CC BY
16
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА
© 2019 Авторы
DOI: 10.17816/KMJ2019-439 УДК 616.33-002: 615.065
Влияние трипептида Leu-Ile-Lys на активность свободнорадикального окисления и уровень экспрессии циклооксигеназы-1 и -2 в слизистой оболочке желудка при экспериментальной индометациновой язве крыс
Самира Эльшадовна Лоренц*, Олеся Николаевна Мазко, Олеся Геннадьевна Макарова, Александр Юрьевич Жариков, Юрий Владимирович Кореновский, Ольга Васильевна Азарова
Алтайский государственный медицинский университет, г. Барнаул, Россия
Реферат
Цель. Определить характер влияния трипептида Leu-Ile-Lys на показатели оксидативного стресса и уровень экспрессии циклооксигеназы-1 и -2 в слизистой оболочке желудка на фоне экспериментальной индо-метациновой язвы.
Методы. Эксперименты проведены на 35 самцах крыс линии Wistar с массой тела 200-250 г в возрасте 2-3 мес, которые были разделены на три группы: группа сравнения (интактные крысы, 8 особей), контрольная группа (моделирование индометациновой гастропатии, 12 особей), подопытная группа (моделирование индометациновой гастропатии + введение трипептида Leu-Ile-Lys, 15 особей). Трипептид Leu-Ile-Lys, полученный методом химического синтеза (чистота образца не менее 98%), вводили внутрижелудочно через зонд ежесуточно в течение 7 дней до моделирования индометацинового повреждения слизистой оболочки желудка в дозе 11,5 мг/кг. Модель индометацинового повреждения слизистой оболочки желудка крыс воспроизводили путём однократного внутрижелудочного введения индометацина в дозе 60 мг/кг в 1 мл изотонического раствора натрия хлорида. В гомогенате желудка крыс определяли показатели активности свободнорадикального окисления по общепринятым методикам. Для количественного определения циклооксигеназы-1 и -2 в гомогенате желудка был использован метод иммуноферментного анализа. Концентрацию определяли спектрофотометрически по интенсивности окраски образцов.
Результаты. На фоне профилактического введения трипептида Leu-Ile-Lys происходили нормализация концентрации тиобарбитурат-реактивных продуктов, рост общей антиоксидантной активности и ослабление активности антиоксидантных ферментов по сравнению с контролем. Концентрация циклооксигена-зы-2 в гомогенате желудка подопытных животных была в 2,3 раза ниже уровня крыс контрольной группы. Вывод. При использовании трипептида Leu-Ile-Lys в условиях экспериментальной индометациновой язвы желудка происходит существенное ослабление оксидативного повреждения и воспалительных процессов в слизистой оболочке желудка.
Ключевые слова: трипептид Leu-Ile-Lys, индометациновая гастропатия.
Для цитирования: Лоренц С.Э., Мазко О.Н., Макарова О.Г. и др. Влияние трипептида Leu-Ile-Lys на активность свободнорадикального окисления и уровень экспрессии циклооксигеназы-1 и -2 в слизистой оболочке желудка при экспериментальной индометациновой язве крыс. Казанский мед. ж. 2019; 100 (3): 439-444. DOI: 10.17816/KMJ2019-439.
Effect of Leu-Ile-Lys tripeptide on the activity of free radical oxidation and expression of eyclooxygenase-1 and -2 in gastric mucosa in experimental indomethacin-induced ulcer in rats
S.E. Lorents, O.N. Mazko, O.G. Makarova, A.Yu. Zharikov, Yu.V. Korenovskiy, O.V. Azarova Altai State Medical University, Barnaul, Russia
Abstract
Aim. To determine the effect of Leu-Ile-Lys tripeptide on indicators of oxidative stress and expression of cyclooxygenase-1 and -2 in the gastric mucosa on the background of experimental indomethacin-induced ulcer.
Адрес для переписки: [email protected] Поступила 30.01.2019; принята в печать 04.03.2019.
Methods. Experiments were performed on 35 male Wistar rats with a body mass of 200-250 g aged 2-3 months that were divided into 3 groups: the control group (intact rats, 8 animals), control group (simulation of indomethacin-induced gastropathy, 12 animals) experimental group (simulation of indomethacin-induced gastropathy + administration of Leu-Ile-Lys tripeptide, 15 animals). The tripeptide Leu-Ile-Lys obtained by chemical synthesis (sample purity at least 98%) was administered intragastrically daily for 7 days before the simulation of indomethacin-induced damage of the gastric mucosa in a dose of 11.5 mg/kg. The model of indomethacin-induced damage to the rodent gastric mucosa was reproduced by a single intragastric administration of indomethacin in a dose of 60 mg/kg in 1 ml of saline. In the stomach homogenate the activity of free radical oxidation was determined by conventional methods. For quantitative determination of cyclooxygenase-1, -2 in gastric homogenate the method of enzyme immunoassay was used. The concentration was determined spectrometrically by the color intensity of the samples. Results. With a prophylactic administration of tripeptide Leu-Ile-Lys, concentration of tiobarbiturate-reactive products was normalized, total antioxidant activity increased and the activity of antioxidant enzymes decreased compared to the control group. The concentration of cyclooxygenase-2 in gastric homogenate from the experimental animals was 2.3 times lower than that of the control rats.
Conclusion. Use of Leu-Ile-Lys tripeptide in experimental indomethacin-induced gastric ulcer showed a significant decrease of oxidative damage and inflammation in the gastric mucosa. Keywords: Leu-Ile-Lys tripeptide, indomethacin-induced gastropathy.
For citation: Lorents S.E., Mazko O.N., Makarova O.G. et al. Effect of Leu-Ile-Lys tripeptide on the activity of free radical oxidation and expression of cyclooxygenase-1 and -2 in gastric mucosa in experimental indomethacin-induced ulcer in rats. Kazan medical journal. 2019; 100 (3): 439-444. DOI: 10.17816/KMJ2019-439.
В процессе разработки нового противоязвенного средства пептидной природы нами было установлено, что пептидный комплекс из тканей свиных почек в условиях экспериментальной индометациновой язвы оказывает выраженное гастропротективное действие, которое сопровождается существенным ослаблением активности процесса свободнора-дикального окисления в слизистой оболочке желудка и снижением уровня экспрессии ци-клооксигеназы-2 (ЦОГ-2) [1, 2].
В дальнейшем на основе данных об аминокислотном составе пептидного комплекса из тканей свиных почек посредством драг-дизай-на нами были смоделированы 7 химических структур индивидуальных пептидов с потенциальной гастропротективной активностью, экспериментальная апробация которой позволила установить, что трипептид Leu-Ile-Lys (лейцин-изолейцин-лизин) обладает выраженным терапевтическим действием при индоме-тациновой гастропатии, сопоставимым по силе с лекарственным препаратом омепразолом [3].
Учитывая большое значение оксидативно-го повреждения слизистой оболочки желудка и роль ферментов ЦОГ-1 и ЦОГ-2 в развитии гастропатии [4, 5], а также полученные ранее результаты, нас заинтересовало изучение влияния трипептида Leu-Ile-Lys на активность свободнорадикального окисления и уровень экспрессии ЦОГ-1 и ЦОГ-2 в желудке крыс при экспериментальной гастропатии.
Цель исследования: определить характер влияния трипептида Leu-Ile-Lys на показатели
оксидативного стресса и уровень экспрессии ферментов ЦОГ-1 и ЦОГ-2 в слизистой оболочке желудка на фоне экспериментальной индометациновой язвы.
Эксперименты проведены на 35 самцах крыс линии Wistar с массой тела 200-250 г в возрасте 2-3 мес. Животных содержали в стандартных условиях вивария со свободным доступом к воде и пище. Исследования на крысах проводили согласно «Правилам надлежащей лабораторной практики» (GLP), утверждённым приказом Министерства здравоохранения и социального развития РФ от 23.08.2010 №708, и требованиям Федерального закона «О защите животных от жестокого обращения» от 01.09.1997.
Экспериментальные животные были разделены на три группы:
- группа сравнения (интактные крысы, 8 особей);
- контрольная группа (моделирование индо-метациновой гастропатии, 12 особей);
- подопытная группа (моделирование индометациновой гастропатии + введение трипептида Leu-Ile-Lys, 15 особей).
Трипептид Leu-Ile-Lys получали методом химического синтеза на предприятии SHANGHAI APEPTIDE CO., LTD (г. Шанхай, Китайская народная республика) при посредничестве ЗАО «Эвалар» (г. Бийск, Россия). Чистота образца составляла не менее 98%.
Трипептид Leu-Ile-Lys вводили животным подопытной группы внутрижелудочно через зонд ежесуточно в течение 7 дней до моделирования индометацинового повреждения
слизистой оболочки желудка (СОЖ) в дозе 11,5 мг/кг. Последнее введение осуществляли за 1 ч до начала действия язвообразующего фактора. Животные группы сравнения получали эквиобъёмное количество изотонического раствора натрия хлорида в соответствующих режимах введения. Модель индометацинового повреждения СОЖ крыс воспроизводили путём однократного внутрижелудочного введения ин-дометацина в дозе 60 мг/кг в 1 мл изотонического раствора натрия хлорида [6, 7].
Через 4 ч после введения индометацина животных подвергали эвтаназии под эфирным наркозом, желудки извлекали, вскрывали по малой кривизне, промывали изотоническим раствором натрия хлорида, измельчали, гомогенизировали 3-кратным циклом замораживания-размораживания.
В гомогенате желудка крыс определяли показатели активности свободнорадикального окисления по общепринятым методикам [8]. Для оценки прооксидантного статуса определяли концентрацию тиобарбитурат-реактивных продуктов окисления жирных кислот (ТБРП), основной представитель которых — малоновый диальдегид, колориметрическим методом, оценивая интенсивность окраски раствора в ходе химической реакции ТБРП с тиобарбитуровой кислотой. Суммарный показатель концентрации всех прооксидантов и свободнорадикаль-ных метаболитов — общую прооксидантную активность — определяли по интенсивности окраски флюоресцентного комплекса, образующегося при взаимодействии продуктов перекисного окисления ТВИН-80 с тиобарби-туровой кислотой.
Для оценки антиоксидантного статуса клеток определяли общую антиоксидантную активность (ОАА) и активность антиоксидантных ферментов: глутатионпероксидазы, каталазы и супероксиддисмутазы.
ОАА оценивали как интегративный показатель активности всех ферментных и неферментных факторов нейтрализации свободных радикалов по степени угнетения Fe2+/аскор-бат-зависимого окисления ТВИН-80 гомогена-том ткани.
Активность каталазы определяли по подавлению ферментом окисления молибдата натрия перекисью водорода.
Активность супероксиддисмутазы оценивали по содержанию в пробе нитроформазана, окрашенного продукта восстановления нитро-тетразолия супероксидными радикалами.
Маркёром активности глутатионперокси-дазы служило определение неокисленного
глутатиона по цветной реакции с реактивом Эллмана.
Для количественного определения ЦОГ-1 и ЦОГ-2 в гомогенате желудка методом имму-ноферментного анализа использовали набор для определения простагландин-эндопероксид-син-тетазы 1,2 (PTGS 1,2) фирмы Cloud-Clone Corp. Микропланшет, входящий в данный набор, был предварительно покрыт антителами, характерными для PTGS 1,2. Затем стандарты и образцы добавляли в соответствующие лунки микропланшета с биотинилированными антителами, характерными для PTGS 1,2. Далее в каждую лунку микропланшета добавляли авидин, конъ-югированный с пероксидазой хрена, и помещали в инкубатор. После этого добавлялся раствор субстрата тетраметилбензидина. Только в тех лунках, которые содержат PTGS 1,2, биотини-лированные антитела и конъюгированный ави-дин, происходило изменение цвета.
Фермент-субстратная реакция прекращалась при добавлении раствора серной кислоты, и изменение цвета оценивали спектрометрически при длине волны 450±10 нм. Концентрацию PTGS 1,2 в образцах определяли при помощи сравнения оптической плотности образцов со стандартной кривой.
Статистическая обработка проведена с помощью программы Statistica for Windows 12.0. Результаты при наличии нормальности распределения представлены в виде среднего значения и стандартной ошибки среднего (M±m), при отсутствии нормальности распределения представлены в виде медианы и интерквар-тильного размаха Me (25%; 75%). Нормальность распределения определяли по критерию Колмогорова-Смирнова в модификации Лил-лиефорса. Для выявления статистической значимости межгрупповых различий при наличии нормальности распределения использовали параметрический t-критерий Стьюдента, при отсутствии нормальности распределения применяли непараметрический критерий Ман-на-Уитни. Разницу считали достоверной при значении p <0,05 [9].
Результаты определения показателей про-оксидантного и антиоксидантного статусов в СОЖ крыс представлены в табл. 1 (показатели нормальности распределения полученных данных: K-S d <0,2; Lilleofors <0,2).
Оказалось, что концентрация ТБРП в контрольной группе при моделировании гастропа-тии увеличилась на 96% по сравнению с уровнем у интактных крыс. При этом в подопытной группе, где животным вводили трипептид Leu-Ile-Lys, величина описываемого показа-
Таблица 1. Показатели прооксидантного и антиоксидантного статусов в слизистой оболочке желудка экспериментальных животных
Группы Показатели прооксидантного статуса Показатели антиоксидантного статуса
ТБРП ОПА ОАА ГПО КАТ СОД
Группа сравнения 5,2 89,2 72,4 48,4 30,9 28,7
Контрольная группа 10,2 р =0,024 ^инт 5 +96% 64,7 р =0,000004 инт -27% 26,8 р =0,000003 инт -63% 66,4 р =0,00002 инт +37% 35,8 р =0,005 инт +16% 38,2
74,5 40,6 26,7 11,9 8,1
Подопытная группа 7,1 р =0,0001 контр -30% ринт=0,026 инт -20% рконтр=0,0006 контр +15% ринт=0,0002 инт -45% рконтр=0,00002 контр +51% ринт=0,0004 инт -45% рконтр=0,00002 контр -60% ринт=0,0001 инт -61% рконтр=0,00002 контр -67% ринт=0,001 инт -72% рконтр=0,00005 контр -79%
Примечание: ТБРП — концентрация тиобарбитурат-реактивных продуктов (мкмоль); ОПА — общая прооксидант-ная активность (%); ОАА — общая антиоксидантная активность (%); ГПО — активность глутатионпероксидазы (%); КАТ — активность каталазы (%); СОД — активность супероксиддисмутазы (%); ринт — показатель статистической значимости различий относительно группы сравнения; р — показатель стат
Г ^^ г 5 ^коитр
контрольной группы. Данные приведены в виде среднего значения показателя.
теля была на 30% меньше, чем в контрольной группе, и практически не отличалась от уровня группы сравнения.
На этом фоне ОАА у крыс контрольной группы уменьшалась на 63% относительно уровня интактных животных. В подопытной группе при применении трипептида Leu-Ile-Lys ОАА была на 51% больше, чем в контроле.
Активность глутатионпероксидазы в контрольной группе относительно группы сравнения возросла на 37%. В то же время величина данного показателя в подопытной группе существенно снижалась как относительно контроля, так и в сравнении с интактными животными: на 60 и 45% соответственно.
Активность каталазы в контрольной группе также увеличилась относительно группы сравнения — на 16%. В подопытной группе произошло уменьшение активности каталазы относительно контрольной группы на 67%, а в сравнении с ин-тактными животными — на 61%.
Активность супероксиддисмутазы в СОЖ крыс контрольной группы приобретала тенденцию к росту относительно интактных крыс, однако это изменение не носило статистически значимого характера. В условиях коррекции экспериментальной гастропатии изучаемым трипептидом Leu-Ile-Lys зарегистрировано существенное снижение активности суперок-сиддисмутазы: на 79% относительно контроля заболевания и на 72% относительно группы сравнения.
ЦОГ-1 ■ ЦОГ-2
10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0
Группа сравнения
Контрольная группа
Подопытная группа
Рис. 1. Показатели уровня экспрессии циклооксигеназы-1 и -2 в слизистой оболочке желудка экспериментальных крыс. По вертикальной оси — значения концентрации циклооксигеназы-1 и -2 в гомогенате слизистой оболочки желудка крыс (нг/мл), по горизонтальной оси — экспериментальные группы. Статистическая значимость различий: Относительно группы сравнения; #относительно контрольной группы. ЦОГ — циклооксигеназа
Результаты определения показателей уровня экспрессии ЦОГ-1 и ЦОГ-2 в СОЖ крыс представлены на рис. 1 (показатели нормальности распределения полученных данных: К^ d >0,2; LШeofors >0,2).
Оказалось, что концентрация ЦОГ-1 в гомо-генате желудков крыс не имела статистически значимых различий между контрольной и подопытной группами: 5,4±0,26 и 7,5±1,09 нг/мл соответственно.
На этом фоне концентрация ЦОГ-2, в группе сравнения составившая 3,1±0,18 нг/мл, у крыс контрольной группы (которым с целью моделирования гастропатии вводили ин-дометацин) уменьшилась в 1,2 раза и составила 2,5±0,12 нг/мл (р=0,016). При этом в подопытной группе (где крысы получали трипептид Leu-Ile-Lys) концентрация ЦОГ-2 составила 1,1±0,05 нг/мл, что было ниже уровня крыс контрольной группы в 2,3 раза (р <0,00001), а также в 2,8 раза уступало уровню у интактных крыс (р <0,00001).
Таким образом, проведённые эксперименты показали, что применение трипептида Leu-Ile-Lys в условиях индометациновой гастропатии сопровождалось существенным ослаблением оксидативного повреждения СОЖ.
Во-первых, об этом свидетельствовала нормализация концентрации ТБРП, значительно повышенной в контроле заболевания. Как известно, основным представителем ТБРП служит малоновый диальдегид — главный продукт перекисного окисления мембранных фосфолипидов. По-видимому, на фоне применения трипептида Leu-Ile-Lys ослаблялось повреждение мембран клеток желудка активными формами кислорода.
Во-вторых, происходило существенное увеличение ОАА — интегративного показателя ферментной и неферментной антиоксидантной защиты клеток.
В-третьих, были зафиксированы весьма характерные изменения активности антиокси-дантных ферментов: глутатионпероксидазы, каталазы и супероксиддисмутазы. В контроле заболевания их активность значительно возрастала, что указывает на компенсаторную реакцию ферментных систем клеток в ответ на развивающийся оксидативный стресс. На фоне же применения трипептида Leu-Ile-Lys активность всех трёх ферментов существенно уменьшалась. Вероятно, под влиянием трипептида Leu-Ile-Lys происходило снижение интенсивно -сти образования свободных радикалов кислорода, вследствие чего не возникало субстратной стимуляции ферментной активности. В совокупности это может свидетельствовать о прямом антиоксидантном действии трипептида Leu-Ile-Lys.
Достаточно давно существует мнение, что оксидативное повреждение СОЖ при язвенной болезни тесно сопряжено развитием воспалительных процессов, маркёром которых служит уровень экспрессии провоспалительного фермента ЦОГ-2 [10, 11]. В наших экспериментах было установлено, что концентрация ЦОГ-2
в контроле снижается относительно показателей интактных крыс, что логично объясняется неселективным ингибирующим действием индометацина на ЦОГ-1 и ЦОГ-2. Важно, что в этих условиях происходило существенное снижение уровня ЦОГ-2 в желудках крыс подопытной группы, получавших лечение, относительно контроля. Это указывает на ослабление воспалительных процессов в СОЖ крыс, которым вводили изучаемый трипептид. Не исключено, что в основе такого эффекта лежало анти-оксидантное действие трипептида Leu-Ile-Lys, выявленное в настоящем исследовании.
ВЫВОД
Применение трипептида Leu-Ile-Lys в условиях экспериментальной индометациновой язвы желудка сопровождается существенным ослаблением оксидативного повреждения слизистой оболочки желудка, о чём свидетельствуют нормализация концентрации тиобарбитурат-реак-тивных продуктов окисления жирных кислот, рост общей антиоксидантной активности и ослабление активности антиоксидантных ферментов. Кроме того, происходит ослабление воспалительных процессов в слизистой оболочке желудка, на что указывает существенное снижение уровня экспрессии провоспалитель-ного фермента циклооксигеназы-2.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов по представленной статье.
ЛИТЕРАТУРА
1. Лоренц С.Э., Жариков А.Ю., Бобров И.П. и др. Га-стропротекторное действие пептидного комплекса из тканей свиных почек при экспериментальной «индометациновой» язве у крыс. Сибирский науч. мед. ж. 2017; 37 (6): 5-9. [Lorents S.E., Zharikov A.Yu., Bobrov I.P. et al. Gastroprotective action of the peptide comlex from pig kidneys in experimental «indometacine» ulcer in rats. Si-birskiy nauchnyy meditsinskiy zhurnal. 2017; 37 (6): 5-9. (In Russ.)]
2. Лоренц С.Э., Жариков А.Ю., Мазко О.Н. и др. Влияние пептидного комплекса из тканей свиных почек на показатели свободнорадикального окисления и экспрессию ЦОГ-1,2 при индометацин-индуцирован-ной гастропатии. Эксперим. и клин. гастроэнтерол. 2018; 154 (6): 81-85. [Lorents S.E., Zharikov A.Yu., Maz-ko O.N. et al. Influence of the peptide complex from pork kidneys tissues on indicators of free-radical oxidation and the expression of COX-1,2 in experimental gastropathy. Ehksperimental'naya i klinicheskaya gastroehnterologiya. 2018; 154 (6): 81-85. (In Russ.)]
3. Zharikov A.Yu., Lorent S.E., Bobrov I.P. et al. Pharmacologically active tripeptide Leu-Ile-Lys in indome-thacin-induced gastric ulcer. Intern. J. Biomed. 2018; 8 (4): 351-354. DOI: 10.21103/Article8(4)_0A17.
4. Щербатых А.В., Кулинский В.И., Большеша-пов А.А., Соколова С.В. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная система при язвенной болезни желудка, двенадцатиперстной кишки и постгастрорезек-ционных синдромах. Сибирский науч. мед. ж. 2005; (3): 9-13. [Shcherbatykh A.V., Kulinskiy V.I., Bol'she-shapov A.A., Sokolova S.V. Lipid peroxydation and an-tioxydative system in peptic ulcer desease and postgast-roresection syndrome. Sibirskiy nauchnyy meditsinskiy zhurnal. 2005; (3): 9-13. (In Russ.)]
5. Demir S., Yilmaz M., Koseoglu M. et al. Role of free radicals in peptic ulcer and gastritis. Turk. J. Gastroenterol. 2003; 14 (1): 39-43. PMID: 14593536.
6. Крылова С.Г., Турецкова В.Ф., Макарова О.Г. и др. Сравнительное исследование противоязвенной активности экстракта коры осины сухого в различных лекарственных формах. Тихоокеанский мед. ж. 2015; 2 (60): 18-21. [Krylova S.G., Turetskova V.F., Makarova O.G. et al. Comparative study of antiulcer activity of dry aspen bark extracts in different dosage forms. Tikhookeanskiy medi-tsinskiy zhurnal. 2015; 2 (60): 18-21. (In Russ.)]
7. Турецкова В.Ф., Макарова О.Г., Талыкова Н.М. и др. Способ получения средства, обладающего противоязвенным действием. Патент на изобретение RUS 2533228. Бюлл. №32 от 20.11.2014. [Turetskova V.F., Makarova O.G., Talykova N.M. et al. A method for obtaining
a medication with an anti-ulcer effect. Patent for invention RUS 2533228. Bulletin №32 issued on 20.11.2014. (In Russ.)]
8. Брюханов В.М., Зверев Я.Ф., Лампатов В.В. и др. Методы доклинического (экспериментального) исследования влияния лекарственных средств на функцию почек. Новосибирск; Гео. 2013; 84 с. [Bryukhanov V.M., Zverev Ya.F., Lampatov V.V. et al. Metody doklinicheskogo (ehksperimental'nogo) issledovaniya vliyaniya lekarstven-nykh sredstv na funktsiyu pochek. (Methods of preclinical (experimental) study of the effect of drugs on renal function.) Novosibirsk: Geo. 2013; 84 р. (In Russ.)]
9. Хафизьянова Р.Х., Бурыкин И.М., Алеева Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной и клинической фармакологии. Казань: Медицина. 2006; 374 с. [Khafiz'yanova R.Kh., Burykin I.M., Aleeva G.N. Matematicheskaya statistika v ehksperimental'noy i klini-cheskoy farmakologii. (Mathematical statistics in experimental and clinical pharmacology.) Kazan': Meditsina. 2006; 374 р. (In Russ.)]
10. Gill R., Tsung A., Billiar T. Linking oxidative stress to inflammation: Toll-like receptors. Free Radical Biol. Med. 2010; 48 (9): 1121-1132. DOI: 10.1016/j.freeradbio med.2010.01.006.
11. Uchida K. A lipid-derived endogenous inducer of COX-2: a bridge between inflammation and oxidative stress. Mol. Cells. 2008, 25 (3): 347-351. PMID: 18483467.
