CC BY
16менее токсичную, что подтверждается данными о протективных свойствах и безопасности обезвреженных препаратов БКВ в опытах in vivo.
Полученные результаты свидетельствуют о необходимости дальнейшего изучения иммунобиологических свойств детоксицированного ЛПС B. pertussis для обоснования целесообразности его присутствия в составе бесклеточной коклюшной вакцины.
ЛИТЕРАТУРА
1. Захарова Н.С., Брицина М.В., Мерцалова Н.У. и др. Отечественная бесклеточная коклюшная вакцина. Журн. микробиол. 2008, 1: 35-41.
2. Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов (Сороковой доклад). Серия технических докладов 800. ВОЗ, Женева, 1992.
3. Allen A.G., Thomas R.M., Cadisch J.T., Maskell D. J. Molecular and functional analysis of the lipopolysaccharide biosintes locus wlb from Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis and Bordetella bronchiseptica. Mol. Microbiol. 1998, 29 (1): 27-38.
4. Chodorowska M. Humoral reaction to Bordetella pertussis antigens: pertussis toxin, filamentous hemagglutinin and lipopolysaccyaride in children with clinical symptoms of whooping cough. II. Occurrence and level of B. pertussis antigens in children with suspected whooping cough. Med. Dosw. Microbiol. 1999, 51 (3 - 4): 269-280.
5. Geurtsen J., Banus H.A., Gremmer E.R. et al. Lipooligosaccharide analogs improve efficacy of acellular pertussis vaccine and reduce type I hypersensitivity in mice. Clin. Vac. Immunol. 2007, 14 (7): 821-829.
6. Ibsen P., M0ller S., Heron I. Lipopolysacharides in a traditional pertussis vaccines. J. Biol. Stand. 1988, 16 (4): 299 - 309.
7. Ibsen P., Schou C., Au-Jensen M., Heron I. The effect of cyclodextrin on lipopolysaccharide production in cultures of Bordetella pertussis. J. Biol. Stand.1989, 17(4):321-330.
8. Marr N., Hajjar A.M., Shah N.R. et al. Substitution of the Bordetella pertussis lipid A phosphate groups with glucosamine is required for robust NF-kappa B activation and release of proinflammatory cytokines in cells expressing human but not murine toll-like receptor 4-MD-2-CD14. Infect. Immun. 2010, 78 (5): 159-171.
9. Westphal O., Jann K. Bacterial lipopolysaccharides extraction with phenol — water and father application of the procedure. In: Methods in Carbohydrate Chemistry. Whistler R.L., Wolfrom M.L. (ed.). New York, Academic Press, 1965.
Поступила 12.02.13
Контактная информация: Зайцев Евгений Михайлович, к.м.н., 105064, Москва, М. Казенный пер., 5А, р.т. (495)916-22-63
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
Э.А.Ахматов1, Н.П.Уткина2, Е.А.Ильиньх2, Е.А.Сорокина1, Е.С.Маракасова1, Е.А.Курбатова1, О.В.Лебединская2, Н.К.Ахматова1
ВЛИЯНИЕ РАЗНЫХ СПОСОБОВ АППЛИКАЦИИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЛИГАНДОВ НА ЭКСПРЕССИЮ ЦИТОКИНОВ
1НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва, 2Пермская государственная медицинская академия
Цель. Изучение продукции цитокинов у мышей при вакцинации поликомпонентной вакциной Иммуновак-ВП-4, содержащей лиганды к TLRs, при разных способах введения. Материалы и методы. Мышам подкожным, интраназальным или пероральным методами вводили Иммуновак-ВП-4. Назально препарат вводили в разовой дозе 500 мкг в объеме 30 мкл. Пероральная разовая доза составила 2000 мкг в объеме 0,5 мл. Подкожно препарат вводили по 200 мкг. Цитокины в сыворотках крови определяли с помощью ИФА через 8 ч после введения вакцины. Результаты. У мышей через 8 часов после однократного введения Иммуновак-ВП-4 достоверно повышался уровень ^-10, ^-6, ^-12, ^-5. Но при
этом концентрация их отличалась в зависимости от метода введения. Наиболее активная экспрессия цитокинов наблюдалась при подкожном введении. Показатели экспрессии цитокинов были значительно выше (P<0,05), чем при непарентеральных методах введения. Заключение. Установлено, что мукозальные методы аппликации наряду с парентеральными могут активировать эффекторные механизмы иммунного ответа с последующей поляризацией его по Th-1/Th2 пути. Эти механизмы готовят почву для развития антиген-специфических иммунных ответов к антигенам/патогенам.
Журн. микробиол., 2014, № 1, С. 24—30
Ключевые слова: цитокины, лиганды TLRs, мукозальная иммунизация
E.A.Akhmatov1, N.P.Utkina2, E.A.Ilinykh2, E.A.Sorokina1, E.S.Marakasova1, E.A.Kurbatova1, O.V.Lebedinskaya2, N.K.Akhmatova1
INFLUENCE OF VARIOUS BACTERIAL LIGAND APPLICATION METHODS ON CY-TOKINE EXPRESSION
1Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Moscow, 2Perm State Medical Academy, Russia
Aim. Study the production of cytokines in mice during vaccination with polycomponent Immunovac-VP-4 vaccine containing TLR ligands with various administration methods. Materials and methods. Immunovac-VP-4 was administered to mice by subcutaneous, intranasal or per oral methods. The preparation was administered nasally at a single dose of 500 ^g in the volume of 30 ц1. Per oral single dose was 2000 ^g in the volume of 0.5 ml. 200 ^g of the preparation was administered subcutaneously. Cytokines in blood sera were determined by EIA 8 hours after the administration ofthe vaccine. Results. In mice 8 hours after the single administration ofImmunovac-VP-4 the levels of IL-ф, IL-6, IL-12, IL-5 increased significantly. However their concentration differed depending on the method of administration. The most active expression of cytokines was observed during subcutaneous administration. The indexes of cytokine expression were significantly higher (p<0.05) than during non-parenteral administration methods. Conclusion. Mucosal application methods along with parenteral were established to be able to activate effector mechanisms of immune repose with its consequent polarization by Th1/Th2 pathways. These mechanisms lay the groundwork for development of antigen-specific immune responses against antigens/pathogens.
Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2014, No. 1, P. 24—30
Key words: cytokines, TLR ligands, mucosal immunization
ВВЕДЕНИЕ
Иммунная система слизистых оболочек служит первым и наиболее значимым барьером для предотвращения развития вирусных и бактериальных инфекций. Поэтому проблема мукозальной иммунизации является одним из приоритетных направлений современной иммунологии [1, 2]. Несмотря на это, знания о механизмах регуляции иммунного ответа слизистых оболочек находятся на начальном этапе своего развития. Это подтверждается тем, что число разрешенных для применения мукозальных вакцин остается небольшим. Так, к началу 2009 года в мире использовалось всего 9 вакцин для непарентерального введения. С одной стороны, наличие такого небольшого количества мукозальных вакцин обусловлено технологическими сложностями их конструирования, а с другой — недостаточностью данных по характеристике создаваемого иммунитета, что связано со сложностью строения, функционирования и изучения мукозальной иммунной системы [11, 12].
Мукозальная иммунная система представляет собой мукозоассоциированную
лимфоидную ткань (mucose-assotiated lymphoid tissue — MALT), функционально связанную с системным иммунитетом [1], и позволяет активированным лимфоцитам распространяться в разные отделы MALT. Важнейшими компонентами мукозальной иммунной системы являются Туб и В1 лимфоциты, заселяющие эпителий слизистых оболочек, характеризующиеся способностью усвоения бактериальных и вирусных лигандов без костимулирующих сигналов и предварительного процессинга другими эффекторами иммунитета [3, 19].
Отличительной особенностью иммунного ответа слизистых на антигены резидентной микрофлоры является доминирование Th2-rarn иммунного ответа. Th2- клетки продуцируют IL-4, IL-5 и IL-10, которые регулируют продукцию IgA. Однако при встрече слизистой с патогенами и вакцинами или под действием адъювантов направленность развития иммунного ответа может меняться. Этот процесс осуществляется на уровне дендритных клеток (ДК), заселяющих слизистые оболочки. В настоящее время цитокины рассматриваются как регуляторы направленности иммунного ответа, и известно, что при подкожном методе вакцинации IL-12, продуцируемый ДК, является ведущим в поляризации иммунного ответа по Thi-типу [4], однако эти механизмы при мукозальных методах вакцинации остаются мало изученными.
Цель исследования — изучить продукцию цитокинов у мышей при вакцинации поликомпонентной вакциной Имуновак-ВП-4 при разных способах введения.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Поликомпонентная вакцина Иммуновак-ВП-4 (НПО «Микроген») из антигенов условно патогенных микроорганизмов (Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Escherichia coli и Staphylococcus aureus) предназначена для иммунотерапии хронических воспалительных и аллергических заболеваний. Вакцина содержит ЛПС, ассоциированный с белком наружной мембраны грамотрицательных микроорганизмов, пептидогликан, тейхоевые кислоты, липопротеины, являющиеся лигандами для Toll-like receptors — TLRs.
Использованы мыши линий СВА, 16 — 18 г из питомника НЦ Биомедицинских технологий «Андреевка».
Мышам подкожным, интраназальным или пероральным методами вводили Иммуновак-ВП-4. Назально препарат вводили в разовой дозе 500 мкг в объеме 30 мкл. Пероральная разовая доза составила 2000 мкг в объеме 0,5 мл. Подкожно препарат вводили по 200 мкг.
Животных выводили из эксперимента под эфирным наркозом в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных».
Цитокины в сыворотках крови мышей определяли через 8 часов после введения Иммуновак-ВП-4 иммуноферментным методом с использованием тест-систем фирмы Bender MedSystems (США).
Статистическую обработку данных проводили с использованием пакета прикладных программ Excel (Microsoft Corporation, США), интегрированным пакетом статистического анализа StatSoft 8.0 с применением параметрических и непараметрических методов сравнения.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Важным показателем действия иммунотропных препаратов является их влияние на продукцию цитокинов, осуществляющих взаимодействие между эффекторами как врожденного, так и адаптивного иммунитета. Уровень цитокинов был изучен при мукозальных методах аппликации Иммуновак-ВП-4 в сравнении с
Уровень цитокинов в сыворотках мышей при однократном введении Иммуновак-ВП-4
Метод введения Содержание цитокинов, пкг/мл
IL-1P IL-6 IL-10 IL-12 IL-4 IL-5 IFN-y TNF-a
Перорально 17,8+0,6* 132+16,3* 37,5+2,8 12,5+1,5* 5,8+0,8 43,6+1,5* 7,5+1,1 30,5+3,1
Интраназально 18,2±0,7* 115+25,6* 39+3,3 13,2+1,2* 6,8+0,7 55,5+12,6* 7,3+0,5 33,7+2,1
Подкожно 68,3+3,2* 215+15,8* 41,2+4,5 38,6+2,7* 5,5+0,4 98,3+9,8* 36,6+2,8* 36,6+2,7
Контроль 5,2+0,5 46,8+3,3 36,3+3,8 5,2+0,6 5,4+0,6 25,7+2,1 7,2+0,5 28,3+2,1
(интактные мыши)
Примечание. * Достоверность различий между контрольной и опытными группами p<0,05.
подкожным введением этого же препарата. Было изучено содержание IL-ф, IL-6, IL-4, IL-10, IL-12, IL-5, TNF-a и IFN-y в сыворотке крови интактных и 1-кратно вакцинированных мышей.
У мышей через 8 часов после однократного введения Иммуновак-ВП-4 достоверно повышался уровень цитокинов IL-ф, IL-6, IL-12, IL-5 (табл.). Но при этом концентрация их отличалась в зависимости от метода введения. Наиболее активная экспрессия цитокинов наблюдалась при подкожном введении вакцины. Показатели экспрессии цитокинов были значительно выше (p<0,05), чем при непарентеральных методах введения. Последние между собой существенно не отличались. При всех исследованных методах введения уровень IL-10, IL-4, TNF-a оставался без изменений.
Подкожное введение вакцины повышало уровень IL-1P в 13,1 раза по сравнению с контролем и в 3,8 раза по сравнению с непарентеральными методами. IL-1 в является мощным провоспалительным цитокином, и известно, что связывание IL-ф с его рецептором приводит к параллельной активации нуклеарного фактора NFkB [10].
Уровень IL-6 был выше контроля в 4,6 раза при подкожной аппликации и в 1,6 — 1,9 раза при назальной и пероральной, соответственно. IL-6 выступает как мощный фактор дифференцировки В- и Т-клеток, макрофагов, мощный стимулятор выработки белков острой фазы клетками печени. Одна из основных функций IL-6 — стимуляция продукции антител in vivo и in vitro. Было установлено, что при использовании рекомбинантного человеческого IL-6 в качестве адъюван-та в субъединичной вакцине против туберкулеза усиливается Th1 ответ, характеризующийся повышением продукции INF-y и усилением клеточной пролиферации [13].
Также существенное повышение экспрессии было отмечено в отношении регуляторного IL-12, он соответственно повышался в 7 и 3 раза при подкожном и непарентеральных методах введения препарата. IL-12 действует не только на NK-клетки, но также на NKT и Т-клетки, индуцируя пролиферацию, цитотокси-ческую активность и дифференцировку ТЫ-клеток [16]. Под воздействием IL-12 Т- и NK-клетки продуцируют INF-y, TNF-a, GM-CSF, IL-3, IL-8 и IL-2. При этом активированные NK- и Т-клетки, выделяя INF-y, также усиливают продукцию IL-12, что свидетельствует о существовании позитивной обратной связи между эффекторами адаптивного и врожденного иммунитета [7]. IL-12 способствует активации В-клеток, особенно В1, что находит отражение в повышении уровня аутоантител, но при этом подавляет выработку IgE, в то время как количество Ig2a, зависимого от IFN-y, повышается [6].
При подкожном методе введения Иммуновак-ВП-4 в сыворотках мышей увеличивалась концентрация IFN-y в 5 раз по сравнению с интактными животными и во столько же раз по сравнению с непарентеральными методами аппликации вакцины.
ОБСУЖДЕНИЕ
IFN-y является мощным активатором антимикробных функций фагоцитов и играет ключевую роль в резистентности ко многим патогенным бактериям, грибам и внутриклеточным паразитам [20]. Он продуцируется в ответ на действие IFN-а/в, вырабатываемых клетками врожденного иммунитета. Источником INF-y являются в основном Th1-клетки и NK, но и другие эффекторы при соответствующей стимуляции также способны секретировать INF-y: Т-клетки (NKT, CD8+-T-клетки и убТ-клетки), макрофаги, ДК и В-клетки [17]. Высвобождение INF-y активирует NK и нейтрофилы, стимулирует микробицидную активность макрофагов и индуцирует формирование гранулем, которые играют барьерную функцию для сдерживания внутриклеточных патогенов. Оба типа 1 и 2 интерфе-ронов активируют NK-клетки для уничтожения инфицированных вирусом клеток и высвобождения цитокинов [15].
При проникновении в организм патогенов происходит активация макрофагов и ДК, которые начинают секретировать IL-12, TNF-а, IL-18, IL-1. IL-12 и IL-18 стимулируют выработку INF-y NК-клетками и Т-лимфоцитами [19]. INF-y с IL-12 индуцируют дифференцировку CD4+ клеток в Th1. Кроме того, INF-y способен ингибировать дифференцировку CD4+ клеток в Th2 тип, синтезирующий IL-4, 5, 10, которые являются мощными ингибиторами цитокинов Th1 типа. INF-y также активирует макрофагальную микробицидную активность через индукцию TNF-а, реактивного кислорода и NO-интермедиатов и повышает экспрессию молекул MHC и рецепторов TNF-а. При различных инфекциях (Brucella abortus, Mycobacterium fortuitum, Candida albicans, Klebsiella pneumoniae) немаловажную защитную роль играют также нейтрофилы, активность которых усиливается под воздействием INF-y [17].
При назальном способе аппликации вакцины Иммуновак-ВП-4 содержание IL-5 повышалось в 1,7 раза, пероральном — в 2,2 раза, подкожном — в 3,8 раза. IL-5 описан как дифференцировочный фактор В-лимфоцитов. Главный источник IL-5 — ^2-клетки. Не влияя на переключение изотипов, этот цитокин повышает число продуцентов IgM, а также, действуя на посттранскрипционном уровне, усиливает продукцию IgA. Тем самым IL-5 способствует защите слизистых оболочек, в которых IgA составляет основной изотип антител (Wang H. et al., 2012).
Установлено, что мукозальные адъюванты или системы доставки являются основными для индукции мукозальных иммунных ответов. Природа системы доставки так же, как путь иммунизации, влияет на природу субпопуляций Th-клеток. Например, использование нативных или нетоксических мутантов СТ с перораль-ной вакцинацией имеет тенденцию индуцировать системный и мукозальный иммунитет: CD4+ Th2-тип клеток с характерными IgG1, IgG2b, IgE и IgA в сыворотке, так же как sIgA мукозальный антительный ответ [9, 14]. С другой стороны, оральная иммунизация рекомбинантными бактериями (например, Salmonella) имеет тенденцию к индукции не только CD4+ TM-типа клеток и CMI ответов, но также характерных CD4+ Th-клеток. Эти CD4+ Th-клетки продуцируют ци-токины, такие как IFN-y и IL-10, которые поддерживают мукозальные sIgА антительные ответы [8].
Таким образом, можно сделать заключение, что антигены условно патогенных бактерий, независимо от пути введения, являются активными стимуляторами эффекторной системы врожденного иммунитета, что обеспечивает быстрое
формирование неспецифической резистентности. В настоящем исследовании было исследовано влияние поликомпонентной вацины Иммуновак-ВП-4 на продукцию цитокинов при однократном введении разными способами. При этом было показано, что мукозальные методы аппликации наряду с парентеральными могут активировать эффекторные механизмы иммунного ответа с последующей поляризацией иммунного ответа по Th-1/Th2 пути. Эти механизмы готовят почву для развития антигенспецифических иммунных ответов к антигенам/патогенам.
ЛИТЕРАТУРА
1. Егорова Н.Б., Ахматова Н.К., Чертов И.В. и др. Влияние разных методов введения антигенов условно патогенных бактерий на субпопуляционную структуру и функциональную активность иммунокомпетентных клеток селезенки, кишечника и регионарных лимфатических узлов. Молекулярная медицина. 2009, 5: 48-54.
2. Семенов Б.Ф., Зверев В.В. Ожидаемые события в развитии вакцинопрофилактики до 2020 — 2030 гг. Журн. микробиол. 2010, 2, 105-111.
3. Сидорова Е.В. Королевство В-лимфоцитов. Медицинская иммунология. 2004, 6 (3 — 5): 176-185.
4. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Иммунная система желудочно-кишечного тракта: особенности строения и функционирования в норме и при патологии. Иммунология. 1997, 5: 4-7.
5. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Иммуномодуляторы: механизмы действия и клиническое применение. Иммунология. 2003, 4: 196-203.
6. Ярилин А.А., Никонова М.Ф., Ярилина А.А. и др. Апоптоз, роль в патологии и значимость его оценки при клинико-иммунологическом обследовании больных. Медицинская иммунология. 2000, 2 (1): 7-16.
7. Braat H., de Jong E.C., van den Brande J.M. et al. Dichotomy between Lactobacillus rham-nosus and Klebsiella pneumoniae on dendritic cell phenotype and function. J. Mol. Med. 2004. 82 (3): 197-205.
8. Chu G.M., Jung C.K., Kim H.Y et al. Effects of bamboo charcoal and bamboo vinegar as antibiotic alternatives on growth performance, immune responses and fecal microflora population in fattening pigs. Anim. Sci. J. 2013, 84 (2): 113-120.
9. Jackson R.J., Staats H.F., Xu-Amano J. et al. Oral vaccine models: multiple delivery systems employing tetanus toxoid. Ann. NY Acad. Sci. 1994, 15 (730): 217-234.
10. Krause A., Whu W.Z., Xu Y et al. Protective anti-Pseudomonas aeruginosa humoral and cellular mucosal immunity by AdC7-mediated expression of the P. aeruginosa protein OprF Vaccine. 2011, 29: 2131-2139.
11. Lawson L.B., Clements J.D., Freytag L.C. Mucosal immune responses induced by transcutaneous vaccines. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 2012, 354: 19-37.
12. Lawson L.B., Norton E.B., Clements J.D. Defending the mucosa: adjuvant and carrier formulations for mucosal immunity. Curr. Opin. Immunol. 2011, 23 (3): 414-420.
13. Leal I.S., Florido M., Andersen P., Appelberg R. Interleukin-6 regulates the phenotype of the immune response to a tuberculosis subunit vaccine. Immunol. 2001, 103: 375-381.
14. Marinaro M., Riccomi A., Rappuoli R. et al. Mucosal delivery of the human immunodeficiency virus-1 Tat protein in mice elicits systemic neutralizing antibodies, cytotoxic T lymphocytes and mucosal IgA. Vaccine. 2003, 8, 21 (25-26): 3972-3981.
15. Mesa M.C., Rodrigues L.S., Franco M.A., Angel J. Interaction of rotavirus with human peripheral blood mononuclear cells: Plasmacytoid dendritic cells play a role in stimulating memory rotavirus specific T cells in vitro. Virology. 2007, 10: 332-348.
16. Moretta A. The dialogue between human natural killer cells and dendritic cells. Curr. Opin. Immunol. 2005, 17(3): 306-311.
17. Netea M.G., Kullberg B.J, Van der Meer J.W.M. Proinflammatory cytokines in the treatment of bacterial and fungal infections. Biodrags. 2004, 18 (1): 9-22.
18. Su Z., Segura M., Morgan K. et al. Impairment of protective immunity to blood-stage malaria by concurrent nematode infection. Infect. Immun. 2005, 73 (6): 3531-3539.
19. Xiong N., Raulet D.H. Development and selection of gammadelta T cells. Immunol. Res. 2007, 215: 15-31.
20. Zanoni I., Granucci F., Foti M., Ricciardi-Castagnoli P. Self-tolerance, dendritic cell (DC)-mediated activation and tissue distribution of natural killer (NK) cells. Immunol. Lett. 2007, 110 (1): 6-17.
Поступила 18.06.13
Контактная информация: Ахматова Нэлли Кимовна, д.м.н., проф., 105064, Москва, М.Казенный пер., 5А, р.т. (495) 916-07-74
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
А.В.Солдатенкова, И.В.Яковлева, Н.В.Гаврилова, Н.А.Михайлова, В.В.Свиридов
ПОЛУЧЕНИЕ И ОЦЕНКА СВОЙСТВ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ЭКЗОТОКСИНУ А PSEUDOMONAS AERUGINOSA
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова, Москва
Цель. Получение, изучение свойств и оценка возможности использования монокло-нальных антител к экзотоксину А Pseudomonas aeruginosa (ЭТА) для выявления молекул рекомбинантных экзотоксина А и анатоксина. Материалы и методы. Получены гибридо-мы — продуценты моноклональных антител к ЭТА. Для иммунизации мышей использован рекомбинантный экзотоксин А, его атоксичные формы, анатоксин синегнойной палочки и живая культура P. aeruginosa PA-103. Результаты. Наиболее продуктивным оказался опыт по слиянию злокачественной клеточной линии и иммунных лимфоцитов, полученных от одной мыши, иммунизированной рекомбинантным ЭТА. Оценена интенсивность взаимодействия моноклональных антител с рекомбинантными атоксичными формами ЭТА в иммуноферментном анализе. Изучена протективная (токсиннейтрали-зующая) активность антител на культуре клеток и способность выявлять экзотоксин А в реакции латекс-агглютинации. Антитела гибридной культуры № 21 способны выявлять молекулы рекомбинантного ЭТА и анатоксина в реакции латекс-агглютинации. Заключение. Предполагается использование полученных антител для тестирования токсигенности штаммов P. aeruginosa, а также выявления анатоксина в технологическом процессе получения профилактических препаратов на основе экзотоксина А.
Журн. микробиол., 2014, № 1, С. 30—35
Ключевые слова: экзотоксин А, Pseudomonas aeruginosa, monoclonal antibodies
A.V.Soldatenkova, I.V.Yakovleva, N.V.Gavrilova, N.A.Mikhailova, V.V.Sviridov
PRODUCTION AND PROPERTIES EVALUATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST PSEUDOMONAS AERUGINOSA EXOTOXIN A
Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Moscow, Russia
Aim. Production, study ofproperties and evaluation ofa possibility to use monoclonal antibodies against Pseudomonas aeruginosa exotoxin A (ETA) for the detection ofmolecules ofrecombinant exotoxin A and anatoxin. Materials and methods. Producer hybridomas for monoclonal antibodies against ETA were generated. Recombinant exotoxin A, its atoxic forms, P.aeruginosa anatoxin and P. aeruginosa PA-103 live culture were used for immunization of mice. Results. The experiment of
