CC BY
9
Влияние тимозина-альфа1 на размножение бактерий in vitro
Р.М.Абдуллаев, С.М.Сафаpова, М.К.Мамедов
Республиканская противочумная станция, Мемоpиальная клиника H.Туси, г.Баку
Лекарственный пpепаpат, промышленно производимый на основе тимозина-альфа1 (Ta1) под коммеpческим названием "задак-син", уже на пpотяжении более десяти лет успешно применяется в качестве высокоэффективного пpотивовиpусного сpедства пpи лечении больных хpоническими гепатитами В и С [1].
В настоящее вpемя считается, что в основе теpапевтической эффективности задакси-на (ЗД) при этих вирусных заболеваниях лежит наличие у Ta1 не только выраженной способности стимулировать звено врожденного иммунитета, обеспечивающего противовирусную резистентность, но и его способность прямо тормозить репродукцию вирусов посредством ряда других механизмов, не имеющих прямой связи с функционированием иммунной системы [2, 3].
Последнее обстоятельство позволило нам предположить, что ЗД может оказаться пригодным для использования при лечении инфекционных заболеваний не только вирусной, но и бактериальной этиологии.
На существование такой возможности косвенно указывали и имеющиеся в литературе сообщения о том, что Tal в экспериментах на лабораторных животных проявил отчетливую антиинвазивную активность в отношении ряда бактериальных (List. monocytogenes, Ps. aeruginosa, Ser. marcescens) и даже грибковых (Candida albicans) агентов [6].
Вместе с тем, до настоящего времени не установлен механизм, обеспечивающий реализацию противобактериальной активности ЗД, поскольку ее проявление in vivo может быть следствием лишь активирующего влияния Tal на противоинфекционную резистентность [4], а данные о характере влияния этого вещества на размножение бактерий в
искусственных средах все еще отсутствуют.
Учитывая данное обстоятельство, мы поставили перед собой задачу оценить характер влияния Tal на рост грам-позитив-ных и грам-негатитвных бактериальных агентов в жидких и плотных питательных средах.
В этом исследовании был использован коммерческий препарат "задаксин", произведенный американской биофармацевтической компанией SciClone и предназначенный для инъекционного введения.
Из содержащегося в ампуле лиофили-зированного порошка экстемпорально готовили 3,0 мл раствора задаксина в изотоническом растворе хлорида натрия. Данный раствор содержал 1,6 мг Tal (разовая доза для инъекционного ведения препарата).
Далее из этого раствора в стерильных условиях готовили два разведения в изотоническом растворе хлорида натрия: первое из них содержало Tal в концентрации 0,25 мг в мл, а второе - 0,05 мг/мл. Эти растворы использовали для добавления в использованные нами жидкие питательные среды, в которых культивировались бактерии.
В качестве культивирусвемых в питательных средах бактериальных агентов в исследовании использовали два вида бактерий, штаммы которых были любезно предостав-ленны нам профессором Т.А.Семененко (НИИ эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалея РАМН, г.Москва). Первый из них представлял собой низковирулентный штамм Staphylococcus aureus, а второй - низковирулентный штамм Pseudomonas aerugi-nosa. До проведения настоящего исследования оба указанных штамма бактерий поддерживались путем регулярных пересевов в мясопептонном бульоне с рН 7,2.
Перед началом исследования оба штамма
были высеяны в чашках Петpи с твеpдой питательной сpедой (мясопептонный агаp pH 7,2 с добавлением глюкозы). Из отобpанных тpехсуточных колоний обоих видов бактеpий в отдельных стеpильных пpобиpках путем pастиpания петлей субстpата колоний на стекле пробирки были пpиготовлены гомоге-наты в изотоническом pаствоpе хлоpида натpия.
Из этих суспензий бактеpиальных клеток путем их сpавнения со стандаpтами мутности (Госудаpственного НИИ стандартизации и контроля им. Л.А.Тарасевича Минздрава РФ) готовили рабочие суспензии, содержащие по 1000 клеток каждого вида бактерий в 1 мл.
Суспензии каждого вида бактерий разливали по 0,5 мл в 4 пробирки (их маркировали номерами от 1 до 4) с 4,5 мл стерильного мя-сопептонного бульона.
В пробирки под N.1 вносили по 0,5 мл раствора, содеражащего Та1 в концентрации 0,25 мг в мл; а в пробирки под N.2 вносили по 0,5 мл раствора, содержащего Та1 в концентрации 0,05 мг/мл.
В пробирки под N.3 вносили по 0,5 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия (1-й контроль - контроль роста бактерий в средах, не содержащих Та1), а в пробирки под N.4 - по 0,5 мл раствора содержащего антибиотик (2-й контроль -контроль подавления роста бактерий под действием антибактерильного агента). При этом, в пробирку, в которую засевался St.aureus вносили по 0,01 мл раствора, содержащего цефтриаксон в концентрации 1,0 мг/мл, а в пробирку, в которую засевался Ps.aeruginosa - 0,01 мл раствора, содержащего гентамицин в концентрации 1,0 мг/мл.
Далее, эти пробирки инкубировали в течение 24 часов в термостате при 37°С. По истечении срока инкубации, из всех четырех пробирок с каждым видом бактерий по 0,1 мл переносили в четыре чистые пробирки, в каждой из которых имелось по 0,9 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия.
Наконец, из каждой из этих пробирок по 0,25 мл переносили на поверность 3-х чашек Петри с мясопептонным агаром. В итоге, по-
лучали 12 чашек с посевами St.aureus и 12 чашек с посевами Ps.aeruginosa. Все эти чашки помещали в термостат на 48 часов, по истечении которых просматривали чашки и подсчитывали число колоний бактерий, появившихся на агаре в каждой из чашек Петри.
Полученные результаты математически обрабатывали с помощью известных формул вариационной статистики, которые позволяли определить среднее число колоний (М) на агаре в чашках, которые были засеяны из разных пробирок, а также стандартную ошибку определения величины "М" (т) [5].
Сравнив число колоний каждого вида бактерий, появившихся в чашках с агаром, мы установили следующее.
Число колоний в чашках, в которые были высеяны бульонные культуры обеих видов бактерий, выращенных в присутствии соответствующих антибиотиков (т.е. в пробирках под N.4) оказалось значительно меньше числа колоний в тех чашках, в которые были высеяны бульонные культуры обеих видов бактерий, выращенных в "чистых" питательных средах (т.е., в пробирках под N.3). При этом, различие между этими показателями сохраняло статистически устойчивый характер в вероятностных интервалах р<0,01 (в случае St.aureus) и р<0,05 (в случае Ps.aerug-inosa).
В то же время, средние числа колоний, появившихся на поверхности мясопептонно-го агара в тех чашках Петри, в которые были высеяны бульонные культуры обоих видов бактерий, выращенных в присутствии двух разных количеств Та1 (т.е. в пробирках под N.1 и N.2) и средние числа колоний в чашках, которые были засеяны бульонными культурами, выращенными в "чистых" питательных средах (т.е., в пробирках под N.3) не имели статистически значимых отличий даже в интервале р < 0,1.
Эти результаты позволили нам прийти к заключению о том, что присутствие Та1 в бульонных культурах как St.aureus, так и Ps.aeruginosa не оказало обнаруживаемого подавляющего влияния на размножение этих бактерий в искусственных питательных средах, аналогичного по направленности
действия, которое оказывали на указанный процесс присутствующие в питательной среде антибиотики.
Из этого следовало, что документированная в ранее проведенных наблюдениях способность Tal подавлять развитие бактериальных инфекций у экспериментальных животных, по всей вероятности, была обусловлена иммунотропной активностью Ta1 и, в частности, его способностью стимулировать им-мунологически обусловленную противоин-фекционную резистентность организма этих животных.
ЛИТЕРАТУРА
1. Ахмедбейли Х.Ф., Дадашева А.Э.,Мамедов М.К.,Сафарова С.М. Задаксин как третий компонент комбинированной противовирусной терапии больных хроническим гепатитом С. // Медицина (Алматы), 2011, N.4, с.8-10;
2. Кребс Р. Биология и иммунофармакология тимозина-альфа1 // Биомедицина, 2003, N.2, c.9-13.
3. Мамедов М.К., Кадырова А.А. Задаксин - новые перспективы применения в лечении инфекционных и онкологических заболеваний.// - Биомедицина, 2004, N.2. c.3-10;
4. Мамедов М.К., Кадырова А.А. Влияние тимозина-альфа1 на показатели иммунологически обусловленной резистентности в экспериментах и клинических наблюдениях. // Биомедицина,
2005, N.l, c.38-40.
5. Платонов А.Е. Статистический анализ в медицине и биологии. М.: РАМН, 2000, 5l с.
6. Zadaxin. Product monography. San Diego, 2000, 78 р.
SUMMARY
Influence of thymosin-alpha1 to bacteria
multiplication in vitro
R.Abdullayev, S.Safarova, GMamedov
Republic anti-plague station, N. Tusi memorial clinic, Baku
The authors carried out special bacteriological investigation for estimation the character influence of thymosin-alphal (Tal) to growth of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aerugi-nosa in artificial mediums.
The results obtained demonstrated that existing of Tal in liquid medium did not inhibit both bacteria multiplication in vitro. This fact permitted to conclude that previously documented anti-invasive activity of Tal to bacterial infection in mice was directly connected with stimulation immunological-ly-mediated anti-infectious resistance.
Поступила l9.04.20ll
