CC BY
9Львов И.Ф., Барабаш Р.Д., Володкина В.В. // Вопросы медицинской химии. - 1973. - Т. 19, № 6. - С. 633-638.
11. Левицкий А.П., Марченко А.И., Рыбак Т.Л. Сравнительная характеристика трех методов определения фосфатаз слюны человека // Лабораторное дело. - 1973. - № 10. - С. 624-625.
12. Каролюк М.А., Иванова Л.И., Майорова Н.Т., Токарев К.Е. Метод определения активности ка-талазы / Лабораторное дело. - 1988. - № 1. - С. 16-18.
13. Левицкий А.П. Лизоцим вместо антибиотиков. - Одесса: КП ОГТ, 2005. - 74 с.
14. Маркеры воспаления в тканях полости рта при экспериментальном дисбактериозе / Левицкий А.П., Макаренко О.А., Россаханова Л.Н., Кнава О.Э., Романова Ю.Г., Ткачук Н.И.// Патологія. - 2008. -Т. 5, № 2. - С. 16.
15. Колесников М.П., Гинс В.К. Фенольные соединения в лекарственных растениях // Прикладная биохимия и микробиология. - 2001. - Т. 37, № 4. -С. 457-465.
16. Лобанова А.А., Будаева В.В., Сакович Г.В.
Исследование биологически активных флавоноидов в экстрактах из растительного сырья // Химия растительного сырья. - 2004. - № 1. - С. 47-52.
Поступила 12.05.09.
УДК 616-092.19.4+678.746.47
Е. К. Ткаченко, к. биол. н.,
М. А. Кузембаева, А. И. Перова, к. мед. н.,
С. В. Носийчук, К. Н. Косенко, д. мед. н.
ГУ «Институт стоматологии АМН Украины»
ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА РАСТИТЕЛЬНЫХ ПОЛИФЕНОЛОВ НА РЕГЕНЕРАЦИОННЫЕ ПРОЦЕССЫ ПРИ ДОЗИРОВАННОЙ ТРАВМЕ ДЕСНЫ КРЫС В УСЛОВИЯХ ДЕЙСТВИЯ ЭПИТЕЛИОТРОПНОГО ТОКСИКАНТА
В опытах на 23 белых крысах-самцах 3-мес. возраста изучали защитные эффекты растительных полифенолов на регенерационные процессы в тканях десны в условиях экспериментальной травмы и введения ге-нотоксиканта. Установлено, что генотоксикант ДДЕ усугублял течение раневого процесса и увеличивал на 30 % скорость эпителизации соединительной ткани слизистой оболочки десны крыс. Препарат ПФ4 - комбинация концентратов полифенолов проростков злаковых и наземной части тысячелистника в условиях травмы и токсического влияния ДДЕ оказал выраженное защитное действие на течение раневого процесса и заживление слизистой оболочки десны крыс.
Ключевые слова: дозированная травма, генотоксикант, регенерационные процессы, растительные полифенолы, защитное действие.
Є. К. Ткаченко, М. О. Кузембаєва, Г. І. Перова, С. В. Носійчук, К. М. Косенко
ДУ «Інститут стоматології АМН України»
ВПЛИВ ПРЕПАРАТУ РОСЛИННИХ ПОЛІФЕНОЛІВ НА ПРОЦЕСИ РЕГЕНЕРАЦІЇ ПРИ ДОЗОВАНІЙ ТРАВМІ ЯСЕН ЩУРІВ В УМОВАХ ДІЇ ЕПІТЕЛІОТРОПНОГО ТОКСИКАНТА
У дослідах на 23 білих щурах-самцях 3-міс. віку вивчали захисні ефекти рослинних поліфенолів на процеси регенерації в тканинах ясен в умовах експериментальної травми і введення генотоксиканта. Встановлено, що генотоксикант ДДЕ посилював перебіг раневого процесу і збільшував на 30 % швидкість епітелізації сполучної тканини слизистої оболонки щурів. Препарат ПФ4 - комбінація концентратів поліфенолів проростків злакових і наземної частини дерев’я в умовах травми і токсичного впливу ДДЕ надав виражену захисну дію на перебіг раневого процесу і загоєння слизової оболонки ясен щурів.
Ключові слова: дозована травма, генотоксикант, процеси регенерації, рослинні поліфеноли, захисна дія.
E. K. Tkachenko, M. A. Kusembaeva,
A. I. Perova, S. V. Nosijchuk, K. N. Kosenko
SE “The Institute of Dentistry of the AMS of Ukraine”
THE INFLUENCE OF THE PREPARATION OF VEGETATIVE POLYPHENOLS UPON THE REGENERATIVE PROCESSES AT THE DOSED TRAUMA OF RAT’S GUM AT THE INFLUENCE EPITHELIOTROPIC TOXICANT
The protective effects of the vegetative polyphenols upon the regenerative processes in gingival tissues under the experimental trauma and introduction of genotoxicant were studied during the experiments of 23 white he-rats of 3 months old. Genotoxicant DDE was determined to worsen the course of wound process and to increase the speed of epithelization of rats ’ mucosa connective tissue by 30%. The preparation PF4 - the combination of the concentrates of polyphenols of cereal germs and aboveground part of milfoil under the conditions of trauma and toxic influence of DDE has displayed the expressed protective influence upon the course of wound process and healing of rats’ mucous membrane.
Key words: dose trauma, genotoxicant, regenerative processes, vegetative polyphenols, protective effect.
© Ткаченко Е. К., КузумбаееаМ. А., Перова А. И., Носийчук С. В.,
Косенко К. Н., 2009
В последнее время в окружающей среде существенно возросло содержание экотоксикантов, оказывающих патогенное воздействие на организм человека. Эпителий слизистой оболочки полости рта (СОПР) в той или иной мере испытывает влияние разнообразных повреждающих агентов.
Ранее в наших исследованиях было показано, что эпителиотропные токсиканты - поли-хлорбифенилы (ДДЕ) и некоторые бицикличе-ские барбитураты (фенобарбитал) вызывают в эпителиальном пласте СОПР увеличение патологических митозов и повреждение хромосом [1]. Изменение уровня пролиферации сопровождалось воспалительно-деструктивными изменениями.
Возникновение стоматологической патологии в значительной степени связано с уровнем резистентности тканей ротовой полости к повреждающим факторам среды. Важную роль для гомеостаза и неспецифической резистентности организма играют растительные полифенолы, которые в настоящее время привлекают внимание исследователей не только как объект изучения, но и в качестве перспективных веществ для получения лекарственных средств.
В растениях ПФ встречаются большей частью в виде гликозидов, реже - агликонов [2]. В природе они в основном обнаружены в высших растениях. Гликозиды содержатся в тканях активного роста (листьях, почках, цветках).
Злаковые культуры - пшеница мягкая (Triti-cum aestivum), овёс посевной ( Avena sativa L.), рожь посевная (Secale cereale L.) богаты ПФ, в частности, С-гликозидами. В листьях пшеницы (как и в листьях овса) выявлены трицин, лютео-лин, апигенин и их гликозиды - (изо)ориентин, (изо)витексин [3]. Трава тысячелистника обыкновенного (Achillea millefolium L.), издавна применяемая как пищевое растение у разных народов, обладает широким спектром фармакологической активности. Она содержит органические кислоты, эфирные масла, дубильные вещества, ПФ (до 3 %) - кверцетин, апигенин, лютеолин, кемпферол, изорамнетин и их гликозиды [4,5].
Кверцетин, рутин, кемпферол и их гликози-ды известны как признанные противовоспалительные средства. Противовоспалительная активность обнаружена у апигенина, лютеолина и их гликозидов [6]. В настоящее время для этих веществ установлены также антимутагенные свойства [7].
В ИСАМН Украины была разработана лабораторная технология получения препарата ПФ — комбинацию концентратов ПФ проростков злаковых (пшеницы, овса, ржи и наземной части тысячелистника) в соотношении 2:1:1:1 [8].
Данные об адаптогенных свойствах ПФ вызвали интерес к оценке их влияния на пролиферативную активность тканей.
Цель настоящего исследования. Изучение защитных эффектов растительных ПФ на регенерационные процессы в тканях десны в условиях экспериментальной травмы и введения гено-токсиканта у крыс.
Материалы и методы исследования. Эксперимент был проведен на 23 белых крысах-самцах 3-мес. возраста средней массой 283±15г. Животным под наркозом (калипсол в дозе 20 мг/кг внутрибрюшинно) наносили дозированную травму десневого края резца. Для этого узким острозаточенным глазным скальпелем отслаивали десневой край в области правого резца нижней челюсти крыс и прямыми глазными ножницами, на острых краях которых были сделаны отметки «3 мм», иссекали лоскут треугольной формы. Таким образом воспроизводили дефект десневого края фиксированного размера. Крысы всех групп содержались на стандартном рационе вивария. Животные были распределены на 3 группы: 1-ая - контрольная (8 крыс), которым была нанесена травма; крысам 2-ой группы (8) на фоне травмы вводили токсикант ДДЕ (2,2-Bis(4-chicrophenyl)-2 dichloroethylene) фирмы Acros or-ganics, USA. ДДЕ является основным метаболитом ДДТ. Раствор ДДЕ в персиковом масле вводили в дозе 3,5 мг/кг массы тела 5 раз в неделю. Животным 3-ей группы (7 крыс) на фоне травмы и введения токсиканта per os давали препарат ПФ4 в дозе 0,2 мл/крысу массой 200 г.
Процесс заживления контролировали по клиническим признакам воспаления: формирование лейкоцитарного вала (наличие отёка, наличие гнойного содержимого, наличие кровоточивости), отторжение некротических масс, формирование молодой грануляционной ткани, уменьшение площади раневой поверхности за счёт эпителизации ткани. Площадь остаточной части раневой поверхности, не заполненной некротическими массами, вычисляя по формуле:
S=V p(p-a)(p-b)(p-c), где р - полупери-
метр; a, b, c - длины сторон треугольника.
Осмотр раневой поверхности проводили ежедневно, начиная со 2-го дня нанесения стандартной травмы, фиксировали клинические признаки течения раневого процесса. Животным, у которых было зафиксировано выздоровление, дальнейший осмотр не проводили.
Результаты экспериментов обрабатывали статистически с использованием критериев достоверности различий по Стьюденту в модификации.
Результаты исследований и их обсуждение. Клинические наблюдения за состоянием дозированной травмы десны показали, что, начиная со 2-го дня эксперимента у всех животных групп «Контрольной» и «Травма+ДДЕ» слизистая оболочка десневого края была сильно отёчна, гипе-ремирована, раневая поверхность покрыта густым гнойным отделяемым. В группе крыс, получавших препарат растительных ПФ на фоне травмы десны и введения ДДЕ («Трав-ма+ДДЕ+ПФ4»), у части животных в эти же сроки были менее выражены кровоточивость и гнойное отделяемое из раны.
Рассмотрим динамику заживления дозированных травм слизистой десневого края крыс в «Контрольной» группе.
Формирование лейкоцитарного вала со всеми проявлениями клинических признаков наблюдалось в этой группе, в основном, в течение 6 дней. На 5-ый день осмотра отёк, кровоточивость и гнойное содержимое раневой поверхности снижалось у большей части животных. Отторжение некротических масс началось с 5-го дня осмотра у 3-х крыс и завершилось на 7-ой день (у 2-х крыс). К 6-му дню гноетечение из раны у всех крыс этой группы не выявлялось, отёк и кровоточивость были зафиксированы у 2-х крыс. На 5-й день фиксировали отторжение некротических масс у 3-х, а на 7-й день - у 2 крыс (табл. 1).
В контрольной группе на 6-й день опыта началось формирование молодой грануляционной ткани у 1 крысы (12,5%); на 7-й день - у 5 крыс (62,5%) и закончилось на 9-й день - у 1 крысы (табл. 1).
Полная эпителизация, начавшаяся на 7-й день у 1 крысы, завершилась к 10-у дню осмотра
- у 8 крыс (100%).
Средняя площадь травмированной поверхности на 2-й день осмотра составляла 8д=2,22±0,26 мм2; на 5-й день наблюдения она снизилась и составила 8д=1,14±0,21 мм2, а на 7-й
- она соответствовала 8д=0,45±0,19 мм2 (табл. 2).
Слизистая оболочка поверхности раны десневого края большего числа крыс группы «Трав-ма+ДДЕ» даже к 5-му дню осмотра оставалась значительно отёчной, гиперемированной, у большинства крыс группы проявлялись отек и кровоточивость. Скорость формирования лейкоцитарного вала в этой группе, по сравнению с контрольной, значительно снижалась и продолжалась вплоть до 8-го дня.
Отторжение некротических масс началось на
6-й день эксперимента у 3 крыс (37,5%); у 50%
животных продолжалось до 9-го дня; на 10-ый день определялось у 1 крысы (12,5%) (табл. 1).
Формирование молодой грануляционной ткани в группе «Травма+ДДЕ» наступило позже, чем в «Контрольной» группе: на 7-й день оно было выявлено у 2 крыс (25%); на 9-й - у 3-х крыс (37,5%) и на 12-й день - у 1 крысы (12,5%).
Эпителизация раневой поверхности наступала в этой группе позже, чем в «Контрольной» и началась на 8-й день у 2 крыс (25%). На 12-й день осмотра эпителизация наблюдалась у большего числа крыс - у 7 (87,5%) и завершилась на 13-й день опыта (100%) (табл. 1).
Средняя площадь раневой поверхности в группе «Травма+ДДЕ» была более значительной и по мере заживления снижалась медленнее, чем в «Контрольной» группе. Так, со 2-го дня осмотра она составила - 8д=2,65±0,044 мм2; на 5-й день
- 8д=2,55±0,09 мм2 (р<0,001). На 7-й день осмотра средняя площадь поверхности раны была в 2,5 раза большей, чем в «Контрольной» группе за этот же период (8д=1,13±0,02 мм2, р<0,001). На 10-й день опыта она составляла у 4 крыс 8д=0,56±0,16 мм2.
Таким образом, в группе «Травма+ДДЕ» об-разовние лейкоцитарного вала, формирование молодой грануляционной ткани, эпителизация наступали существенно медленнее, чем в других группах, что свидетельствует о токсическом влиянии ДДЕ на течение раневого процесса и заживление травмы.
В группе крыс, получавших препарат растительных полифенолов на фоне травмы десны и введения ДДЕ («Травма+ДДЕ+ПФ4») осмотр раневой поверхности выявил следующее. Уже со 2го дня наблюдений в этой группе гнойное содержимое и кровоточивость раневой поверхности фиксировали у 4 крыс из 7 (57,1%). На 3-й день осмотра кровоточивость определялась у всех 7 крыс группы. Начиная с 5-го дня состояние лейкоцитарного вала резко изменилось. Гнойное содержимое раны и кровоточивость фиксировали на 5-ый день у 2-х животных (28,6 %). В то же время отёк наблюдался у всех крыс вплоть до 8-го дня наблюдений. На 6-й день в группе «Травма+ДДЕ+ПФ4», в основном, завершилось формирование лейкоцитарного вала.
Отторжение некротических масс определялось у большего числа животных с 5-го дня наблюдений (у 71,4%) и завершилось у 100% крыс группы на 7-ой день.
Таблица 1
Динамика заживления травм десневого края крыс
Группы животных Состояние раневой поверхности Дни регистрации состояния раневой поверхности
2-й 3-й 5-й 6-й 7-й 8-й 9-й 10-й 12-й 13-й
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Контрольная (травма) п=8 1. Формирование лейкоцитарного вала:
а) отёк 8 8 7 2
б) гнойное содержимое 8 8 2 -
в) кровоточивость 8 8 7 2 1
2. Отторжение некротических масс 3 5 2
3. Формирование молодой грануляционной ткани 1 5 2 1
4. Эпителизация 1 6 7 8
Травма + ДДЕ п=8 1. Форм. лейкоцит. вала:
а) отёк 8 8 8 5 5 4
б) гнойное содержимое 8 8 6 4 1 -
в) кровоточивость 8 8 6 4 3 2
2. Отторжение некротических масс 3 4 4 4 1
3. Формирование молодой грануляционной ткани 2 1 3 4 1
4. Эпителизация 2 3 4 7 8
Травма +ДДЕ + ПФ4 п=7 1. Форм. лейкоцит. вала:
а) отёк 7 7 7 6 4 1
б) гнойное содержимое 4 4 2 1
в) кровоточивость 4 7 2 1
2. Отторжение некротических масс 5 7 1
3. Формирование молодой грануляционной ткани 2 4 4 1
4. Эпителизация 2 3 6 7
Таблица 2
Площадь раневой поверхности (в мм2) по дням наблюдения (M±m; p; pi)
Группы живот- Дни наблюдения
ных 2-й 3-й 5-й 6-й 7-й 8-й 9-й 10-й
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Контрольная (травма) n=8 2,22±0,26 1,84±0,26 1,14±0,21 0,97±0,09 0,45±0,19 n=7 0,174 n=2 0,108 n=1
Травма+ДДЕ 2,65±0,044 2,55±0,09 2,55±0,09 1,61±0,08 1,13±0,02 1,28±0,17 1,39±0,17 0,56±0,1 6 n=4
n=8 р=0,11 р=0,02 р<0,001 р<0,001 p<0,001 n=6 n=5
Трав- 1,56±0,22 1,51±0,24 0,45±0,15 0,25±0,018 0,24±0,097 0,023±0,006 0,017
ма+ДДЕ+ПФ4 n=7 р=0,08 р!<0,001 рх=0,001 р=0,02 р!<0,001 р<0,001 рх<0,001 pi<0,001 n=5 pi<0,001 n=4 n=1
Формирование молодой грануляционной ткани в этой группе началось на 6-й день у 2 крыс (28,6%), на 7-й и 8-й - у 4 крыс (57,1%), и на 9-й день завершилось.
Восстановление эпителиального пласта соединительной ткани (эпителизация) началась на
7-й день опыта у 2-х крыс (28,6%). У 85,7% крыс группы, получавших препарат ПФ4, она была зафиксирована на 9-й день; на 10-й день эпите-лизация раны у всех животных группы завершилась (табл. 1).
Средняя площадь раневой поверхности в группе «Травма+ДДЕ+ПФ4» уже на 2-й день осмотра была существенно ниже, чем в двух других группах (табл. 2) и составляла: 8д=1,56±0,22 мм2 (р=0,08; р1<0,001). На 6-й день опыта после завершения формирования лейкоцитарного вала она составила: 8д=0,25±0,018мм2 (р<0,001;
рі<0,001);на 8-й день - 8д=0,023±0,006 (рі<0,001). Таким образом, средняя площадь раны за счёт эпителизации под влиянием растительных ПФ в условиях действия токсиканта ДДЕ на 7-й день осмотра снижалась в 1,9 раза относительно «Контрольной» группы и в 4,7 раза по сравнению с группой «Травма+ДДЕ».
Анализируя проведенные исследования, следует констатировать, что у крыс «Контрольной» группы (травма) и в группе крыс, получавших препарат растительных ПФ («Трав-
ма+ДДЕ+ПФ4»), окончательное выздоровление произошло на 10-е сутки. В группе животных с экспериментальной травмой десны и введением токсиканта ДДЕ - лишь на 13-е сутки. На 10-й день опыта в группе «Травма+ДДЕ» выявлено лишь 50 % выздоровевших животных.
Выводы. 1. Генотоксикант ДДЕ усугублял течение раневого процесса слизистой оболочки десны крыс при её дозированных травматических повреждениях.
2. Препарат ПФ4 - комбинация концентратов полифенолов проростков злаковых (пшеницы, овса, ржи) и наземной части тысячелистника в условиях воспроизведения экспериментальной травмы и токсического влияния ДДЕ оказал вы-
раженное защитное действие на течение раневого процесса и заживление слизистой оболочки десны крыс.
Список литературы
1. Влияние фенобарбитала и полихлорбифени-лов на активность ферментов, сопряжённых с регуляторами апоптоза, митотического режима и фрагментации ДНК клеток крыс / И.Н. Моисеев, О.Н. Воскресенский, В.В. Сумбаев и др. // Досягнення біології та медицини. - 2003. - №2. - С. 48-49.
2. Минаева В. Г. Флавоноиды в онтогенезе растений и их практическое использование. «Наука». -1978.
3. Estiarte M., Penuelas J., Kimball B.A. Free-air CO2 enrichment of wheat: leaf flavonoid concentration throughout the growth cycle // Physiologia Plantarum. -1999. - Vol. 105. - P. 423-433.
4. Содержание некоторых биологически активных веществ в траве тысячелистника обыкновенного (Achillea Millefolium), произрастающего в Красноярском крае / Шаталина Н.В., Первышина Г.Г., Ефремов А.А., Гордиенко Г.П., Агафонова Е.А., Гончаров Д.В. // Химия растительного сырья. - 2002. - № 3. - С. 13-16.
5. Малачевская А.С. О фармакологическом действии тысячелистника // Фармакология и токсикология. - 1961. - № 6. - С. 742-744.
6. Theoharides T.C, Alexandrakis M. et al. // Anti-inflammatory actions of flavonoids structural requirements for new design // Int. J. Immupathol. Pharmacol. - 2001. - Vol. 14. - P. 119.
7. Choi J.S., Park K.Y., Rhee S.H., Young H.S. Antimutagenic effect of plant flavonoids in the Salmonella assay system. // Arch. Pharm. Res. - 1994. - №17. -P. 71-75.
8. Носийчук С.В., Воскресенський О.Н., Ле-вицький А.П. Лабораторная технология получения концентрата полифенолов злакових и тысячелистника и его количественный анализ. // Вісник стоматології.
- 2008. - Спецвипуск. - С.28-29./ Мат. II сімп. «Рослинні полі феноли та неспецифічна резистентність», 2-3 жовтня 2008 р.
9. Раны и раневая инфекция. Рук-во для врачей / Под ред. акад. АМН СССР, проф. М.И. Кузина и проф. Б.М. Костюченок. - М.: Медицина. - 1990. -591с.
Поступила 12.02.09.
