CC BY
32
УДК 615.32: 612.017.1
С.Ч.Гончикова, В.Б.Хобракова, О.Д.Цыренжапова
ВЛИЯНИЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА ПЯТИЛИСТНИКА КУСТАРНИКОВОГО НА СОСТОЯНИЕ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ОРГАНИЗМА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ИММУНОДЕПРЕССИИ, ВЫЗВАННОЙ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ
Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ
РЕЗЮМЕ
В опытах на мышах линии С57В1/6 и Fi (СВАхС57В1/6) установлена иммунокорригирующая активность сухого экстракта пятилистника кустарникового в условиях иммунодепрессии, вызванной противотуберкулёзными препаратами, которая выражается в эффективном восстановлении показателей клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа до уровня таковых у интактных животных.
SUMMARY
S.Ch.Gonchikova, V.B.Khobrakova,
О.Б.Тзегещароуа
FIVE-LEAF EXTRACT EFFECT ON IMMUNE SYSTEM IN EXPERIMENTAL ANTITUBERCULOSIS DRUG INDUCED IMMUNODEPRESSION
Five-leaf extract had an immunocorrecting effect on immunodepresion induced by antituberculosis drugs in C57B1/6 and F1(CBAxC57Bl/6) mouse strain. Cellular, humoral and macrophageal indices approached those of intact animals.
В условиях угрожающей эпидемиологической ситуации по туберкулезу с увеличением числа затяжных хронических процессов, остро прогрессирующих форм особое значение придается взаимоотношениям защитных сил организма с особенностями течения специфического процесса. Экссудативнонекротические реакции в легких с быстрым переходом в казеоз при массивной микобактериальной агрессии характеризуются развитием вторичного иммунодефицита с глубокой количественной и функциональной перестройкой иммунной системы [2, 8]. При этом этиопатогенетическая терапия оказывается несостоятельной, кроме того, проведение длительной комплексной химиотерапии усугубляет имеющееся иммунодефицитное состояние.
Таким образом, проблема фармакологической коррекции и профилактики побочных эффектов базисной химиотерапии является актуальной, а включение препаратов с иммуномодулирующей активностью в схему лечения имеет важное значение. В на-
стоящее время предложено множество иммуномодуляторов, широкое применение которых ограничено их высокой стоимостью, наличием побочных эффектов, необходимостью парентерального введения. В связи с этим возрос интерес к препаратам растительного происхождения, обладающих поливалентным действием и не оказывающих нежелательных эффектов при их длительном применении.
Объектом настоящего исследования явился сухой экстракт пятилистника кустарникового (ЭПК). Высокая эффективность лекарственных средств, созданных на основе пятилистника кустарникового, при хронических инфекционных процессах в кишечнике и аллергических заболеваниях (атопических дерматозах), в патогенезе которых существенное значение имеют нарушения иммунологической реактивности организма, предполагает наличие у них иммуномодулирующей активности [4, 6].
Предварительные исследования подтвердили выраженную иммуномодулирующую активность экстракта пятилистника кустарникового в условиях азатиоприновой иммуносупрессии [9, 10]. Полученные данные позволили предположить, что ЭПК будет оказывать аналогичное действие при вторичных иммунодефицитах другой этиологии, в частности, вызванных на фоне длительного введения туберкуло-статиков. Для более обоснованного использования ЭПК во фтизиатрической практике было необходимо дополнить полученные ранее данные об изменениях в иммунном статусе под действием противотуберкулезной терапии и изучить иммуномодулирующее действие ЭПК при использовании противотуберкулезных препаратов.
Целью настоящей работы явилось определение иммуномодулирующих свойств экстракта пятилист-ника кустарникового в условиях экспериментальной иммуносупрессии, вызванной введением противотуберкулезных средств.
Материалы и методы исследований
Эксперименты проведены на мышах-самках обоего пола линии р! (СВАхС57В1/6) и мышах обоего пола линии С57В1/6 массой 18-20 г.
Контролем служили группы мышей с иммунодефицитом, вызванным введением противотуберкулезных препаратов (ПТП): изониазид (И), рифампицин (Р) в дозе 10 мг/кг, пиразинамид (П) - 25 мг/кг, стрептомицин (С) - 15 мг/кг. И, Р, П вводили живот-
ным в смеси перорально, С - внутрибрюшинно. ПТП использовали в виде водного раствора ежедневно в течение 7 дней. Сухой экстракт пятилистника кустарникового вводили опытной группе животных на фоне туберкулостатиков в виде водного раствора перорально в экспериментально-терапевтической дозе 300 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали деалкоголизированный жидкий экстракт элеутерококка колючего перорально в дозе 5 мл/кг. Оба средства вводили 1 раз в сутки в течение 14 дней. Интактная группа животных получала дистиллированную воду по аналогичной схеме и в соответствующем объеме.
Действие ЭПК на состояние клеточного иммунитета оценивали в реакции “трансплантат против хозяина” (РТПХ) по В. Тессеневу (1979) [7].
Влияние ЭПК на состояние гуморального иммунитета оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых методом локального гемолиза по AJ.Cunningham (1965) [13].
Фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов (ПМ) мышей в отношении Staphyllococcus aureus под влиянием ЭПК при иммуносупрессии, вызванной туберкулостатиками, исследовали in vitro по методике, описанной И.С. Фрейдлин (1976) [11].
Полученные данные обрабатывали статистическим методом с помощью t-критерия Стьюдента [1].
Результаты и их обсуждение
Влияние ЭПК на состояние клеточного звена иммунного ответа определяли по реакции РТПХ. Способность ПТП угнетать указанную форму клеточноопосредованной иммунной реакции проявилась в уменьшении соотношения клеточного содержания лимфоузлов контрольной и опытной лапок по сравнению с данными в интактной группе на 25 % (табл. 1).
При использовании исследуемого экстракта на фоне описанной выше супрессии наблюдали достоверное повышение индекса увеличения лимфатических узлов на 41% по сравнению с контролем. А при введении препарата сравнения -ЭЭК индекс реакции достоверно повышался на 29%.
При исследовании влияния ЭПК на процессы ан-тителообразования установлено, что испытуемый экстракт восстанавливает показатели гуморального иммунного ответа в условиях иммуносупрессии, вызванной ПТП. Введение ПТП приводило к снижению как абсолютного числа АОК, так и числа АОК на 106 спленоцитов на 44% и 32%, соответственно по сравнению с теми же показателями в интактной группе (табл. 2).
При введении исследуемого средства на фоне иммунодепрессии наблюдали достоверное увеличение количества АОК как в абсолютных значениях, так и при расчете на 106 спленоцитов; при этом первый показатель превышал данные в контрольной группе в 2,2 раза, а второй показатель - в 1,6 раза. Аналогично действовал и препарат сравнения -ЭЭК (при введении данного средства достоверно возросло как абсолютное, так и относительное количество АОК в 2,2 и 1,7 раза, соответственно по сравнению с контролем).
Фагоцитарную активность макрофагов под влиянием ЭПК на фоне введения ПТП исследовали по фагоцитозу Staphyllococcus aureus in vitro. При этом оценивали следующие показатели фагоцитоза: активность (процент фагоцитирующих клеток из общего числа подсчитанных клеток) и интенсивность (среднее количество St. aureus, поглощенное одной клеткой).
При введении в культуру клеток ПТП (изониазид, рифампицин в концентрации 0,01 мг/мл, пиразина-мид - 0,025 мг/мл, стрептомицин - 0,015 мг/мл) происходило подавление как активности, так и интенсивности фагоцитоза на 38% и 63%, соответственно по сравнению с данными в интактной группе (табл. 3).
Внесение в культуральную среду ПМ с бактериальной культурой St. aureus ЭПК в концентрации 0,3 мг/мл на фоне ПТП восстанавливало функциональную активность ПМ до уровня показателей фагоцитоза интактных макрофагов. При этом активность и интенсивность фагоцитоза увеличивались в 1,6 и 2,6, раза соответственно по сравнению с контролем.
Таблица 1
Влияние сухого экстракта пятилистника кустарникового на выраженность реакции “трансплантат против хозяина” (РТПХ)
Группы животных Индекс увеличения лимфатических узлов
Интактная 1,9S ± 0,07
Контроль (ПШ) 1,49 ± 0,07
ПШ+ЭПК 2,26 ± 0,21*
ПШ+ЭЭК 1,SS ± 0,1*
Примечание: * - здесь и далее означает, что разница существенна (р<0,05) по сравнению с контролем.
Таблица 2
Влияние сухого экстракта пятилистника кустарникового на антителообразование
Группы животных Количество АОК
на селезенку на 106 спленоцитов
Интактная 52457±33SS 267 ± 23
Контроль (ПШ) 29250 ±10S9 1S1 ± 15
ПШ+ЭПК 63563 ±4207* 292 ± 26*
ПШ+ЭЭК 63152±2S93* 304±29*
Таблица З
Влияние сухого экстракта пятилистника кустарникового на функциональную активность макрофагов мышей
Группы Активность Интенсивность
Интактные макрофаги S5,3 ± 7,1 7,7 ± 1,5
Контроль (ПШ) 52,5 ± 3,4 2,S ± 0,3
ПШ+ЭПК S2,3 ± 2,2* 7,2 ± 0,3*
ПШ+ЭЭК 69,2 ± 0,6* 6,2 ± 0,1*
Почти аналогичный эффект вызывал ЭЭК (активность и интенсивность фагоцитоза возрастали в 1,3 и 2,2, раза соответственно по сравнению с контролем).
Таким образом, исследование иммуномодулирующих свойств ЭПК при иммунодепрессии, вызванной противотуберкулезными препаратами, выявило эффективность его по отношению к реакциям клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа. ЭПК способен отменять супрессивное действие ПТП на клеточноопосредованную иммунную реакцию РТПХ, антителогенез и фагоцитоз макрофагов, что выражается в восстановлении показателей иммунных реакций организма до уровня таковых у интактных животных.
Исследуемый экстракт по выявленному иммуномодулирующему эффекту не уступает препарату сравнения - жидкому экстракту элеутерококка.
Эффективность ЭПК, по-видимому, обусловлена большим разнообразием содержащихся в них биологически активных веществ, преимущественно, поли-фенольными соединениями, обладающими иммуномодулирующими свойствами [3, 5, 12].
На основании полученных данных можно заключить, что сухой экстракт пятилистника кустарникового обладает иммуномодулирующими свойствами на фоне иммунодефицита, вызванного противотуберкулезными препаратами, что позволяет рекомендовать его для использования в комплексной терапии различных форм туберкулеза с целью повышения иммунного статуса, а следовательно, и эффективности фармакотерапии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта.- Л.,1963.- С.81-107.
2. Берестова А.В. Туберкулез: медико-социальные аспекты // Архив патологии.- 1999.- №5.- С.81-84.
3. Евстифеева Т.А., Сибиряк С.В. Иммунотроп-ные свойства биологически активных продуктов,
полученных из зверобоя продырявленного // Экспер. и клин.фармакология. 1996.- Т.59, №1.- С.51-54.
4. Коровкина Г.В., Телятьев В.В., Марамович А. С. Бактерицидные свойства дазифоры кустарниковой по отношению к холерным вибрионам (Предварительное сообщение) // Материалы юбилейной конференции, посвященной 30-летию фармфакультета: Тез. докл.- Иркутск, 1971.- С.27-28.
5. Максютина Н.П., Пилипчук Л.Б., Любенко П.Х. Иммуностимулирующие средства на основе кверце-тина: Тез. докл. III-й Украинской конференции по медицинской ботанике.- Киев, 1992. -Ч. 1.- 96 с.
6. Пат. 2109517, РФ, Способ получения средства, обладающего антиаллергической активностью / И.Г.Николаева, О.Д.Цыренжапова, Т.А. Асеева и др.// Бюл.-1998.-№12.
7. Тессенев В. Реакция "трансплантат против хозяина" на мышах гибридах первого поколения // Иммунологические методы.- М., 1979.- С.182-186.
8. Туберкулез / Под ред. А.Г.Хоменко.- М., 1997.- 225 с.
9. Хобракова В.Б. Экспериментальная азатио-приновая иммуносупрессия и ее коррекция сухим экстрактом пятилистника кустарникового: Автореф. дис. ... к.б.н. - Улан-Удэ, 1999.- 24 с.
10. Хобракова В.Б., Жамсаранова С. Д., Николаев С. М. и др. Иммуномодулирующие свойства сухого экстракта из побегов Pentaphilloides fruticosa (L.) O. Schwarz // Растительные ресурсы.- 2000.- Вып.1.-С.45-53.
11. Фрейдлин И.С. Использование культуры мышиных перитонеальных макрофагов в качестве модели для изучения клеток мононуклеарной фагоцитарной системы организма и их изменений под влиянием биологически активных веществ: Методические рекомендации.- Л., 1976.
12. Berg P.A., Daniel P.T. Effects of flavonoid compounds on the immune response // Piod.Clin.Biol.Res. -1988.- Vol.280.- P.157-171.
13. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells // Nature.- 1965.- Vol.207.- ‘5001 - P.1106-1107.
□ □□
