспартатаминотрансферазы (на 20,7%) и щелочной фосфатазы (на 35,2%) в плазме крови животных основной группы ОГ-1 по сравнению с показателями крыс группы ОГ-2, нормализовалась концентрация глюкозы до уровня контрольной группы; уменьшилась концентрация билирубина (на 22,9%) и триглицеридов (на 48,1%), что свидетельствует о достоверном уменьшении показателей холестатического синдрома в группе животных ОГ-1 в сравнении с ОГ-2; снизились общая прооксидантная активность и концентрация тиобарбитурат-реактивных продуктов по сравнению с группами КГ-2 и ОГ-2, что свидетельствует о подавлении окислительного стресса и, как следствие, об улучшении состояния печени животных с токсическим гепатитом даже на фоне приема жиросодержащего продукта. В гистопрепаратах печени животных, получавших майонез с бетулином, некробиотические изменения менее выражены в сравнении с группой ОГ-2 и оцениваются в 1 балл: обнаружены очаги мелкокапельной дистрофии, кровоизлияния в междольковые перегородки с воспалительной инфильтрацией по ходу кровоизлияний против наличия некрозов гепатоцитов с выраженной жировой дистрофией в центрах долек, ступенчатых некрозов с признаками замещения поврежденных гепатоцитов соединительной тканью, сопровождающейся центролобулярными кровоизлияниями.
Заключение. Введенный в состав майонеза бетулин способствует торможению развития синдрома цитолиза при токсическом гепатите у крыс и подавляет процессы перекисного окисления, на основании чего жиросодержащие пищевые продукты с бетулином в составе могут быть рекомендованы к клиническому изучению в качестве специализированных продуктов при острых и хронических заболеваниях печени, в том числе осложненныххолестазом. Ключевые слова: бетулин; майонез; токсический гепатит; крысы; биохимические показатели крови; антиокси-дантная активность; морфологическая структура печени
One of the principles of prevention and non-medicamentous treatment of liver diseases, including hepatitis of different etiology, is the normalization of the diet through the consumption of food with physiologically active ingredients, in particular betulin, which helps to eliminate the causes of metabolic and oxidative disorders within liver cells.
The aim of the research was to assess in vivo the influence of triterpene alcohol betulin extracted from Betula pendula Roth. birch bark in fat-containing products (for example mayonnaise) on the blood biochemical parameters and liver morphological structure of rats with initiated acute toxic hepatitis.
Material and methods. Hepatoprotective and antioxidant activities of betulin as part of mayonnaise samples has been investigated in vivo on the model of toxic hepatitis initiated by carbon tetrachloride in male Wistar rats weighing 210-265 g. The animals were divided into 4 groups of 10 animals each: CG-1 - intact, CG-2 and MG - with carbon tetrachloride initiated toxic hepatitis. rats of the main groups were orally administered mayonnaise once a day at a dosage of 1 ml for 21 days after the formation of the model pathology: OG-1 with the added betulin (1 mgper 1 kg of body weight), OG-2 without betulin. Disorders of metabolic and oxidative processes in liver cells of animals were evaluated by biochemical indicators of blood plasma: the level of glucose, albumin, total cholesterol, triglycerides and urea and the activity of alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, alkaline phosphatase and y-glutamyltransferase. Oxidative stress in rats was estimated by the activity of catalase and superoxide dismutase in blood hemolysate (at a dilution of 1:200 and 1:10, respectively); the total prooxidant (in blood plasma) and total antioxidant (in blood hemolysate at a dilution of 1:10) activity were determined spectrophotometrically (colored complexes of TWIN-80 oxidation products with thiobarbi-turic acid). The morphological structure of rats' liver was estimated by microscopy of prepared cuts of hepatic tissue. Results. Based on biochemical parameters of rat blood plasma, it has been established that the administration of mayonnaise with betulin prevents the development of cytolic syndrome and suppresses the process of peroxidation by directly neutralizing free radicals. Aspartate aminotransferase and alkaline phosphatase activity in blood plasma of the experimental animals of the main group MG-1 reduced by 20.7 and 35.2% compared with indicators of the rats of the main group MG-2. Glucose concentration normalized to the level of the control group CG-1. The concentration of bilirubin and triglycerides decreased by 22.9 and by 48.1%, which indicates a significant reduction in the indicators of cholestatic syndrome in the group of animals OG-1 compared to OG-2. The total prooxidant activity and the concentration of thiobarbiturate-reactive products decreased compared to the CG-2 and MG-2 groups, which
indicates the suppression of oxidative stress and, as a result, an improvement in liver conditions of animals with toxic hepatitis even when taking a fat-containing product. In liver histopeparates of animals receiving mayonnaise with betulin, necrobotic changes were less pronounced in comparison with the group MG-2. They were estimated at 1 point: small-drip dystrophy spots were found, haemorrhages in the interregional septum with inflammatory infiltration in the course of hemorrhages against the presence of necrosis hepa-tocytes with pronounced adipose dystrophy in the centres of the lobules, step necrosis with signs of replacing the damaged hepatocytes of the connective tissue, accompanied by centrolobular hemorrhages in MG-2 rats.
Conclusion. Introduced into the composition of mayonnaise betulin, reduces the development of cytolic syndrome in toxic hepatitis and suppresses the process of peroxidation, on the basis of which fat-containing foods with betulin can be recommended for clinical examination as specialized products in acute and chronic liver diseases, including complicated cholestasis. Keywords: betulin; mayonnaise; toxic hepatitis; rats; blood chemistry; antioxidant activity; liver morphology
Печень млекопитающих имеет зональную организацию на доли и дольки, паренхиматозные клетки и гепатоциты которых обусловливают функциональное влияние на высокую метаболическую способность и способность к детоксикации [1]. Таким образом, печень является эндокринным органом и центром химической обработки, синтеза новых субстанций и обезвреживания токсических веществ; при этом ее поражение возможно под воздействием различных факторов, включая гепатотропные вирусы (гепатита от А до Е), токсические вещества (алкогольные напитки, лекарственные средства и т.д.) и ксенобиотики (промышленные загрязнители, пестициды, препараты бытовой химии), дисметаболические нарушения и др., в результате чего возможно развитие хронической патологии печени [2]. По данным Всемирной организации здравоохранения, в последние два десятилетия наблюдается тенденция к росту заболеваний печени как вирусной, так и невирусной этиологии, при этом хронические заболевания печени занимают существенное место среди причин ранней нетрудоспособности и смертности населения [2]. Поражения печени, независимо от этиологии, проявляются примерно в одной и той же последовательности, называемой «печеночным континуумом», конечным звеном которого становятся хронические диффузные заболевания печени, профилактика которых, по мнению гепатологов, наряду с терапией представляет большой научно-практический интерес с точки зрения общественного здравоохранения [2, 3].
Несмотря на достижения последних лет в области клинической фармакологии, основным и обязательным этапом лечения и профилактики хронических диффузных заболеваний печени является изменение образа жизни, основанное на 2 основных принципах: во-первых, нормализация рациона питания, в частности уменьшение энергетической ценности рациона за счет ограничения потребления жиров животного происхождения и легкоусвояемых углеводов; во-вторых, введение в привычку ежедневной физической активности [4].
При этом диета рассматривается в качестве основы немедикаментозного лечения и подразумевает ограничительный принцип. Однако, по мнению А.Н. Сасу-новой и соавт., изменение сформировавшихся привычек пищевого поведения, а также необходимость постоянно подбирать ингредиентный состав рациона и рассчитывать его калорийность могут приводить к отказу
пациентов от диеты и в результате к снижению эффективности лечения [5]. Кроме того, сочетание диетотерапии с аэробной физической нагрузкой и силовыми упражнениями ограничено для некоторых групп пациентов, например с сопутствующими заболеваниями опорно-двигательного аппарата и сердечно-сосудистой системы, а они составляют значительное число больных, в связи с чем принципиальное значение для данного сегмента потребителей имеет совершенствование рациона - разработка и выпуск пищевых продуктов ежедневного рациона с подтвержденными безопасностью и полезными свойствами.
С этой позиции представлялось интересным изучить возможность разработки такого продукта, как майонез -эмульсионого масложирового, предназначенного для улучшения вкуса и усвояемости основных блюд. Несмотря на то что майонез не считается продуктом здорового питания из-за высокого содержания жировой составляющей, это привычный пищевой продукт для потребителей во многих странах мира. Так, по данным Росстата, 37,7% россиян старше 14 лет потребляют майонез чаще 1 раза в неделю, почти 50,0% опрошенных - хотя бы раз в месяц и лишь 12,5% ответили, что практически не употребляют майонез. В 2021 г. в России произведено 765,2 тыс. т майонеза, что на 3% больше, чем в 2020 г., и в целом за последние 5 лет объемы производства майонеза стабильны на уровне 760-780 тыс. т [6].
С точки зрения пищевой матрицы, майонезы в большинстве случаев - прямые концентрированные эмульсии или дисперсные системы, состоящие из взаимно нерастворимых жидкостей, где одна жидкость равномерно распределена в другой в виде мельчайших капель [7].
Возможность обогащения рациона растворимыми пищевыми волокнами, полиненасыщенными жирными кислотами, веществами с антиоксидантной активностью и другими, способствующими уменьшению воспалительного процесса в ткани печени, оценена в ряде исследований [5, 8-10]. В работах [11, 12] показано, что наиболее часто для ослабления воспалительного процесса в ткани печени используют антиоксиданты (отдельно или в сочетании) - силимарин, витамин Е, тиоктовую (а-липоевую) кислоту, фенольные вещества и др. В частности, для регуляция клеточных факторов, опосредующих повреждение печени и регенерацию после острого токсического повреждения печени, применяют природный
29
25
11 26 ■ 13 17
D
1 14 16
HO
22 28
CH2OH
24
23
Рис. 1. Структурная формула бетулина с нумерацией атомов углерода
Fig. 1. Structural formula of betulin with numbering of carbon atoms
фитоалексин, производное транс-стильбена - ресве-ратрол [13]; гепатотоксичность, вызванную мышьяком, кадмием, хромом, медью, свинцом и ртутью, снижает производное феруловой кислоты - куркумин [14].
Следует отметить, что при разработке «полезных» майонеза, соусов и заправок на его основе в приоритете использование местного растительного сырья, в том числе вторичного, действующие вещества которого придают функциональную направленность готовому продукту и обладают хорошими технологическими свойствами (эмульгаторы, антиоксиданты, стабилизаторы консистенции и др.). Это хорошо согласуется с современными исследованиями по разработке составов майонеза, которые развиваются в 2 основных направлениях: использование заменителей жира и/или добавление в майонез функциональных пищевых ингредиентов, в частности пребиотиков, антиоксидантов, а также пищевых добавок - консервантов и др. [15-17].
Одним из таких природных ингредиентов является бетулин [луп-20(29)-ен-3,28-диол, C30H50O2, CAS: 473-98-3] - пентациклический тритерпеновый спирт лупанового ряда, содержащийся в количестве от 25 до 50% во внешней части коры белоствольных берез (бересте). Бетулин и его производные обладают доказанной терапевтической активностью при лечении нарушений обмена веществ [18], инфекционных [19, 20], гепатопротекторных [21] и сердечно-сосудистых заболеваний [20], неврологических расстройств и др. [22, 23]. Он не токсичен, не вызывает аллергических реакций, не оказывает тератогенного, кожнораздражающего, канцерогенного, кумулятивного, мутагенного действия и не влияет на развитие плаценты [24, 25].
В морфологических исследованиях показана высокая активность бетулина и его окисленной формы - бету-лоновой кислоты - против острого токсического гепатита, а их регулярный прием уменьшает нефротический синдром [26].
Бетулин имеет в своей структуре двойную связь в изопропенильной группе (С-20, 29) и 2 гидроксильные группы: первичную (С-28) и вторичную (С-3), обе связаны с алкильными фрагментами и проявляют классические спиртовые свойства, благодаря чему бетулин имеет большее сходство с растворителями средней полярности, чем с малополярными растворителями (рис. 1).
Однако бетулин нерастворим в воде, так как его молекула слишком велика для реализации пустотного механизма растворения, поэтому необходима такая его форма или пищевая матрица, которая будет способствовать растворению и максимальному усвоению. Состав матрицы пищевых продуктов имеет решающее значение для биодоступности микроингредиентов вообще и тритерпенов в частности, так как, прежде чем попасть к месту абсорбции в тонкую кишку, они перевариваются в ротовой полости, желудке и двенадцатиперстной кишке, подвергаясь механическому и ферментативному воздействию при различных значениях pH. Кроме того, тритерпены в составе пищевой матрицы взаимодействуют с макроингредиентами. Так, комплексы тритер-пенов с белками, углеводами и пищевыми волокнами снижают их усвояемость, а присутствие жира в пищевой матрице, напротив, способствует солюбилизации и мицелляризации липофильных соединений до абсорбции, усиливая их всасывание [27].
Данные факты послужили предпосылкой для введения в состав майонеза функционального пищевого ингредиента бетулина, потребление которого предотвращает нарушения обменных и окислительных процессов внутри клеток печени.
Цель исследования - оценка влияния In vivo выделенного из бересты березы Betula pendula Roth. тритер-пенового спирта бетулина в составе жиросодержащих продуктов (на примере майонеза) на биохимические показатели крови и морфологическую структуру печени крыс с инициированным острым токсическим гепатитом.
Материал и методы
Бетулин получен по методу, разработанному и запатентованному в [28] экстракцией предварительно активированной бересты 86% этиловым спиртом. Коэффициент извлечения 97%; Тпл = 259-260 °С (из этилового спирта). Подлинность экспериментального образца бетулина подтверждена данными ИК-спектроскопии: у(О-Н) 3374,42 см-1, для СН3-групп у(С-Н)5 2939,92 см-1 и 5(С-Н)3 1375,62 см-1, у(С-О) 1029,57 см-1, что соответствует данным литературы [29], и результатами элементного анализа (найдено: С - 81,2%; Н - 11,5%; О - 7,2%; вычислено: С - 81,4%; Н - 11,3%; О - 7,2%). Описанные выше проявления биологической активности бетулина и качество опытного образца позволяют рассматривать это биоактивное вещество как физиологически активный ингредиент в составе пищевых продуктов, в частности жиросодержащих - в майонезе.
Экспериментальные образцы майонеза приготовлены из традиционных ингредиентов по рецептуре майонеза «Провансаль» (67% жирности) по классической технологии с внесением в опытный образец 0,2% раствора бетулина в растительном масле в количестве 6% на этапе эмульгирования рецептурных компонентов, контролем являлся приготовленный аналогичным способом образец майонеза без внесения бетулина. Образцы получены без каких-либо химических консервантов, исследование их качества проведено в день приготовления. Подробно матрикс экспериментального образца майонеза «Провансаль» представлен в [30]. По результатам оценки на соответствие требованиям ГОСТ 31761-2012 «Майонезы и соусы майонезные. Общие технические условия» и ТР ТС 021/2011 «О безопасности пищевой продукции» образцы признаны безопасными и стандартного качества.
Физиолого-биохимические исследования гепа-топротекторной активности бетулина в составе образцов майонеза проводили in vivo на 40 сертифицированных крысах-самцах линии Вистар массой тела 210-265 г, предоставленных ФГБНУ ФИЦ ИЦиГ СО РАН (Новосибирск, Россия), в зимне-весенний период в течение 28 дней. Эксперименты проводили в соответствии с ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами». Крысы были подвижны и активны, шерсть гладкая, чистая, кожные покровы и слизистые бледно-розового цвета.
После недельной адаптации крысы были разделены на 4 группы по 10 животных в каждой - 2 контрольные (КГ) и 2 основные группы (ОГ). Животных содержали в клетке в контролируемых условиях окружающей среды: T = 22±2 °C, относительная влажность воздуха 40-45%, с 12-часовым циклом освещения. Животные получали общевиварный рацион и воду ad libitum. Животные КГ-1 - интактные, КГ-2 - с инициированным тетрахлорме-таном (СС14) токсическим гепатитом, обеих ОГ - с инициированным СС14 токсическим гепатитом, дополнительно животным ОГ-1 в общевиварный рацион был введен майонез с добавлением бетулина, ОГ-2 - майонез без добавления бетулина. Образцы майонеза (с бетулином и без) вводили 1 раз в сутки перорально в дозировке 1 мл на 1 животное в течение 21 дня после формирования модельной патологии.
Токсический гепатит инициировали внутрибрюшным введением животным 1 мл 25% масляного раствора СС14 в течение 6 сут. Животных выводили из эксперимента на 28-е сутки после 16-часового голодания, под эфирным наркозом путем декапитации осуществляли эвтаназию экспериментальных животных с последующим забором крови и тканей печени для исследований в асептических условиях.
СС14-индуцированная модель токсического гепатита выбрана как широко используемая в практике доклинических исследований для воспроизведения печеночной
недостаточности у мелких лабораторных животных, наряду с хирургическими манипуляциями и инициированием инфекционного процесса, провоцирующая цитолиз и гибель гепатоцитов [31].
Нарушение обменных и окислительных процессов в клетках печени оценивали по характеризующим функцию печени биохимическим показателям крови: концентрация глюкозы, альбуминов, общего холестерина, триглицеридов и мочевины [32], а также по активности печеночных ферментов: аланин- (АЛТ) и аспартат-аминотрансферазы (АСТ), щелочной фосфатазы (ЩФ) и у-глутамилтрансферазы (ГГТ), являющихся индикаторами цитолиза при косвенной оценке тяжести повреждения гепатоцитов [33] и определяемых фотометрически кинетическим методом с использованием наборов реагентов (АО «Витал Девелопмент Корпорэйшн», Россия).
Показатели окислительного стресса у крыс оценивали по активности каталазы и супероксиддисмутазы (СОД) в гемолизате крови: активность каталазы - по подавлению ферментом окисления молибдата натрия перекисью водорода (разведение 1:200); активность СОД -по содержанию в пробе нитроформазана, окрашенного продукта восстановления нитротетразолия супероксидными радикалами (в разведении 1:10). Концентрацию продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) - тиобарбитурат-реактивных продуктов (ТБРП) -определяли фотометрически в плазме крови животных по интенсивности окраски образования оснований Шиффа с тиобарбитуровой кислотой (ТБК). Общую антиоксидантную активность определяли в гемолизате крови в разведении 1:10 по способности подавлять Рв2+/аскорбат-индуцированное окисление ТВИН-80 с последующим спектрофотометрическим определением образующихся в результате цветной реакции окрашенных комплексов продуктов окисления с ТБК. Общую прооксидантную активность (ОПА) определяли в плазме крови по способности подавлять окисление ТВИН-80 с последующим спектрофотометрическим определением образующихся в результате цветной реакции окрашенных комплексов продуктов окисления с ТБК [34].
Влияние экспериментальных образцов майонеза с бетулином на морфологическую структуру печени крыс с токсическим гепатитом, вызванным введением СС14, оценивали полуколичественным методом, согласно которому подготовленные срезы печеночной ткани толщиной 10-15 мкм окрашивали гематоксилином и эозином и затем микроскопировали.
Статистическую обработку результатов экспериментальных исследований проводили с использованием программы 81а11в11са 6.1 с вычислением значений средней величины (М) и стандартного отклонения (а). Соответствие выборок закону нормального распределения оценивали по критерию Шапиро-Уилка. При определении статистической значимости различий использовали критерии Манна-Уитни, Стьюдента и Вилкоксона.
Таблица 1. Биохимические показатели плазмы крови крыс (М±а, n=10) Table 1. Biochemical parameters of blood plasma in rats (M±a, n=10)
Показатель Группа животных / Group of animals
Index КГ-1 / СG-1 КГ-2 / СG-2 ОГ-1 / MG-1 ОГ-2 / MG-2
АСТ, Ед/л / AST, U/l 196,6±6,0 312,6±27,9* 256,0±24,5* 309,0±19,3*, #
АЛТ, Ед/л / ALT, U/l 58,6±3,9 110,4±8,1* 90,8±9,1* 98,6±5,9*
ЩФ, Ед/л / Alkaline phosphatase, U/l 374,0±18,4 645,6±45,8* 453,2±28,7* 612,8±35,2*, #
ГГТ, Ед/л / GGT, U/l 1,89±0,67 2,28±0,67* 2,95±0,64* 3,36±1,48*
Билирубин общий, мкмоль/л / Total bilirubin, ¡rmol/l 4,01 ±0,62 6,15±0,80* 5,11 ±0,64 6,28±0,41 *, #
Глюкоза, ммоль/л / Glucose, mmol/l 8,70±0,45 5,00±0,30* 8,20±0,60 5,80±0,70*, #
Триглицериды, ммоль/л / Triglycerides, mmol/l 1,60±0,06 1,91±0,25 1,85±0,20 2,74±0,30*, #
Холестерин, ммоль/л / Cholesterol, mmol/l 1,09±0,10 1,24±0,20 1,17±0,20 1,30±0,20
Мочевина, ммоль/л / Urea, mmol/l 4,66±0,34 5,15±0,40 3,00±0,20* 3,90±0,10*
Альбумин, г/л / Albumin, g/l 69,5±0,7 47,1±3,6* 49,8±6,2* 46,4±3,5*
П р и м е ч а н и е. Здесь и в табл. 2: статистически значимое (р<0,05) отличие показателя от показателя животных: * - 1-й контрольной (интактной) группы; # - 1-й основной группы. Расшифровка аббревиатур дана в тексте.
N o t e. Here and in table 2: statistically significant (p<0.05) difference between the index and the index of animals: * - control (intact) group 1; # - main group 1. Explanation of abbreviations is given in the text.
Результаты и обсуждение
Эффективность майонеза с добавлением 0,2% раствора бетулина в растительном масле в обеспечивающем функциональные свойства продукта количестве 6%, оценивали в эксперименте in vivo при пероральном введении.
Данные табл. 1 свидетельствуют о том, что маркеры цитолиза гепатоцитов в крови животных с инициированным СС14 гепатитом (КГ-2) значительно отличались от нормы (КГ-1): повысилась активность ферментов -АЛТ на 88,4%, АСТ на 59,0%, ЩФ на 72,0% и ГГТ на 21,0%. Бетулин в составе майонеза ослаблял гепа-тотоксическое действие СС14, на что указывает значительное снижение активности ферментов АСТ и ЩФ в крови животных ОГ-1 по сравнению с биохимическими показателями крови крыс ОГ-2 - АСТ на 20,7% и ЩФ на 35,2% (р<0,05). Понижение активности ГГТ на 13,9% у животных ОГ-1, получавших майонез с бетулином, свидетельствует о тенденции к увеличению азотистого обмена при снижении уровня цитолиза гепатоцитов по сравнению с животными ОГ-2, получавшими майонез без бетулина (р<0,09).
Согласно данным табл. 1, острый токсический гепатит, вызванный СС14, приводил к развитию холестатического синдрома, о чем свидетельствует повышение в сыворотке крови животных КГ-2 уровня билирубина на 53,4%. О нарушении глюкогенеза свидетельствует понижение уровня глюкозы на 42,5%, а уменьшение концентрации альбумина в плазме крови на 32,2% в совокупности с другими показателями указывает на нарушение белок-синтезирующей функции печени.
Пероральное введение животным майонеза с бету-лином (ОГ-1) привело к снижению содержания в плазме крови триглицеридов на 48,1% по сравнению с показателем животных ОГ-2. Однако этот показатель не достигал значения интактной группы (КГ-1), что, вероятно, связано со снижением активности митохондриаль-
ного бета-окисления жирных кислот при токсическом поражении печени и высокой концентрацией жиров (не менее 67%) в самом продукте. Нормализующее влияние бетулина отмечено в изменении концентрации билирубина и триглицеридов, что свидетельствует о достоверном уменьшении показателей холестатического синдрома в экспериментальной группе животных ОГ-1.
Таким образом, биохимические исследования крови показали, что пероральное введение животным майонеза с бетулином в дозе 1 мл (что соответствует 1 мг бетулина на 1 кг массы тела животного) в течение 21 сут снижает развитие цитолитического синдрома на модели острого токсического гепатита, инициированного СС14.
Гепатопротекторный эффект тритерпеноидов связывают с их антиоксидантными свойствами - уменьшением активации ПОЛ и повышением устойчивости клеточных структур к свободнорадикальным процессам [35], в результате которых образуются активные формы кислорода (АФК), а мишенями для их атаки являются ненасыщенные жирные кислоты и фосфолипиды в составе цитоплазматических мембран [24]. Это дает основание предположить, что внесение бетулина в пищевые продукты может снизить риск развития окислительного стресса.
В условиях экспериментального гепатита наблюдаются признаки выраженного окислительного стресса, о чем свидетельствует увеличение концентрации ТБРП окисления жирных кислот и ОПА, а также повышение активности антиоксидантных ферментов: СОД и ката-лазы. Результаты исследования антиоксидантной активности майонеза с бетулином в экспериментах in vivo представлены в табл. 2.
На модели острого токсического гепатита установлено, что концентрация ТБРП относительно контроля КГ-2 снижалась в 2,1 раза в группе ОГ-1 и не отличалась от концентрации ТБРП у интактных крыс (КГ-1); значение
Таблица 2. Показатели окислительного стресса у крыс (М±а, n=10) Table 2. The Indicators of oxidative stress in rats (M±a, n=10)
Показатель Группа животных / Group of animals
Index КГ-1 / СG-1 КГ-2 / СG-2 ОГ-1 / MG-1 ОГ-2 / MG-2
ОПА, % / TPA, % 28,7±1,3 45,4±1,6* 23,1±1,8* 39,3±1,7*, #
ОАА, % / TAA, % 56,7±2,2 67,3±1,3* 58,2±2,1 62,2±1,1 *, #
ТБРП, мкмоль / TBRP, pmol 2,8±0,2 5,7±0,3* 2,6±0,4 3,9±0,9*, #
Каталаза, % / Catalase, % 15,4±1,2 26,3±1,6* 21,7±0,3* 23,2±0,7*
СОД, % / SOD, % 12,9±0,8 26,9±1,1* 29,2±0,5* 27,5±1,1*
ОПА в группе ОГ-1 снизилось в 1,9 раза относительно контрольной группы (КГ-2) и было несколько меньше значения ОПА у интактных крыс (КГ-1).
В сравнении с показателями интактных крыс (КГ-1) более чем в 2 раза возрастала активность СОД у крыс с индуцированным гепатитом, максимально для группы ОГ-1 (~2,3 раза). Активация СОД при гепатите может носить компенсаторный характер в ответ на гиперпродукцию супероксидного анион-радикала. Некоторое дополнительное увеличение активности СОД у крыс ОГ-1 можно объяснить тем, что тритерпеноиды в плазме крови проявляют антиоксидантные свойства, уменьшая процессы липопероксидации (на это указывает нормализация уровня ТБРП в группе ОГ-1 до уровня интактных животных), что, вероятно, стимулирует анти-оксидантную защиту, проявляющуюся в увеличении активности СОД. Полученные результаты согласуются с данными по влиянию бетулина на окислительный стресс при воспалительном процессе [36]. Стимуляция свободнорадикального окисления, возникающая при гепатите, приводит к образованию значительного количества АФК, и, как следствие, к увеличению активности каталазы. Значительное увеличение активности каталазы в крови животных с гепатитом по сравнению с КГ-1 связано со способностью этого фермента катализировать разложение перекиси водорода, являющейся АФК, индуцируемой в условиях окислительного стресса.
Таким образом, повышение прооксидантной активности и уровня ТБРП у крыс группы КГ-2 по отношению к показателям животных группы КГ-1 свидетельствует о развитии окислительного стресса. Введение животным майонеза с бетулином приводило к достоверному (р<0,05) уменьшению ОПА и снижению образования ТБРП по сравнению с группами КГ-2 и ОГ-2, что свидетельствует о снижении окислительного стресса и, как следствие, к улучшению состояния печени животных с токсическим гепатитом даже на фоне приема жиросодержащего продукта.
Согласно данным литературы, антиоксидантные функциональные группы бетулина встраиваются в мембраны гепатоцитов и превращают гидроперекиси полиеновых жирных кислот в нетоксичные оксикислоты с обрывом цепей ПОЛ [36]. Таким образом, ингиби-рующее действие бетулина на свободнорадикальные процессы, протекающие в клетке, обусловлено наличием спиртовых групп, участвующих в обмене активных ради-
калов на оксипероксильные, что приводит к уменьшению энтропии при образовании активированного окислительного комплекса и увеличению вероятности обрыва цепи [36, 37]. Изменения у С-28, как правило, сочетаются с окислением вторичной спиртовой группы у C-3 до кетона и являются более перспективными по сравнению с окислением двойной связи С-20, 29 изопренильного заместителя у С-19 лупанового ядра [38] (рис. 2).
Первичная спиртовая группа C-28 вносит наибольший вклад в обеспечение брутто-ингибирующего действия бетулина на ПОЛ, что составляет порядка 54% эффективности молекулярной структуры в целом [39].
С учетом результатов биохимического исследования крови крыс, характеризующих интенсивность процессов свободнорадикального окисления, моделируемых in vivo, можно предположить, что бетулин, являясь физиологически активным ингредиентом в составе жиросо-держащего пищевого продукта - майонеза, способен подавлять процесс ПОЛ посредством прямой нейтрализации образующихся свободных радикалов.
Состояние печени оценивали полуколичественным методом. Сравнение групп проводили по следующим параметрам: дистрофия, некробиотические изменения, воспаление, сохранность балочно-радиарного строения, а также состояние сосудов печени (рис. 3).
В печени крыс интактной группы КГ-1 отсутствовали дистрофические и некробиотические изменения
Х^он
Q
°U
Ocooh
/
ьо
Рис. 2. Направления окислительных процессов Fig. 2. Directions of oxidative processes
1 но
24
23
В Г
Рис. 3. Гистопрепараты печени крыс (х400): А - 1-я контрольная группа (интактные); Б - 2-я контрольная группа (с СС14-индуцированным гепатитом); В - 1-я основная группа (с СС14-индуцированным гепатитом, получавшие майонез с бетулином); Г - 2-я основная группа (с СС14-индуцированным гепатитом, получавшие майонез без добавления бетулина)
Fig. 3. Histopreparations of rat liver (x400): A - control group 1 (intact); B - control group 2 (with CCl4-induced hepatitis); C - main group 1 (with CCl4-induced hepatitis, treated with mayonnaise with betulin); D - main group 2 (with CCl4-induced hepatitis treated with mayonnaise without the addition of betulin)
(рис. 3А). Гепатоциты имели нормальную форму и окраску. По ходу междольковых перегородок выявлена воспалительная инфильтрация. Морфогистохимические исследования печени крыс с токсическим гепатитом, вызванным СС14, из КГ-2 показали наличие мелкокапельной дистрофии в 2-3 балла, с очагами крупнокапельной (рис. 3Б). Видны выраженные некробиотиче-ские изменения, затрагивающие периферию и центр долек, а также полная декомпенсация балочно-ради-арного строения и гиперемия сосудов. В печени крыс, получавших майонез с бетулином, обнаружились очаги мелкокапельной дистрофии в 1 балл без некробиотиче-ских изменений (рис. 3В); наблюдались кровоизлияния в междольковые перегородки и воспалительная инфильтрация по ходу кровоизлияний; балочно-радиарное
строение прослеживалось с явлениями декомпенсации. В то же время в печени крыс, получавших майонез без добавления бетулина, из ОГ-2 в центрах долек определялись некрозы гепатоцитов с выраженной жировой дистрофией (рис. 3Г), формированием ступенчатых некрозов и признаками замещения поврежденных гепатоцитов соединительной тканью, сопровождающейся центролобулярными кровоизлияниями.
Заключение
Согласно полученным экспериментальным данным введенный в состав майонеза бетулин тормозит развитие синдрома цитолиза при токсическом гепатите
и подавляет процессы перекисного окисления за счет взаимодействия с АФК и нейтрализации свободных радикалов.
На основании биохимических исследований плазмы крови крыс установлено, что пероральное введение животным майонеза с бетулином в дозе 1 мл (что соответствует 1 мг бетулина на 1 кг массы тела животного) в течение 21 сут снижает развитие цитолити-ческого синдрома на модели острого токсического гепатита, инициированного СС14, на что указывает значительное снижение активности ферментов АСТ и ЩФ в крови животных ОГ-1 по сравнению с биохимическими показателями крови крыс ОГ-2 и нормализация концентрации глюкозы по сравнению с показателями плазмы крови КГ-2. Нормализующее влияние бетулина отмечено в изменении концентрации билирубина и триглицеридов, что свидетельствует об уменьшении показателей холестатического синдрома в экспериментальной группе животных ОГ-1 в сравнении с ОГ-2.
Показано, что пероральное введение животным майонеза с бетулином сопровождалось подавлением окисли-
тельного стресса, о чем свидетельствует значимое (р<0,05) снижение ОПА и образование ТБРП по сравнению с крысами КГ-2 и ОГ-2.
По результатам морфогистохимического исследования печени крыс можно сделать вывод, что в гистопре-паратах печени животных, получавших майонез с бету-лином, некробиотические изменения менее выражены в сравнении с показателями крыс ОГ-2 и оцениваются в 1 балл: обнаружены очаги мелкокапельной дистрофии, кровоизлияния в междольковые перегородки с воспалительной инфильтрацией по ходу кровоизлияний.
Таким образом, жиросодержащие пищевые продукты с бетулином в составе, адекватные нормы потребления которого (40-80 мг/сут) внесены в «Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к товарам, подлежащим санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) Таможенного союза ЕврАзЭС для биологически активных веществ» (Приложение 5), могут быть рекомендованы к клиническому изучению в качестве специализированных продуктов при острых и хронических заболеваниях печени, в том числе осложненных холестазом.
Сведения об авторах
Аверьянова Елена Витальевна (Elena V. Averyanova) - кандидат химических наук, доцент, доцент кафедры биотехнологии технологического факультета БТИ АлтГТУ (Бийск, Российская Федерация) E-mail: averianova.ev@bti.secna.ru https://orcid.org/0000-0003-2144-1238
Школьникова Марина Николаевна (Marina N. Shkolnikova) - доктор технических наук, доцент, профессор кафедры биотехнологии технологического факультета БТИ АлтГТУ (Бийск, Российская Федерация); профессор кафедры технологии питания Института менеджмента, предпринимательства и инжиниринга ФГБОУ ВО УрГЭУ (Екатеринбург, Российская Федерация) E-mail: shkolnikova.m.n@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-9146-6951
Чугунова Ольга Викторовна (Olga V. Chugunova) - доктор технических наук, профессор, заведующий кафедрой технологии питания Института менеджмента, предпринимательства и инжиниринга ФГБОУ ВО УрГЭУ (Екатеринбург, Российская Федерация) E-mail: chugun.ova@yandex.ru https://orcid.org/0000-0002-7039-4047
Мазко Олеся Николаевна (Olesia N. Mazko) - кандидат биологических наук, доцент кафедры фармакологии им. профессора В.М. Брюханова Института фармации ФГБОУ ВО АГМУ Минздрава России (Барнаул, Российская Федерация)
E-mail: olesia.mazko@yandex.ru https://orcid.org/0000-0001-7299-4516
Литература
Schenk A., Ghallab A., Hofmann U., Hassan R., Schwarz M., Schuppert A. et al. Physiologically-based modelling in mice suggests an aggravated loss of clearance capacity after toxic liver damage // Sci. Rep. 2017. Vol. 7, N 1. P. 6224. DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-017-04574-z Балукова Е.В., Успенский Ю.П., Фоминых Ю.А. Поражения печени различного генеза (токсического, лекарственного, дисме-таболического): от этиологической гетерогенности к единой унифицированной терапии пациентов // РМЖ. Медицинское обозрение. 2018. Т. 2, № 1-1. С. 35-40.
Губергриц Н.Б., Беляева Н.В., Клочков А.Е., Лукашевич Г.М., Фоменко П.Г. Лекарственные поражения печени: от патогенеза к лечению // Вестник клуба панкреатологов. 2020. Т. 1, № 46. С. 72-80. DOI: https://doi.org/10.33149/vkp.2020.01.10 Губергриц Н.Б., Беляева Н.В., Клочков А.Е., Лукашевич Г.М., Фоменко П.Г. Современные представления о питании и физи-
ческой активности в лечении неалкогольной жировой болезни печени // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2018. № 2. С. 100-109.
Сасунова А.Н., Морозов С.В., Соболев Р.В., Исаков В.А., Кочет -кова А.А., Воробьева И.С. Оценка эффективности использования специализированного пищевого продукта в составе диетотерапии пациентов с неалкогольным стеатогепатитом // Вопросы питания. 2022. Т. 91, № 2. С. 31-42. DOI: https://doi.org/10.33029/ 0042-8833-2022-91-2-31-42
Официальный сайт. Все масла мира. URL: https://www.oilworld. ru/analytics/localmarket/334695 (дата обращения 05.03.2023). Лабецкий В.В., Феофилактова О.В. Исследование реологических параметров эмульсионных соусов // Пищевая промышленность: наука и технологии. 2022. Т. 15, № 3. С. 86-89. DOI: https://doi. org/10.47612/2073-4794-2022-15-3(57)-86-89
i.
2
6
7
4
8. Воробьева В.М., Воробьева И.С., Морозов С.В., Сасунова А.Н., 24. Кочеткова А.А., Исаков В.А. Специализированные пищевые продукты для диетической коррекции рациона больных с неалкогольным стеатогепатитом // Вопросы питания. 2021. Т. 90, № 2.
С. 100-109. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2021-90-2-100-109 25.
9. Morisco F., Vitaglione P., Amoruso D., Russo B., Fogliano V., Caporaso N. Foods and liver health // Mol. Aspects Med. 2008. Vol. 29, N 1-2. P. 144-150. DOI: https://doi.org/10.1016/j.mam.2007.09.003
10. Ma C., Wang C., Zhang Y., Zhou H., Li Y. Potential natural compounds 26. for the prevention and treatment of nonalcoholic fatty liver disease:
a review on molecular mechanisms // Curr. Mol. Pharmacol. 2022. Vol. 15, N 6. P. 846-861. DOI: https://doi.org/10.2174/187446721566 6211217120448 27.
11. Cerletti C., Colucci M., Storto M., Semeraro F., Ammollo C.T., Incampo F. et al. Randomised trial of chronic supplementation with a nutraceutical mixture in subjects with non-alcoholic fatty liver disease // Br. J. Nutr. 2020. Vol. 123, N 2. P. 190-197. DOI: https://doi. 28. org/10.1017/S0007114519002484
12. Иноземцев П.О., Федорова Л.И., Лепехова С.А. Современные методы коррекции и профилактики печеночной недостаточности // Эффективная фармакотерапия. 2020. Т. 16, № 1. С. 46-51. 29. DOI: https://doi.org/10.33978/2307-3586-2020-16-1-46-51
13. Chan C.-C., Lee K.-C., Huang Y.-H., Chou C.K., Lin H.C., Lee F.Y. Regulation by resveratrol of the cellular factors mediating liver damage and regeneration after acute toxic liver injury // J. Gastroenterol. Hepatol. 2014. Vol. 29, N 3. P. 603-613. DOI: https://doi.org/10.1111/ 30. jgh.12366
14. García-Niño W. R., Pedraza-Chaverrí J. Protective effect of curcumin against heavy metals-induced liver damage // Food Chem. Toxicol. 2014. Vol. 69. P. 182-201. DOI: https://doi.org/10.1016/j.fct.2014.04.016
15. Mirzanajafi-Zanjani M., Yousefi M., Ehsani A. Challenges and 31. approaches for production of a healthy and functional mayonnaise sauce // Food Sci. Nutr. 2019. Vol. 7, N 8. P. 2471-2484. DOI: https:// doi.org/10.1002/fsn3.1132 32.
16. Fenoglio D., Soto M-D., Alarcon M-J., Ferrario M., Guerrero S., Matiacevich S. Active food additive based on encapsulated yerba mate (Ilex paraguariensis) extract: effect of drying methods on the oxidative stability of a real food matrix (mayonnaise) // J. Food Sci. Technol. 2021. 33. Vol. 58. P. 1574-1584. DOI: https://doi.org/10.1007/s13197-020-04669-y
17. Zhang W., Jiang H., Yang J., Jin M., Du Y., Sun Q., Xu H. Safety assessment and antioxidant evaluation of betulin by LC-MS combined
with free radical assays // Anal. Biochem. 2019. Vol. 587. Article 34. ID 113460. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ab.2019.113460
18. Amiri S., Dastghaib S., Ahmadi M., Mehrbod P., Khadem F., Behrouj H. et al. Betulin and its derivatives as novel compounds with different pharmacological effects // Biotechnol. Adv. 2020. Vol. 38. Article 35. ID 107409. DOI: https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2019.06.008
19. Boparai A., Niazi J., Bajwa N., Singh P.A. Betulin a pentacyclic triterpenoid: an hour to rethink the compound // Open Access J. Transl. Med. Res. 2017. Vol. 1, N 2. P. 53-59. DOI: https://doi.org/10.15406/ 36. oajtmr.2017.01.00012
20. Воробьева О.А., Малыгина Д.С., Грубова Е.В., Мельникова Н.Б. Производные бетулина. Биологическая активность и повышение растворимости // Химия растительного сырья. 2019. № 4. 37. С. 407-430. DOI: https://doi.org/10.14258/jcprm.2019045419
21. Hordyjewska A., Ostapiuk A., Horecka A., Kurzepa J. Betulin and betulinic acid: Triterpenoids derivatives with a powerful biological potential // Phytochem. Rev. 2019. Vol. 18. P. 929-951. DOI: https:// doi.org/10.1007/s11101-019-09623-1 38.
22. Ноотропное средство: пат. 2300389C1 Рос. Федерация. № 2005138574/15 / Ковалев Г.И., Салимов Р.М., Балакшин В.В., Чистяков А.Н.; заявл. 12.12.2005; опубл. 10.06.2007, Бюл. № 16. 17 с.
23. Средство для профилактики и лечения болезни Паркинсона:
пат. 2324492C1 Рос. Федерация. № 2006142767/15 / Ковалев Г.И., 39. Абаимов Д.А., Фирстова Ю.Ю., Балакшин В.В., Чистяков А.Н.; заявл. 04.12.2006; опубл. 20.05.2008, Бюл. № 14. 27 с.
Rastogi S., Pandey M.M., Kumar Singh Rawat A. Medicinal plants of the genus Betula - traditional uses and a phytochemical-pharmacological review // J. Ethnopharmacol. 2015. Vol. 159. P. 62-83. DOI: https://doi. org/10.1016/j.jep.2014.11.010
Chen H., Xiao H., Pang J. Parameter optimization and potential bioactivity evaluation of a betulin extract from white birch bark // Plants. 2020. Vol. 9, N 3. P. 392-407. DOI: https://doi.org/10.3390/ plants9030392
Шапекова Н.Л., Аймаков О.А., Сафаров Р.З., Алманов Г.А. Биоактивность бетулина, бетулинового альдегида и их производных // Материалы научно-практической конференции «Global Science and Innovations IV». София, 31 октября 2018. С. 122-131. Furtado J.C., Pirson N., Edelberg L., Miranda H.M., Loira-Pastoriza L., Preat C. Pentacyclic triterpene bioavailability: an overview of in vitro and in vivo studies // Molecules. 2017. Vol. 22, N 3. P. 400. DOI: https://doi.org/10.3390/molecules22030400 Способ получения бетулина: пат. 2640587C1 Рос. Федерация. № 2017104346 / Аверьянова Е.В., Школьникова М.Н., Цыганок С.Н., Хмелев В.Н., Шакура В.А.; заявл. 09.02.2017; опубл. 10.01.2018, Бюл. № 1. 10 с.
Кузнецова С.А., Скворцова Г.П., Маляр Ю.Н., Скурыдина Е.С., Веселова О.Ф. Выделение бетулина из бересты березы и изучение его физико-химических и фармакологических свойств // Химия растительного сырья. 2013. № 2. С. 93-100. DOI: https://doi. org/10.14258/jcprm.201302093.
Аверьянова Е.В., Школьникова М.Н., Чугунова О.В. Исследование антиоксидантных свойств тритерпеноидов в составе жиросодержащих продуктов // Техника и технология пищевых производств. 2022. Т. 52, № 2. С. 233-243. DOI: https://doi. org/10.21603/2074-9414-2022-2-2358
Скуратов А.Г. Тетрахлорметановая модель гепатита и цирроза печени у крыс // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2012. № 9. С. 37-40.
Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У Хабриева. 2-е изд. Москва : Медицина, 2005. 832 с. ISBN: 5-22504219-8.
Макарова М.А., Баранова И.А. Основные гепатологические синдромы в практике врача-интерниста // Consilium Medicum. 2017. Т. 19, № 8. С. 69-74. DOI: https://doi.org/10.26442/2075-1753_19.8.69-74
Брюханов В.М., Зверев Я.Ф., Лампатов В.В., Жариков А.Ю., Тала-лаева О.С. Методы доклинического (экспериментального) исследования влияния лекарственных средств на функцию почек. Новосибирск : ГЕО, 2013. 82 с. ISBN 978-5-906284-12-9. Фролов Б.А., Калинина О.В., Кириллова А.В., Штиль А.А. Прео-долениегепатотоксичностиметотрексата: рольтритерпеноидов // Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. 2013. Т. 6, № 1. С. 1-10. Воробьева О.А., Малыгина Д.С., Соловьева А.Г., Беляева К.Л., Грубова Е.В., Мельникова Н.Б. Антиоксидантные и прооксидан-тные свойства производных бетулина // Биорадикалы и антиок-сиданты. 2018. Т. 5, № 4. С 9-20.
Воронова О.А., Плотников Е.В., Калиева С.С., Нурпейис Е.Е., Мамаева Е.А., Ташенов А.К. и др. Исследование антиоксидан-тной активности представителей тритерпеноидов лупанового и олеанового ряда методом вольтамперометрии // Вестник Карагандинского университета. Серия: Химия. 2017. № 3 (87). С. 31-37. Яковлева М.П., Медведева Н.И., Саитов К.М., Ишмуратов Г.Ю. Химическое поведение производных бетулина в реакциях с органическими надкислотами // Вестник Башкирского университета. 2022. Т. 27, № 2. С. 323-329. DOI: https://doi. org/10.33184/bulletin-bsu-2022.2.12
Цымбал И.Н. Закономерности антиоксидантного действия природных и синтетических тритерпеноидов ряда лупана и в-амирина. Тюмень : ТюмГНГУ, 2004. 24 с.
References
Schenk A., Ghallab A., Hofmann U., Hassan R., Schwarz M., Schup-pert A., et al. Physiologically-based modelling in mice suggests an aggravated loss of clearance capacity after toxic liver damage. Sci Rep. 2017; 7 (1): 6224. DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-017-04574-z Balukova E.V., Uspensky Yu.P., Fominykh Yu.A. Liver diseases of various genesis (toxic, drug-induced, dysmetabolic): from etio-logical heterogenicity to a single unified therapy of patients. RMZh. Meditsinskoe obozrenie [RMJ. Medical Review]. 2018; 2 (1-1): 35-40. (in Russian)
Gubergrits N.B., Belyaeva N.V., Klochkov A.E., Lukashevich G.M., Fomenko P.G. Medicinal lesions of the liver: from pathogenesis to
treatment. Vestnik kluba pankreatologov [Bulletin of the Pancre-
atologists Club]. 2020; 11 (46): 72-80. DOI: https://doi.org/10.33149/ vkp.2020.01.10 (in Russian)
Gubergrits N.B., Belyaeva N.V., Klochkov A.Y., Lukashevish G.M., Fomenko P.G. Modern views on nutrition and physical activity in the treatment of non-alcoholic fatty liver disease. Eksperimentalnaya i klinicheskaya gastoenterologiya [Experimental and Clinical Gastroen-terology]. 2018; (2): 100-9. (in Russian)
Sasunova A.N., Morozov S.V., Sobolev R.V., Isakov V.A., Kochet-kova A.A., Vorob'eva I.S. Efficacy of newly developed food for special dietary use in the diet of patients with non-alcoholic steato-
4
2
hepatitis. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2022; 91 (2): 23. 31-42. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2022-91-2-31-42 (in Russian)
6. Official website. All oils of the world. URL: https://www.oilworld. ru/analytics/localmarket/334695 (date of access March 05, 2023). 24. (in Russian)
7. Labetsky V.V., Feofilaktova O.V. Research of rheological parameters of emulsion sauces. Pishchevaya promyshlennost': nauka i tehnologii [Food Industry: Science and Technology]. 2022; 15 (3): 86-9. DOI: 25. https://doi.org/10.47612/2073-4794-2022-15-3(57)-86-89 (in Russian)
8. Vorob'eva V.M., Vorob'eva I.S., Morozov S.V., Sasunova A.N., Kochet-kova A.A., Isakov V.A. Specialized food products for dietary correc- 26. tion of the diet of patients with nonalcoholic steatohepatitis. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2021; 90 (2): 100-9. DOI: https://doi. org/10.33029/0042-8833-2021-90-2-100-109 (in Russian)
9. Morisco F., Vitaglione P., Amoruso D., Russo B., Fogliano V., Capo- 27. raso N. Foods and liver health. Mol Aspects Med. 2008; 29 (1-2): 144-50. DOI: https://doi.org/10.1016/j.mam.2007.09.003
10. Ma C., Wang C., Zhang Y., Zhou H., Li Y. Potential natural compounds
for the prevention and treatment of nonalcoholic fatty liver disease: 28. a review on molecular mechanisms. Curr Mol Pharmacol. 2022; 15 (6): 846-61. DOI: https://doi.org/10.2174/1874467215666211217120448
11. Cerletti C., Colucci M., Storto M., Semeraro F., Ammollo C.T., Incampo F., et al. Randomised trial of chronic supplementation with 29. a nutraceutical mixture in subjects with non-alcoholic fatty liver disease. Br J Nutr. 2020; 123 (2): 190-7. DOI: https://doi.org/10.1017/ S0007114519002484
12. Inozemtsev P.O., Fedorova L.I., Lepekhova S.A. Modern methods of correction and prevention of liver failure. Effektivnaya farmakoterapiya 30. [Effective Pharmacotherapy]. 2020; 16 (1): 46-51. DOI: https://doi. org/10.33978/2307-3586-2020-16-1-46-51 (in Russian)
13. Chan C.-C., Lee K.-C., Huang Y.-H., Chou C.K., Lin H.C., Lee F.Y. Regulation by resveratrol of the cellular factors mediating liver damage
and regeneration after acute toxic liver injury. J Gastroenterol Hepatol. 31. 2014; 29 (3): 603-13. DOI: https://doi.org/10.1111/jgh.12366
14. García-Niño W. R., Pedraza-Chaverrí J. Protective effect of curcumin against heavy metals-induced liver damage. Food Chem Toxicol. 2014; 32. 69: 182-201. DOI: https://doi.org/10.1016/j.fct.2014.04.016
15. Mirzanajafi-Zanjani M., Yousefi M., Ehsani A. Challenges and approaches for production of a healthy and functional mayonnaise sauce. 33. Food Sci Nutr. 2019; 7 (8): 2471-84. DOI: https://doi.org/10.1002/ fsn3.1132
16. Fenoglio D., Soto M-D., Alarcon M-J., Ferrario M., Guerrero S., 34. Matiacevich S. Active food additive based on encapsulated yerba mate (Ilex paraguariensis) extract: effect of drying methods on the oxidative stability of a real food matrix (mayonnaise). J Food Sci Technol. 2021;
58: 1574-84. DOI: https://doi.org/10.1007/s13197-020-04669-y 35.
17. Zhang W., Jiang H., Yang J., Jin M., Du Y., Sun Q., Xu H. Safety assessment and antioxidant evaluation of betulin by LC-MS combined with free radical assays. Anal Biochem. 2019; 587: 113460. DOI: https://doi. org/10.1016/j.ab.2019.113460
18. Amiri S., Dastghaib S., Ahmadi M., Mehrbod P., Khadem F., 36. Behrouj H., et al. Betulin and its derivatives as novel compounds with different pharmacological effects. Biotechnol Adv. 2020; 38: 107409. DOI: https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2019.06.008
19. Boparai A., Niazi J., Bajwa N., Singh P.A. Betulin a pentacyclic triterpe- 37. noid: an hour to rethink the compound. Open Access J Transl Med Res. 2017; 1 (2): 53-9. DOI: https://doi.org/10.15406/oajtmr.2017.01.00012
20. Vorob'eva O.A., Malygina D.S., Grubova E.V., Mel'nikova N.B. Betulin derivatives. Biological activity and solubility enhancement. Khimiya rastitel'nogo syr'ya [Chemistry of Plant Raw Material]. 2019; (4): 407-30. DOI: https://doi.org/10.14258/jcprm.2019045419 (in Russian) 38.
21. Hordyjewska A., Ostapiuk A., Horecka A., Kurzepa J. Betulin and betu-linic acid: Triterpenoids derivatives with a powerful biological potential. Phytochem Rev. 2019; 18: 929-51. DOI: https://doi.org/10.1007/ s11101-019-09623-1
22. Nootropic: pat. 2300389/C1 Russian Federation. No. 2005138574/15. 39. Kovalev G.I., Salimov R.M., Balakshin V.V., Chistyakov A.N.; application. 12.12.2005; publ. 10.06.2007, Bull. No. 16: 17 p. (in Russian)
A remedy for the prevention and treatment of Parkinson's disease: pat. 2324492/C1 Russian Federation. No. 2006142767/15. Kovalev G.I., Abaimov D.A., Firstova Yu.Yu., Balakshin V.V., Chistyakov A.N.; application. 04.12.2006; publ. 20.05.2008, Bull. No. 14: 27 p. (in Russian) Rastogi S., Pandey M.M., Kumar Singh Rawat A. Medicinal plants of the genus Betula — traditional uses and a phytochemical-pharmaco-logical review. J Ethnopharmacol. 2015; 159: 62—83. DOI: https://doi. org/10.1016/j.jep.2014.11.010
Chen H., Xiao H., Pang J. Parameter optimization and potential bioac-tivity evaluation of a betulin extract from white birch bark. Plants. 2020; 9 (3): 392-407. DOI: https://doi.org/10.3390/plants9030392 Shapekova N.L., Aymakov O.A., Safarov R.Z., Salmanov G.A. Bioac-tivity of betulin, betulin aldehyde and their derivatives. In: Materials of the scientific and practical conference «Global Science and Innovations IV». Sofia, 2018: 122-30. (in Russian)
Furtado J.C., Pirson N., Edelberg L., Miranda H.M., Loira-Pastoriza L., Preat C. Pentacyclic triterpene bioavailability: an overview of in vitro and in vivo studies. Molecules. 2017; 22 (3): 400. DOI: https://doi. org/10.3390/molecules22030400
Method of obtaining betulin: pat. 2640587C1 Russian Federation. No. 2017104346. Averyanova E.V., Shkolnikova M.N., Tsyganok S.N., Khmelev V.N., Shakura V.A.; application. 09.02.2017; publ. 10.01.2018, Bull. No. 1: 10 p. (in Russian)
Kuznetsova S.A., Skvortsova G.P., Malyar Yu.N., Skurydina E.S., Veselova O.F. Extraction betulin from birch bark and study of its physico-chemical and pharmacological properties. Khimiya rastitel'nogo syr'ya [Chemistry of Plant Raw Material]. 2013; (2): 93-100. DOI: https://doi. org/10.14258/jcprm.201302093. (in Russian)
Aver'yanova E.V., Shkol'nikova M.N., Chugunova O.V. Antioxidant properties of triterpenoids in fat-containing products. Tekhnika i tekh-nologiya pischevykh proizvodstv [Technique and Technology of Food Production]. 2022; 52 (2): 233-43. DOI: https://doi.org/10.21603/2074-9414-2022-2-2358 (in Russian)
Skuratov A.G. Tetrachloromethane model of hepatitis and cirrhosis in rats. Eksperimental'naya i klinicheskaya gastoenterologiya [Experimental and Clinical Gastroenterology]. 2012; (9): 37-40. (in Russian) Guidelines for experimental (preclinical) study of new pharmacological substances. Edited by Khabriev R.U. 2nd ed. Moscow: Meditsina, 2005: 832 p. ISBN: 5-225-04219-8. (in Russian)
Makarova M.A., Baranova I.A. Main hepatic syndromes in practice of internist. Consilium Medicum. 2017; 19 (8): 69-74. DOI: https://doi. org/10.26442/2075-1753_19.8.69-74 (in Russian) Bryukhanov V.M., Zverev Ya.F., Lampatov V.V., Zharikov A.Yu., Talalaeva O.S. Methods of pre-clinical (experimental) study of the influence of drugs on renal function. Novosibirsk: GEO: 82 p. ISBN 978-5-906284-12-9. (in Russian)
Frolov B.A., Kalinina O.V., Kirillova A.V., Shtil' A.A. Overcoming methotrexate induced liver toxicity: a role of triterpenoids. Kliniches-kaya onkogematologiya. Fundamental'nye issledovaniya i klinicheskaya praktika [Clinical Oncohematology. Basic Research and Clinical Practice]. 2013; 6 (1): 1-10. (in Russian)
Vorob'eva O.A., Malygina D.S., Solov'eva A.G., Belyaeva K.L., Grubova E.V., Mel'nikova N.B. Antioxidant and pro-oxidant properties of betulin derivatives. Bioradikaly i antioksidanty [Bioradicals and Antioxidants]. 2018; 5 (4): 9-20. (in Russian)
Voronova O.A., Plotnikov E.V., Kalieva S.S., Nurpeyis E.E., Mamaeva E.A., Tashenov A.K., et al. Investigation of antioxidant activity representatives of triterpenoids series of lupane and oleane by using voltammetry. Vestnik Karagandinskogo universiteta. Seriya: Khimiya [Bulletin of Karaganda University. Series Chemistry]. 2017; (3): 31-7. (in Russian)
Yakovleva M.P., Medvedeva N.I., Saitov K.M., Ishmuratov G.Yu. Chemical behavior of betulin derivatives in reactions with organic nadacids. Vestnik Bashkirskogo universiteta [Bulletin of Bashkir University]. 2022; 27 (2): 323-9. DOI: https://doi.org/10.33184/ bulletin-bsu-2022.2.12 (in Russian)
Tsymbal I.N. Regularities of the antioxidant effect of natural and synthetic triterpenoids of the lupane and ß-amyrin series. Tyumen': TyumGNGU, 2004: 24 p. (in Russian)
