Влияние биологически активных веществ на состояние пародонта у крыс с экспериментальным дисбиозом Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ЕКСПЕРИМЕНАТЛЬНО-ТЕОРЕТИЧНИЙ РОЗДІЛ

УДК 616.314.17.008.1-092:612.015.14+547.9:577.1

К. В. Скидан, к. мед. н.

Харьковский национальный медицинский университет

ВЛИЯНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ НА СОСТОЯНИЕ ПАРОДОНТА У КРЫС С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ ДИСБИОЗОМ

У белых крыс вызывали дисбиоз путем введения с питьевой водой антибиотика линкомицина в дозе 60 мг/кг живой массы в течение 5 дней. Оценивали состояние десны по уровню маркеров воспаления (концентрация МДА, активность протеаз и кислой фосфатазы) и установили повышение этих показателей, что свидетельствует о развитии в пародонте воспалительнодистрофического процесса. Введение per os препаратов БАВ из корней цикория, винограда или зерна пшеницы молочной спелости оказывает защитное действие на ткани десны, увеличивая активность ферментов защиты (каталазы и лизоцима) и снижая уровень маркеров воспаления.

Ключевые слова: дисбиоз, антибиотики, десна, воспаление, ферменты, фитотерапия.

К. В. Скидан Харківський національний медичний університет

ВПЛИВ БІОЛОГІЧНО АКТИВНИХ РЕЧОВИН НА СТАН ПАРОДОНТА У ЩУРІВ З ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНИМ ДИСБІОЗОМ

У білих щурів викликали дисбіоз шляхом введення

з питною водою антибіотика лінкоміцина в дозі 60 мг/кг живої маси протягом 5 днів. оцінювали стан ясен за рівнем маркерів запалення (концентрація МДА, активність протеаз і кислої фосфатази) і встановили підвищення цих показників, що свідчить про розвиток в пародонті запально-дистрофічних процесів. Введення per os препаратів БАР з кореня цикорію, винограду або зерна пшениці молочної стиглості виявляє захисний ефект на тканини ясен, збільшуючи активність ферментів захисту (каталази і лізоциму) і знижуючи рівень маркерів запалення.

Ключові слова: дисбіоз, антибіотики, ясна, запалення, ферменти, фітотерапія.

K. V. Skidan

Kharkiv National Medical University

THE INFLUENCE OF BIOACTIVE SUBSTANCES UPON THE STATE OF PERIODONTIUM IN RATS WITH THE EXPERIMENTAL DISBIOSIS

Disbiosis was caused in white rats with the introduction of antibiotics lincomycin dosed at 60mg/kg of live weight with table water during 5 days. The stale of gum was estimated according to the level of markers of inflammation (concentration of MDA, activity of proteases and acid phosphatase). The growth of these indices was observed. This fact speaks of the development of inflammatory dystrophic process in periodontium. The introduction per os of the preparations of BAS from chicory roots, grapes and wheat seeds of milky ripeness possesses protective effect at the tissues of gum, increasing the activity of the protective enzymes (cata-lase and lysozyme) and reducing the level of inflammatory markers.

Key words: disbiosis, antibiotics, gum, inflammation, enzymes, phytotherapy.

Роль микробного фактора в развитии пародонтита общеизвестна [1-3]. В последнее время большинство исследователей считают, что основной причиной роста патогенной микрофлоры у больных пародонтитом является дисбактериоз (дисбиоз) полости рта [4, 5].

Имеется весьма ограниченное количество работ, в которых показано, что одной из существенных причин дисбиоза является нарушение питания, в частности нехватка тех или иных биологически активных веществ (БАВ), которые в сильной степени влияют на рост индигенной микрофлоры [6, 7].

В настоящей работе сделана попытка изучить влияние на состояние пародонта (десны) при дисбиозе ряда БАВ из корней цикория, виноградной выжимки или зерна пшеницы молочной спелости.

Цель исследования. Установить возможный лечебно-профилактический эффект при дисбио-тических нарушениях в пародонте БАВ растительного происхождения.

Материалы и методы исследования. В работе было использовано 50 крыс самцов линии Вис-тар стадного разведения в возрасте 4 месяца. Дис-биоз (дисбактериоз) вызывали введением с питьевой водой в течение 5 дней антибиотика линко-

© Скидан К. В., 2009

мицина (угнетающего рост бифидобактерий и лактобацил) в дозе 60 мг/кг живой массы) [8].

В качестве БАВ из корней цикория использовали препарат КальЦикор, содержащий полный набор экстрактивных веществ из корней цикория плюс цитрат кальция в соотношении 1:2 (ТУ У 15.8-13903778-039:2007; Гигиеническое заключение МЗУ № 05.03.02-06/40697 от 10.08.2007 г.; производство НПА "Одесская биотехнология"). Источником БАВ из винограда служил препарат "Экстравин" (ТУ У 15.834737476-001:2007; Гигиеническое заключение МЗУ № 05.03.02-06/40839 от 10.08.2007 г.; производство ЧП "Болисс", г. Одесса). БАВ из пшеницы молочной спелости получали в лабораториях путем экстракции дистиллированной водой измельченных зерен пшеницы молочной спелости сорта "Вдала" (СГИ, г. Одесса). Экстракцию осуществляли на кипящей водяной бане в течение 30 минут при гидромодуле 1:10 и после центрифугирования использовали надосадочную жидкость (концентрация экстрактивных веществ 2,6%).

Все препараты БАВ вводили за две недели до воспроизведения дисбиоза и продолжали введение во время введения антибиотика (+5 дней) и затем вводили еще 10 дней (всего 28 дней). Препараты БАВ вводили перорально (зондом) в следующих дозах: из цикория - в дозе 750 мг/кг живой массы, из винограда - в дозе 1 мл препарата "Экстравин" на 1 кг и экстракт из пшеницы в дозе 5 мл/кг живой массы. Эти дозировки соответствовали следующему количеству экстрактивных веществ: из цикория - 250 мг, из винограда -83 мг и из пшеницы - 130 мг/кг живой массы.

Умерщвление животных осуществляли на 30 день от начала эксперимента (с начала введения препаратов) под тиопенталовым наркозом (20 мг/кг) путем тотального кровопускания из сердца.

В гомогенатах десны (мягкие ткани), которые получали путем растирания с толченым стеклом замороженной навески ткани в 0,9%-ном №С1 (при температуре +2-30С) с последующим центрифугированием при 2500 g при +40С в течение 15 минут. Определяли маркеры воспаления: малоновый диальдегид (МДА) [9], общую протеолитическую активность (ОПА) [10] и активность кислой фосфатазы (КФ) [11]. Кроме того, в гомогенате десны определяли активность ферментов, отражающих состояние защитных систем: каталазы (показатель антиоксидантной системы) [12] и лизоцима (показатель иммунитета [13].

Результаты исследований и их обсуждение. На рис. 1-3 представлены результаты определения в десне уровня маркеров воспаления

[14]: МДА, ОПА и КФ. Из этих данных видно, что все маркеры свидетельствуют о наличии воспаления в десне крыс с дисбиозом и о снижении степени воспаления под влиянием БАВ из растений. Наиболее показательными оказались МДА и КФ; ОПА не дала достоверных изменений из-за больших индивидуальных разбросов показателей. Наиболее выраженное влияние на состояние воспаления в десне оказали экстракты из винограда и «молочной» пшеницы.

20 і

16 -

Ц

О

2

м

12 -

8 -

4 -

ї

1 2 3 4 5

Г руппы

Рис. 1. Влияние БАВ из растений на уровень МДА в десне крыс с экспериментальным дисбиозом: 1 - контроль; 2 - дисбиоз (Д); 3 - Д+КЦ (КальЦит); 4 - Д+ЭВ (Экстравин); 5 - Д+Ф (БАВ из «молочной» пшеницы).

40

32 -

ІЗ

и

и

8

©

И

24 -

16 -

8 -

£

її ГЇ

т-------------1------------1------------1------------1

1 2 3 4 5

Группы

Рис. 2. Влияние БАВ из растений на ОПА в десне крыс с экспериментальным дисбиозом:

1 - контроль; 2 - дисбиоз (Д); 3 - Д+КЦ (КальЦит);

4 - Д+ЭВ (Экстравин); 5 - Д+Ф (БАВ из «молочной» пшеницы).

32 -

24 -

©

И

16 -

8 -

£

Ьп ГЇ

1-------1--------1-------1-------1

1 2 3 4 5

Группы

Рис. 3. Влияние БАВ из растений на активность КФ в десне крыс с экспериментальным дисбиозом: 1 - контроль; 2 - дисбиоз (Д); 3 - Д+КЦ (КальЦит);

4 - Д+ЭВ (Экстравин); 5 - Д+Ф (БАВ из «молочной» пшеницы).

0

0

Таблица 1

Влияние БАВ из растений на активность каталазы и лизоцима в десне крыс при экспериментальном дисбиозе (M ± m)

№ п/п Г руппы Каталаза, мкат/кг Лизоцим, ед/г

1 Контроль 5,27 ± 0,32 0,37 ± 0,08

4 75 ± 0 22 0 30 ± 0 06

2 Дисбиоз (без лечения) р > 0,05 р > 0,1

5,86 ± 0,27 0,33 ± 0,02

3 Дисбиоз + "КальЦикор" р > 0,05 р > 0,3

р і < 0,01 р1 > 0,4

5,57 ± 0,32 0,36 ± 0,05

4 Дисбиоз + "Экстравин" р > 0,3 р > 0,8

р 1 > 0,05 р 1 > 0,05

5,49 ± 0,29 0,38 ± 0,04

5 Дисбиоз + БАВ из «молочной» пшеницы р > 0,3 р > 0,8

р 1 > 0,05 р 1 > 0,05

Примечание : р - показатель достоверности различий с группой № 1;

р1 - показатель достоверности различий с группой № 2

В табл. 1 представлены результаты определения маркеров защитных систем десны - активности каталазы и лизоцима. Как видно из этих данных, при дисбиозе снижается активность ка-талазы, которая достоверно возрастает лишь при действии препарата КальЦикор, остальные препараты также увеличивают активность этого фермента, однако из-за больших индивидуальных колебаний статистически значимых отличий не зафиксировано р>0,05 (но менее 0,1).

Точно также изменяется и активность лизо-цима, проявляющая тенденцию к снижению при дисбиозе и повышению под влиянием препаратов БАВ из растений.

Полученные нами результаты подтверждают данные, полученные Левицким и др. [14] при изучении влияния дисбиоза на состояние маркеров воспаления (в частности, фосфолипазы А2) в слизистой оболочке полости рта.

Использованные нами препараты БАВ содержат в значительных количествах биофлава-ноиды [15, 16], что дает нам основание считать, что именно за счет действия этих соединений наблюдается их лечебно-профилактический эффект в тканях десны.

Выводы. 1. При экспериментальном дисбио-зе у крыс наблюдается развитие воспалительнодистрофических процессов в тканях пародонта, о чем свидетельствует увеличение уровня маркеров воспаления и снижение уровня маркеров защиты.

2. БАВ из корней цикория, винограда или зерна пшеницы молочной спелости оказывают защитное действие на ткани десны, снижая уровень маркеров воспаления и увеличивая активность ферментов защиты.

Список литературы

1. Мащенко И.С. Болезни пародонта. - Днепропетровск: Коло, 2003. - 272 с

2. Зеленова Е.Г., Заславская М.И., Салина Е.В., Рассанов С.П. Микрофлора полости рта: норма и патология. - Н.Новгород: изд-во НГМА, 2004. -158 с.

3. Мамедова Л.А., Подойникова М.Н. Исторические аспекты этиологии и патогенеза заболеваний пародонта // Российский стоматологический журнал.

- 2006. - № 4. - С. 42-44.

4. Грудянов А.И., Дмитриева Н.А., Фоменко Е.В. Применение пробиотиков в комплексном лечении воспалительных заболеваний пародонта. - М.: МИА, 2006. - 112 с.

5. Дисбиотические факторы в патогенезе стоматологических заболеваний / Левицкий А.П., Макаренко О.А., Россаханова Л.Н., Кнава О.Э., Ходаков И.В.// Матер. III (X) з'їзду Асоціації стоматологів України "Інноваційні технології - в стоматологічну практику".

- Полтава: Дивосвіт, 2008. - С. 197-198.

6. Скиба В.Я., Почтарь В.Н., Голобородько В.В., Гончарук С.В., Левицкий А.П. Регуляция дисбактериоза полости рта биофлаваноидами // Вісник стоматології. - 2006. - Спец. вип., № 3. - С. 27-28.

7. Левицкий А.П. Полифенольные вещества как регуляторы микробного гомеостаза // Вісник стоматології. - 2008. - № 4. - С. 19-21.

8. Пат. № 31012, UA. МПК (2006) А61Р31/00. Спосіб моделювання дисбіозу (дисбактеріозу) / Леви-цький А.П., Селиванська І.О., Цісельський Ю.В., Поч-тар В.М., Розсоханова Л.М., Гулавський В.Т. - 2008, Бюл. № 6.

9. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобар-битуровой кислоты. В кн.: Современные методы в биохимии. - М.: Медицина, 1977. - С. 66-68.

10. Калликреины и неспецифические протеазы в слюне больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки / Левицкий А.П., Коновец В.М., Львов И.Ф., Барабаш Р.Д., Володкина В.В. // Вопросы медицинской химии. - 1973. - Т. 19, № 6. - С. 633638.

11. Левицкий А.П., Марченко А.И., Рыбак Т.Л. Сравнительная характеристика трех методов определения фосфатаз слюны человека // Лабораторное дело. - 1973. - № 10. - С. 624-625.

12. Каролюк М.А., Иванова Л.И., Майорова Н.Т., Токарев К.Е. Метод определения активности каталазы / Лабораторное дело. - 1988. - № 1. - С. 1618.

13. Левицкий А.П. Лизоцим вместо антибиотиков. - Одесса: КП ОГТ, 2005. - 74 с.

14. Маркеры воспаления в тканях полости рта при экспериментальном дисбактериозе / Левицкий А.П., Макаренко О.А., Россаханова Л.Н., Кнава О.Э., Романова Ю.Г., Ткачук Н.И.// Патологія. - 2008. -Т. 5, № 2. - С. 16.

15. Колесников М.П., Гинс В.К. Фенольные соединения в лекарственных растениях // Прикладная биохимия и микробиология. - 2001. - Т. 37, № 4. -С. 457-465.

16. Лобанова А.А., Будаева В.В., Сакович Г.В.

Исследование биологически активных флавоноидов в экстрактах из растительного сырья // Химия растительного сырья. - 2004. - № 1. - С. 47-52.

Поступила 12.05.09.

«»♦4«

УДК 616-092.19.4+678.746.47

Е. К. Ткаченко, к. биол. н.,

М. А. Кузембаева, А. И. Перова, к. мед. н.,

С. В. Носийчук, К. Н. Косенко, д. мед. н.

ГУ «Институт стоматологии АМН Украины»

ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА РАСТИТЕЛЬНЫХ ПОЛИФЕНОЛОВ НА РЕГЕНЕРАЦИОННЫЕ ПРОЦЕССЫ ПРИ ДОЗИРОВАННОЙ ТРАВМЕ ДЕСНЫ КРЫС В УСЛОВИЯХ ДЕЙСТВИЯ ЭПИТЕЛИОТРОПНОГО ТОКСИКАНТА

В опытах на 23 белых крысах-самцах 3-мес. возраста изучали защитные эффекты растительных полифенолов на регенерационные процессы в тканях десны в условиях экспериментальной травмы и введения генотоксиканта. Установлено, что генотоксикант ДДЕ усугублял течение раневого процесса и увеличивал на 30 % скорость эпителизации соединительной ткани сли-

зистой оболочки крыс. Препарат ПФ4 - комбинация концентратов полифенолов проростков злаковых и наземной части тысячелистника в условиях травмы и токсического влияния ДДЕ оказал выраженное защитное действие на течение раневого процесса и заживление слизистой оболочки десны крыс.

Ключевые слова: дозированная травма, гено-токсикант, регенерационные процессы, растительные полифенолы, защитное действие.

Є. К. Ткаченко, М. О. Кузембаєва, Г. І. Перова,

С. В. Носійчук, К. М. Косенко

ДУ «Інститут стоматології АМН України»

ВПЛИВ ПРЕПАРАТУ РОСЛИННИХ ПОЛІФЕНОЛІВ НА ПРОЦЕСИ РЕГЕНЕРАЦІЇ ПРИ ДОЗОВАНІЙ ТРАВМІ ЯСЕН ЩУРІВ В УМОВАХ ДІЇ ЕПІТЕЛІОТРОПНОГО ТОКСИКАНТА

У дослідах на 23 білих щурах-самцях 3-міс. віку вивчали захисні ефекти рослинних поліфенолів на процеси регенерації в тканинах ясен в умовах експериментальної травми і введення генотоксиканта. Встановлено, що генотоксикант ДДЕ посилював перебіг раневого процесу і збільшував на 30 % швидкість епітелізації сполучної тканини слизистої оболонки щурів. Препарат ПФ4 -комбінація концентратів поліфенолів проростків злакових і наземній частині тисячолісника в умовах травми і токсичного впливу ДДЕ надав виражену захисну дію на перебіг раневого процесу і загоєння слизистої оболонки ясен щурів. Ключові слова: дозована травма, генотокси-кант, процеси регенерації, рослинні поліфеноли, захисна дія.

Е. К. Ткаченко, М. А. Кузембаева, А. И. Перова, С. В. Носийчук, К. Н. Косенко

ГУ «Институт стоматологии АМН Украины»

ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА РАСТИТЕЛЬНЫХ ПОЛИФЕНОЛОВ НА РЕГЕНЕРАЦИОННЫЕ ПРОЦЕССЫ ПРИ ДОЗИРОВАННОЙ ТРАВМЕ ДЕСНЫ КРЫС В УСЛОВИЯХ ДЕЙСТВИЯ ЭПИТЕЛИОТРОПНОГО ТОКСИКАНТА

В опытах на 23 белых крысах-самцах 3-мес. возраста изучали защитные эффекты растительных полифенолов на регенерационные процессы в тканях десны в условиях экспериментальной травмы и введения генотоксиканта. Установлено, что генотоксикант ДДЕ усугублял течение раневого процесса и увеличивал на 30 % скорость эпителизации соединительной ткани сли-

© Ткаченко Е. К., КузумбаеваМ. А., Перова А. И., Носийчук С. В.,

Косенко К. Н., 2009