CC BY
66
Медицинская Иммунология 2005, Т. 7, Ms 5-6, стр 525-534 © 2005, СПб РО РААКИ
Оригинальные статьи
ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА «ПРОФЕТАЛЬ» НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ И ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА
Черешнев В.А.1, Лебединская О.В.2, Родионов С.Ю.3, Ахматова Н.К.4, Шубина И.Ж.4, Лебединская Е.А.2, Гаврилова Т.В.1, Киселевский М.В.4
1
Институт иммунологии и физиологии УрО РАН, Екатеринбург;
2
ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия» МЗ РЗ, Пермь;
3
Филиал Института иммунологии и физиологии УрО РАН, Пермь;
4
Онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва
Резюме. Исследовано действие препарата «Профеталь», основным действующим компонентом которого является лиофилизированный и стабилизированный декстраном человеческий а-фетопротеин, на функциональные свойства мононуклеарных лейкоцитов (МЛ) периферической крови здоровых доноров и возможность генерации из них зрелых дендритных клеток (ДК).
Показано, что введение в культуры оптимальных доз данного препарата вызывает статистически достоверное повышение пролиферативной способности, уровня бласттрансформации МЛ и их цитотоксической активности по отношению к опухолевой линии К-562, а также индуцирует созревание антиген-презентиру-ющих дендритных клеток.
На основании полученных данных сделан вывод, что «Профеталь» является активным иммуномодулирующим фактором и может быть использован для генерации цитотоксических лимфоцитов и зрелых ДК с целью их применения в биотерапии онкологических и инфекционных заболеваний.
Ключевые слова: «Профеталь», а-фетопротеин, мононуклеарные лейкоциты, дендритные клетки, иммунофенотип, функциональная активность.
Chereshnev V.A., Lebedinskaya O.V., Rodionov C.Yu., Ahmatova N.K., Shubina I.Zh.,
Lebedinskaya E.A., Gavrilova T.V., Kisselevsky M.V.
THE EFFECTS OF ‘PROFETAL’ PREPARATION UPON FUNCTIONAL ACTIVITY OF HUMAN MONONUCLEAR LEUKOCYTES AND DENDRITIC CELLS
Abstract. The effects of ‘Profetal’, a drug containing liophylized, dextran-stabilized human alpha-fetoprotein as main active component, were investigated on peripheral donor blood mononuclear leukocytes (ML), with respect to their functional properties and the potential to generate mature dendritic cells (DC).
Addition of the drug to cell cultures at optimal doses was shown to cause significant increase in their proliferative capacity and ML blastic transformation levels, and enhanced cytotoxicity towards K562 tumor cells, as well as to induce maturation of antigen-presenting dendritic cells.
On the basis of the data obtained, a conclusion is made that ‘Profetal’ is an active immunomodulatory factor, and it may be applied for generation of cytotoxic lymphocytes and mature DC, aiming to apply them for the biotherapy of oncological and infectious diseases. (Med. Immunol., 2005, vol.7, № 5-6, pp 525-534)
Адрес для переписки: Введение
ЛебединскаяЕлена В настоящее время ведутся интенсивные рабо-
614039, г. ул. Полины Осиnенкo, д. 6L кв. 74. ты по внедрению в клиническую практику онкоТел.: (3422) 44-55-23. E-mail: [email protected] логии методов адоптивной иммунотерапии, осно-
525
Черешнев В.А., Лебединская О.В. и др.
Медицинская Иммунология
ванных на экстракорпоральной активации эффекторов противоопухолевого иммунитета. Наибольший интерес представляют лимфокин-активиро-ванные киллеры (ЛАК), генерированные in vitro при инкубации мононуклеарных лейкоцитов (МЛ) периферической крови с цитокинами [2, 12, 13, 19] и специфические вакцины на основе дендритных клеток (ДК) [16, 20, 23, 27]. ЛАК представляют собой крупные лимфоциты типа иммунобластов, характеризуются активностью натуральных киллеров (НК) и способны эффективно лизировать опухолевые клетки [13]. Для получения ЛАК используют интерлейкин-2 (IL-2) и интерферон-а (INF-а).
ДК рассматриваются как особая субпопуляция антиген-презентирующих клеток, характеризующаяся рядом морфологических и иммунофенотипических особенностей. Данные клетки, пульсирован-ные in vitro различными пептидами, способны пре-зентировать антигены наивным Т-лимфоцитам in vivo и индуцировать иммунные реакции против опухолей и бактериальных инфекций [1, 2, 3, 9]. Конструирование вакцин против определенных бактериальных патогенных компонентов и опухолевых клеток основывается и на возможности ДК презентировать антиген, и на их способности к па-ракринному высвобождению цитокинов, таких, например, как интерлейкин-12 (IL-12) [22], который активирует не только натуральные киллеры, но натуральные киллеры — Т-клетки (НКТ) и Т-лимфо-циты, индуцируя пролиферацию, цитотоксическую активность и дифференцировку Т^1 клеток [22, 24, 25]. Дендритные клетки получают из клеток-пред-шественников [30] или моноцитов периферической крови человека [26, 29], а также из СD34+ предшественников костного мозга [20]. Для получения ДК обычно используют гранулоцит-макрофагально-ко-лониестимулирующий фактор (GM-CSF) и интерлейкин-4 (IL-4), а в качестве индуктора созревания применяют фактор некроза опухолей и ряд других препаратов [5, 7, 9].
Вместе с тем до настоящего времени не исследована возможность применения для активации рассматриваемых эффекторов таких биорегуляторов, как а-фетопротеин (АФП), который, как нами ранее было установлено на эмбриональных фибробластах, проявляет свойства стимулятора пролиферации и индуктора дифференцировки [8, 17].
В связи с этим целью настоящего исследования явилось изучение влияния препарата «Про-феталь», основным действующим компонентом которого является человеческий а-фетопротеин, на цитотоксическую и пролиферативную активность мононуклеарных лейкоцитов периферической крови и процесс генерации из них дендритных клеток.
Материалы и методы
Выделение мононуклеарных лейкоцитов. МЛ выделяли из стабилизированной гепарином (25 Ед./ мл) периферической крови 30 здоровых доноров на одноступенчатом градиенте фиколла («Pharmacia», США, плотностью 1,077 г/см3) центрифугированием при 400 g в течение 30 минут. Мононуклеарные клетки, образовавшие интерфазное кольцо, собирали пипеткой и трехкратно отмывали в среде 199 (Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН, Москва, Россия). После каждой отмывки в 10-кратном объеме среды клетки осаждали центрифугированием при 200 g.
Культивирование клеток опухолевой линии К-562. Клетки эритробластного лейкоза человека линии К-562 культивировали в среде RPMI-1640 (ICN, США) с добавлением глютамина, 5% эмбриональной телячьей сыворотки и гентамицина при 37°С в атмосфере 4% С^.
Препараты. В работе использован препарат «Профеталь» (производства ЗАО «Институт новых медицинских технологий», г. Пермь, Россия), включающий лиофилизированный и стабилизированный декстраном человеческий а-фетопротеин. Исследуемые дозы — 0,001; 0,01; 0,1; 1,0 и 10,0 мкг/мл.
Цитотоксический тест. Цитотоксическую активность МЛ определяли на НК-чувствительной линии опухолевых клеток К-562. Опухолевые клетки (1x104 в 1 мл) инкубировали в культуральной среде с МЛ, обработанными препаратом «Профеталь» в концентрациях 0,001; 0,01; 0,1; 1,0 и 10,0 мкг/мл (при соотношении клетки-мишени/эффекторы 1:5, 1:2, 1:1 и 1:0,5) в плоскодонных 96-луночных микропланшетах («Costar», Франция) 18 часов. Затем в лунки добавлялся витальный краситель МТТ («Sigma», США) и по оптической плотности, измеряемой на мультискане МСС-340 («Labsystem», Финляндия), рассчитывался процент лизиса опухолевых клеток (процент цитотоксичности).
Оценка пролиферативной активности мононуклеарных лейкоцитов. Оценку пролиферативной активности МЛ при действии препарата «Профеталь» проводили в колориметрическом тесте с использованием витального красителя AlamarBlue («Biosours», США) в стерильных условиях, используя ламинарный бокс с горизонтальным потоком воздуха («JuanVFS 906», Франция). Клеточную взвесь (по 5х103 клеток) в обогащенной среде RPMI 1640 («Па-нЭко», Россия) вносили в лунки 96-луночного плоскодонного планшета («Costar», Франция). Затем добавляли препарат «Профеталь» в концентрациях от 0,01 до 10,0 мкг/мл. Планшеты помещали в CO -инкубатор («Binder», Германия) при 37°С и 5% СО . Клетки инкубировали в течение 72 часов. По окончании инкубации в лунки вносили 10% краситель AlamarBlue («Biosource», США). Флюоресценцию измеряли после четырехчасовой инкубации при
526
2005, Т. 7, № 5-6
Влияние препарата «Профеталь»...
37°С, 5% СО на флюориметре Versa Fluor V13 («Втокал», Россия) при длине волны возбуждения 530-560 нм, эмиссии 590 нм и выражали в условных единицах (у.е.) флюоресценции. Рассчитывали индекс стимуляции (ИС), представляющий собой отношение пролиферативной активности МЛ при стимуляции препаратом к спонтанной пролиферативной активности мононуклеарных лейкоцитов.
Культивирование дендритных клеток. Мононук-леарные лейкоциты, выделенные из периферической крови, ресуспендировали в среде RPMI 1640 с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки в концентрации 1х106 клеток/мл и инкубировали в течение 4 ч. Затем удаляли не прилипшие клетки, к которым добавляли по 10 нг/мл мышиного рекомбинантного гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) и IL-4 («Biosource», США). Клетки инкубировали в обогащённой среде RPMI 1640 при 4,5% СО и 37°С в течение 3 суток, после чего повторно добавляли те же цитокины. На шестые сутки производили смену среды с добавлением препарата «Профеталь» в концентрации 1,5 мкг/мл. На 9 сутки собирали и исследовали полученные клетки.
Анализ фенотипа ДК. Фенотип генерированных клеток исследовали с использованием моноклональных антител («Caltag Laboratories», США) против соответствующих антигенов. Клетки отмывали холодным фосфатно-солевым буфером (ФСБ) и окрашивали FITC (флюоресцеинизоти-оционат) и PE (фикоэритрин)-меченными антителами согласно инструкции производителя. Затем отмывали 2 раза холодным ФСБ. Результаты учитывали на проточном цитометре FacsCalibur («Becton Dickinson», США). На клетках, полученных из мононуклеаров периферической крови доноров, исследовали уровни экспрессии молекул СD14, CD34, CD80, CD83, CD1a и CD11c. Гейт (окно) популяции клеток устанавливали на основе комбинации прямого и бокового светорассеяния и размера клеток. При учете результатов подсчитывали 10000 клеток в гейте. Статистическая обработка материала проведена при помощи программного пакета WIN MDI 2.8.
Морфо-гистохимическое исследование. Через 9 суток после начала культивирования из центрифугата
надосадочной жидкости культур МНК периферической крови, активированных GM-CSF, IL-4 и препаратом «Профеталь», были сделаны мазки, которые окрашивали на РНК по Браше с контрольной обработкой РНК-азой, эозин-азуром по Романовскому-Гимза, реактивом Шиффа по Шабадашу с контролем амилазой на гликоген и гликозаминогликаны [4]. В окрашенных по Браше мазках подсчитывали процентное содержание выявляемых клеток. Статобра-ботка данных проводилась с использованием программы «ИПСО» (Россия).
Световая, фазово-контрастная микроскопия и фотографирование клеток, генерированных из мо-нонуклеаров периферической крови, меченных антителами, во взвеси и в окрашенных мазках проводили с помощью системы AxioVision 4 (фирмы Carl Zeiss, Германия).
Результаты
Функциональная активность мононуклеарных лейкоцитов
Как следует из данных, представленных в табл. 1, «Профеталь» оказывает стимулирующее влияние на уровень цитотоксической активности МЛ по отношению к опухолевым клеткам линии К-562. Этот показатель достоверно повышается при воздействии препарата в концентрациях 0,01-10,0 мкг/мл по сравнению со спонтанной цитотоксичностью МЛ, достигая максимальных значений при инкубации с препаратом в дозе 1,0 мкг/мл. Самая низкая из испытанных концентраций препарата не сказывается на противоопухолевой активности МЛ.
Исследуемый препарат в используемых дозах проявляет себя также как митогенный фактор для мононуклеарных лейкоцитов крови здоровых доноров (табл. 2). Количество бластных форм в пуль-сированных им культурах увеличивается в 3-7 раз (в зависимости от дозы препарата) по сравнению с контрольной группой, а индекс стимуляции пролиферативной активности МЛ примерно составляет, соответственно от 3,2 (при дозе 0,01 мкг/мл) до 6,9 (при дозе 10,0 мкг/мл). При этом 97-98% мононуклеарных клеток сохраняют жизнеспособность.
Табл.1. ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА «ПРОФЕТАЛЬ» НА ЦИТОТОКСИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ МОНОНУКЛЕАРОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ К ЛИНИИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК К-562 (n=15)
Концентрация препарата мкг/мл Уровень цитотоксичности,%
Препарат «Профеталь» МЛ (контроль)
10,0 78,0±4,6*
1,0 73,2±4,1*
0,1 96,7±4,1** 24,4±3,97
0,01 77,3±3,9*
0,001 24,7±2,6
Достоверность различий между контрольной (МЛ) и экспериментальными группами: * p <0,05; ** p<0,01.
527
Черешнев В.А., Лебединская О.В. и др.
Медицинская Иммунология
Рис. 1. Гистограммы, отражающие экспрессию поверхностных молекул (кластеров детерминации) зрелых ДК, полученных с использованием препарата «Профеталь» (1,5 мкг/мл): Верхний ряд, дотплот - светорассеяние (популяция зрелых ДК в очерченной области), на гистограммах левый пик ~ аутофлюоресценция клеток при использовании изотипического контроля, правый ~ флюоресценция (FITC ~ флюоресцеинизотиоционат и R-PE ~ фикоэритрин) после окрашивания соответствующими антителами.По оси ординат ~ количество клеток, по оси абсцисс ~ интенсивность флюоресценции. Обозначения: CD ~ дифференцировочные антигены.
528
2005, Т. 7, № 5-6
Влияние препарата «Профеталь»...
Табл. 2. ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА «ПРОФЕТАЛЬ» НА ПРОЛИФЕРАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ И МИТОГЕНЕЗ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ (n=15)
Условия культивирования Бластные формы, у.е M±m Индекс стимуляции, М±т Жизнеспособные клетки, % М±т
Контроль - 0,095±0,02 - 98,0±0,5
а-фето- 10,0 1,0 0,655±0,05** 0,517±0,04** 6,9 5,4 96,9±0,6 97,5±0,8
протеин (мкг/мл) 0,1 0,510±0,07** 5,4 98,0±2,5
0,01 0,309±0,03* 3,2 98,0±2,4
Достоверность различий между контрольной и экспериментальными группами:* p <0,05; ** p <0,01.
Влияние препарата на созревание ДК
Изучение дендритных клеток, полученных при коинкубации МЛ с GM-CSF и IL-4 в течение 6 суток, показало, что они имеют типичные морфологические и иммунофенотипические признаки незрелых ДК. Практически все рассматриваемые клетки экспрессируют на своей поверхности характерные для ДК маркер CDla и костимулирующие молекулы (CD40, CD80 и CD86).
Влияние препарата «Профеталь» на созревание ДК оценивали, основываясь на изменении уровня экспрессии дифференцировочных молекул CD14, CD34, CD80, CD83, CD^, CD1^ и данных световой микроскопии культур через 3 суток после добав-
ления данного препарата к незрелым ДК. Согласно полученным данным, при стимуляции рассматриваемым препаратом большая часть незрелых ДК дифференцируется в зрелые формы, так как они приобретали высокий уровень экспрессии поверхностных молекул CD80, CD83, CD^ и CD1^ (рис. 1, 2).
При исследовании иммунофенотипа обращает на себя внимание тот факт, что среди клеток, генерированных под действием общепринятых цитокинов, но с добавлением препарата «Профеталь», достаточно большое количество клеточных форм активно экспрессирует на своей поверхности молекулы антигенов, характеризующих популяцию клеток-предше-ственников — CD34+/CD45+ (рис. 1).
Б
Рис. 2. Зрелые дендритные клетки, генерированные из МЛ периферической крови доноров и меченные флюоресцирующими антителами, в культуральной взвеси на 9-е сутки инкубации (3 сутки после пульсации препаратом «Профеталь»).
Микрофотография дендритных клеток при фазово-контрастной микроскопии:А) ДК СD83+. Окраска флюоресцеинизотиоционатом (FITC). Ок. 10,
об. 40.Б) ДК CD^+. Окраска фикоэритрином (РЕ). Ок. 10, об. 40.
529
Черешнев В.А., Лебединская О.В. и др.
Медицинская Иммунология
к •
Рис. 3. Дендритные клетки, генерированные из МЛ периферической крови доноров, в культуре, активированной GM-CSF и интерлейкином-4 (7-е сутки инкубации). Микрофотография дендритной клетки, прилипшей к дну культурального сосуда. Окраска фуксином Циля. Ок. 10, об. 100.
При световой (рис. 3) и фазово-контрастной (рис. 2, 4) микроскопии выявлялись дендритные клетки, имеющие овальную, неправильную звездчатую или вуалевидные форму с характерными цитоплазматическими отростками. Цитоплазма дендритных клеток окрашивалась базофильно по Романов-скому-Гимза, а при окраске по Браше в ней определялся исчезающий после обработки РНК-зой пиро-нинофильный компонент, свидетельствующий о наличии в клетках РНК (рис. А). Обработка Шифф-реактивом выявляла в цитоплазме ШИК-положи-тельные гранулы, интенсивность окраски которых слегка уменьшалась после воздействия амилазой, что говорит о наличии в клетках как гликогена, так и гли-козаминогликанов (рис. 5Б).
После пульсации культуры дендритных клеток, генерированных из мононуклеарных лейкоцитов периферической крови доноров, исследуемым препаратом, несколько изменялись гистохимические характеристики ДК. Цитоплазма приобретала более яркую пиронинофильную окраску, отражающую повышенное содержание в ней РНК. Пиронино-фильные ядрышки в ядрах становились более крупными и многочисленными (Рис. 6А). Возрастало
Рис. 4. Мононуклеарные клетки периферической крови доноров в культуре на 9 сутки инкубации (3 сутки после пульсации препаратом «Профеталь»). Микрофотография клеток при фазово-контрастной микроскопии культуральной взвеси в тёмном поле. Ок. 10, об. 40. а) зрелые ДК; б) колонии активированных лимфоцитов; в) бласты.
530
2005, Т. 7, № 5-6
Влияние препарата «Профеталь»...
Ф
А
Б
А
Б
Рис. 5. Дендритные клетки, генерированные из МЛ периферической крови доноров, в культуре, активированной GM-CSF и интерлейкином-4 (7-е сутки инкубации). Микрофотография клеток в мазке культуральной взвеси.А) Окраска метиловым зелёным-пиронином по Браше. Ок. 10, об. 90.а) дендритная клетка, б) лимфоциты; в) моноцит; г) макрофаг; д) гранулоцит.Б) Окраска Шифф-реак-тивом по Шабадашу с контрольной обработкой амилазой. Ок. 10, об. 90.а) незрелая ДК; б) зрелая ДК; в) лимфоциты; г) макрофаг.
Рис. 6. Зрелые дендритные клетки, генерированные из МЛ периферической крови доноров, в культуре на 9-е сутки инкубации (3 сутки после пульсации препаратом «Профеталь»).
Микрофотография клеток в мазке культуральной взвеси. А) Окраска метиловым зелёным-пиронином по Браше. Ок. 10, об. 90.а) зрелая ДК; б) макрофаг. Б) Окраска Шифф-реактивом по Шабадашу. Ок. 10, об. 90.а) зрелые ДК; б) лимфоциты; в) макрофаг.
531
Черешнев В.А., Лебединская О.В. и др.
Медицинская Иммунология
также содержание гликогена и гликозаминогликанов (ШИК-положительные гранулы при окраске по Шабадашу имели более крупные размеры и увеличивались в количестве) (рис.6Б). В мазках появлялись клетки с морфологическими и гистохимическими характеристиками ДК в состоянии деления и многочисленные бластные формы (рис. 7).
Обсуждение
Препарат «Профеталь» оказывает существенное влияние на функциональную активность и диффе-ренцировку мононуклеарных лейкоцитов периферической крови человека, а также на созревание генерированных из них дендритных клеток.
При введении в культуры исследуемых доз данного препарата статистически достоверно повышается и пролиферативная активность и уровень бла-сттрансформации МЛ. Это явление может рассматриваться, по-видимому, как проявление де-дифференцировки зрелых лимфоцитов периферической крови под влиянием препарата «Профе-таль», что подтверждается высоким содержанием в культурах CD34+/CD45+ клеток, относящихся к популяции стволовых гемопоэтических клеток. Очевидно также, что «Профеталь», индуцируя созревание ДК, усиливает их антигенпрезентирую-
щую способность и возможность стимулировать пролиферацию МЛ.
Увеличение цитотоксической активности моно-нуклеарных лейкоцитов под действием препарата может свидетельствовать о генерации активированных лимфоидных элементов.
Как известно, на поверхности мембран ДК экспрессируются маркеры антигенного представления (CDla, MHC I, МНС II), костимулирующие молекулы (CD80, CD86, CD40), маркер терминальной диф-ференцировки CD83, маркеры моноцитов/макрофа-гов (CD14, CD68, CD115), адгезивные молекулы (CD54, CD58, семейство молекул CD11, CD29 и т.д.), хемокиновые рецепторы (CCR 1, 2, 5, 6, 7, CXCR4), цитокины и цитокиновые рецепторы (IL-12 и CD25) и другие молекулы [6, 10, 11, 15, 18, 23]. Изменение наборов поверхностных молекул дендритных клеток связано с изменением их функций в ходе созревания. Основная тенденция определяется переходом от захвата и процессинга антигена к процессам межклеточного взаимодействия. Зрелые ДК обладают рядом особенностей, позволяющих им максимально эффективно, по сравнению с незрелыми формами, представлять антиген эффекторам иммунных реакций. Только зрелые ДК экспрессируют высокий уровень костимулирующих молекул, обеспечивающих формирование вспомогательных сигна-
Рис. 7. Мононуклеарные клетки периферической крови доноров, в культуре на 9-е сутки инкубации (3 сутки после пульсации препаратом «Профеталь»).
532
2005, Т. 7, № 5-6
Влияние препарата «Профеталь»...
лов при активации лимфоцитов, и высокий уровень молекул МНС I и MHC II, обеспечивающих эффективное представление антигена [28]. Зрелые ДК сек-ретируют значительное количество цитокинов и хе-мокинов, необходимых для хемотаксиса и активации Т-клеток и других эффекторов иммунной системы [14, 21].
Практически все дендритные клетки, полученные в наших опытах из МЛ доноров при активации препаратом «Профеталь», имели иммунофенотипические признаки зрелых ДК: высокий уровень экспрессии маркёров антигенного представления (CDla), костимулирующих молекул (CD80), адгезивных молекул (CD11^ и, наконец, основной показатель зрелости ДК — высокий уровень экспрессии антигена терминальной дифференцировки — CD83. Данные морфологических исследований соответствовали функциональным и иммунофенотипическим показателям, характеризующим клетки, полученные в культурах при действии препарата, как зрелые ДК.
Следовательно, изученный препарат в данных концентрациях является активным иммуномодулирующим фактором, способным вызывать созревание дендритных клеток, и может повышать цитотоксическую и пролиферативную способность мононук-леарных лейкоцитов. Весьма вероятно, что «Профеталь» приводит к дедифференцировке зрелых лимфоцитов вплоть до образования стволовых гемопоэтических клеток. Препарат может быть использован для биотерапии онкологических и инфекционных заболеваний.
Список литературы
1. Барышников А.Ю. Взаимоотношение опухоли и иммунной системы организма // Практическая онкология. - 2003. - Т. 4. - № 3. - С. 127-129.
2. Киселевский М.В., Титов К.С., Тер-Ованесов М.Д. Перспективы адоптивной иммунотерапии радикально оперированного рака желудка // Российский биотерапевтический журнал. - 2002. - № 4. -
С. 46-48.
3. Кузнецова А.В., Данилова Т.И., Гладских О.П., Иванов А.А., Пальцев М.А. Дендритные клетки и их использование в иммунотерапии // Молекулярная медицина. - 2003. - № 3. - С. 3-17.
4. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / М.: Мир, 1969. - С. 128-131.
5. Пальцев М.А. Введение в молекулярную медицину / Под редакцией Пальцева М.А. - М.: ОАО Изд-во «Медицина», 2004. - 496 с.
6. Пащенков М.В., Пинегин Б.В. Основные свойства дендритных клеток // Иммунология. - 2001. -№3. - С. 7-16.
7. Родина А.В., Москалева Е.Ю., Беляев Д.Л. Получение функционально активных дендритных кле-
ток человека с использованием препарата лейкинфе-рон в качестве индуктора созревания // Аллергия, астма и клиническая иммунология. - 2003. - Т. 7. - № 9. - С. 19-27.
8. Черешнев В.А., Родионов С.Ю., Черкасов В.А., Малютина Н.Н., Орлов О.А. / Альфа-фетопротеин.
- Екатеринбург: УрО РАН, 2004. - 376 с.
9. Чикилева И.О., Халтурина Е.О., Киселевский М.В. Современные подходы и направления в иммунотерапии и иммунопрофилактике злокачественных новообразований // Молекулярная медицина. - 2003.
- № 2. - С. 40-50.
10. Ardavin С, Martinez del Hoyo G., Martin P. Origin and differentiation of dendritic cells // Trends in Immunology. - 2001. - V. 22. - P. 691-700.
11. Banchereau J., Steinman R. M. Dendritic cells and the control of immunity // Nature - 1998. - V. 392.
- P. 245-252.
12. Blymenberg A.G., Kiselevski M.V., Gorbunova V.A., Volkov S.V., Kadagidze Z.G. Immunotherapy IL-2/LAK for the treatment of platinum and taxman-resistant advanced // International journal of gynecological cancer. - 2002. - V. 12. - N. 5. - P. 70.
13. Carlens S., Gilljam M., Chambers B.J., Aschan J., Guven H., Ljunggren H.G., Christensson B., Dilber M.S. A new method for in vitro expansion of cytotoxic human CD3-CD56+ natural killer cells // Hum. Immunol. - 2001. - V. 62. - P. 1092-1098.
14. Chen Z., Dehm S., Bonham K. DNA array and biological characterization of the impact of the maturation status of mouse dendritic cells on their phenotype and antitumor vaccination efficacy // Cell Immunol.-2001.- V. 214.- P. 60-71.
15. Cho B.K. A proposed mechanism for the induction of cytotoxic T lymphocyte production by heat shock fusion proteins // Immunity. - 2000. - V. 12. - P. 263272.
16. Dhodapkar M.V. Active immunization of humans with dendritic cells // J. Clin. Immunol. - 2000. - V. 20.-P. 167-173/
17. Dudich E.I., Semenkova L.N., Dudich I.V. et al. Alpha-fetoprotein-induced apoptosis of cancer cells // Bull. Biol. Med. - 2000. - V. 130. - № 12. - P. 11271133.
18. Enk A.H. & Jonuleit H. How do dendritic cells prevent autoimmunity: what is a mature dendritic cell in the mouse? // Trends in Immunology. - 2001. - V. 22.
- P. 547-553.
19. Falk C.S., Noessner E., Weiss E.H., Schendel DJ. Retaliation against tumor cells shoing aberrnt HLA expression using lymphokine activated killer-derived T cells // Cancer Res. - 2002. - V. 62. - P. 480-487.
20. Ferlazzo G., Wesa A., Wei W.Z. Dendritic cells generated from CD34+ progenitor cells or from monocytes differ in their ability to activate antigen-specific CD8+ T cells // J. Immunol. - 1999. - V. 163. -P. 35-97.
533
Черешнев В.А., Лебединская О.В. и др.
Медицинская Иммунология
21. Granucci F., Andrews D.M., Degli-Espoti M.A. IL-2 mediates adjuvant effect of dendritic cells // Trends in Immunology. - 2002. - V. 23. - P. 169-171.
22. Heufler C., Koch F., Stanzl U. Interleukin-12 is produced by dendritic cells and mediates T helper 1 developments as well as interferon-gamma production by T helper 1 cells // J. Immunol. - 1996. - V. 26. -P. 659-668.
23. Jefford M., Maraskovsky E., Cebon J., Davis I.
D. The use of dendritic cells in cancer therapy // Lancet Oncol. - 2001. - V. 2. - P. 343-353.
24. Keller R. Dendritic cells: their significance in health and disease // Immunol. Letters.- 2001.- V. 78.-P. 113-122.
25. Lotze M.T. Thomson A.W. Dendritic cells. Biology and clinical applications / N-Y.: Academic Press. -1999. - P.214-237.
26. Nishiyama T., Tachibana M., Horiguchi Y. Immunotherapy of bladder using autologous dendritic cells
pulsed with human lymphocyte antigen-A24-specific MAGE-3 peptide // Clin. Cancer. Res. - 2001. - V. 7. -P. 23-31.
27. Nouri-Shirazi M., Banchereau J., Fay J. Dendritic cell based tumor vaccines // Immunol. Letters. -
2000. - V. 74. - P. 5-10.
28. Reid C.D.L. Dendritic cells and immunotherapy for malignant disease / C.D.L. Reid // British J. Haematol .- 2001. - V. 112. - P. 874-887.
29. Thurner B., Haendle I., Roder C. Vaccination with MAGE-3 A1 peptide-pulsed mature, monocyte-derived dendritic cells expands specific cytotoxic T cells and induces regression of some metastases in advanced stage IV melanoma // J. Exp. Med. - 1999. - V. 190. - P. 1669-1678.
30. Valone F.H., Small E., MacKezie M. Dendritic cell-based treatment of cancer: closing in on a cellular therapy // Cancer J. - 2001. - V. 7. -P. 53-61.
поступила в редакцию 28.07.2005 принята к печати 15.11.2005
534
