CC BY
57
УДК 578.821:616.155
ВЛИЯНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО TNF-СВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА ВИРУСА НАТУРАЛЬНОЙ ОСПЫ НА МИГРАЦИОННУЮ И ОКИСЛИТЕЛЬНОМЕТАБОЛИЧЕСКУЮ ФУНКЦИЮ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ МЫШЕЙ ПРИ ЭПИКУТАННОЙ АППЛИКАЦИИ ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ
Дондок Дамдинович ЦЫРЕНДОРЖИЕВ1, Сергей Витальевич СЕННИКОВ1,
Елена Алексеевна ВЯЗОВАЯ1, Ирина Павловна ГИЛЕВА2, Сергей Николаевич ЩЕЛКУНОВ2,
Игорь Александрович РЯЗАНКИН2, Леонид Рудольфович ЛЕБЕДЕВ2, Людмила Борисовна ТОПОРКОВА1, Василий Васильевич КУРИЛИН1, Алена Александровна ПЕТУХОВА1, Ирина Анатольевна ОРЛОВСКАЯ1
1НИИ клинической иммунологии СО РАМН 630091, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14
2ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора 630559, р. п. Кольцово, Новосибирская обл.
В статье представлены результаты изучения влияния рекомбинантного мышиного фактора некроза опухолей (гМи-ТОР) и TNF-антагониста нового типа, TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы (УАКУ-СгшВ), на миграционную и окислительно-метаболическую функции лейкоцитов мышей линии Ва1Ь/с. При эпикутан-ной аппликации гMu-TNF усиливает миграционную способность и интенсивность окислительного метаболизма лейкоцитов крови мышей. При этом установлено, что гMu-TNF кондиционирует (праймирует) лейкоциты, это проявляется в усилении продукции активных метаболитов кислорода (АМК) в ответ на дополнительный стимул — зимозан. Белок УАКУ-СгшВ нейтрализует TNF-зависимую продукцию АМК лейкоцитами и нормализует
их реактивность.
Ключевые слова: фактор некроза опухолей, рода, вирус натуральной оспы, лейкоциты.
Одним из ключевых коммуникативных медиаторов иммунных и воспалительных реакций организма человека и животных является фактор некроза опухолей (TNF). TNF, взаимодействуя с рецепторами цитоплазматической мембраны TNFRI (p55) и TNFRII (p75) [1], запускает каскад внутриклеточных реакций, в том числе модулирует окислительный метаболизм фагоцитирующих клеток. Высокая реакционная способность активных метаболитов кислорода (АМК) определяет их токсичность для биологических систем на всех уровнях — от молекулярно-клеточного до организменного. Например, гиперпродукция TNF и АМК при
TNF-связывающий белок, активные формы кисломассивной антигенной нагрузке и/или на фоне дефицита антиоксидантов приводит к разрушению клеток и тканей [2].
С учетом роли цитокинов в механизмах развития многих социально значимых заболеваний проводится поиск лекарственных средств, способных не только ингибировать их синтез и процессинг, но и предотвращать взаимодействие с эффекторными клетками [3]. Для создания лекарственных средств используются моноклональные антитела (Infliximab, Adalimumab) [4, 5] или рекомбинантные химерные белки, состоящие из TNF-рецепторных и иммуноглобулиновых доменов (Etanercept) [6].
Цырендоржиев Д.Д. — д.м.н., проф., вед.н.с. лаборатории иммунобиологии стволовой клетки; e-mail: tsdon@mail.ru
Сенников С.В. — д.м.н., проф., зав. лабораторией молекулярной иммунологии; e-mail: Sennikov_sv@mail.ru Вязовая Е.А. — к.б.н., ст.н.с. лаборатории иммунобиологии стволовой клетки; e-mail: viazovaia@mail.ru Гилева И.П. — к.б.н., вед.н.с. отдела геномных исследований и разработки методов ДНК-диагностики поксвирусов; е-mail: gileva@vector.nsc.ru Щелкунов С.Н. — д.б.н., проф., зав. отделом геномных исследований и разработки методов ДНК-диагностики поксвирусов; е-mail: snshch@vector.nsc.ru Рязанкин И.А. — к.б.н., н.с. отдела геномных исследований и разработки методов ДНК-диагностики поксвирусов
Лебедев Л.Р. — к.б.н., ст.н.с. отдела конструирования биопрепаратов для медицины и ветеринарии Топоркова Л.Б. — к.б.н., ст.н.с. лаборатории иммунобиологии стволовой клетки; е-mail: toporkova12@mail.ru Курилин В.В. — к.м.н., ст.н.с. лаборатории молекулярной иммунологии; e-mail: medinfo@ngs.ru Петухова A.A. — аспирант лаборатории иммунобиологии стволовой клетки
Орловская И.А. — д.м.н., зав. лабораторией иммунобиологии стволовой клетки; е-mail: irorl@mail.ru
В настоящее время получены разрешения для практического применения таких TNF-блокаторов, как Remicade® (Centocor Inc., Malvern, США), Enbrel® (Immunex Corp., США), Humira™ (Abbott Laboratories, США), их действующим началом являются Infliximab, Etanercept и Adalimumab соответственно. Однако эти препараты не обладают универсальностью и противопоказаны больным с сердечно-сосудистыми заболеваниями [7], туберкулезом [8], латентными вирусными инфекциями [9].
Во многих научных центрах России также ведутся разработки оригинальных препаратов для системной блокады ключевых цитокинов, в том числе TNF. В частности, выделен и охарактеризован новый тип TNF-антагониста — TNF-свя-зывающий белок вируса натуральной оспы (VARV-CrmB) [10—12]. Авторами установлено, что, кроме эффективной TNF-нейтрализующей активности in vitro, VARV-CrmB оказывает выраженное лечебное действие в экспериментальной модели ЛПС-ин-дуцированного эндотоксинового шока у стерильных (specific pathogen free, SPF) мышей линии Balb/с, достоверно увеличивая процент выживших животных. Кроме того, показано, что рекомбинантный вирусный белок VARV-CrmB нейтрализует in vitro цитотоксическое действие rMu-TNF и лимфотоксина-а в экспериментах с мышиными фибробластами линии L929 [11]. Таким образом, установлено, что VARV-CrmB обладает TNF-нейтрализующей активностью как in vitro, так и in vivo. Однако для уточнения механизмов TNF-нейтрализующего эффекта необходимы всесторонние исследования биологических свойств VARV-CrmB.
В связи с этим целью настоящей работы явилось исследование влияния рекомбинантного TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы VARV-CrmB на миграционную и окислительно-метаболическую функцию лейкоцитов крови мышей линии Balb/с при эпикутан-ной аппликации TNF.
Материал и методы
Эксперименты проводили на мышах-самцах линии Balb/с массой 23—25 г. Животных содержали в стандартных условиях в виварии НИИ клинической иммунологии СО РАМН.
В работе использовали рекомбинантный мышиный TNF (rMu-TNF), выделенный из бактериального штамма-продуцента [10], и белок VARV-CrmB, полученный по методу, описанному в работе [13].
Эпикутанную аппликацию rMu-TNF и VARV-CrmB на дорзальную поверхность обоих ушей мышей в объеме 25 мкл/ухо проводили по Cumberbatch M. et al. [14].
Животные были разделены на 4 группы: 1-я (контрольная) группа — эпикутанная обработка
фосфатным буфером (PBS) (n = 8), 2-я группа — эпикутанная аппликация rMu-TNF в дозе 500 нг/мышь (n = 15), 3-я группа — эпикутан-ное применение рекомбинантного VARV-CrmB в дозе 500 нг/мышь (n = 15), 4-я группа — эпи-кутанная аппликация 500 нг rMu-TNF и, спустя 30 мин, 500 нг VARV-CrmB (n = 15).
Животных выводили из эксперимента через 2, 24 и 72 ч после эпикутанной аппликации PBS, rMu-TNF и VARV-CrmB согласно правилам использования экспериментальных животных с соблюдением принципов гуманности, изложенных в директивах Европейского сообщества (86/609/ЕЕС) и Хельсинкской декларации.
Подсчет количества лейкоцитов периферической крови проводили при помощи гематологического анализатора PCE-90 (ERMA Inc., Япония).
Окислительно-метаболическую функцию лейкоцитов крови оценивали по интенсивности люминол-зависимой хемилюминесценции (ХЛ) [15] на мультимодальном планшетном ридере «LB 941 TriStar» («Berthold Technologies», Германия). Для оценки реактивности лейкоцитов добавляли суспензию дрожжевого полисахарида зимозана А (Sigma, США) в концентрации 5 мг/мл и рассчитывали индекс стимуляции как соотношение зимозан-индуцированной и спонтанной ХЛ. Регистрацию интенсивности ХЛ каждой пробы осуществляли ежеминутно в течение 20 мин. Результаты выражали в условных единицах (1 усл. ед. = количество импульсов, испускаемых 1 лейкоцитом за 20 мин).
Миграцию клеток из кожного эксплантата после аппликации мышам rMu-TNF определяли по методу Larsen et al. [16]. Суммарное количество клеток, мигрировавших из целого кожного лоскута (дорзальная поверхность уха), полученных через 2 и 24 ч после аппликации rMu-TNF и PBS (контроль), подсчитывали в камере Горяева через 24 ч культивирования.
Статистическую обработку результатов исследования проводили, вычисляя среднее арифметическое значение (М), ошибку среднего арифметического значения (m) и представляли в виде M ± m. Различия между группами оценивали с помощью критерия Стьюдента, достоверными считались результаты при р < 0,05.
Результаты
Динамика изменения общего количества лейкоцитов крови. У животных контрольной группы общее количество лейкоцитов крови после аппликации PBS возрастало и через 72 ч увеличилось в 3,4 раза (табл. 1). При аппликации rMu-TNF наблюдали неуклонный рост числа лейкоцитов крови. Так, через 2 ч их содержание возрастало в 1,8 раза по сравнению с показателями контрольных мышей и достигало максиму-
Таблица 1
Общее количество лейкоцитов крови и их миграционная активность у мышей после аппликации белка УАКУ-СгтЬ гМи-Т^¥-обработанным животным
Группа животных Количество лейкоцитов крови, х 106/л Количество мигрирующих лейкоцитов, х 103
2 ч 24 ч 72 ч 2 ч 24 ч 72 ч
Контроль 4,2 ± 0,7 8,4 ± 3,7 16,0 ± 1,9 7,6 ± 0,8 11,3 ± 0,7 15,3 ± 1,5
rMu-TNF 8,7 ± 0,7* 17,1 ± 0,6* 18,6 ± 2,8 17,8 ± 1,4* 8,2 ± 0,9 11,8 ± 1,6
VARV-Crmb 7,0 ± 0,5* 18,1 ± 0,9* 12,5 ± 3,7 8,0 ± 1,7# 8,7 ± 1,0 7,1 ± 0,7*
rMu-TNF + VARV-Crmb 2,9 ± 0,3*,# 9,6 ± 1,8# 15,2 ± 1,5 11,7 ± 1,1# 10,2 ± 1,2 9,7 ± 0,9
Примечание: здесь и в табл. 2, на рис.: * — значения, достоверно (р < 0,05) отличающиеся от величин соответствующих показателей контрольной группы, # — от величин соответствующих показателей мышей, обработанных гМи-ТОТ.
ма через 72 ч. Аппликация rVARV-Crmb также вызывала увеличение численности лейкоцитов крови мышей, но менее выраженное, чем применение rMu-TNF. В то же время аппликация rVARV-Crmb достоверно снижала количество лейкоцитов у rMu-TNF-обработанных мышей. Изменение численности лейкоцитов крови при аппликации как PBS, так и rVARV-Crmb может быть результатом стресс-реакции в ответ на проводимые манипуляции, при которой наблюдается выход клеток из депо, в том числе из костного мозга, вследствие усиления продукции эндогенного TNF.
Оценка миграционной активности лейкоцитов. У мышей всех групп, за исключением животных, обработанных rVARV-Crmb, наблюдали усиление миграции лейкоцитов (табл. 1). При этом стоит отметить, что, по данным Larsen et al. [16], около
60 % мигрирующих клеток являются дендритными клетками. У животных контрольной группы суммарное количество лейкоцитов, мигрирующих из кожного лоскута дорзальной поверхности уха, постепенно возрастало (через 72 ч — в 1,9 раза). При аппликации rMu-TNF наблюдали волнообразный характер изменения миграции клеток: уже через 2 ч их количество резко возрастало (в 2,4 раза), через 24 ч снижалось до уровня контрольных величин, а затем несколько повышалось. При обработке мышей rVARV-Crmb величина исследуемого показателя не менялась. В то же время практически на всех сроках наблюдения rVARV-Crmb достоверно снижал количество мигрирующих лейкоцитов у rMu-TNF-обра-ботанных мышей.
Исследование окислительно -метаболической функции лейкоцитов крови. Результаты иссле-
Рис. Изменение интенсивности спонтанной (А) и зимозан-индуцированной (Б) ХЛ лейкоцитов крови мышей после аппликации белка УАКУ-СгтЬ тЫи-Т^¥-обработанным животным
дования ХЛ показали, что уже через 2 ч после эпикутанной обработки rMu-TNF активируется окислительный метаболизм лейкоцитов крови мышей, достигая максимума через 24 ч, а затем постепенно снижается до контрольных величин к 72 ч наблюдения (рис. 1А). В то же время через 2 и 24 ч после обработки мышей гУЛЯУ-СгшВ интенсивность спонтанной ХЛ лейкоцитов крови не менялась, но через 72 ч возрастала по сравнению с контролем. При эпикутанной аппликации УЛЯУ-СгшВ данный показатель, отражающий окислительно-метаболическую функцию лейкоцитов крови мышей, обработанных rMu-TNF, значительно снижался, что свидетельствует о TNF-нейтрализующей способности белка.
Изменение реактивности лейкоцитов крови.
Результаты исследования показали, что при обработке мышей УЛЯУ-СгшВ интенсивность зимозан-стимулированного ХЛ ответа лейкоцитов крови практически не отличалась от контрольных значений. В то же время на всех сроках наблюдения после эпикутанной аппликации rMu-TNF данный показатель у мышей значительно возрастал, а обработка этих животных УЛЯУ-СгшВ приводила к его достоверному снижению (рис. 1Б). При этом наиболее выраженное усиление зимозан-индуцированного ХЛ ответа лейкоцитов наблюдали у мышей через 2 ч после эпикутанной аппликации rMu-TNF, а применение УЛЯУ-СгшЬ сопровождалось его уменьшением в 1,6 раза (р < 0,05).
Анализ результатов расчета индекса стимуляции показал, что белок УЛЯУ-СгшЬ не менял реактивности лейкоцитов крови мышей (табл. 2). Среди исследуемых групп животных, судя по данному показателю, максимально высокая реактивность лейкоцитов была выявлена у мышей через 2 ч после эпикутанной аппликации rMu-TNF, которая сохранялась на высоком уровне и через 24 ч, а к 72 ч не отличались от значения контрольной группы. На всех сроках наблюдения ап-
пликативное применение VARV-Crmb приводило к нормализации реактивности лейкоцитов крови rMu-TNF-обработанных мышей.
Обсуждение
Для изучения влияния rMu-TNF на функциональное состояние лейкоцитов и оценки TNF-нейтрализующей способности белка VARV-Crmb в настоящей работе использовали эпикутанный аппликативный метод воздействия. Метод чрез-кожной доставки лекарственных средств в составе мазей, гелей и других форм широко применяется в клинической практике с незапамятных времен. Кроме того, различные патогенные агенты, органические и неорганические соединения при контакте с кожей вызывают развитие воспалительных и иммунопатологических (аллергических) процессов не только в коже, но и во внутренних органах.
В наших исследованиях было выявлено, что при эпикутанной аппликации rMu-TNF происходит усиление миграционной способности и интенсивности окислительного метаболизма лейкоцитов мышей. Усиление миграции лейкоцитов в зону воздействия rMu-TNF может быть связано с активацией резидентных гистиоцитов, клеток Лангерганса, дендритных клеток, гранулоцитов, продуцирующих целый спектр хемотактических медиаторов, таких как лейкотриены C4, B4, D4, интерлейкины (IL-1ß, IL-6, IL-8 и т.д.), TNF и компоненты комплемента С3а, С5а [17]. В экспериментах с интрадермальным введением мышам rMu-TNF и rIL-1ß наблюдали усиление миграции клеток Лангерганса, а применение соответствующих моноклональных антител отменяло этот эффект [18]. При этом установлено, что характер миграционной активности клеток во многом зависит от концентрации цитокинов. Например, в экспериментах Stoitzner et al. [19] показано, что низкие дозы TNF-a (10—50 ЕД/мл) стимулируют миграцию дендритных клеток, а высокие (5000— 10000 ЕД/мл) — снижают, что подтверждает гипотезу блокады рецепторов TNF-a [TNFRI (p55)
Таблица 2
Индекс стимуляции лейкоцитов крови мышей после аппликации белка УЛКУ-СгтЬ rMu-TNF-обработанным животным
Группы животных Срок наблюдения (ч)
2 24 72
Контроль 2,07 ± 0,27 2,07 ± 0,27 2,07 ± 0,27
rMu-TNF 3,60 ± 0,18* 2,90 ± 0,10* 2,80 ± 0,34
VARV-Crmb 2,42 ± 0,26# 2,20 ± 0,14# 2,00 ± 0,38
rMu-TNF + VARV-Crmb 2,60 ± 0,18# 2,37 ± 0,15# 2,70 ± 0,25
и TNFRII (p75)] «запредельными» концентрациями этого цитокина.
Стимуляция окислительно-метаболической функции лейкоцитов крови при эпикутанной аппликации rMu-TNF происходит, возможно, при непосредственном его попадании в гемоциркуляцию. В научной литературе имеются противоречивые данные о действии TNF на окислительный метаболизм лейкоцитов. Результаты одних авторов свидетельствуют, что TNF не индуцирует продукцию активных метаболитов кислорода, другие исследования приводят доказательства прямой АМК-генерирующей способности TNF [2]. С другой стороны, не исключена возможность опосредованной активации окислительнометаболической функции лейкоцитов крови под действием цитокинов, в том числе TNF, секре-тируемых резидентными фагоцитами в зоне ап-пликативного воздействия rMu-TNF, которые, в свою очередь, способствуют каскадному запуску продукции медиаторов лейкоцитами, обеспечивая высокий уровень TNF в циркулирующей крови.
В наших экспериментах выявлено изменение реактивности лейкоцитов крови при апплика-тивном воздействии rMu-TNF. Так, на дополнительную стимуляцию зимозаном лейкоциты крови мышей, полученные после эпикутанной аппликации (особенно через 2 ч) отвечают дыхательным взрывом, продуцируя значительно большие количества АМК, что свидетельствует о развитии гиперреактивности этих клеток. При этом стоит отметить, что лейкоциты, полученные через 2 ч после аппликации VARV-CrmB, в данной системе генерировали АМК на уровне интактных клеток. Отсюда видно, что на данном этапе эксперимента лейкоциты находятся в состоянии кондиционирования (праймирова-ния), а стимуляция зимозаном переводит их в состояние полной активации. В настоящее время принято считать, что для полной активации фагоцитов (нейтрофилов, моноцитов, макрофагов) требуется не менее двух последовательных событий: 1) праймирование и 2) активация. Классическим праймирующим агентом является IFN-y, а разрешающим и/или стимулом, переводящим фагоциты в состояние полной активации — структурные молекулы микроорганизмов, например, липополисахариды грамнегативных бактерий, а также цитокины, в том числе и сам по себе TNF [20].
В наших экспериментах показано, что аппликация белка VARV-CrmB мышам, предварительно обработанным rMu-TNF, приводит к снижению продукции лейкоцитами АМК и способствует нормализации их реактивности. Результаты этих экспериментов свидетельствуют о TNF-нейт-рализующей способности белка VARV-CrmB.
Снижение интенсивности окислительного метаболизма лейкоцитов TNF-обработанных мышей и отмена у них состояния праймирования под действием белка VARV-CrmB могут быть связаны с эффективной блокадой рецепторов к TNF на мембране лейкоцитов [11]. Кроме того, следует принять во внимание, что следствием эпикутанной аппликации rMu-TNF является увеличение концентрации не только TNF, но и других цитокинов и хемокинов (IL-8, IL-16), которые стимулируют продукцию АМК лейкоцитами крови. TNF-нейтрализующая активность VARV-CrmB может быть связана с тем, что данный белок, наряду с N-концевым TNF-связывающим, содержит С-концевой SECRET-домен, обеспечивающий взаимодействие вирусного белка с хемокинами. Возможно, что способность VARV-CrmB связывать не только TNF, но и хемокины важна для проявления нейтрализующего эффекта данного белка при септическом шоке [11], а также для угнетения продукции АМК лейкоцитами, индуцированными цитокинами и хемокинами, что в итоге приводит к нормализации их реактивных свойств.
Заключение
Таким образом, эпикутанная аппликация rMu-TNF усиливает миграционную способность и интенсивность окислительного метаболизма лейкоцитов мышей. При этом установлено, что rMu-TNF оказывает праймирующее влияние на лейкоциты крови мышей in vivo, следствием чего является усиление продукции АМК в ответ на дополнительную стимуляцию зимозаном. Белок VARV-CrmB эффективно нейтрализует TNF-ин-дуцированную продукцию АМК лейкоцитами крови и нормализует их реактивность.
Благодарности
Работа выполнена при финансовой поддержке Федеральной целевой программой «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009—2013 гг. (гос. контракт 02.740.11.0485) и РФФИ (грант 10-04-00387а).
Список литературы
1. Mc Devitt H., Munson S., Ettingen R., Wu A. Multiple roles for tumor necrosis factor-а and lym-photoxin а/ß in immunity and autoimmunity // Arthritis Res. 2002. 4. (Suppl. 13). 141-152.
2. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньщикова Е.Б. Окислительный стресс: Биохимические и патофизиологические аспекты. М.: МАИК Наука/ Интерпериодика, 2001. 343 с.
Zenkov N.K., Lankin V.Z., Men’shchikova E.B. Oxidative stress: Biochemical and pathophysiological aspects. M.: MAIK Nauka/Interperiodica. 2001. 343 p.
3. Непомнящих Т.С., Антонец Д.В., Гилева И.П., Щелкунов С.Н. Болезни, обусловленные наруше-
нием продукции TNF и IFNy, и современные подходы к их терапии // Успехи соврем. биологии. 2007. 127. (6). 576-587.
Nepomnyaschikh T.S., Antonets D.V., Gileva I.P., Shchelkunov S.N. Diseases caused by violation of the production TNF and IFNy, and modern approaches to their therapy // Uspekhi Sovrem. biology. 2007. 127. (6). 576-587.
4. Siegel S.A., Shealy D.J., Nakada M.T. et al. The mouse/human chimeric monoclonal antibody cA2 neutralizes TNF in vitro and protects transgenic mice from cachexia and TNF lethality in vivo // Cytokine. 1995. 7. 15-25.
5. Weinblatt M.E., Keystone E.C., Furst D.E. et al. Adalimumab, a fully human anti-tumor necrosis factor alpha monoclonal antibody for treatment of rheumatoid arthritis in patients taking concomitant methotrexate the ARMADA trial // Arthritis Rheum.
2003. 48. 35-45.
6. Bathon J.M., Martin R.W., Fleischmann R.M. et al. A comparison of etanercept and methotrexate in patients with early rheumatoid arthritis // N. Engl. J. Med. 2000. 343. 1586-1593.
7. Lo E., Rezai K., Evans A.T. et al. Why don’t they listen? Adherence to recommendations of infectious disease consultations // Clin. Infect. Dis.
2004. 38. 1212-1218.
8. Arend S.M., Breedveld F.C., van Dissel J.T. TNF-alpha blockade and tuberculosis: better look before you leap // Neth. J. Med. 2003. 61. 111-119.
9. Calabrese L.H., Zein N., Vassilipoulos D. Safety of antitumour necrosis factor (anti-TNF) therapy in patients with chronic viral infections: hepatitis C, hepatitis B, and HIV infection // Ann. Rheum. Dis. 2004. 63. (Suppl. 2). 18-24.
10. Гилева И.П., Малкова Е.М., НепомнящихЕ. С. и др. Изучение действия TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы на развитие ЛПС-индуцированного эндотоксического шока // Ци-токины и воспаление. 2006. (1). 44-49.
Gileva I.P., Malkova E.M., Nepomnyaschikh E.S. et al. The study of the TNF-binding protein of variola virus on the development of LPS-induced endotoxic shock // Cytokiny i vospalenie. 2006. (1). 44-49.
11. Гилева И.П., Непомнящих Т.С., Рязан-кин И.А., Щелкунов С.Н. Рекомбинантный TNF-связывающий белок вируса натуральной оспы как потенциальный TNF-антагонист нового поколения // Биохимия. 2009. 74. (12). 1664— 1671.
Gileva I.P., Nepomnyaschikh T. S., Rya-zankin I.A., Shchelkunov S.N. Recombinant TNF-binding protein of variola virus as a new generation potential TNF-antagonist // Biokhimiya. 2009. 74. (12). 1664 - 1671.
12. Gileva I.P., Nepomnyashchich T.S., Antonets D.V. et al. Properties of the recombinant TNF-binding proteins from variola, monkeypox, and cow-pox viruses are different // Biochim. Biophys. Acta. 2006. 1764. 1710-1718.
13. Лебедев Л.Р., Рязанкин И.А., Сизов А.А. и др. Способ очистки антагонистов фактора некроза опухолей и исследование их некоторых свойств // Биотехнология. 2001. (6). 14-18.
Lebedev L.R., Ryazankin I.A., Sizov A.A. Method of cleaning and other antagonists of tumor necrosis factor and study some of their properties // Biotechnologiya. 2001. (6). 14-18.
14. Cumberbatch M., Clelland K., Dearman R.J., Kimber I. Impact of cutaneous IL-10 on resident epidermal Langerhans’ cells and the development of polarized immune responses // J. Immunol. 2005. 175. 43-50.
15. Tono-oka T., Ueno N., Matsumoto T. Chemi-luminescence of whole blood. I. A simple and rapid method for the estimation of phagocytic function of granulocytes and opsonic activity in while blood // Clin. Immunol. Immunopathol. 1983. 26. (1). 66-75.
16. Larsen C.P., Steinman R.M., Witmer-Pack M. et al. Migration and maturation of Langerhans cells in skin transplants and explants // J. Exp. Med. 1990. 172. 1483-1493.
17. Маянский Д.Н. Лекции по клинической патологии. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. 464 с.
Mayanski D.N. Lectures on clinical pathology. M.: GEOTAR-Media, 2007. 464 p.
18. Antonopoulos C, Cumberbatch M, Dearman R.J. et al. Functional caspase-1 is required for Langerhans cell migration and optimal contact sensitization in mice // J. Immunol. 2001. 166. 3672-3677.
19. Stoitzner P., Zanella M, Ortner U. et al. Migration of Langerhans cells and dermal dendritic cells in skin organ cultures: augmentation by TNF-a and IL-1p // J. Leukoc. Biol. 1999. 66. 462-470.
20. Маянский Д.Н., Цырендоржиев Д.Д. Активация макрофагов // Успехи соврем. биол. 1990. (3). 352-368.
MayanskiiD.N., Tsyrendorzhiev D.D. Activation of macrophages // Uspekhi sovrem. biol. 1990. (3). 352-368.
EFFECT OF RECOMBINANT TNF-BINDING PROTEINS OF VARIOLA VIRUS ALONG THE MIGRATORY AND OXIDATION-METABOLIC FUNCTIONS OF MICE BLOOD LEUKOCYTES AT THE APPLICATIONS RMU-TNF
Dondok Damdinovich TSYRENDORZHIEV1, Sergey Vitalevich SENNIKOV1,
Elena Alekseevna VYAZOVAYA1, Irina Pavlovna GILEVA2, Sergey Nikolaevich SCHELKUNOV2,
Igor Alexandrovich RYAZANKIN2, Leonid Rudolfovich LEBEDEV2, Ludmila Borisovna TOPORKOVA1, Vasilii Vasil’evich KURILIN1, Alena Alexandrovna PETUKHOVA1, Irina Anatol’evna ORLOVSKAYA1
1Institute of Clinical Immunology SB RAMS 630091, Novosibirsk, Yadrintsevskaya str., 14
2Center of Virology and Biotechnology « Vector» of Rospotrebnadsor 630559, Koltsovo, Novosibirsk region
The influence of recombinant murine tumor necrosis factor (rMu-TNF) and a new type of TNF-antagonist, TNF-binding protein of variola virus (VARV-CrmB), on migration and oxidative-relatively metabolic (OM) function of Balb/c mice blood leukocytes has been studied. At the application, rMu-TNF enhances migration and oxidative metabolism of mice blood leukocytes and primes them increasing the release of reactive oxygen species in response to an additional stimulus — zymosan. VARV-CrmB protein neutralizes rMu-TNF-modulated reactive oxygen species release of leukocytes and normalizes their reactivity.
Key words: tumor necrosis factor, TNF-binding protein, reactive oxygen species, variola virus, white blood cells.
Tsyrendorzhiev D.D. — doctor of medical sciences, professor, leading researcher of laboratory immunobiology of stem cell; e-mail: tsdon@mail.ru
Sennikov S.V. — doctor of medical sciences, professor, head of laboratory molecular immunology; e-mail: Sennikov_sv@mail.ru
Viazovaia E.A. — candidate of biological sciences, senior researcher of laboratory immunobiology of stem cells; e-mail: viazovaia@mail.ru
Gileva I.P. — candidate of biological sciences, leading researcher of department genomic research and development of methods of DNA diagnosis of poksviruses; e-mail: gileva@vector.nsc.ru Schelkunov S.N. — doctor of biological sciences, head of department genomic research and development of methods of DNA diagnosis of poksviruses; e-mail: snshchel@vector.nsc.ru Ryazankin I.A. — candidate of biological sciences, researcher of department genomic research and development of methods of DNA diagnosis of poksviruses
Lebedev L.R. — candidate of biological sciences, senior researcher of department designing biological products for human and veterinary medicine
Toporkova L.B. — candidate of biological sciences, senior researcher laboratory immunobiology of stem cells; e-mail: toporkova12@mail.ru
Kurilin V.V. — candidate of medical sciences, senior researcher of laboratory molecular immunology; e-mail: medinfo@ngs.ru
Petukhova A.A. — post-graduate student of laboratory immunobiology of stem cells
Orlovskaya I.A. — doctor of medical sciences, head of laboratory immunobiology of stem cells; e-mail: irorl@mail.ru
