CC BY
43
Влияние препарата "реамберин для инфузий" на функциональное состояние печени на разных сроках экспериментальной механической желтухи
С.А.Алекберова, Ф.Г.Джамалов, И.А.Шафиев, Э.В.Набиева, М.М.Мурсалов
Азербайджанский медицинский университет, г.Баку
По данным различных авторов в последнее время отмечается рост заболеваний гепатопанкре-атодуоденальной зоны, сопровождающихся нарушением физиологического оттока желчи. Частота развития механической желтухи (МЖ) при этих заболеваниях варьирует от 12 % до 45,2% и зависит от характера основной патологии [1,2]
Актуальность проблемы МЖ объясняется сохраняющимся высоким процентом послеоперационных осложнений, достигающим 24-54%, а также высокой летальностью, которая составляет от 7,2 до 60 % [3, 4, 5].
Одной из основных причин высокой летальности является развивающаяся функциональная дестабилизация печени, которая усугубляет эндогенную интоксикацию при механической желтухе, что приводит в свою очередь к глубоким расстройствам деятельности органов и систем организма [6].
В связи с развитием желчной гипертензии происходит нарушение выделения билирубина в желчные пути, что в свою очередь оказывает токсическое действие на гепатоциты с нарушением их функции и ведет к изменению свойств и структуры клеточных мембран, что обусловлено изменением состава мембранных липидов, холестерина и жирных кислот, нарушением активности мембраносвя-занных ферментов [7].
Выраженность и характер морфологических изменений в ткани печени зависит также от интенсивности и длительности желтухи [8].
Это обусловлено тем, что при длительной би-лиарной обструкции в печени происходят резко выраженные некробиотические, дегенеративные и деструктивные изменения, которые приводят к развитию печеночной, а затем и к полиорганной недостаточности [9].
Большая роль печеночно-клеточной недостаточности в патогенезе механической желтухи неопухолевой этиологии обусловливает важность своевременной интенсивной комплексной терапии,
способной предупреждать развитие необратимых нарушений структуры и функции печени. По мнению большинства хирургов, лечение необходимо начинать с консервативных мероприятий, которые должны способствовать улучшению свойств и структуры клеточных мембран, коррекции белкового и электролитного дисбаланса, снижению интоксикации, гипоксии, восстановлению энергетического потенциала, ликвидации печеночной недостаточности и воспалительных инфекционных явлений в желчных протоках [10, 11].
Таким образом, в настоящее время остается актуальной проблема поиска средств и методов своевременной интенсивной комплексной терапии, способной предупреждать развитие необратимых нарушений структуры и функции печени.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Изучение влияния препарата реамберин 1,5%-ный для инфузий на функциональную активность печени на разных сроках экспериментальной механической желтухи у крыс.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Экспериментальные исследования были проведены на 80 белых крысах линии Вистар обоего пола массой 180-220 г. Метки и индивидуальные номера животных регистрировали в протоколах лабораторных испытаний. Животных содержали в условиях вивария на неограниченном потреблении корма и воды. Ограничение потребление корма было только в день операции. Лапаротомия и забор крови выполнялись после вывода животных из эксперимента методом декапитации под анестезией. Все манипуляции с животными проводили в соответствии с Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (ЕТS N 123, Страсбург, 18 марта 1986 г.).
Механическую желтуху вызывали у крыс путем наложения лигатуры на внепанкреатический участок общего желчного протока под наркозом. Крысам под общей анестезией проводилась срединная лапарото-мия, органы брюшной полости сдвигались и выделялся общий желчный проток. Общий желчный проток перевязывался двумя лигатурами 4-0, после чего органы брюшной полости крысы аккуратно возвращались на
прежнее положение, и проводилось послойное ушивание операционной раны.
Животных делили на 4 группы. 1 Группа (п=5) являлась контрольной. Животным 2 группы (опытной) (п=25) перевязывался желчный проток с целью создания модели механической желтухи, 3-ей группе (п=25), после создания у них механической желтухи, начиная со дня развития холестаза вводили 1,5% раствор Реамбе-рина (ООО "ПОЛИСАН", Россия). 4-ой группе (п=25) этот же препарат начинали вводить спустя 3 суток после создания у них модели механической желтухи. Препарат из-за большого объема (0,16мл) вводили внутрибрюшинно в дозе 10 мг/кг. Введение препарата проводилось ежедневно. Животных 2, 3 и 4-ой группы в свою очередь делили на 5 подгрупп, в каждой по 5 голов соответственно. Такое деление производилось с учетом того, что у крыс производился забор крови для биохимических исследований на 1, 3, 7, 10 и 15 сутки после моделирования у них механической желтухи. Для биохимических анализов кровь после введения миорелак-санта животным, забиралась из брюшной аорты в 5 гр-е шприцы и переливалась в стерильные пробные пробирки. После проведения этой крови через центрифугу с частотой 3000 в 10 мин., отделенная от форменных элементов плазма забиралась пипеткой и переливалась в другую стерильную пробирку и направлялась для проведения требуемых анализов в соответствующие лаборатории. Биохимические анализы выполнялись в Научно-Исследовательский Центре АМУ, а также в лаборатории учебно-хирургической клиники АМУ.
Степень холестаза оценивали по количеству циркулирующего в плазме крови общего билирубина, по уровню гамма-глутамилтранспептидазы (ГГТП). Активность патологического процессав печени (цитолиз) оценивали по уровню активности щелочной фосфата-зы (ЩФ) и аланинаминотрансферазы (АЛТ). Биохимические параметры крови - общий билирубин, общий белок, щелочная фосфатаза (ЩФ), аспартатаминотра-нсфераза (АсАТ) гаммаглутамилтранспептидаза (ГГТП) - исследовали с помощью наборов реагентов по общепринятым методикам.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ. После перевязки общего желчного протока наблюдается многократное повышение таких показателей как билирубин, АСТ, ЩФ, ГГТП, а также изучаемых цитокинов. С первых же суток мы наблюдаем двукратное увеличение содержания билирубина в сыворотке крови и по мере увеличения длительности холестаза отмечается все большее его нарастание. Так на 3-и сутки его уровень превышает норму в 7,3 раза (45,1±4,1), на 7-е в 9,2 раза (57,5±6,9), и всё ещё возрастая, к 15 дню заболевания, достигает максимального своего значения, равного 82,0±6,4мкм/л, что в 13,2 раза превышает норму (р<0,01). В то же время, отмечается существенное нарушение белоксинтезирующей функции печени - к 7-м суткам уровень общего белка снизился на 57% по сравнению с нормой. Наряду с
этим, отмечалось повышение активности внутриклеточных ферментов: уровень аспартатаминотра-нсферазы (АСТ) возрос уже с первых суток в 2,8 раза, щелочной фосфатазы (ЩФ) - в 1,4 раза, а гаммаглютамилтранспептидазы (ГГТП) - в 8,7 раз (р<0.01) по сравнению с контрольными данными (таблица). Далее наблюдалось достоверное повышение данных показателей вплоть до 10-х суток, а затем резкое снижение к 15-м суткам, что возможно было связано с глубокими нарушениями в функциональной активности печени. Механизм увеличения рассматриваемых показателей связывают с усилением синтеза фермента в гепатоцитах и попаданием их в сыворотку с плазматической мембраны клеток. Наблюдаемые в данной группе изменения свидетельствовали о развитии выраженного холестатического и цитолитического синдромов.
Выполнение третьей и четвертой серий экспериментов было обусловлено необходимостью изучения влияния препарата "реамберин 1,5%-ный для инфузий" на функциональное состояние печени при механической желтухе у крыс. Применение данного препарата выявило положительную динамику в биохимических показателях (таблица 1). Так, в третьей группе, на 3-и сутки после введения реамберина отмечается снижение в динамике АСТ на 68,2% по сравнению с основной группой (р<0,01), ГГТП - на 72,7% (р<0,01). Наблюдаемая положительная динамика внутриклеточных ферментов печени (АСТ, ЩФ, ГГТП) свидетельствует об улучшении функции печени, уменьшении повреждения мембран гепатоцитов. В нашем эксперименте не предусматривался этап разрешения под-печеночного холестаза и восстановления желчеот-тока, поэтому нами не были выявлены достоверные отличия в отношении общего билирубина, несмотря на незначительное снижение его показателей после лечения по сравнению с основной группой.
По сравнению с третьей группой, в четвертой наблюдалась относительно менее положительная динамика изучаемых показателей. Так например, при исследовании ферментов печени, было обнаружено что по мере длительности холестаза, хотя и происходило снижение их уровня после введения препарата, но, по сравнению с третьей группой, где лечение начиналось непосредственно сразу после операции, в четвёртой они оставались все ещё высокими. К примеру, если значения АСТ к 7 суткам в третьей группе снизились на72,2%, то в четвёртой группе этот же показатель снизился на 64,4% (р<0,05), а значения ЩФ если в третьей снизились на 38,5%, то в четвёртой - на 32,9%.
Таблица 1. Результаты исследования ФНО-а
ФНО-а (интакг. - 4,66t0,23)
1сугки 3 сутки 7 сутки 10 сутки 15сугки
Основ, гр. 17,4&tl,39 14,7-22,4 21,3±1,13 19,34-25,6 18,8&t2,43 11,2-26,5 10,3± 1,44 5,8-14,9 6,8±0,65 4,8-8,9
Лечение с 1-х суток м/ж 10,10*1,34 5,8-14,2** 6,22=Ш,41 5,1-7,4* 5,32±0,18 5-5,9 5,1 OttO ,30 4,1-6 4,96t0,29 4,2-6
Лечение с 3-го дня м/ж 7,4 OttO, 62 5,5-9,4** 6,60=Ю,37 5,6-7,7** 5,72 ±0,33 4,7-6,7* 4, &t0,21 4,11-5,44 4,81±0,22 4,13-5,49
Примечание: статистическая значимость различий с показателями контрольной фуппы: * - р<0,05; ** -р< 0,01
Таблица 2. Результаты исследования ИЛ-6
ИЛ-6 (интакг - 0,746=Ю,149)
1сутки Зсутки 7 сутки 10 сутки 15 сутки
Основ, гр. 6,474±0,425 5,15-7,51 9,34&t0,401 8,1-10,3 13,580*3,364 3,4-24,5 7,6*1,341 4,8-12,7 4,06 OttO,635 2,2-6,1
Лечение с 1-х суток м/ж 3,60tt0,367 2,6-4,5** 1,70±0,247 1-2,5* 1,254*0,124 0,88-1,66* 0,914*0,094 0,62-1,21 0,836¿0,069 0,67-1,08
Лечение с 3-го дня м/ж 2,040*0,233 1,28-2,73** 1,70 OttO,125 1,3-2,08** 1,382±0,059 1,21-1,56** 0,87 OttO,122 0,49-1,26 0,842t0,069 0,64-1,05
Примечание: статистическая значимость различий с показателями контрольной фуппы: * -р<0,05; ** -р<0,01
При изучении активности провоспалительных цитокинов - интерлейкина-6 (ИЛ-6) и фактора нек-ротизирущего опухоль (ФНО-а) в сыворотке крови экспериментальных животных отмечается значительное повышение их уровня по сравнению с контрольной группой. Концентрация этих цитоки-нов в крови возрастала по мере увеличения продолжительности моделированной механической желтухи и достигла максимальной концентрации в случае с ИЛ-6 к 7 суткам, будучи в 18,2 раза выше нормы, а уровень ФНО-а уже к 3 суткам в 4,6 раз превышал норму. Это объясняется активацией выработки провоспалительных цитокинов при патологическом процессе. Далее наблюдалось некоторое снижение уровня исследуемых цитокинов, что объясняется истощением иммунной системы, выраженной потерей гепатоцитов вследствие некроза или апоптоза, что совпадает с мнением ряда исследователей. После применения "Реамберина" отмечалось последовательное снижение выработки исследуемых цитокинов, хотя так же как и в случае с печёночными ферментами, по сравнению с третьей группой, в четвертой наблюдалась относительно менее положительная динамика изучаемых показателей (таблицы 1 и 2).
ВЫВОДЫ:
1. В результате проведенного эксперимента, выявлено выраженное позитивное влияние препарата "1,5% раствор Реамберина для инфузий" на динамику большинства исследуемых показателей.
2. В ходе проводимого лечения, отмечена эффективность данного препарата в снижении интенсивности холестатического и цитолитического синдромов, а также выработке провоспалительных цитокинов.
3. Сравнительный анализ эффективности препарата при введении его непосредственно в день развития холестаза и спустя 3 суток, показал более удовлетворительные результаты при раннем начале лечения.
ЛИТЕРАТУРА
1. Agayev В.А.,СэггаЫ xsstslikbr. Baki: Maarif, 2008, s.572.
2. Williams E., Beckingham I., Sayed G. et al. Updated guideline on the management of common bile duct stones (CBDS) // Gut. 2017, v.66(5), p.765-782.
3. Елисеев С.М., Корнилов Н.Г., Чикотеев С.П. и др. Обоснование хирургической тактики при механической желтухе // Бюл. ВСНЦ СО РАМН, 2010, № 5(75), с. 233-239.
4.Ничитайло М.Е., Огородник П.В., Дейниченко А.Г. Миниин-вазивная хирургия доброкачественной обструкции дистального отдела общего желчного протока // Укр. журн. Хiрурrii', 2013, № 3, с. 45-49.
5. Катанов Е.С., Вазанов А.А., Анюров С.А. и др. Угнетение функции печени после операций по поводу желчнокаменной болезни / Матер. XI съезда хирургов России. 2011, с. 45-46.
6. Лаптев В.В. Румянцева С.А., Цкаев А.Ю. и др. Применение препарата Гепа-Мерц при механической желтухе неопухолевого генеза // Лiки Укра'ни, 2010, №139, с.87-91.
7. Иоффе И.В., Потеряхин В.П. Динамика изменений биохимических показателей крови у больных при обтурационной желтухе, обусловленной холедохолитиазом, под влиянием плазма-фереза // Клин. Хирургия, 2010, №4, с.19-20.
8. Паршиков В.В., Измайлов С.Г., Яковлева Е.И. и др. Ультраст-
руктурные изменения печени при механической желтухе различной этиологии и перспективы применения гепатопротекто-ров // Успенские чтения, 2003, Вып. З, с.206-207.
9. Weber A. Complications of percutaneous transhepatic biliary drainage in patients with dilated and nondilated intrahepatic bile ducts // Eur. J. Radiol., 2009, v.72(3), p.412-417.
10. Лаптев В.В. Румянцева С.А., Цкаев А.Ю. и др. Применение препарата Гепа-Мерц при механической желтухе неопухолевого генеза // Лжи Украши, 2010, №139, c. 87-91.
11. Александров Л.В., Ачкасов Е.Е., Негребов М.Г. Нарушение трофического статуса и его коррекция у больных с механической желтухой, обусловленной желчнокаменной болезнью // Московский хирургический журнал, 2010, №1, с. 27-31.
SUMMARY
Influence of "reamberin for infusion" preparation on functional condition of liver at different periods of experimental obstructive jaundice S.Alekberova, F.Jamalov, I.Shafiyev E.Nabiyeva, M.Mursalov Azerbaijan Medical University, Baku
In the article have been studied the changes of the biochemical indicators in the blood of rats after the jaundice creating. In the first phase of the study, after
the establishment of experimental cholestasis in animals, the significant increase of biochemical parameters were observed a day later the experiment creating and their concentration were depend on the term of jaundice. In the second and third phases of the study in treatment of the jaundice was used the solution of "Reamberin for infusion". As a result, the effect of the drug used to reduce the intensity of cytolytic and cholestatic syndromes, inhibition of the proinflammatory cytokines production have been identified, and more satisfactory results have been achieved at early started treatment.
Поступила: 08.11.2018
