CC BY
86
УДК 616.31-089
ВЛИЯНИЕ ОСТЕОТРОПНОГО МАТЕРИАЛА «АЛЛОПЛАНТ» НА ФОРМИРОВАНИЕ КОСТНОЙ ТКАНИ ЧЕЛЮСТИ В ОБЛАСТИ РАНЫ ПОСЛЕ ЗУБОСОХРАНЯЮЩИХ ОПЕРАЦИЙ
М.В. Столяров
ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова» г. Чебоксары, Чувашская Республика, Россия, 428015
Аннотация. Одной из важнейших проблем реконструктивной хирургии является оптимизация процессов регенерации костной ткани. Вследствие чего, существует необходимость создания наиболее оптимальных условий для ее формирования. Цель исследования — изучение процесса новообразования костной ткани после зубосохраня-ющих операций с применением в дефекте костной ткани остеотропного материала «Аллоплант». Больным от 20 до 46 лет проведены зубосохраняющие операции. В послеоперационный дефект костной ткани укладывали остео-тропный материал «Аллоплант», г. Уфа. Применялись люминесцентно-гистохимические методы исследования и о краска материала по методу Унна. Анализ проводился в день операции и через 3, 7, 30 и 120 дней. Для определения направленности и выраженности статистических изменений применялся Т-критерий Вилкоксона.
Нейроаминное окружение в дефекте костной ткани остается высоким до 30 суток после операции. В это время происходит дифференцировка клеток, а далее идет снижение до показателей здоровых пациентов При полноценном восстановлении дефекта костной ткани и окончательном формировании костных пластинок сульфатирован-ность гепарина увеличивается с появлением у-метахромазии тучных клеток. Это зрелые тучные клетки с высоко сульфатированным углеводным компонентом.
Ключевые слова: зубосохраняющая операция, деструктивные формы хронического верхушечного периодонтита, дефект костной ткани, остеотропный материал «Аллоплант».
Отсутствие лечения зуба ведет к формированию хронического одонтогенного очага инфекции и удалению причинного зуба [1]. Но существуют методики хирургических вмешательств, позволяющие сохранять зубы с воспалительно-деструктивными изменениями в периапикальных тканях, они получили название «зубосохраняющих операций». Нежелательным результатом их проведения считается образование дефекта костной ткани, который и приводит к возникновению послеоперационных осложнений. Успех всего лечения во многом зависит от процесса регенерации костной ткани [2], который зависит от наличия в тканях определенной концентрации нейроаминов, ферментов их регулирующих, и их инактиваторов, одним из которых является гепарин [3].
Ряд клинических и экспериментальных исследований показал высокий остеоиндуктивный потенциал аллогенных трансплантатов, таких как например «Аллоплант» (торговая марка материалов для аллотрансплантации, производящихся во Всероссийском Центре глазной и пластической хирургии «Аллоплант», г. Уфа). Остеотропный препарат «Аллоплант» изготовлен из донорской трупной костной ткани человека, поэтому имеет сходство с тканью пациента. Низкая антигенность и селективный рост тканей реципиента обеспечили широкое внедрение в практику этого материала [4].
Цель нашей работы — это оценка содержания нейроаминов в гранулярных люминесциру-ющих клетках (ГЛК) и гепарина тучных клеток в дефекте челюсти после зубосохраняющих опера-
—--—-
~ 123 ~
—--—
ций с применением материала «Аллоплант». Ранее такие исследования не проводились.
Материал и методы. В исследовании находилось 12 человек в возрасте от 20 до 46 лет. Ос-теотропный препарат использовали в послеоперационном дефекте челюсти у 8 пациентов. Объем замещаемых участков костной ткани составлял в среднем 1,5 см3. У 4-х пациентов контрольной группы мы получили материал здоровой альвеолярной костной ткани. Он был получен с помощью щипцов во время удаления ретинированных и дис-топированных зубов по ортодонтическим показаниям. Дополнительно после операции проводили исследование гранулемы. На 3-й и 7-й день забор биоптата осуществляли с помощью кюретажной ложки. На 30-й и 120-й день проводили пункцион-ную биопсию созревающей костной ткани с помощью иглы набора «Ostycut», производство Bard (США). Далее проводили окраску нефиксированных криостатных срезов свежезамороженного материала.
Нами были применены:
1. Люминесцентно-гистохимический метод Фалька-Хилларпа в модификации Е.М. Крохиной. Этот метод применялся для выявления катехола-минов и серотонина в структурах дефекта костной ткани [5].
2. Люминесцентно-гистохимический метод Кросса, Эвена, Роста использовался для идентификации структур, содержащих гистамина [6].
3. Для определения количества серотонина, катехоламинов и гистамина использовался метод цитоспектрофлуориметрии (Карнаухов В.И.) [7]. Количество нейромедиаторов оценивали с помощью люминесцентного микроскопа МЛ-6 (ОАО «ЛОМО», г. Санкт-Петербург) с применением фотометрической насадки ФМЭЛ-6. Показатели цифрового вольтметра определялись в условных единицах (у. е.).
4. Проводили окраску полихромным толуи-диновым синим по методу А. Унна для выявления числа тучных клеток и сульфатированности в них гепарина. Голубую (ортохромную) окраску имеет незрелый гепарин. Чернильно-фиолетовую (в-метахроматическую) имеет созревающий гепарин, содержащий 3 сульфатные группы. Пятисуль-фатированный гепарин считается зрелым и имеет пурпурную ^-метахроматичную) окраску [8]. Число тучных клеток подсчитывали в 5 полях зрения с помощью микроскопа «Микромед 5» (ОАО «Оптические приборы», г. Санкт-Петербург) с иммерсионным объективом 100х.
5. В работе применялись непараметрические методы статистики. Для определения направленности и выраженности статистических изменений применялся Т-критерий Вилкоксона (1945). С его помощью определяли, является ли сдвиг показателей в одном направлении более существенным, чем в другом. Различия достоверны при р < 0,05.
Результаты и их обсуждение. При люми-несцентно-гистохимическом исследовании в материале здоровой альвеолярной кости выявляются люминесцирующие костные пластинки, которые местами расслаиваются. В количестве 10—15 пластинок они образуют остеон. Между пластинками ярко люминесцируют макрофаги. В них люминес-цируют в основном ядра, цитоплазма светится зелено-желтым цветом. Заметно не более 1-й клетки в нескольких полях зрения. В материале обнаруживаются желтовато-беловатые гранулы тучных клеток. На 2 поля зрения обнаружено в среднем 1—2 тучные клетки (табл. 1). В некоторых препаратах при окрашивании материала по методу Фалька между костными пластинками заметны темные пространства, в которых проходят адренергические нервные волокна с «пуговками».
Таблица 1
Анализ числа структур дефекта костной ткани во временном аспекте с применением материала «Аллоплант»
Структуры Здоровая кость Гранулема 3-й день 7-й день 30-й день 120-й день
Тучные клетки 0,7 ± 0,2* 2,2 ± 0,2* 15,6 ± 2,2* 7,5 ± 1,2 6 ± 1 0,6 ± 0,1
Макрофаги 0,7 ± 0,3* 4,4 ± 0,2* 9,6 ± 2,6 7,1 ± 1,4 6,3 ± 0,8 1,3 ± 0,3
Примечание: * статистически достоверное изменение показателя (р < 0,05). Число клеток указано в 1 поле зрения. Микроскоп ЛЮМАМ-1. Об. 100. Ок. 10.
—--—-
~ 124 ~
—--—
норма
гранулема 3-й день 7 день
30 день 120 день
Рис. 1. Динамика содержания катехоламина (КА), серотонина (СТ) и гистамина (Г) в костных пластинках после операции
100 80 60 40 20 0
норма гранулема 3-й день 7 день 30 день 120 день
Рис. 2. Динамика содержания катехоламина (КА), серотонина (СТ) и гистамина (Г) в тучных клетках после операции
КА □ СТ Г
КА □ СТ Г
5 п 4 3 2 1 0
норма
гранулема
3-й день
7 день
30 день
120 день
Рис. 3. Динамика содержания катехоламина (КА), серотонина (СТ) и гистамина (Г)
в макрофагах после операции
КА □ СТ Г
0
—--—-
~ 125 ~
—--—
Цитоспектрофлуориметрия показала, что ин-втенсивность люминесценции нейроаминов из-менчиа, причем показатели контрольной и опытных групп являются сопоставимыми (рис. 1—3).
При исследовании здоровой альвеолярной костной ткани по методу Унна вблизи остеонопо-добных структур обнаруживается 1 тучная клетка на 2 поля зрения. Эта клетка имеет у-метахрома-зию. Данный факт говорит о том, что гепарин, входящий в состав тучных клеток зрелый, содержит от 4 до 5 сульфатных групп [9]. Что можно объяснить тем, что в костной ткани имеется большое количество хондроитин сульфата, который стимулирует синтез гликозаминогликанов, в том числе гепарина. Хондроитин сульфат замедляет резорбцию костной ткани, ускоряет процессы репарации костной ткани, оказывает противовоспалительное действие [10].
В материале гранулемы при люминесцентно-гистохимическом исследовании заметно увеличение количества тучных и гранулярных люминес-цирующих клеток (ГЛК). Костные пластинки не определяются. Наблюдается дегрануляция тучных клеток с тусклым свечением и наличием единичных гранул.
Цитоспектрофлуориметрический метод исследования позволил определить низкое содержание нейроаминов в структурах гранулемы, кроме тучных клеток. В них содержание серотонина и кате-холаминов очень высокое, а содержание гистами-на — очень низкое (рис. 2). Возможно, это связано с истощением нейромедиаторной системы в связи с хроническим воспалительным процессом.
При окрашивании гранулемы по методу Ун-на число тучных клеток увеличивается в среднем до 2-х клеток на 1 поле зрения. Они имеют орто-хромное окрашивание, что свидетельствует о наличии незрелого гепарин-моносульфата. Клетки выглядят опустошенными, что связанно с их де-грануляцией. Этот процесс приводит к «старению» популяции тучных клеток и истощению нейромедиаторной системы в данном месте. Легкую метахромазию имеют макрофаги и лимфоциты, что говорит об их бласттрансформации, по современным данным этот факт говорит о ще-тинге [11].
При исследовании раны на 3-й день после заполнения ее материалом «Аллоплант» нами было обнаружено максимальное число макрофагов до 10 клеток на 1 поле зрения. В них люминесци-рует в основном ядра, цитоплазма светится зелено-желтым цветом. Заметно большое число тучных клеток, до 15 на 1 поле зрения (см. табл. 1). Они имеют тусклое свечение с наличием мелких гранул. Число тучных клеток в дефекте увеличилось, возможно, это связано с тем, что они являются огромным по емкости депо медиаторов [12]. В первые дни после операции, когда идет усиленный приток в дефект костной ткани клеток воспаления, нейроамины в большом количестве выделяются из разрушенных сосудов. Вместе с макрофагами утилизируют излишки нейроаминов и тучные клетки [13]. Костные пластинки не обнаружены.
Цитоспектрофлуориметрия показала, что в макрофагах и тучных клетках содержание гиста-мина и серотонина превосходит количество кате-холаминов (см. рис. 2, 3). Благодаря секреции разнонаправленных по действию нейроаминов в дальнейшем тучные клетки не только регулируют проницаемость сосудов, но и участвуют в поддержании биоаминного гомеостаза в ходе обмена веществ [14].
В окрашенном по методу Унна материале все пустоты заполнены кровью. Мы видим массовую дегрануляцию ортохромных тучных клеток. Гранулы свободно лежат в тканях (гранулы единичные, или определяется большое их скопление). Такое морфологическое и функциональное состояние тучных клеток позволяет предположить, что воспалительная реакция в дефекте костной ткани в наших исследованиях протекала на фоне выхода гистамина из тучных клеток без связывания его гепарином.
На 7-й день определяются гепариновые и белковые тучные клетки с сине-зеленой окраской. Происходит снижение числа макрофагов Клетки зрелые, наблюдается свечение ядер макрофагов, в цитоплазме свечение отсутствует. Костные пластинки не обнаружены. Количество ней-роаминов схоже с 3-м днем послеоперационного периода.
—--—-
~ 126 ~
На 7-й день с применением метода Унна заметны лимфоциты, окрашенные ортохромно. Имеются участки, которые не воспринимают краситель, и ортохромно окрашенные участки с большим числом фибробластов. Имеются участки с у-метахромазией. Рядом с остеокластами обнаруживается резорбированная кость.
На 30-й день продолжается снижение числа макрофагов. Большое число тучных клеток в послеоперационном периоде совпадает с ускорением процессов дифференцировки фибробластов, что выражается в образовании на 30-й день ос-теоида с формированием тяжей ретикулофиб-розной (губоволокнистой) костной ткани.
В этот период отмечается высокое содержание нейроаминов, особенно серотонина. С одной стороны, выделение большого количества серотонина, по данным Л. А. Любовцевой, приводит к дифференцировке клеток, а с другой, происходит сдерживание размножения бластных форм клеток [15]. Содержание серотонина в макрофагах
Рис. 4. Окраска челюстной костной ткани на 30-й день после применения материала «Аллоплант» по методу А. Унна: а — остеоноподобная структура; б — кровеносный сосуд; в — костные пластинки; г — демаркационная линия образования костной ткани.
Микроскоп МЛ-6. Ув. 100
В макрофагах заметно увеличение содержания нейроаминов (рис. 3). В тучных клетках содержание серотонина и катехоламинов уменьшается, а гистамина увеличивается и становится схожим с содержанием в тучных клетках здоровой костной
всегда выше, чем других нейроаминов, кроме 30 дня, где количество серотонина и гистамина равны. В послеоперационном периоде содержание гистамина и серотонина уравновешивается, а количество катехоламинов всегда остается ниже их уровня
При окрашивании материала по методу Ун-на обнаружено формирование остеоноподобных структур, костные пластинки которые окрашены не равномерно. Между структурами вставочных костных пластинок нет. Кроме того, обнаруживаются дегранулированные тучные клетки (рис. 4). Они встречаются как ортохромные, так и в-мета-хромного окрашивания в равных количествах.
На 120-й день число тучных клеток и макрофагов снизилось до показателей здоровой кости. Обнаружены люминесцирующие костные пластинки с плотной структурой. Имеются места темной окраски с участками разрушения грубоволокни-стой кости и образования на их месте пластинчатой кости (рис. 5).
Рис. 5. Применение остеотропного материала «Аллоплант»:
а — остеоноподобная структура; б — Гаверсов канал; в — костные пластинки. Окраска по методу Falck-HiUarp (1969). Материал взят на 120-й день после операции. Микроскоп МЛ-6. Ув. 100
ткани (рис. 2). В исследуемых клетках происходит стабилизация содержания биогенных аминов. Мы предполагаем, это объясняется тем, что процесс новообразования костной ткани челюсти подходит к завершению. В костных пластинках содержание
—--—-
~ 127 ~
—--—
нейроаминов снижается и доходит до содержания в здоровой альвеолярной костной ткани (рис. 1). Мы считаем, что снижение содержания нейроаминов объясняется факторами их контролирующими, в частности, гепарином.
Видна четкая организация костной ткани при окраске материала по методу Унна, заметны места губчатости и неокрашенные пространства. Определяются как белковые, так и гепариновые у-метахроматичные тучные клетки в равных количествах. Их окраска свидетельствует об увеличении сульфатированности гепарина. Полученные данные подтверждают участие гепарина тучных клеток в инактивации нейроаминов [16] и формировании костной ткани.
Проведенное нами исследование дает качественную и количественную характеристику распределения нейроаминов в послеоперационном дефекте костной ткани челюстей, улучшает понимание их биологической роли, открывает перспективы изучения механизмов направленного влияния биогенных аминов на новообразование костной ткани после зубосохраняющих операций.
Выводы
1. Обнаружены особенности гистострукту-ры и содержания биоаминов в структурах дефекта костной ткани с применением материала «Аллоплант» у людей 20—46 лет после зубосо-храняющих операциях.
2. При анализе исследования дефекта костной ткани, заполненного остеотропным препаратом «Аллоплант», можно видеть, что к 120-му дню произошло преобладающее, но не полное восстановление дефекта новообразованной костной тканью.
3. Формирование костных пластинок происходит при увеличении количества медиаторов и увеличении сульфатированности гепарина в них и тучных клетках.
4. Установлено, что в тучных клетках, как основных биоаминсодержащих клетках дефекта костной ткани, в первые дни после операции увеличивается содержание серотонина и катехоламинов, а количество гистамина уменьшается, в сравнении с тучными клетками костной ткани здоровых пациентов.
5. Появление метахроматичных тучных клеток в послеоперационном периоде свидетельствует о сульфатировании гепарина.
ЛИТЕРАТУРА
1. Боровский Е.В. Лечение осложнения кариеса зубов: проблемы и их решение // Стоматология. 1999. № 1. С. 21—24.
2. Иорданишвили А.К., Гололобов В.Г., Усиков Д.В. Оценка эффективности применения современных имплантационных материалов // Terra Medical стоматология. 2003. № 2. С. 28—32.
3. Ларионов Е.В., Глыбина Т.А. Роль сульфатиро-ванных гликозаминогликанов (сГАГ) в физиологии и патофизиологии тканей // Стоматология сегодня. 2007. № 9 (69). С. 54—55.
4. Мулдашев Э.Р., Нигматуллин Р.Т., Шантана О.Р., Чернов Н.В., Киселев Е.В. Социальные и медико-биологические аспекты трансплантации тканей. Уфа, 2007.
5. Falck B., Hillarp N.A., Thieme G., Torp A. Fluorescence of catecholamines and related compounds condensed with formaldehyde // J Histochem Cytochem. 1969. № 10. Р. 348—354.
6. Cross S.A., Ewen S.W., Rost E.W. A study of methods a vailable for cytochemical localisation of histamine by fluorescence induced with ophtaldehydepracetalde-hyde // Histochem J. 1971. № 3. Р. 471—476.
7. Карнаухов, В.И. Люминесцентный спектральный анализ клетки. М.: Наука, 1978. С. 3—35.
8. Пирс Э. Гистохимия теоретическая и прикладная. Издательство иностранной литературы, 1962.
9. Лукашин Б. П., Гребенюк А.Н. Глюкозаминог-ликаны: биологическая роль в системе межклеточных взаимодействий // Успехи современной биологии. 2010. Т. 130. № 2. С. 165—179.
10. Гичев Ю.Ю., Гичев Ю.П. Руководство по мик-ронутриентологии. Роль и значение биологически активных добавок к пище. М.: Триада-Х, 2006.
11. Полетаева А.В., Добродеева Л.К. Соотношение содержания растворимых и мембранных форм кластеров дифференциации лимфоцитов // Вестник Уральской медицинской академической науки. 2011. № 2 (35). С. 62—63.
12. Быков В.Л. Гистология и эмбриология органов полости рта человека. СПб.: СОТИС, 2008.
13. Мордашова О.Н., Лукьянова Я. С. Роль катехол-аминов и биогенных аминов в развитии бронхиальной астмы // Современные наукоемкие технологии. 2005. № 1. С. 71—72.
—--—-
~ 128 ~
14. Гордон Д.С., Любовцева Л.А., Олангин О.И. и др. Иммуноцитохимическая люминесцентно-морфо-логическая идентификация клеток органов иммунной системы // Российские морфологические ведомости. 1999. № 1—2. С. 55.
15. Любовцева Л. А. Количественный анализ гранулярных люминесцирующих и тучных клеток в орга-
нах иммунной и неиммунной систем // Международный журнал по иммунореабилитации. 2000. Т. 2. № 2. С. 53.
16. Schwartz L.M., Osborne B.A. Programmed cell death, apoptosis and killer genes // Immunol Today. 1993. № 14. Р. 582—590.
EFFECT OF THE OSTEOTROPIC MATERIAL «ALLOPLANT» ON THE FORMATION OF THE JAWBONE
IN THE WOUND AREA
AFTER TOOTHPROTECTING OPERATIONS
M. V. Stolyarov
Chuvash state University. I.N. Ulyanov Cheboksary, Chuvash Republic, Russia, 428015
Annotation. One of the major problems of the reconstructive surgery is to optimize the processes of the bone tissue regeneration. As a consequence, there is the need to create the most appropriate conditions for her formation. Objective: to study the process of new formation of the bone after toothprotecting operations using in the defect of bone tissue the osteotrophic material «Alloplant». To patients from 20 to 46 years there were conducted toothprotecting operations. The postoperative bone defect was filled with osteotrophic material "Alloplant" which is produced from the donor cadaveric material in the Russian Eye and Plastic Surgery Centre "Alloplant" in Ufa. There were applied luminescent-histochemical and color of the material by the method of Unna. The analysis was performed on the operation day and in 3, 7, 30 and 120 day after it. To determine the direction and degree of statistical changes there was applied T-Wilcoxon test.
Neuroamine environment in the defect of bone tissue remains high up to 30 days after the surgery. It is possible that at this time cell differentiation happens and further decreases to levels seen by healthy patients. With complete recovery of the bone defect and the final formation of the bone plates heparin sulfatedness increases with the appearance of y-metachromasia fat cells. That Mature fat cells with highly sulfated carbohydrate component.
Key words: toothprotecting operation, destructive forms of chronic apical periodontitis, bone defect, osteotrophic material "Alloplant".
REFERENCES
1. Borovskij E.V. Lechenie oslozhnenija kariesa zu-bov: problemy i ih reshenie. Stomatologija. 1999. № 1. S. 21—24.
2. Iordanishvili A.K., Gololobov V.G., Usikov D.V. Ocenka jeffektivnosti primenenija sovremennyh implanta-cionnyh materialov. Terra Medical stomatologija. 2003. № 2. S. 28—32.
3. Larionov E.V., Glybina T.A. Rol' sul'fatirovannyh glikozaminoglikanov (sGAG) v fiziologii i patofiziologii tkanej. Stomatologija segodnja. 2007. № 9 (69). S. 54—55.
4. Muldashev Je.R., Nigmatullin R.T., Shangina O.R., Chernov N.V., Kiselev E.V. Social'nye i mediko-biologiche-skie aspekty transplantacii tkanej. Ufa, 2007.
5. Falck B., Hillarp N.A., Thieme G., Torp A. Fluorescence of catecholamines and related compounds condensed with formaldehyde. J Histochem Cytochem. 1969. № 10. R. 348—354.
6. Cross S.A., Ewen S.W., Rost E.W. A study of methods a vailable for cytochemical localisation of histamine by fluorescence induced with ophtaldehydepracetalde-hyde. Histochem J. 1971. № 3. R 471—476.
7. Karnauhov V.I. Ljuminescentnyj spektral'nyj analiz kletki. M.: Nauka, 1978. S. 3—35.
8. Pirs Je. Gistohimija teoreticheskaja i prikladnaja // Izdatel'stvo inostrannoj literatury, 1962.
9. Lukashin B.P., Grebenjuk A.N. Gljukozaminogli-kany: biologicheskaja rol' v sisteme mezhkletochnyh vzai-modejstvij. Uspehi sovremennoj biologii. 2010. T. 130. № 2. S. 165—179.
—--—
~ 129 ~
—--—
10. Gichev Ju.Ju., Gichev Ju.P. Rukovodstvo po mik-ronutrientologii. Rol' i znachenie biologicheski aktivnyh dobavok k pishhe. M.: Triada-H, 2006.
11. Poletaeva A.V., Dobrodeeva L.K. Sootnoshenie soderzhanija rastvorimyh i membrannyh form klasterov differenciacii limfocitov. Vestnik Ural'skoj medicinskoj aka-demicheskoj nauki. 2011. № 2 (35). S. 62—63.
12. Bykov V.L. Gistologija i jembriologija organov polosti rta cheloveka. SPb.: SOTIS, 2008.
13. Mordashova O.N., Luk'janova Ja. S. Rol' katehol-aminov i biogennyh aminov v razvitii bronhial'noj astmy. Sovremennye naukoemkie tehnologii. 2005. № 1. S. 71—72.
14. Gordon D.S., Ljubovceva L.A., Olangin O.I. i dr. Immunocitohimicheskaja ljuminescentno-morfologicheskaja identifikacija kletok organov immunnoj sistemy. Rossijskie morfologicheskie vedomosti. 1999. № 1—2. S. 55.
15. Ljubovceva L.A. Kolichestvennyj analiz granuljar-nyh ljuminescirujushhih i tuchnyh kletok v organah immun-noj i neimmunnoj sistem. Mezhdunarodnyj zhurnal po im-munoreabilitacii. 2000. T. 2. № 2. S. 53.
16. Schwartz L.M., Osborne B.A. Programmed cell death, apoptosis and killer genes. Immunol Today. 1993. № 14. R. 582—590.
РЕЦЕНЗЕНТЫ:
Московский Александр Владимирович — д.м.н., профессор, кафедра ортопедической стоматологии и ортодонтии ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова», г. Чебоксары
Уруков Юрий Николаевич — д.м.н., профессор, заведующий кафедры ортопедической стоматологии и ортодонтии ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова», г. Чебоксары
