CC BY
117
УДК 619:615.281:577.1:636.028
ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА ФЛОРОПЕН НА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
И.В. БРЮХОВА, кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник
Г.Г. ЧУСОВА, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
Т.Е. РОГАЧЕВА, кандидат биологических наук, зав. лабораторией
А.В. ТОПОЛЬНИЦКАЯ, младший научный сотрудник ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии Россель-хозакадемии
E-mail: [email protected]
Резюме. Изучение влияния препарата флоропен в хроническом опыте свидетельствует, что его длительное подкожное введение в течение 21 дня белым крысам в дозах 315,0 и 788,0 мг/кг не оказывает отрицательного воздействия на гематологические и биохимические показатели крови животных. В случае увеличения дозы до 1575,0 мг/кг массы тела у крыс опытной группы, по сравнению с контролем, достоверно возрастало содержание в сыворотке крови креатинина - на 18,3 %, мочевины - на 26,2 %, активность аспартат- и аланинаминотрансфераз - на 19,1 и 24,6 %. В то же время колебания величин этих показателей находились в пределах физиологической нормы для крыс.
На основании полученных результатов можно заключить, что флоропен в дозах 315,0 и 788,0мг/кг не оказывает отрицательного воздействия на морфологические и биохимические показатели крови животных, а в дозе 1575,0 мг/кг эти изменения незначительны и имеют обратимый характер.
Ключевые слова: флоропен, лабораторные животные, хроническая токсичность, гематология, биохимия.
Применение биологически активных веществ в сельскохозяйственном производстве, в частности, антибиотиков - один из подходов решения проблемы обеспечения населения планеты безопасным продовольствием [1].
В связи с тем, что число антимикробных препаратов, к которым чувствительна условно-патогенная и патогенная микрофлора, быстро сокращается [2], а ретроспективный анализ литературы показывает не достаточную эффективность и высокую токсичность применяемых средств химиотерапии и химиопрофилактики [3], необходимо разрабатывать новые препараты и проводить их доклинические испытания.
Поскольку все протекающие в организме процессы находят свое отражение в биохимическом и морфологическом составе крови, по результатам анализа изменений ее гематологических и биохимических показателей можно судить об уровне обмена веществ животных и безопасности изучаемого препарата [4].
Цель исследования - изучить влияния нового препарата флоропен, предложенного для лечения эндометритов свиноматок, на гематологические и биохимические показатели крови лабораторных животных в хроническом опыте.
Условия, материалы и методы. Флоропен - комплексный препарат для профилактики и лечения воспалительных процессов матки у свиноматок. Он представляет собой эмульсию для внутриматочного введения в аэрозольной упаковке. В состав препарата входят флорфе-никол (25,0 мг/г), линкомицина гидрохлорид (15,0 мг/г), диметилсульфоксид (100,0 мг/г) и вспомогательные компоненты. Флоропен обладает широким спектром антимикробной активности в отношении культур микроорганизмов, выделенных от больных эндометритом свиноматок.
Достижения науки и техники АПК, №1-2012 __
Предварительное определение среднелетальной дозы (ЛД50) при подкожном введении крысам - аналитическим способом Спирмена-Кербера [5] и с помощью пробит-анализа с использованием прикладной программы «Статистика +2003» - показало, что она составляет 15750 мг/кг.
Эксперименты проводили на половозрелых нелинейных самках белых крыс с массой тела 200...220 г в возрасте 4 мес. из вивария ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии. Животных содержали при влажности воздуха 40.60 % и 20.22 °С, обеспечение кормами соответствовало нормативным требованиям [6.9].
Для проведения опыта по принципу аналогов было сформировано 4 группы крыс по 12 гол. в каждой. Животным всех групп в течение 21 дня делали подкожные инъекции. Крысам I группы (контрольной) вводили стерильное растительное масло, особям II, III, IV групп - флоропен в дозах 315,0 мг/кг (1/50 от ЛД50); 788,0 мг/кг (1/20 от ЛД50) и 1575,0 мг/кг (1/10 от ЛД50) соответственно.
Общетоксическое действие препарата оценивали по динамике массы тела животных при взвешивании один раз в неделю, а также по гематологическим показателям и состоянию системы гемостаза - по окончании курса инъекций и через неделю восстановительного периода.
Абсолютный среднесуточный прирост живой массы определяли по формуле [10]:
_ w±-w2
t '
где А - среднесуточный прирост (г); W0 и W1 - живая масса животного соответственно в начале и конце периода (г); t - продолжительность периода (дни).
Клеточный состав периферической крови учитывали, используя стандартные методики подсчета клеток в камере Горяева. Фракции белка определяли электрофорезом в агарозном геле, концентрацию общего белка, липидов, триглицеридов и билирубина - с использованием наборов фирмы «Витал» (Санкт-Петербург), концентрацию мочевины, фосфора, холестерина, глюкозы, креатинина, кальция, активность аспартат- и аланинаминотрасфераз (АсАТ и АлАТ), щелочной фосфатазы - на биохимическом анализаторе «Hitachi-902».
Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакетов прикладных программ «Microsoft Excel», «Statistica 5,0». Достоверность отличий оценивали методом парных сравнений, используя t-критерий Стьюдента [5].
Результаты и обсуждение. Многократное подкожное введение флоропена во всех испытанных дозах не вызывало существенных изменений в клиническом состоянии животных: поведение, аппетит, частота дыхания у всех крыс опытных групп, как в период применения препарата, так и в течение 10 дн. после окончания его использования оставались в пределах нормы. За время наблюдения у животных опытных групп не отмечено нарушений функций пищеварения и мочеотделения.Гибели крыс в ходе опыта не установлено.
Достоверная разница в среднесуточном приросте живой массы крыс контрольной, II и III опытных групп в течение опыта отсутствовала.
В IV группе на второй неделе опыта (с 7 по 14 день) он был меньше, чем у животных в контроле, в среднем на
---------------------------------------------- 57
14,7 % (Р>0,95), в следующие 7 дней (с 14 по 21 день) - на 35,2 % (Р>0,99). В восстановительный период (с 21 по 31 день) различий по среднесуточному приросту между животными контрольной и IV опытной групп не обнаружено.
Достоверных изменений в морфологическом составе и биохимических показателях крови животных II и III групп, по сравнению с показателями крыс в контроле, на 21 день опыта не установлено (см. табл.).
Таблица. Г ематологические и биохимические показатели крови белых крыс при длительном подкожном применении флоропена на 21 день опыта
Показатель Контроль Группа
I II III
Эритроциты,1012/л 7,2±0,7 7,4±0,5 7,2±0,3 7,3±0,6
Лейкоциты, 109/л 11,9±1,3 11,0±3,0 12,1±2,4 13,9±0,9
Гемоглобин, г/л 120,7±6,9 124,4±9,1 123,2±6,1 113,0±8,5
Гематокрит, % 41,1±1,19 42,6±2,13 42,4±2,9 42,0±3,7
Нейтрофилы, % Палочкоядерные 2,53±0,30 2,48±0,18 2,72±0,20 1,88±0,23
Сегментоядерные 26,9±1,19 27,7±3,20 25,0±0,16 27,1±1,26
Эозинофилы, % 4,38±0,32 4,12±0,40 3,78±0,29 4,22±0,30
Лимфоциты, % 65,4±4,11 64,7±1,94 67,9±0,90 65,8±1,36
Моноциты,% 1,00±0,44 1,00±0,47 1,00±0,60 1,00±0,50
Общий белок, г/л 70,1±3,24 71,5±2,11 70,3±4,68 69,5±5,12
Альбумины, г/л 34,8±1,45 35,1±3,19 33,7±2,11 33,1±1,53
а- глобулины, г/л 5,17±0,14 4,99±0,29 5,11±0,30 5,83±0,43
в- глобулины, г/л 11,37±1,12 12,14±0,80 11,05±2,17 13,00±2,30
Y-глобулины, г/л 18,76±1,15 18,67±2,08 20,44±1,70 17,57±2,05
Мочевина, мМ/л 4,16±0,32 4,21±0,16 4,00±0,22 5,25±0,20*
Креатинин, мкМ/л 40,4±1,10 46,9±3,10 41,5±4,51 47,8±1,54**
Липиды, г/л 1,78±0,09 1,84±0,15 1,68±0,03 1,71±0,02
Холестерин, мМ/л 1,36±0,14 1,25±0,09 1,20±0,11 1,30±0,15
Триглицериды, мМ/л 0,70±0,01 0,75±0,03 0,70±0,06 0,71±0,01
Глюкоза, мМ/л 7,13±0,43 7,00±0,34 7,18±0,29 7,36±0,61
ЩФ, мМ/л*ч 5,32±0,27 5,12±0,19 5,52±0,21 5,06±0,11
АсАТ, мМ/л*ч 1,31±0,19 1,34±0,09 1,21±0,07 1,56±0,07
АлАТ, мМ/л*ч 0,65±0,05 0,68±0,11 0,60±0,04 0,81±0,11
Билирубин, мкМ/л 2,92±0,30 2,90±0,17 3,10±0,16 3,04±0,13
Фосфор, мМ/л 1,70±0,11 1,73±0,05 1,66±0,03 1,72±0,04
Кальций, мМ/л 2,33±0,02 2,28±0,04 2,31±0,02 2,25±0,03
* - Р < 0,01; ** - Р < 0,001 по сравнению с контролем
При использовании флоропена в дозе 1575,0 мг/кг массы тела отмечена тенденция к увеличению лейко-
цитов (на 16,8 %) и снижению гемоглобина (на 6,4 %). Но колебания величин этих показателей находились в пределах физиологической нормы, как сразу же после курса инъекций, так и через 10 дней после последнего введения препарата.
Кроме того, в этой группе отмечена тенденция к более напряженному функционированию мочевыделительной и гепатобиллиарной системы организма крыс.
На 21-день эксперимента у крыс IV опытной группы достоверно возрастало содержание в сыворотке крови креатинина (на 18,3 %) и мочевины (на 26,2 %), а также отмечена тенденция к увеличению активности АсАТ и АлАТ (на 19,1 и 24,6 % соответственно), по сравнению с животными в контроле. Тем не менее колебания величин этих показателей оставались в пределах физиологической нормы для крыс на протяжении всего опыта.
Выводы. Анализируя результаты определения морфологических и биохимических показателей крови белых крыс при подкожном применении флоропена в течение 21 дня, можно констатировать, что препарат в дозах 315,0 и 788,0 мг/кг не оказывает отрицательного воздействия на их величины. Изменения, которые вызывает доза 1575,0 мг/кг обратимы, так как в течение 10 дней после отмены препарата гематологические и биохимические показатели у опытных животных восстанавливались.
Литература.
1. Шахов А. Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят//Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Матер. междунар. науч.-практич. конф. Воронеж, 2002. - Воронеж: Воронежский Государственный университет, 2002.
2. Ануфриев П.А. Факторные болезни свиней. IV. Этиология, эпизоотические особенности и диагностика факторных инфекционных болезней // Ветеринарный консультант - 2006 - №18. - С. 10- 17.
3. Ефанова Л.И., Сайдулдин Е.Т. Защитные механизмы организма. Иммунодиагностика и иммунопрофилактика инфекционных болезней животных. - Воронеж, 2004. - 391с.
4. Кузнецов С.В., Тухватова Р.Ф. Гематологические показатели крови при изучении хронической токсичности препарата сильверол на лабораторных животных/// «Лекарственные препараты для животных (разработка, производство, эффективность и качество)» Тез. докл. межд. науч. конф., посвящ. 80-летию организации ВГНКИ. - Москва, 2011. - С. 144-145.
5. Лакин Г. Ф. Биометрия. - М.: Высшая школа, 1990. - 344 с.
6. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте . - Изд. 2. - Издательское объединение «Вища школа», 1974. - 304 с.
7. Приказ Минздрава СССР от 10.10. 83 г. № 1179 (пункт 4.1).
8. «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. № 755).
9. «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г.
10. Луценко А.Е., Черногорцева Т.Г. Разведение сельскохозяйственных животных: Учебное пособие для студентов очного и заочного обучения по направлению подготовки 110401.65 “Зоотехния"; Краснояр. гос. аграр. ун-т. - Красноярск: Изд-во КрасГАУ, 2008. - 158 с.
THE INFLUENCE OF THE DRUG FLOROPEN ON HEMATOLOGIC AND BIOCHEMICAL PARAMETERS
OF BLOOD IN LABORATORY ANIMALS I.V. Bryukhova, G.G. Chusova, Т.Е. Rogachevа, A.V. Topolnitskaya
Summary. Pre-clinical tests of medical preparations are obligatory and one of the major stages of their creation. So, it was carried out a study of influence of a preparation floropen on haematological and biochemical parameters of the blood of laboratory animals in chronic experience.
Analysis of data obtained in the study of the toxic properties of floropen with the long-term subcutaneous application within 21 days of white rats, has shown that the drug in doses of 315,0 mg/kg and 788,0 mg/kg has no negative effect on haematological and biochemical parameters of the blood of animals. During the 21-day subcutaneous injection of the preparation in the dose of 1575 mg/kg body weight in rats of experimental group reliably increased content in the blood serum creatinine - on 18,3 %, urea - on 26,2 %, activity of aspartate 58 ----------------------------------------- ___________ Достижения науки и техники АПК, №1-2012
aminotransferase and alanine aminotransferase - accordingly on 19,1 and 24,6 % in comparison with animals of control group. At the same time, fluctuations in the values of these indicators were within the physiological norm for this type of animals.
Thus, on the basis of the results obtained from chronic experience, we can conclude that floropen in doses 315,0 mg/kg and 788,0 mg/kg has no negative effect on morphological and biochemical indicators of the blood of animals, and in the dose of 1575,0 mg/kg, these changes are minor and are reversible.
Key words: floropen, laboratory animals, chronic toxicity, hematology, biochemistry.
УДК 619:615.281:615.9:612.6:636.028
ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА ЭРИТРОКСИД НА РЕПРОДУКТИВНЫЕ ФУНКЦИИ БЕЛЫХ КРЫС
Т.А. ПАНИНА, младший научный сотрудник ции, наряду с общетоксикологическими исследованиями,
И.Ю. КАШАПОВА, кандидат биологических наук, на- предусматривает изучение таких специфических видов
учный сотрудник
Е.И. ПОНОМАРЕВА, младший научный сотрудник ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии Россель-хозакадемии
E-mail: [email protected]
Резюме. В работе проведено изучение эмбриотоксического и тератогенного действия комплексного препарата эритроксид, в состав которого входят эритромицин и окситетрациклина гидрохлорид, растворенные в полиэтиленоксиде-400 и 1,2-пропиленгликоле. Препарат вводили самкам беспородных крыс в дозе 0,3 мл/кг массы тела на 5 (I опытная группа) и 15 (II опытная группа) дни беременности. Эритроксид не индуцировал гибели эмбрионов, не оказывал отрицательного влияния на развитие потомства. Все исследованные показатели соответствовали физиологическим значениям, аномалии развития внутренних органов и скелета плодов отсутствовали. Существенных различий в плодовитости крыс опытных и контрольной групп не установлено. Среднее число плодов на самку в контрольной группе составило
9,7 ± 0,4 шт, в I опытной - 9,9 ± 0,6 и во II опытной - 9,7 ± 0,3 шт. Выживаемость потомства в постнатальном онтогенезе во всех группах составляла 86,4...88,3 %. Анализ физического развития потомства (сроков отлипания ушных раковин, появления волосяного покрова, прорезывания резцов, открытие глаз и др., а также динамики массы тела и роста крысят) не выявил каких-либо отклонений от нормы. Так, отлипание ушных раковин в контроле происходило на 2,74 ± 0,06 дн., в I опытной группе - на 2,80 ± 0,04 дн., во II - на 2,83 ± 0,07дн. Появление первичного волосяного покрова отмечено соответственно на 5,91 ± 0,05, 5,86 ± 0,07 и 5,79 ± 0,08 дн.
Таким образом, внутримышечное введение препарата эритроксид в дозе 0,3 мг/кг массы тела в период имплантации (5 день беременности) и органогенеза (15 день) не влияет на выживаемость и развитие потомства беспородных крыс.
Ключевые слова: репродуктивная токсичность, эритроксид, развитие потомства.
Каждое лекарство - это химическое вещество, которое взаимодействует с организмом, причем по мере увеличения эффективности препарата, чаще всего, возрастает его опасность [1].
Сочетание различных химических структур в композиции позволяет достичь их синергетического эффекта, в частности расширить спектр антимикробной активности препарата, и получить лекарства с новыми полезными свойствами [2]. Однако любой комбинированный препарат более опасен, чем его однокомпонентная альтернатива, в связи с увеличением риска возникновения негативных реакций организма [1].
Именно по этой причине система оценки безопасности лекарственных средств, принятая в Российской Федера-
Достижения науки и техники АПК, №1-2012 __
токсичности, как генотоксичность, иммунотоксичность, аллергенность, репродуктивная токсичность [3].
Цель нашего исследования изучить эмбриотоксическое и тератогенное действие препарата эритроксид.
Условия, материалы и методы. Эритроксид - новый комплексный инъекционный препарат для лечения коли-бактериоза и сальмонеллеза поросят. В его состав входят эритромицин (50 мг/см3) и окситетрациклина гидрохлорид (50 мг/см3), растворенные в полиэтиленоксиде-400 и 1,2-пропиленгликоле. Препарат обладает широким спектром антимикробной активности в отношении грамотрицатель-ных и грамположительных микроорганизмов, основных возбудителей желудочно-кишечных болезней поросят (Временное наставление по применению эритроксида для лечения бактериальных инфекций телят и поросят. Регистрационный номер 00 1053-0П).
Опыты проведены на самках белых крыс с массой тела 220,0 ± 20,0 г. Фазу полового цикла устанавливали путем исследования вагинального содержимого. Первым днем беременности считали день обнаружения спермиев после подсадки самцов к самкам. Животные разделили на три группы (контрольную и две опытные) по 12 гол. в каждой. Крысам I опытной группы на 5 день беременности (период имплантации) внутримышечно вводили эритроксид в дозе 0,3 мл/кг ма^ы тела. Животным II опытной группы препарат инъецировали в такой же дозе на 15 день беременности (период органогенеза). Для определения повреждающего действия препарата на плод половину самок каждой группы убивали на 19.20 день беременности, затем проводили осмотр матки, плацент и плодов, определяли число желтых тел беременности, оценивали равномерность расположения плодов в рогах матки. Раннюю и позднюю резорбцию, общую эмбриональную смертность, выживаемость подсчитывали по формулам, предложенным А.М. Малашенко и И.Е. Егоровым [4].
Для выявления патологии внутренних органов эмбрионов материал фиксировали в жидкости Боуэна и 70 %-ном спирте. Аномалии скелета определяли по методу Доусона в модификации А.П. Дыбан с соавторами [5].
Критериями оценки эмбриотоксического и тератогенного действия препарата служили показатели гибели зародышей на пред- и постимплантационных стадиях развития (эмбриональный эффект), наличие аномалий развития внутренних органов и скелета (тератогенный эффект), уровень плодовитости и масса зародышей.
---------------------------------------------- 59
