CC BY
45
УДК 616.72-002-001.6-615.45
ВЛИЯНИЕ ПОЛИФЕРМЕНТНОГО, ХОНДРОПРОТЕКТИВНОГО И АНТИГИПОКСИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТОВ НА ПРОЯВЛЕНИЯ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО АУТОИММУННОГО АРТРИТА
М.В.ФЕДОТОВА, В. А.МИТРОФАНОВ, Б .Я.ПОЗДНЯКОВА, Д.М.ПУЧИНЬЯН*
Аутоиммунные артриты вызывают повреждение всех структур сустава, что приводит к неизбежному развитию вторичного остеоартроза, усугубляющего течение заболевания и приводящего к ранней инвалидизации больных [1]. От эффективности снижения воспалительного процесса зависит характер течения данного заболевания. Однако практически все традиционные противовоспалительные препараты обладают побочными действиями, которые могут существенно утяжелять течение основного заболевания и даже приводить к опасным для жизни осложнениям [10]. Ведётся активная работа по поиску эффективных и безопасных методов и средств подавления воспалительного процесса, в том числе и при аутоиммунных артритах, используя препараты с разнонаправленными механизмами действия, которые максимально влияют на различные пути разрушения тканей суставов и имеют минимальное отрицательное действие на организм больного [7, 9]. Учитывая сложность развития данного патологического процесса целесообразно одновременно применять средства, воздействующие на различные его механизмы.
Полиферментные препараты снижают активность воспаления за счёт уменьшения инфильтрации интерстициальной ткани циркулирующими плазменными белками, способствуют восстановлению микроциркуляции и снабжения тканей кислородом, а также элиминации иммунных комплексов [3]. Иммуномодулирующее действие протеолитических энзимов, в частности препарата «Вобензим», проявляется в достижении оптимальной активности клеток, участвующих в иммунологических реакциях. В результате такого лечения регулируется иммунный ответ и ограничивается возможность нежелательных иммунологических эффектов. Однако не было обнаружено данных об изолированном использовании вобензима при аутоиммунных артритах.
Для защиты суставного хряща от разрушения широко используется хондропротективный препарат «Дона», действующим веществом которого является глюкозамина сульфат. Глюкозамин содержится в костной, хрящевой тканях и других компонентах сустава. Он является одной из ключевых молекул в синтезе гли-козаминогликанов и гиалуроновой кислоты. Логично предположить, что экзогенное введение глюкозамина компенсирует его эндогенный дефицит, предохраняя хрящ от разрушения. В экспериментах на животных показано, что глюкозамин участвует в реакциях биосинтеза протеогликанов, а также подавляет образование супероксидных радикалов и ферментов, разрушающих коллаген [8, 11]. Препарат «Дона» проявил себя как эффективное и безопасное средство для лечения остеоартроза, однако для лечения аутоиммунных артритов он не применялся.
Принимая во внимание важность участия одного из основных факторов аутоиммунного воспаления - региональной тканевой гипоксии - в деградации протеогликанов суставного хряща, представляется целесообразным дополнительно изучить действие антигипоксанта - оксибутирата натрия (натриевая соль гамма-оксимасляной кислоты) на структуры сустава при аутоиммунном артрите. Это средство повышает устойчивость тканей к воздействию различных видов гипоксии. Антигипоксический эффект препарата обусловлен активизацией системы митохондриального окисления за счёт активации транспорта электронов в дыхательной цепи и ускорения высвобождения энергии. Не найдено сведений о применении оксибутирата натрия для предотвращения воспалительной деструкции соединительно-тканных структур суставов. Это позволило предположить, что действие всех трёх препаратов - вобензима (полифермент), доны (хондропротектор) и оксибутирата натрия (антигипоксант) должно обеспечивать угнетение ряда патогенетических процессов, участвующих в воспалительной деструкции соединительной ткани суставов.
Цель работы - изучение влияния полиферментного препарата «Вобензим», хондропротектора «Дона» и антигипоксанта «Оксибутират натрия» при их применении на состояние организма животных при экспериментальном артрите.
Материалы и методы исследования. В качестве экспериментальной модели артрита использовался адъювантный артрит, который по клинической и морфологической картине наиболее близок к аутоиммунным артритам человека [5].
Исследование проведено на 110 половозрелых лабораторных крысах-самцах массой 200-230 г, содержавшихся в стандартных условиях вивария, с одинаковым рационом. Адъювантный артрит вызывали введением в подушечку правой задней лапки 0,1 мл полного адъюванта Фрейнда. Адъювантный артрит у крыс проявлялся выраженным отёком мягких тканей стопы и увеличением суставов правой нижней конечности - межфаланговых, плюснефаланговых, голеностопного и коленного, повышалась температура в подколенной ямке. Отмечалось значительное снижение объёма активных и пассивных движений в опытных коленных суставах и выраженная болезненность при их ощупывании. Животные были вялыми, при обследовании у них наблюдалось увеличение СОЭ, снижение количества эритроцитов, лейкоцитоз, повышение уровня малонового диальдегида в крови, содержания гликозаминогликанов и циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови.
Животные были разделены на 7 серий: 1-я - здоровые животные (контрольная серия); 2-я - артрит без лечения (серия сравнения); 3-я - ежедневное внутрижелудочное введение вобен-зима (42,85 мг/кг массы тела); 4-я - ежедневное внутреннее введение доны (21,4 мг/кг); 5-я - внутрисуставное введение оксибу-тирата натрия 2 раза в неделю (5,7 мг/кг); 6-я - ежедневное внут-рижелудочное введение вобензима и доны (42,85 мг/кг и 21,4 мг/кг соответственно); 7-я - ежедневное внутрижелудочное введение вобензима и доны с одновременным внутрисуставным введением 2 раза в неделю оксибутирата натрия (42,85мг/кг, 21,4 мг/кг и 5,7 мг/кг соответственно). Количество вводимых препаратов рассчитывалось на основании дозировки, рекомендуемой в инструкции по применению каждого препарата с учётом средней массы человека - 70 кг, крысы - 200 г. Препараты начинали применять на 3-и сутки после введения адъюванта, когда развивались местные признаки артрита (отёк, гиперемия, болезненность, ограничение движений в суставах). Через сутки после завершения эксперимента (на 16-й день наблюдения) животных выводили из опыта путём декапитации с соблюдением правил гуманного обращения с животными (под эфирным наркозом).
О выраженности воспалительной реакции сустава судили по его окружности и температуре кожи в подколенной ямке, гематологическим (СОЭ, количество эритроцитов и лейкоцитов в крови) и метаболическим изменениям (содержание малонового диальдегида - маркёра перекисного окисления липидов [6] и уровень гликозаминогликанов сыворотки крови - показателю деструкции соединительной ткани, определяемому по содержанию уроновых кислот и гексоз [4]) в динамике эксперимента. Степень выраженности иммунопатологических процессов оценивали по уровню циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови [2]. Цифровой материал обработан методом вариационной статистики с вычислением 1-критерия по Стьюденту.
Результаты. Все изучаемые средства и их сочетания достоверно снижали величину окружности поражённого сустава и накожную температуру в подколенной ямке. Однако следует отметить, что окружность сустава не достигала значений, наблюдаемых в серии контрольных животных, а нормализация показателя «накожная температура» была только у животных 7-й серии. Обращало на себя внимание, что вобензим (3-я серия) менее всего оказывал влияние на местные показатели (табл. 1). Шло более выраженное снижение накожной температуры в 4-й серии по сравнению с 3-й серией (Рз_4<0,001).
Таблица 1
Влияние препаратов «Вобензим», «Дона» и «Оксибутират натрия» на местные проявления воспаления коленных суставов
Серии Окружность сустава, мм Температура, °С
1-я (n=20) 4,15±0,03 З4,06±0,04
2-я (n=20) 6,80±0,03*** З6,96±0,04***
3-я (n=20) 6,60±0,09*** + З7,00±0,04***
4-я (n=10) 6,46±0,08*** +++ З5,87±0,18*** +++
5-я (n=10) 5,55±0,12*** +++ З5,90±0,08*** +++
6-я (n=20) 5,12±0,09*** +++ З4,50±0,12*** +++
7-я (n=10) 4,44±0,05*** +++ З4,10±0,05+++
Примечание: *** - Р<0,001 по сравнению с данными 1-й серии (контроль); + - Р<0,05, +++ - Р<0,001 - по сравнению с 2-й серией (артрит без лечения)
* Саратовский НИИ травматологии и ортопедии
У крыс 5-й серии наблюдалось более выраженное по сравнению с животными 3-й и 4-й серий уменьшение окружности сустава и накожной температуры (Рз-5<0,001; Р4-5<0,001). Уменьшение местных признаков воспаления в 6-й серии было более выраженным, чем у животных, получавших один из рассматриваемых препаратов (серии 3-6).Все препараты снижали величину СОЭ, но только их сочетания (6-я и 7-я серии) приводили к нормализации данного показателя. Количество эритроцитов в крови животных с адъювантным артритом оставалось низким при использовании изучаемых препаратов как в отдельности, так и в сочетании. Вместе с тем, если каждый препарат в отдельности статистически достоверно снижал количество лейкоцитов в крови крыс, то при сочетанном их воздействии (6-я и 7-я серии) их количество достигало контрольных величин (табл. 2). У животных 4-й серии наблюдалось более выраженное по сравнению с 3й серией снижение СОЭ (Р3-4<0,02), которое, однако не достигало нормы (Р1-4<0,001). Статистически достоверной разницы между количеством лейкоцитов у крыс 3-й и 4-й серий не выявлено (Р3-4>0,5). Количество эритроцитов в 4-й серии статистически повышалось в сравнении с 3-й серией (Рз-4<0,001). У крыс 5-й серии уровень СОЭ статистически достоверно не изменился по сравнению с животными 3-й и 4-й серий
Таблица 2
Влияние препаратов «Вобензим», «Дона» и «Оксибутират натрия» на СОЭ, количество эритроцитов и лейкоцитов в крови
Серии СОЭ,мм/ч Кол-во эритроцитов, х1012/л Кол-во лейкоцитов,х109/л
1-я (n=20) 3,00±0,02 6,50±0,13 12,60±0,04
2-я (n=20) 5,20±0,12*** 4,46±0,07*** 13,42±0,02***
3-я (n=20) 4,50±0,12***+++ 5,62±0,09*** ^+ 13,15±0,01*** ^+
4-я (n=10) 3,70±0,30*+++ 5,01±0,03*** +^ 13,17±0,03*** ^+
5-я (n=10) 4,71±0,54***++ 5,10±0,05***+++ 13,13±0,13*** +
6-я (n=20) 2,60±0,18 * +++ 5,20±0,02***+++ 12,81±0,15+++
7-я (n=10) 2,70±0,32+++ 5,95±0,09***+++ 11,90±0,51+++
Примечание: * - Р<0,05, ** - Р<0,01, *** - Р<0,001 по сравнению с данными 1-й серии (контрольной); + - Р<0,05, ++ - Р<0,01, +++ - Р<0,001 - по сравнению с 2-й серией (артрит без лечения)
Количество лейкоцитов статистически достоверно снизилось по сравнению с 3-й и 4-й сериями (Р<0,01 в обоих случаях). Количество эритроцитов у крыс 5-й серии было незначительно больше, чем в 4-й серии, но без статистической достоверности и меньше, чем у животных 3-й серии (Р3-5<0,001; Р4-5>0,05). Как следует из данных, представленных в табл. 3, вобензим, дона и оксибутират натрия при раздельном и комплексном применении явно подавляли активность процесса перекисного окисления липидов, при этом только при сочетании всех трёх препаратов шло снижение уровня малонового диальдегида до контрольных цифр. Разница в уровнях малонового диальдегида у животных 3 и 4 серий была значимой (Р3-4<0,05). Оксибутират натрия (5-я серия) слабее снижал уровень малонового диальдегида.
Уровень гликозаминогликанов по уроновым кислотам снижался до нормальных величин при совместном применении вобензима и доны (6-я серия), а также всех трёх препаратов (7-я серия). Уровень же гликозаминогликанов, определяемых по гексозам, нормализовался у животных всех серий, получавших лечение в виде отдельного применения вобензима (3-я серия), доны (4-я серия) и оксибутирата натрия (5-я серия) и при сочетанном их использовании (6-я и 7-я серии). Не выявлено статистически достоверной разницы в содержании гликозаминоглика-нов между крысами 3-й, 4-й и 5-й серий (Р>0,5 во всех случаях).
Уровень гликозаминогликанов по уроновым кислотам снижался до нормальных величин при совместном применении вобензима и доны (6-я серия), а также всех трёх препаратов (7-я серия). Уровень же гликозаминогликанов, определяемых по гексозам, нормализовался у животных всех серий, получавших лечение как в виде отдельного применения вобензима (3-я серия), доны (4-я серия) и оксибутирата натрия (5-я серия), так и при сочетанном их использовании (6-я и 7-я серии). Не было выявлено статистически достоверной разницы в содержании гликозами-ногликанов между крысами 3-й, 4-й и 5-й серий (Р>0,5 во всех случаях). Следует отметить, что содержание циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови снизилось при введении вобензима (3-я серия) и при применении всех трёх изучаемых средств (7-я серия) (табл. 3). В 4-6-й сериях уровень циркулирующих иммунных комплексов статистически достоверно не изменялся по сравнению со 2-й серией.
Таблица 3
Влияние препаратов «Вобензим», «Дона» и «Оксибутират натрия» на содержание малонового диальдегида, гликозаминогликанов и циркулирующих иммунных комплексов
Серии Малоновый диальдегид, мкмоль/л Гликозаминогликаны, гх10-2/л Циркулирующие иммунные комплексы, усл.ед.
уроновые кислоты гексозы
1-я (n=20) 0, ± 6 ,8 1,39±0,04 3,58±0,05 8,25±1,18
2-я (n=20) 5,93±0,21*** 4,25±0,25*** 5,93±0,2*** 28,91±2,73 ***
3-я (n=20) 3,37±0,13*** +++ 1,76±0,04*** +++ 3,44±0,11+++ 15,08±0,04*** ^+
4-я (n=10) 3,68± 0,02*** +++ 1,79±0,07***+++ 3,48 ±0,15 +++ 23,70±1,84***
5-я (n=20) 3,78±0,37** +++ 2,20±0,14***+++ 3,94±0,27+++ 26,07±10,2***
6-я (n=10) 3,30±0,10** +++ 1,70±0,24+++ 3,61±0,07+++ 23,01±2,72***
7-я (n=10) 3,14±0,39+++ 1,53±0,07 +++ 3,31±0,47+++ 16,60±4,50*** +
Примечание: ** - Р<0,01, *** - Р<0,001 по сравнению с данными 1-й серии (контрольной); + - Р<0,05, +++ - Р<0,001 - по сравнению с 2-й серией (артрит без лечения).
Заключение. Из-за влияния полиферментного средства, хондропротектора и антигипоксанта на воспалительные процессы в тканях коленного сустава у крыс с адъювантным артритом, при изолированном применении каждого из них, нормализовался только уровень гликозаминогликанов в сыворотке крови.
Сочетанное применение полифермента и хондропротектора приводило к нормализации СОЭ, количества лейкоцитов в крови и уровня гликозаминогликанов в сыворотке крови. Наиболее выраженный противовоспалительный эффект у лабораторных крыс при адъювантном артрите был получен при использовании комплекса, состоящего из полиферментного, хондропротективно-го и антигипоксического препаратов. Противовоспалительный эффект характеризовался полным восстановлением функции суставов и двигательной активности, восстановлением внешнего вида животных, нормализацией накожной температуры опытного сустава. Одновременно с этим нормализовались гематологические показатели, уровень перекисного окисления липидов, подавлялись деструктивные процессы в соединительной ткани, уменьшалась напряжённость аутоиммунных реакций. Вышеизложенное говорило об уменьшении внешних проявлений артрита, выраженности метаболических и иммунологических нарушений.
Литература
1. Зборовская И.А. и др. // Актуальные проблемы современной ревматологии.- Волгоград: ЦПК, 2005.- Вып. XXII.- С. 54.
2. Гриневич Ю.А. // Лаб. дело.- 1984.- № 8.- С. 493-496.
3. Зборовский А.Б. // Научно-практическая ревматология.-2003.- № 1.- С. 64-68.
4. Карякина Е.В., Косягин Д.В. // Лаб. дело.- 1982.- № 10.-С. 591-593.
5. Копьёва Т.Н.Патология ревматоидного артрита.- М.: Медицина, 1980.
6. Коробейникова Э.Н. // Лаб. дело.- 1989.- № 7.- С. 8-10.
7. Петрова Н.Н., Ильина Т.Н. // Реабилитология.- М., 2003.- С. 297-299.
8. Сергиенко А.// Аллергол. и иммунол.- 2006.- №3.-С. 439.
9. Сучков С.В. и др. // Тер. архив.- 2004.- № 12.- С.83-87.
10. Шукурова С.М. и др // Актуальные проблемы современной ревматологии.- Волгоград: ЦПК, 2005.- Вып. XXII.- С. 167.
11. Colombo C .// Arthr Reum.- 1983.- Vol. 26, №7.- Р. 875.
УДК 616.314.17-002.2-02-07-059-036.8(045)
О ЛЕЧЕБНОМ ДЕЙСТВИИ НАНОАЛМАЗОВ ВЗРЫВНОГО СИНТЕЗА ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНО-ДЕСТРУКТИВНЫХ ИЗМЕНЕНИЯХ ТКАНЕЙ ПАРОДОНТА ЖИВОТНЫХ
Л.И. ЛАЗАРЕНКО*, А.П. ПУЗЫРЬ**’***, Г.Г. МАНАШЕВ1,
В.С. БОНДАРЬ**,***, Е.Л. ЖУКОВ*,#
К наиболее часто встречающимся (>90% случаев) стоматологическим заболеваниям относят пародонтиты (воспалительно -деструктивные процессы в тканях пародонта), представляющие серьезную проблему для здоровья человека [1,2,3]. При отсутст-
**Красноярский Госмедуниверситет им. В.Ф. Войно-Ясенецкого
** *Институт биофизики СО РАН, Красноярск
Институт фундаментальной биологии и биотехнологии ФГОУ ВОП Сибирский федеральный университет, Красноярск Красноярское краевое патологоанатомическое бюро
