CC BY
32
УДК 615.244:616-092.9
И.Э. Раднаева, С.Ц. Аюшиева
ВЛИЯНИЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА «ПОЛИГЕПАФИТ» НА СИСТЕМУ ПОЛ - АОА ПРИ ОСТРОМ Д-ГАЛАКТОЗАМИНОВОМ ГЕПАТИТЕ У БЕЛЫХ КРЫС
Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН (Улан-Удэ)
В эксперименте на белых крысах изучено влияние на систему ПОЛ — АОА фитосбора «Полигепфит», в качестве препарата сравнения использован классический гепатопротектор карсил.
Было установлено, что курсовое введение фитосбора «Полигепафит.» ингибирует, перекисное окисление липидов и повышает, антиоксидантный статус организма при. остром. Д-галактозовом гепатите. Доказано, что фитосбор «Полигепафит.» обладает, выраженным, противовоспалительным, антиоксидантным. действиями, вследствие чего является, перспективным, средством, для. профилактики обострений при. воспалительных заболеваниях печени.
Ключевые слова: Д-галактозаминовый гепатит, перекисное окисление липидов, антиоксидантная система, растительное средство «Полигепафит»
THE ANTiOXiDANT ACTiONS OF HERBAL REMEDY «POLYHEPAPHiT» AT D-GALACTOSOAMiN-iNDUSED iNJURY iN RAT LiVER
I.E. Radnaeva, S.C. Aushieva
Institute of general and experimental biology, Ulan-Ude
In this paper the antioxidant actions of herbal remedy «Polyhepaphit» was studied. The classical hepatoprotec-tor carsil was used, as a comparison preparation.
It has been established, that herbal remedy «Polyhepaphit» inhibit lipid, peroxidation, and increase the antioxidant status of the organism, at D-galactosoamin-induced injury in rat liver.
It is proved, that herbal remedy «Polyhepaphit» possesses expressed anti-inflammatory, antioxidant actions and can use as perspective mean for preventive maintenance of aggravations at inflammatory diseases of a liver. Key words: D-galactosoamin, hepatitis, lipid peroxidation, herbal remedy «Polyhepaphit»
В основе многих морфологических изменений, развивающихся в печени при воспалительных заболеваниях печени, лежит цитолиз гепатоцитов, инициирующий процесс прогрессирующего некробиоза печеночных клеток [4]. Одним из универсальных механизмов повреждения и даже гибели клеток любых органов, тем более печени, является чрезмерная пероксидация мембранных структур, обусловленная усиленной выработкой активных форм кислорода [2, 4]. Из образовавшихся диеновых конъюгатов при дальнейшем воздействии на них гидроксильных радикалов образуются гидроперекиси липидов, способствующие появлению в гидрофобном слое мембран гидрофильных «дыр». Вследствие этого нарушаются функции органоидов клеток, органов, а затем и целостного организма. Усилению патологических изменений в органах и тканях способствует свойство гидроперекисей липидов распространяться на соседние участки мембраны, повреждая их. В местах присоединения перекисных радикалов жирные кислоты разрываются на фрагменты, на краях которых расположены альдегидные группы, обладающие высокой реакционной способностью. Если разрыв произошел с двух сторон, образуется малоновый диальдегид. Конечным продуктом ПОЛ является липофусциновый пигмент [1, 3].
Пусковым механизмом повреждения печени при Д-галактозаминовом гепатите является цитолиз гепатоцитов, повреждение ядерного аппарата клетки [3]. В связи с тем, что аналогичные морфо-
логические изменения в печени развиваются при поражениях печени вирусной этиологии, модель Д-галактозаминового повреждения гепатоцитов [5] взята для изучения влияния на систему перекисно-го окисления липидов (ПОЛ) — антиоксидантной активности (АОА) данных средств природного происхождения.
Целью настоящей работы явилось определение антиоксидантных свойств растительного комплексного фитосбора «Полигепафит».
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Фитосбор с условным названием «Полигепафит» (рег. удост. № 005462, Р.643.07.2003) имеет следующий состав: цветки ноготков, плоды шиповника, плоды боярышника, корневища девясила, цветки бессмертника, корни солодки, листья мяты.
Экспериментальная работа выполнена на 90 беспородных белых крысах обоего пола с исходной массой 130 — 230 г. Животных содержали в идентичных условиях на стандартном рационе вивария (Приказ МЗ СССР № 1179 10.10.83 г.). Эксперименты осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г.). Крыс эвтаназировали методом мгновенной декапитации. В эксперименте использовали модель острого токсического повреждения печени путем внутрибрюшинного введения Д-галактозамина в объеме 0,2 г/кг мас-
сы животного в течение 3 дней. После окончания введения Д-галактозамина животным ежедневно зондовым методом внутрижелудочно 1 раз в сутки вводили испытуемое средство «Полигепафит» в виде отвара в дозе 0,3/кг массы животного (в пересчете на воздушно-сухое сырье). В качестве препарата сравнения использовали карсил в дозе 50 мг/кг. Животным контрольной группы вводили зондовым методом обычную воду. Функциональное состояние печени животных оценивали в динамике через 7, 14, 21-е сутки от начала эксперимента. Эти сроки сопоставимы со сроками приема лечения людей вышеуказанными средствами.
Состояние антиоксидантной защиты оценивали по каталазной активности сыворотки крови, по содержанию восстановленного глутатиона и супероксиддимутазы. Каталазную активность сыворотки крови крыс определяли по методу Г.А. Бобенко, М.Н. Гайнацкого (1976) и М.А. Королюка и др. (1988). Восстановленный глутатион измеряли по методике, предложенной Р.Л. Андерсоном (1977). Содержание СОД определяли по методу Чевари и Чаба (1985). Интенсивность процессов перекисного окисления липидов оценивали по содержанию малонового диальдегида (МДА) (Темир-булатов, Селезнев, 1981) и диеновых конъюгатов (ДК) в сыворотке крови (Стальная, Гаришвили, 1977).
Применялись стандартные параметрические методы статистического анализа: вычислялись средние арифметические значения показателей и ошибки средних (М ± т) и стандартные отклонения, результаты считались статистически значимыми при величинах достигнутого уровня значимости (р < 0,05).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ
Данные, приведенные в таблице 1, свидетельствуют, что воспроизведение модели острого Д-галактозаминового гепатита сопровождается индукцией процессов свободнорадикального окисления липидов и снижением активности эндогенной антиокислительной системы организма.
Так, концентрация МДА и ДК в крови у крыс контрольной группы на 7-е сутки наблюдения достоверно (р < 0,05) возрастала в 1,9 и 1,8 раза соответственно по сравнению с таковыми у животных интактной группы. Наряду с этим установлено, что при остром гепатите наблюдалось достоверное (р < 0,05) понижение активности каталазы и СОД в 2,2 и 3,6 раза соответственно по сравнению с показателями у интактных животных. Достоверно (р < 0,05) снижался на 7-й день эксперимента и показатель восстановленного глютатиона в контрольной подгруппе в 1,7 раза по отношению к интактной (здоровой) группе. Выявленные изменения систе-
Таблица 1
Продукты ПОЛ - АОА у крыс при остром Д-галактозаминовом гепатите в разные сроки эксперимента при введении фитосбора «Полигепафит» и препарата сравнения карсил
Показатели ПОЛ - АОА Группы животных 7-е сутки 14-е сутки 21-е сутки
Восстановленный глутатион (мкмоль/л) интактная 12,32 ± 0,58 9,21 ± 0,14 9,32 ± 0,37
контрольная 7,06 ± 0,32 4,38 ± 0,64 3,5 ± 0,3
карсил 7,8 ± 0,18 8,78 ± 0,59* 7,03 ± 0,3*
фитосбор 11,45 ± 0,25* 9,03 ± 0,47* 9,27 ± 0,42*
МДА (мкмоль/л) интактная 3,33 ± 0,49 3,2 ± 0,18 3,46 ± 0,32
контрольная 6,48 ± 0,72 4,93 ± 0,21 12,94 ± 0,5
карсил 5,6 ± 0,4 4,21 ± 0,51 11,4 ± 0,18*
фитосбор 3,41 ± 0,6* 3,64 ± 0,2* 5,43 ± 0,12*
Каталаза (мкат/л) интактная 5,56 ± 0,43 6,11 ± 0,06 6,78 ± 0,35
контрольная 2,53 ± 0,38 4,8 ± 0,4 4,55 ± 0,2
карсил 4,99 ± 0,36* 5,92 ± 0,89 5,49 ± 0,23*
фитосбор 5,18 ± 0,38* 6,01 ± 0,9* 5,6 ± 0,13*
СОД эритроцитов (ммоль/л) интакт 16,18 ± 0,36 6,1 ± 0,06 8,43 ± 0,16
контроль 4,5 ± 0,23 1,74 ± 0,2 5,98 ± 0,18
карсил 5,41 ± 0,23* 1,96 ± 0,34 6,48 ± 0,34*
фитосбор 8,36 ± 0,57* 2,5 ± 0,22* 7,03 ± 0,07*
ДК (моль в 1 мл) интактная 216,26 ± 5,5 248,02 ± 34 206,23 ± 3,9
контрольная 408,46 ± 4,1 393,34 ± 24 382,54 ± 20
карсил 353,24 ± 30 315,33 ± 6,1* 291,5 ± 10,3*
фитосбор 229,32 ± 16* 255,09 ± 20* 205,06 ± 1,6*
Примечание: * - достоверность различий с контрольной группой (р < 0,05).
мы ПОЛ — АОА продолжали оставаться в крови крыс на 14-е и на 21-е сутки эксперимента, причем было отмечено дальнейшее достоверное (р < 0,05) снижение СОД эритроцитов, восстановленного глютатиона и каталазы по сравнению с данными на 7-е сутки эксперимента. Эти выявленные изменения указывают на то, что восстановления активности ферментов антиоксидантной системы организма не только не отмечалось на 21-е сутки эксперимента в контрольной подгруппе, но оно еще более углублялось.
Курсовое введение животным опытных подгрупп фитосбора «Полигепафит» вызывало достоверное (р < 0,05) снижение уровня МДА в сыворотке крови на 7-е, 14-е, 21-е сутки наблюдения в 1,9; 1,3 и 2,4 раза соответственно. Уровень МДА при приеме карсила оставался на уровне контрольных цифр на 7-е и 14-е сутки, а на 21-е сутки снизился в 1,1 раза.
Уровень ДК в плазме крови достоверно снижался на 7-е сутки в 1,8 раза (р < 0,05) у фитосбора, а прием карсила не влиял на уровень ДК. На 14-е сутки отмечается снижение ДК в 1,2 раза на фоне приема карсила, а при приеме фитосбора отмечается снижение ДК в 1,5 раза. И здесь фитосбор показал достоверное снижение уровня диеновых конъюгатов на протяжении всех 21-х суток. Обращает на себя внимание то, что уровень продуктов ПОЛ на 21-й день эксперимента сравнялся с таковым интактной (здоровой) группы у крыс, пролеченных фитосбором, а в группе сравнения (карсил) уровень ДК на 21-е сутки был достоверно повышен в 0,7 раза.
Наряду с этим, введение исследуемых средств повышало активность ключевых ферментов анти-оксидантной системы организма во все сроки исследования. Так, на фоне введения фитосбора «Полигепафит» активность каталазы достоверно повышалась: на 7-е сутки — в 2,04 раза, а карсила в 1,9 раза. На 14-е сутки активность каталазы достоверно повысилась лишь у карсила в 1,2 раза. При оценке уровня каталазы на 21-е сутки произошло достоверное повышение в 1,2 раза при лечении и карсилом, и фитосбором.
Динамика изменений показателей активности СОД следующая: ее уровень повышался на 7-е сутки в 1,2 (р < 0,05) раза при применении карсила и в 1,8 раза при применении фитосбора. А на 14-е сутки уровень СОД достоверно повышался только при приеме фитосбора в 1,4 раза. На 21-е сутки достоверное повышение СОД отмечалось у карсила
— в 1,1 раза, и у фитосбора — в 1,2 раза.
Показатель восстановленного глютатиона в плазме крови крыс на 7-й день эксперимента не имел достоверных (р > 0,05) различий с группой, принимающей карсил, а по сравнению с контролем отмечалось достоверное (р > 0,05) повышение в 1,6 раза при приеме фитосбора «Полигепафит. На 14-е сутки эксперимента зарегистрировано достоверное (р > 0,05) повышение показателя восстановленного глютатиона почти в 2 раза в группах сравнения и опытной. Отмечается достоверное повышение уровня ВГ в 2 раза в группе, пронимающей карсил, а в группе с фитосбором отмечается повышение ВГ в 2,6 раза на 21-й день эксперимента.
Таким образом, курсовое введение фитосбора «Полигепафит» ингибировало перекисное окисление липидов и повысило антиоксидантный статус организма при остром экспериментальном гепатите. При сравнении вышеуказанного средства карсил заметно уступает ему в антиоксидантной активности, что, по-видимому, объясняется тем, что «Полигепафит» является многокомпонентным растительным средством в отличие от карсила и имеет более выраженную антиокислительную активность.
Полученные результаты указывают, что фитосбор «Полигепафит» способен уменьшать воспалительные реакции через подавление радикального окисления и повышения активности ферментов антиоксидантной системы.
литература
1. Влияние карнозина и его комбинации с эссенциале на процессы перекисного окисления липидов и работоспособность экспериментальных животных / Н.Р. Сейфуллина [и др.] // Экспериментальная и клиническая фармакология. — 2005.
- № 5. - С. 46-49.
2. Гепатопротекторы препятствуют токсическому действию циклофосфана на печень крыс при С^4-гепатите / А.В. Ратекин [и др.] // Экспериментальная и клиническая фармакология — 2005.
- № 2. - С. 38-41.
3. Полунина Т.Е. Лекарственные поражения печени / Т.Е. Полунина // Лечащий врач. - 2005.
- № 3. - С. 14-18.
4. Сафонов А.Д. Метаболические и иммунные взаимосвязи в патогенезе острого вирусного гепатита В, HCV-инфекции и их сочетанной формы : дис. ... д-ра мед. наук. - СПб., 1998.
5. Quanbo Xiong Hepatoprotective Activity of Phenyletanoids from Cistanche deserticola / Quanbo Xiong, Koji Hase // Planta Medica, 1998. - № 2. -С. 120-125.
Сведения об авторах
Раднаева Ирина Элбековна - врач-методист РМИАЦ (670042, г Улан-Удэ, ул. Мокрова 19а, 20; тел.: 8 (3012) 55-60-18, 8 (902) 562-06-99)
Аюшиева СэсэгЦыренжаповна - врач-терапевт РКБ им. Семашко, к.м.н.
