CC BY
18ции составляет от 5,3 до 25% в зависимости от источника гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) и вида трансплантации. Гипофункция сопряжена с высокими рисками развития инфекционных, геморрагических осложнений и летальностью ассоциированной с трансплантацией. В настоящее время не существует единого подхода в терапии гипофункции среди трансплантационных центров, однако, по нашему мнению, одним из эффективных и безопасных методов терапии является введение селектированных СБ34+ клеток донора. Целью работы являлось оценить эффективность и безопасность применения селектированных СБ34+ клеток для лечения тяжелых гипофункций трансплантата.
Материалы и методы
В исследование было включено 5 пациентов, которым в период с 2018 по 2020 год в ФГБУ «НМИЦ гематологии» была выполнена инфузия СБ34+ селектированных клеток. В группу вошли 2 пациента после трансплантации от родственного ИЬА-идентичного донора, 2 - от неродственного частично-совместимого донора, 1 - от родственного гаплоидентичного донора с ТСК.аЬ/ СБ19-деплецией. Медиана возраста составила 35 лет (21-48 л.). В группу пациентов попали 2 пациента страдающих острыми лейкозами, и 3 пациента с неопухолевыми заболеваниями крови (МДС, АА, ПМФ). У всех пациентов к моменту введения селектированных клеток сохранялось, по данным пункции костного мозга, 100% донорское кроветворение. У трех пациентов была 3-х ростковая цитопения (гранулоцитопения <0.5*109/л, тромбоцитопения <20*109/л, гемоглобин <70 г/л после констатации приживления), у одного - двухростковая и у одного - парциальная красноклеточная аплазия (ПККА), не поддающаяся стадартному лечению (плаз-маферез, ритуксимаб, плазмосорбция). В 80% случаев гипофункция развилась на фоне инфекционных ослож-
нений. Медиана выполнения процедуры составила 130 дней после алло-ТГСК (102-410 д). Заготовка СЭ34+ клеток проводилась с использованием стандартных протоколов мобилизации (Г-КСФ 10 мкг/кг) и афереза от того же донора, что и «основной» трансплантат. После этого методом иммуномагнитной сепарациии были получены продукты, медиана концентрации СЭ34+ клеток в которых составила 98,83% (97,64-99,48%). Медиана перелитых клеток составила 4,2 (3,16-6,8*106/кг СЭ34+ клеток).
Результаты
Полный ответ (восстановление всех ростков кроветворения, отсутствие зависимости от трансфузий) был получен у 4 пациентов. Медиана полного ответа на терапию составила 14 дней (13-30 д.). У одного пациента был достигнут частичный ответ - восстановление грануло-цитарного ростка, уменьшение зависимости от трансфузий эритроцитарной взвеси, однако сохраняется зависимость от трансфузий тромбоконцентрата. После восстановления у пациентов не было зафиксировано ни одного случая развития РТПХ.
Заключение
Несмотря на малую выборку пациентов, можно утверждать, что введение селектированных СБ34+ клеток может являться достаточно безопасным и эффективным методом лечения гипофункции трансплантата. Недостатками метода является необходимость повторной донации ГСК от донора.
Ключевые слова
Аллогенная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток, гипофункция трансплантата, клетки СБ34+, селекция.
HR-04
CD45RA- fraction reinfusion impact on the T-cell subpopulations of the bone marrow in patients after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation from a haploidentical donor with TCRap depletion
Ulyana V. Maslikova, Natalia N. Popova, Feruza A. Omarova , Julia O. Davydova, Nikolay M. Kapranov, Mikhail Yu. Drokov, Denis V. Kamelskikh, Vera A. Vasilieva, Irina V. Galtseva, Larisa A. Kuzmina, Tatiana V. Gaponova, Elena N. Parovichnikova
National Research Center for Hematology, Moscow, Russian Federation
Contact: Dr. Mikhail Yu. Drokov, e-mail: mdrokov@gmail.com
Introduction
Given the limited number of donor registries in the Russian Federation, it is becoming increasingly common to use a haploidentical transplantation. Currently, there are several approaches, including the TCRa^ depletion method (Maschan M.A., et al), which has come from paediatric practice, when performing haploidentical transplantation. One of the features of this procedure is a scheduled reinfusion of CD45RA fraction on days 0, +30, +60, +90 after the transplant. Despite its effectiveness shown in some works, the impact of this reinfusion upon reconstitution and structural composi-
tion of bone marrow in adults and children remains unclear. The purpose of the present work was to evaluate the impact of CD45RA- reinfusion upon the marrow T-cell composition in the patients after haploidentic transplantation.
Materials and methods
Nineteen patients were included in the study. All the patients were transplanted from related haploidentical donors. Ex vivo TCRa^ depletion with CD45RA- reinfusion was performed in seven cases on the day 0, +30, +60, +90 (dose of CD45RA- was 50*104/kg), and 12 patients were also transplanted with TCRa^ depletion, without infusion of CD45RA
fraction. Clinical characteristics of the patients are presented in Table 1. All the patients included into the study exhibited primary engraftment of the hematopoietic transplant. The subpopulation composition of CD4+ and CD8+ T-cells was studied in bone marrow samples on the day +30, +90 (before CD45RA- reinfusion), +180 and +365 using flow cytometry (BD FACS Canto II, Becton Dickinson, USA). The following subpopulations were studied: T-naive and stem memory cells (Tnv+Tscm) - CD45R0CCR7+CD28+; T cells of central memory (Tcm) - CD45R0+CCR7+CD28+; transition memory T cells (Ttm) - CD45R0+CCR7-CD28+; T-cells of effector memory (Tem) - CD45R0+CCR7-CD28-; T-terminal effectors (Tte) - CD45R0-CCR7-CD28-. Statistical analysis of data was carried out using IBM SPSS v.23 statistical software (USA). Shapiro-Wilk criterion was used to check the normal distribution of the samples under study. Due to abnormal data distribution, The Mann-Whitney U-criterion was used in analysis between the two independent samples. The p-val-ue <0.05 was considered statistically significant.
Results
The effects of CD45RA- fraction reinfusion upon bone marrow structure in patients after haploidentic transplantation
Table 1. Clinical characteristics of the patients
are shown in Fig. 1 and 2. No significant differences were found between patients with CD45RA fraction reinfusion and patients without it. Thus, according to our data, the CD45RA- fraction reinfusion on the days 0, +30, +60, +90 at a dose of 50*104/kg does not significantly affect the bone marrow composition in the patients after haplo-SCT.
Conclusion
According to our previously published data, only 2.24% of transfused CD45RA cells are represented by the cells with Tcm phenotype (i.e., about 11200 transfused cells per kg of body weight). This dose is probably suboptimal to affect the structure of the bone marrow in any significant way. Although CD45RA- reinfusion is a safe and, according to some publications, an effective method of preventing undesirable events after transplantation, the immunological effects of this intervention have yet to be evaluated with respect to further adjustment of this method for adult patients.
Keywords
Hematopoietic stem cell transplantation, haploidentical, TCR a^-depletion, CD45RA- reinfusion.
Reinfusion of CD45RA fraction Without CD45RA- reinfusion
Age 22 (21-24) 28 (17-57)
Sex Women 1 14.3% 10 76.9%%
Men 6 85.7% 3 23.1%
Disease MDS 1 14.3% 1 7.7%
ALL 6 85.7% 4 30.8%
AML 0 0°% 8 61.5%
Disease status 1 CR 71.4% 9 69.2%
2 CR 2 28.6% 4 30.8%
Source BM 0 0°% 0 0%o
SC 7 100°% 13 100%%
aGVHD 0 grade 4 57.1% 10 76.9%%
1 grade 3 42.9% 3 23.1%
MDS, myelodysplastic syndrome; ALL, acute lymphoblastic leukemia; AML, acute myeloid leukemia; CR, complete remission. BM, bone marrow; SM, stem cells; aGVHD, acute graft-versus-host disease
Days after allo-HSCT
Figure 1. Ratio of CD4+ cells in the patients at different times after haploidentical transplantation with TCRap depletion. Abscissa, terms posttransplant, days
Figure 2. Numbers of CD8+ cells in patients at different times after haploidentical transplantation with TCRap depletion
Влияние реинфузии CD45RA- фракции на Т-клеточный субпопуляционный состав костного мозга у пациентов после аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток от гаплои-дентичного донора с TCR/СD19 ар-деплецией
Ульяна В. Масликова, Наталья Н. Попова, Феруза А. Омарова, Юлия О. Давыдова, Николай М. Капранов, Михаил Ю. Дроков, Денис В. Камельских, Вера А. Васильева, Ирина В. Гальцева, Лариса А. Кузьмина, Татьяна В. Гапонова, Елена Н. Паровичникова
Национальный медицинский исследовательский центр гематологии, Москва, Россия
Введение
Учитывая, что донорские регистры в Российской Федерации ограничены, все чаще в практике приходится прибегать к гаплоидентичной трансплантации. В настоящее время существует несколько подходов при выполнении гаплоидентичной трансплантации в том числе и пришедший из педиатрической практики метод TCR/ CD19 а^-деплеции (Масчан М.А. и соавт.). Одной из особенностей этой процедуры является плановая ре-инфузия CD45RA- фракции в 0, +30, +60, +90 дни после трансплантации. Несмотря на показанную в некоторых работах эффективность, влияние этой реинфузии на ре-конституцию и структурный состав костного мозга как у детей, так и у взрослых остается невыясненным. Цель работы: оценить влияние реинфузии CD45RA- фракции на Т-клеточную структуру костного мозга у пациентов после гаплоидентичной трансплантации.
Материалы и методы
В исследование было включено 19 пациентов. Всем пациентам была выполнена трансплантация от родственного гаплоидентичного донора c TCR/CD19 а^-депле-ция. Введение CD45RA- фракции в 0, +30, +60, +90 дни (доза CD45RA- клеток составляла 50*104/кг) было выполнено 7 пациентам, остальным 12 - инфузия CD45RA-фракции не выполнялась. Клинические характеристики пациентов представлены в Табл. 1. У всех пациентов, включенных в исследование, было констатировано первичное приживление трансплантата. В контрольные сроки на +30, +90 (до реинфузии CD45RA- фракции), + 180 и +365 дни на проточном цитометре (BD FACS Canto II, Becton Dickinson, США) в образцах костного мозга исследовался субпопуляционный состав CD4+ и CD8+ Т-клеток: T-наивные и стволовые клетки памяти (Tnv+Tscm) - CD45R0 CCR7+CD28+; T-клетки центральной памяти (Tcm) - CD45R0+CCR7+CD28+; T-клетки транзиторной памяти (Ttm) - CD45R0+CCR7CD28+; T-клетки эффекторной памяти (Tem) - CD45R0+CCR7-CD28-; T-терминальные эффекторы (Tte) - CD45R0-CCR7-CD28-. Статистический анализ данных проводился с использованием статистического пакета IBM SPSS v.23 (США). Для проверки нормальности распределения исследуемых выборок был использован критерий Шапиро-Уилка. Учитывая распределение, отличное от нормального, в дальнейшем для оценки различий между двумя независимыми выборками был использован U-критерий Манна-Уитни. Статистически значимым считали значение p <0.05.
Результаты
Влияние реинфузии С045КА- фракции на структуру костного мозга у пациентов после гаплоидентичной трансплантации с ТСК./СЭ19 а^-деплецией показано на рис. 1 и 2. Различий между пациентами с реинфузией С045КА- фракции и без нее выявлено не было. Таким образом, по данным нашей работы реинфузия СБ45КА-фракции в 0, +30, +60, +90 дни в дозе 50*104/кг значимо не влияет на структуру костного мозга у пациентов после гаплоидентичной трансплантации.
Заключение
По нашим данным, в составе переливаемых СБ45КА-клеток лишь 2,24% представлено клетками с фенотипом Тст (это около 11200 переливаемых клеток на кг веса реципиента). Этой дозы, по всей видимости, недостаточно, чтобы значимо повлиять на Т-клеточную структуру костного мозга. Несмотря на то, что реинфузия СБ45КА- фракции является безопасным и по некоторым публикациям эффективным методом профилактики нежелательных явлений после трансплантации, иммунологические эффекты данного вмешательства еще предстоит оценить с целью последующей корректировки данной методики под потребности взрослых пациентов.
Ключевые слова
Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток, гаплоиндентичная, истощение ТСКл^, реинфузии С045КА- клеток.
