CC BY
34УДК 619:636.2.082.35:615.3:616.33
ВЛИЯНИЕ ПРОБИОТИКА НА МИКРОФЛОРУ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ
1О.Б.Павленко - кандидат ветеринарных наук, доцент; С.М.Сулейманов - доктор ветеринарных наук, профессор; 1П.А.Паршин - доктор ветеринарных наук, завкафедрой; 2Л.П.Миронова - доктор
ветеринарных наук, профессор, вед.н.с.
ФГБОУ ВО«Воронежский государственный аграрный университет имени императора Петра I», г.Воронеж(394087, г.Воронеж, Мичурина, 1, тел: +7(473) 253-86-51; e-mail: [email protected].).
2ФГБНУ «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт», г.Новочеркасск (346493, Ростовская область, г.Новочеркасск, Ростовское шоссе, дом 0,
тел.+7 (8635) 26-69-92).
Мастит сухостойных коров сохраняется до отела, но с наступлением лактации накопленный в емкостной системе пораженной доли экссудат, будучи многократно разбавленным молозивом, обычно остается незамеченным. Поступление продуктов воспаления в желудочно-кишечный тракт теленка приводит к тяжелым расстройствам пищеварения с токсическими проявлениями и высоким процентом летальности, а при лечении мастита антибиотиками, они выделяются с молозивом. C целью изучения влияния пробиотика на основе Bacillus amyloliquefaciens, получаемого телятами вместе с молоком коров-матерей было сформировано 3 группы животных. Исследованы пробы кала телят. Бактериологические исследования микрофлоры осуществлялись по общепринятым в микробиологии методикам определения морфологических свойств культур и других микроорганизмов. Телятам на протяжении всего опыта выпаивали молоко, полученное от леченых коров. Пробиотический препарат вводился в молочную железу коровам, больным субклиническим маститом за 2 недели до предполагаемого отела и на 4 день лактации по результатам исследований. Пробы фекалий отбирали на исследование до начала опыта, далее через сутки и на 5 день опыта. Учитывали клиническое состояние телят, прирост живой массы, количество дней с расстройством пищеварения, сохранность поголовья. Установлено, что применение про-биотиков коровам при субклиническом мастите улучшало микробную экосистему желудочно-кишечного тракта у новорожденных телят. Полезная микрофлора увеличивалась за счет содержания молочнокислой микрофлоры, кишечной палочки, ингибирования роста и размножения условно-патогенной микрофлоры, а заболеваемость телят желудочно-кишечными болезнями снизилась в 2,7 раза.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: телята, пробиотик, микрофлора, кишечник, фекалии.
Антибиотики, сульфаниламиды, применяемые для лечения коров с субклиническим маститом длительное время выделяются с секретом как из леченных, так и из здоровых смежных долей молочной железы. Они, попадая с молоком в организм человека и животных, оказывают отрицательное действие на состояние их здоровья [3, 5, 6, 8]. При применении пробиотиков такой опасности нет. Пробиотики, как средство неспецифической профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка, находят признание во всех странах мира с развитым животноводством. Во многих государствах ученые и практики рекомендуют применение пробиотиков для коррекции кишечного биоценоза начиная с первых часов жизни животных [1, 7, 9, 10].
Целью наших исследований явилось изучение влияния пробиотика на основе Bacillus amyloliquefaciens ВКГМ В-10642 (DSM 24614), задаваемого телятам с молоком, на состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта в норме и при расстройстве желудочно-кишечного тракта.
Материалы и методы. Для научно-производственного опыта были отобраны телята черно-пестрой и красной степной пород в возрасте 12-14 дней на ферме учхоза «Донское» Ростовской области. Клинический статус определялся по общепринятым методикам с тщательным исследованием систем организма.
Исследования проводились по следующей схеме:
Животные были разделены на 3 группы (по 6 голов в каждой):
- 1 (К)- контрольная группа;
- 2 (О-1) - здоровые телята, получавшие молоко от коров, прошедших лечение пробиотиком на основе Bacillus amyloliquefaciens;
- 3 (О-2) - группа телята с признаками диспепсии, получавшие молоко от коров, прошедших лечение пробиотиком на основе Bacillus amyloliquefaciens.
Для изучения влияния пробиотика на основе Bacillus amyloliquefaciens на состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта были исследованы пробы кала телят контрольной и опытных групп. Бактериологические исследования микрофлоры осуществляли по об-
щепринятым в микробиологии методикам определения морфологических и других свойств культур микроорганизмов. Пробиотический препарат вводили в молочную железу коровам, больным субклиническим маститом за 2 недели до предполагаемого отела и по результатам исследований на 4 день лактации. После лечения пробиотиком на основе Bacillus amyloliquefaciens молоко выпаивали телятам. Оценку динамики изменений состава микрофлоры проводили исследованием проб кала телят в возрасте 12-14, 13-15 и 18-20 дней.
Пробы фекалий отбирали на исследование до начала опыта. Телятам на протяжении всего опыта выпаивали молоко, полученное от леченых коров. Далее через сутки были взяты пробы фекалий на исследование и на 5 день опыта.
Результаты исследований. Учитывалось клиническое состояние телят, прирост живой массы, количество дней с расстройством пищеварения, сохранность поголовья (табл. 1).
Таблица 1
Показатели клинического состояния телят
Группа Средняя живая масса, кг Количество дней с расстройством пищеварения Сохранность поголовья, %
на начало опыта в конце опыта
К 39,70+5,10 43,12+3,75 - 100,0%
О-1 39,60+2,30 45,46+3,20 - 100,0%
О-2 36,60+4,30 39,69+2,60 5 100,0%
Сохранность поголовья составляла 100% в трех группах, однако во второй опытной группе у исследуемых животных наблюдали расстройство желудочно-кишечного тракта, прирост живой массы у животных первой опытной группы составил 5,86 кг за исследуемый период, в контрольной группе - 3,50 кг, а во второй опытной - 3,09 кг, что практически в 2 раза меньше, чем в первой опытной группе.
В дальнейшем учитывался состав микрофлоры как у телят контрольной, так и у опытных группах (рис. 1).
Установлено, что в кишечнике телят контроль-
ной группы общее микробное число (количество мезофильно-аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов) на протяжении опыта не менялось (рис. 2). В первой и второй опытной группах оно увеличилось на 10,0%. При этом наблюдалось увеличение содержания кишечной палочки в контрольной и первой опытной группах. Во второй опытной группе после выпойки молока через сутки наблюдалось незначительное уменьшение содержания кишечной палочки (190,0±33,17 против 179,0±38,77) (табл. 2).
Таблица 2
Влияние пробиотика на основе Bacillus amyloliquefaciens на состав микрофлоры желудочно-кишечного
тракта телят
Группа микроорганизмов Группа телят Возраст, дни
12-14 13-15 18-20
1 2 3 4 5
К 1,59x106 1,54x106 1,6x106
ОМЧ, млн. КОЕ/г О -1 1,59x106 1,59x106 1,71x106
О -2 1,0x105 1,72x104 1,1x105
К 310,0+45,20 320,0+39,15 335,0+47,40
Е. ооН, млн. КОЕ/г О -1 320,0+42,28 310,0+40,02 340,0+41,0
О -2 190,0+33,17 179,0+38,77 210,0+35,65
К 320,0+40,23 310,0+43,21 330,0+46,30
Молочнокислые, млн. КОЕ/г О -1 300,0+39,25 320,0+40,30 480,0+40,20
О -2 80,0+21,50 120,0+30,10 200,0+33,21
К 3,50+1,05 3,40+1,11 4,02+0,96
Стафилококки, тыс. КОЕ/г О -1 2,80+1,04 2,10+1,02 0,90+1,11
О -2 4,28+1,10 4,0+1,65 3,10+1,78
Продолжение таблицы 2
1 2 3 4 5
К 7,16±2,08 6,89±1,07 7,0+2,01
Стрептококки, млн. КОЕ/г О -1 7,16±2,08 7,11±1,51 5,37+0,42
О -2 16,60±3,04 14,60±6,04 10,60+2,02
К - - -
Citrobakterfreundii О -1 - - -
О -2 выделен у двух телят выделен у одного теленка -
Содержание молочнокислых микроорганизмов возрастало в 1 и 2 опытных группах в 1,6 и 2,5 раза соответственно. Соотношение молочнокислой микрофлоры и кишечной палочки в опытных группах (О-1 и О-2) в начале исследований составило 1,0:1,0 и 1,0:2,4 соответственно. Общая численность молочнокислой микрофлоры в кишечнике телят второй опытной группы в начале исследований была в 2,4 раза меньше по отношению к кишечной
палочке, что указывало на дисбаланс в экосистеме кишечника телят (рис. 3, 4).
Спустя 5 сут соотношение молочнокислой микрофлоры и кишечной палочки изменилось: в первой опытной группе содержание молочнокислой микрофлоры в кишечнике у телят увеличилось и составило 1,4:1,0, во второй опытной группе количество молочнокислых микроорганизмов увеличилось в 2,5 раза, при соотношении 1,0:1,0.
Рис. 1. Количественное содержание индигенной микрофлоры в кале у телят опытных групп.
400 - -
Ii I ■
до опыта
1 день
5 день
□ E.coli, млн.КОЕ/г
□ стафилококки, тыс.КОЕ/г ■ Citrobakter freundü
■ молочнокислые, глнл.КОЕ/г О стрептококки,пллн.КОЕ/г
Рис. 2. Количественный состав микрофлоры у телят контрольной группы.
□ E.coli, млн.КОЕ/r
□ стафилококки, тыс.КОЕ/г I Cirtobakter freundii
Рис. 3. Количественный состав микрофлоры у телят первой опытной группы.
Рис. 4. Количественный состав микрофлоры у телят второй опытной группы.
Из кала двух телят второй опытной группы до начало исследований были выделены энтеропатогенные штаммы СйгоЬа^егй'еипСи, спустя сутки энтеропато-генный штамм С^гоЬаМег^еипСи был обнаружен в фекалиях только у одного теленка.
В трёх опытных группах наблюдалось снижение содержания условно-патогенной микрофлоры - стафилококков и стрептококков, способных на фоне других отрицательных факторов спровоцировать заболевания пищеварительного тракта молодняка крупного рогатого скота.
Литература
Заключение. Таким образом, молоко, полученное из долей, подвергавшихся лечению про-биотиком на основе Bacillus amyloliquefaciens, практически не изменяло микробную экосистему желудочно-кишечного тракта телят. Наоборот, было отмечено изменение микробиологического состава в сторону полезной микрофлоры. Это объяснялось увеличением содержания молочнокислой микрофлоры, кишечной палочки, ингиби-рованием роста и размножения условно-патогенной микрофлоры.
1. Андреева, Н.Л. Альтернатива антибиотикам / Н.Л.Андреева // Международный вестник ветеринарии. -2009. - № 2. - С. 10-13.
2. Обрывков, В.А. Морфологическая характеристика органов пищеварения телят при применении пробио-тика / В.А.Обрывков, Л.В.Харитонов // Профилактика и терапия болезней сельскохозяйственных животных: сб. науч. тр. ВГАУ. - Воронеж, 1994. - С. 147-149.
3. Павленко, О.Б. Лечебная эффективность биологического препарата при субклиническом мастите у коров / О.Б.Павленко, Б.А.Булычева // Экологические проблемы в сельскохозяйственном производстве: материалы молодежной науч. конф. - Ростовская область, пос. Персиановский: Донской государственный аграрный университет, 2002. - С. 92-93.
4. Павленко, О.Б. Морфофункциональное обоснование применения пробиотиков при субклиническом мастите у коров: автореф. дис. ... д-ра биол. наук: 06.02.06 / О.Б.Павленко. - Новочеркасск, 2016. - 45 с.
5. Париков, В.А. Разработка и совершенствование методов диагностики, терапии, профилактики мастита у коров: дис. ... д-ра вет. наук: 16.00.07 / В.А.Париков. - Воронеж, 1990. - 52 л.
6. Париков, В.А. Состояние и перспективы исследований по лечению и профилактике мастита у коров / В.А.Париков // Материалы Всерос. науч. и учеб.-методической конф. по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных. - Воронеж, 1994. - С. 223-224.
7. Подберезный, В.В. Биотерапия и биопрофилактика мастита у коров: автореф. дис ... д-ра вет. наук: 16.00.07 / В.В.Подберёзный. - Воронеж, 1995. - 45 с.
8. Полянцев, Н.И. Мастит у коров в сухостойный период и заболеваемость телят диспепсией / Н.И.Полянцев, Л.Г.Подкуйко // Ветеринария. - 1987. - № 3. - С. 62-65.
9. Распутина, О.В. Этиопатогенетические особенности и терапия массовых болезней коров и телят / О.В.Распутина, М.Н.Шадрина, Н.А.Шкиль // Диагностика, профилактика и лечение болезней животных: сб. тр. Ин-та экс-перим. ветеринарии Сибири и Дал. Востока. - Новосибирск, 2008. - С. 56-60.
10. Использование кормовых добавок «Споротермин» и «Ковелос-сорб» в рационах животных / Н.А.Юрина [и др.] // Сборник науч. тр. Северо-Кавказского научно-исследовательского института животноводства. - 2014. - Т. 2, № 3. - С. 255-260.
PROBIOTIC EFFECT ON DIGESTIVE TRACT MIKROFLORA IN NEWBORN CALVES
1Pavlenko O.B. - Candidate of Veterinary Sciences; 'Suieymanov S.M. - Doctor of Veterinary Medicine, professor; 'Parshin P.A. - Doctor of Veterinary Medicine;
2Mironova L.P. - Doctor of Veterinary Medicine, professor.
'Emperor Peter the Great Voronezh State Agrarian University, Voronezh (e-mail: [email protected]).
2North Caucasian Areal Research Veterinary Institute, Novocherkassk (e-mail: [email protected]).
In cows having mastitis cows during the dry period remains the infection until calving period. However, as the lactation period starts the exudates which has been collected in the infected breast part can easily remain unnoticed after the repeated delusion with colostrum. Entering the newborn calve gastrointestinal tract the inflammation products can cause heavy digestive disorders with toxic signs and high lethal rate. At treatment of mastitis with antibiotics they are taken up with a colostrum. The aim of the studies was to study the effect of Bacillus amyloliquefaciens - based probiotic additive intoroduced to newborn calves with milk from cows with mastitis, three groups of animals were formed. During the experiment calves were fed with the milk received from the cows under the treatment. The samples of calves feces was studied using conventional microbiological methods. The probiotic drug was introduced into mammary gland of cows with subclinical mastitis two weeks before the supposed calving day at 4 days of lactation. Fecal samples were selected before the experiment, at one day and five days of the experiment. Also the calves clinical state, daily weight gain, days with diarrhea, survival rate were taken into consideration. The studies showed that use of probiotics in cows with subclinical mastitis improved a microbial ecosystem in digestive tract at newborn calves. The number of useful microflora increased due to the content of lactic microflora, colibacillus, inhibition of growth and reproduction of opportunistic microflora, while sickness rate with gastrointestinal diseases reduced by 2.7 times.
KEYWORDS: calves, probiotic, microflora, intestines, excrements.
References
1. Andreeva, N.L. Al'ternativa antibiotikam [Alternative to antibiotics] / N.L.Andreeva // Mezhdunarodnyj vestnik veterinarii. - 2009. - № 2. - P. 10-13.
2. Obryvkov, V.A. Morfologicheskaja harakteristika organov pishhevarenija teljat pri primenenii probiotika [The morphological characteristic of digestive organs of calfs at application of a probiotic] / V.A.Obryvkov, L.V Haritonov // Profilaktika i terapija boleznej sel'skohozjajstvennyh zhivotnyh: Sbornik nauchnyh trudov. VGAU. - Voronezh, 1994. - P. 147-149.
3. Pavlenko, O.B. Lechebnaja jeffektivnost' biologicheskogo preparata pri subklinicheskom mastite u korov [Medical efficiency of biological medicine at subclinical mastitis at cows] / O.B.Pavlenko, B.A.Bulycheva // Jekologicheskie problemy v sel'skohozjajstvennom proizvodstve: materialy molodezhnoj nauchnoj konferencii. - Donskoj gosudarstvennyj agrarnyj universitet, 2002. - P. 92-93.
4. Pavlenko, O.B. Morfofunkcional'noe obosnovanie primenenija probiotikov pri subklinicheskom mastite u korov [Morfofunktsionalny justification of application of probiotics at subclinical mastitis at cows]: abstract from dissertation for Doctor of Veterinary Medicine: 06.02.06 / Pavlenko Ol'ga Borisovna. - Novocherkassk, 2016. - 45 p.
5. Parikov, V.A. Razrabotka i sovershenstvovanie metodov diagnostiki, terapii, profilaktiki mastita u korov [Development and improvement of diagnostic methods, therapies, prophylaxes of mastitis at cows]: dis. v forme nauch. dokl.d-ravet.nauk: 16.00.07 / V.A.Parikov. - Voronezh, 1990. - 52 p.
6. Parikov, V.A. Sostojanie i perspektivy issledovanij po lecheniju i profilaktike mastita u korov [State and prospects of researches on treatment and prophylaxis of a mastitis at cows] / V.A.Parikov // Materialy vserossijskoj nauchnoj i uchebno-metodicheskoj konferencii po akusherstvu, ginekologii i biotehnike razmnozhenija zhivotnyh. - Voronezh, 1994. - P. 223-224.
7. Podbereznyj, V.V. Bioterapija i bioprofilaktika mastita u korov [Biotherapy and bioprevention of mastitis at cows]: abstract from dissertation for Doctor of veterinary Medicine: 16.00.07 / V.V.Podberjoznyj. - Voronezh, 1995. - 45 p.
8. Poljancev, N.I. Mastit u korov v suhostojnyj period i zabolevaemost' teljat dispepsiej [Mastitis at cows during the sukhostoyny period and incidence of calf's of dyspepsia] / N.I.Poljancev, L.G.Podkujko // Veterinarija. - 1987. - № 3. - P. 62-65.
9. Rasputina,O.V. Jetiopatogeneticheskie osobennosti i terapija massovyh boleznej korov i teljat [Etiopatogenetichesky features and therapy of mass diseases of cows and calfs] / O.V.Rasputina, M.N.Shadrina, N.A.Shkil' // Diagnostika, profilaktika i lechenie boleznej zhivotnyh: In-t jeksperim. veterinarii Sibiri i Dal. Vostoka. - Novosibirsk, 2008. - P. 56-60.
10. Jurina, N.A. Ispol'zovanie kormovyh dobavok «Sporotermin» i «Kovelos-sorb» v racionah zhivotnyh [Use of Sporotermin and Kovelos-sorb feed additives in diets of animals] / N.A.Jurina [et al.] // Sbornik nauchnyh trudov Severo-Kavkazskogo nauchno-issledovatel'skogo instituta zhivotnovodstva. - 2014. - Vol. 2, № 3. - P. 255-260.
УДК 619:611.018.54:59.111
ВЛИЯНИЕ АПИФИТОПРЕПАРАТА НА МИКРОБНЫЕ КОНТАМИНАНТЫ КУЛЬТУРАЛЬНЫХ СРЕД
З.Г.Чурина - соискатель.
ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», Казань (420075, г.Казань, Научныйгородок-2, тел.+7(843) 239-53-20, e-mail: [email protected]).
Целью работы явилась оценка антимикробной активности биополимера - хитозана и хитинсодержащего препарата - апифитоэкстракта, полученного на основе биологически активных продуктов пчеловодства (БАПП). Биополимерхитозан был получен из ООО «Фармакор» (Санкт-Петербург), а апифитоэкстракт (АФЭ) - из биологически активной композиции «Вита-Форце» путем этанолового экстрагирования хитинсодержащего препарата. В качестве тест-микробов использовали мезофильные аэробные и факультативно анаэробные микробы (КМАФиМ), выделенные из мышечных экстрактов коров, используемых в биотехнологии для культивирования клеток при производстве вирусных вакцин. Для изучения антимикробного действия, из испытуемых препаратов готовили 0,1-1,0%-ные растворы хитозана и апифитоэкстракта, которые вносили в пробирки, содержащие КМАФиМ в концентрации 2*10 КОЕ/мл и оставляли на 1-48 ч при температуре 22'С. По истечении указанных экспозиций производили посевы из микробных суспензий с испытуемыми препаратами на МПБ и МПА, подсчитывая количество выживших микроорганизмов. Результаты микробиологических исследований показали, оба испытанных препарата обладали достаточно высокой бактерицидной активностью, вызывая гибель тест-микробов через 24 ч после контактирования с 0,44%-ным (хитозан) и 1%-ным (АФЭ) растворами на испытуемых агентах. Таким образом, апифитоэкстракт на основе БАПП обладает высокой антибактериальной активностью и безвредностью и может применяться в качестве антимикробного агента при культивировании клеток взамен антибиотиков - деконтаминантов.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: культура клеток, культуральные питательные среды, апипрепараты, биополимеры, хитин,хитозан.
