CC BY
54
При сравнении других факторов воспаления выявлено повышение концентрации ИЛ-6 в пред- и послеоперационном периоде (21,4±30,7 пг/мл и 47,2±57,1 пг/мл). При этом после КШ уровень данного биомаркера был статистически значимо выше (р<0,0001). Концентрация фибриногена статистически значимо повышается после операции (4,3±1,1 г/л против 3,3±0,9 г/л, р<0,0001). Анализ ИЛ-8, ИЛ-10, СРБ показал, что после КШ отмечается статистически значимое повышение вышеуказанных параметров, однако их концентрация остается в пределах нормальных значений.
В послеоперационном периоде уровень тропо-нина увеличивается значимо (2,8±2,2 мкг/л против 0, р<0,0001). Данные представлены в таблице 3.
Таблица 3
Показатели лабораторного анализа (n=96)
Норма До операции После операции р
Лейкоциты, х109/л 4,0-10,0 7,08±1,9 13,5±3,5 <0,0001
Сегментоядерные, % 40-70 - 74,9±9,0
Палочкоядерные, % 1-5 - 9,8±6,9
Лимфоциты, % 20-45 - 11,7±7,2
Моноциты, % 2-8 - 3,4±2,9
Эозинофилы, % 1-5 - 1,7±1,0
Фибриноген, г/л 2,0-4,0 3,3±0,9 4,3±1,1 <0,0001
ИЛ-6, пг/мл 0-10,0 21,4±30,7 47,2±57,1 <0,0001
ИЛ-8, пг/мл 0-10,0 2,32±1,8 8,7±6,2 <0,0001
ИЛ-10, пг/мл 0-20,0 6,9±5,2 11,2±5,8 <0,0001
СРБ, мг/л 0-5,0 1,1±1,2 4,5±0,7 <0,0001
Тропонин, мкг/л 0-0,4 0 2,8±2,2 <0,0001
Атеросклероз - это системное заболевание, поражающее, как правило, несколько артериальных бассейнов [7]. В нашем исследовании среди пациентов, поступающих на КШ, отмечался мультифокальный атеросклероз, что определяло тяжесть заболевания. В обследуемой группе преобладало двух- и трехсосудистое поражение разных артериальных бассейнов. При этом до 62% пациентов перенесли кардиоваскулярные события в прошлом. Наши данные подтверждены другими исследованиями [7]. Так, в регистре REACH оценивались факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний у 67888 пациентов, которые получали соответствующую терапию [2]. По полученным результатам регистра у 26,3% пациентов с наличием ИБС, ишемией головного мозга, поражением периферических артерий присутствуют признаки атеротромбоза больше, чем в одном бассейне, а у 2,1% наличие симптомов атеротромбоза имеются в трех сосудистых бассейнах.
Артериальная гипертензия (АГ) встречалась с высокой частотой среди наших пациентов. Проведенные исследования по эпидемиологии и контролю АГ в России также продемонстрировали ее высокую распространенность (40,8%, т. е. более 42 млн человек в России) [4].
В нашей работе у больных наблюдалась коморбид-ная патология, включая сахарный диабет, заболевания почек и дыхательной системы. Наши результаты совпадают с данными Л.А. Эфрос (2013) [6]. Автор показал, что сопутствующие заболевания могут оказывать существенное влияние на течение и прогноз ИБС у пациентов после КШ и эффективность восстановительного лечения. В исследовании PRESTO (Prevention of Restenosis with Tranilast and its Outcomes) у пациентов с наличием сахарного диабета чаще возникали случаи нестабильной стенокардии, декомпенсации сердечной недостаточности, АГ, имели более высокий индекс массы тела и сниженную фракцию выброса ЛЖ. Таким образом, пациенты, прошедшие оперативное лечение, в реабилитационном периоде нуждаются в проведении полноценного лечения таких сопутствующих заболеваний.
Приверженность к терапии статинами среди обследуемых пациентов составила 71,9%, что отличается от других исследований [3]. C.A. Jackevicue (2005) отметил, что степень двухлетней приверженности в группе боль-
ных с острым коронарным синдромом наблюдалась в 40,1%, в группе хронической ИБС - 36,1% и в группе первичной профилактики - 25,4% [9]. Таким образом, был сделан вывод о невысокой приверженности участников к приему статинов, вследствие чего лечение не было достаточно эффективным.
После вмешательства на сердце у пациентов возникает воспалительный ответ. В послеоперационном периоде происходит активация маркеров, отвечающих за воспаление, что в последующем может стать причиной различных осложнений и привести к полиорганной недостаточности [13].
Для оценки характера воспаления традиционно используются неспецифические показатели системного воспаления (СОЭ, лейкоцитоз, изменение качественного состава лейкоцитарной формулы). В нашей работе продемонстрировано увеличение уровня лейкоцитов, палочкоядерных и сегментоядерных клеток крови после операции. Кроме того, при кардиохирургическом вмешательстве нарастает концентрация фибриногена в плазме, что отражено в других работах [18]. Выявлено, что повышение уровня данного биомаркера является прогностически неблагоприятным признаком, поскольку повышает склонность к тромбообразованию [18].
Уровень СРБ в ходе оперативного вмешательства увеличивается статистически значимо в пределах нормальных значений, что отражено в работе Т. Ра1шепш (2005). Автор показал прогностическую ценность уровня СРБ в предоперационном периоде, в частности уровень СРБ >3 мг/мл увеличивает риск смерти и инфаркт миокарда [17]. Поэтому, несмотря на изменение концентрации данного биомаркера среди обследованных пациентов в рамках нормы, его роль в возникновении ранних и отдаленных осложнений остается значимой.
ИЛ-6 вырабатывается в ответ на воспаление при различных сердечно-сосудистых заболеваниях [109]. В нашем исследовании обнаружено повышение ИЛ-6 в предоперационном периоде, что говорит о значимости показателя в процессах атерогенеза. К. Мг№а (2013) продемонстрировал, что ИЛ-6 является предиктором кардиоваскулярных событий с учетом традиционных и воспалительных факторов, в том числе среди здоровой популяции населения [15].
В нашей работе при кардиохирургическом вмешательстве происходит статистически значимое увеличение уровня ИЛ-6 при сравнении с состоянием до операции. Подобные данные продемонстрированы 1.8. иуаг (2014) [19]. Однако Я.М. 1о^шап (2014) получил иные результаты. Он выявил, что при реконструктивных операциях происходит значимое повышение ИЛ-10, фактора некроза опухоли-а, но не ИЛ-6 [10]. С другой стороны, I. Каш (2013) наблюдал увеличение концентрации ИЛ-6 после КШ наряду с моноцитарным хемоаттрак-тантным белком - 1 [11].
ИЛ-8 является провоспалительным фактором, в то время ИЛ-10 - противовоспалительный маркер. В нашей работе их концентрация оставалась в норме до- и после операции. Наши данные разнятся с результатами 8.Я. М^Ьа1ег (2015), который показал, что только ИЛ-8 и ИЛ-10 играют значительную роль в патогенезе карди-оваскулярных заболеваний [14]. Автор 1.8. иуаг также отметил значительное повышение ИЛ-8 в послеоперационном периоде [19]. Возможно, что именно низкий уровень ИЛ-10, который противодействует развитию воспаления, обуславливает высокие величины ИЛ-6 (почти в 5 раз больше нормы) после КШ.
Мы наблюдали увеличение маркеров повреждения миокарда. Уровень тропонина изменялся статистически значимо в ходе реконструктивной операции. Значимость ишемии подчеркивается в работе О.Б. БискЬег§ (2002) [8]. Несмотря на оптимальные методы защиты миокарда, различные факторы оперативного вмешательства (использование аппарата искусственного кровообращения, пережатие аорты, диссекция коронарных артерий, хирургическая техника) могут приве-
сти к выбросу тропонина [12]. Периоперационное повреждение миокарда является серьезной проблемой и наиболее распространенной причиной заболеваемости и смертности во время КШ [12].
Таким образом, повышение концентрации фибриногена, СРБ, интерлейкина-6 при проведении коронарного шунтирования у пациентов с ишемической болезнью сердца сопровождается увеличением тяжести системного воспалительного ответа. Кроме того, оперативное вмешательство приводит к миокардиальной ишемии, что обуславливает повышение в сыворотке крови тро-понина.
Конфликт интересов. Автор заявляет об отсутствии конфликта интересов.
Прозрачность исследования. Исследование не имело спонсорской поддержки. Исследователь несет полную ответственность за предоставление рукописи в печать.
Декларация о финансовых и иных взаимодействиях. Автор принимал участие в разработке концепции и дизайна исследования и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была проверена руководителем. Автор не получал гонорар за исследование.
Работа поступила в редакцию: 12.01.2016 г.
ЛИТЕРАТУРА
1. Оганов Р.Г., Концевая А.В., Калинина А.М. Экономический ущерб от сердечно-сосудистых заболеваний в Российской Федерации // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2011. - №10(4). - С.4-9.
2. Панченко Е.П. Беленков Ю.Н. Характеристика и исходы атеротромбоза у амбулаторных больных в Российской Федерации (по материалам международного регистра REACH) // Кардиология. - 2008. - №2. - С.17-24.
3. Рубаненко О.А. Коррекция дислипидемий у больных ишемической болезнью сердца категорий высокого и очень высокого риска // Аспирантский вестник Поволжья. Медицина. Научные статьи молодых ученых. - 2009. - №34. - С.65-68.
4. Чазова И.Е., Чучалин А.Г., Зыков К.А. и др. Диагностика и лечение пациентов с артериальной гипертонией и хронической обструктивной болезнью легких (Рекомендации Российского медицинского общества по артериальной гипертонии и Российского респираторного общества) // Системные гипертензии. - 2013. - №10. - С.5-34.
5. Шальнова С.А., Конради А.О., Карпов Ю.А. и др. Анализ смертности от сердечно-сосудистых заболеваний в 12 регионах Российской Федерации, участвующих в исследовании «Эпидемиология сердечно-сосудистых заболеваний в различных регионах России» // Российский кардиологический журнал. - 2012. - №5. - С.6-11.
6. Эфрос Л.А., Калев О.Ф. Сопутствующая патология у больных ишемической болезнью сердца после коронарного шунтирования // Полипатии в семейной и клинической медицине: материалы всероссийской научно-практической конференции, посвящённой 75-летию заслуженного деятеля науки РФ, профессора О.Ф. Калева. - Челябинск: Изд-во ГОУ ВПО ЧелГМА Росздрава, 2013 - С.228-234.
7. Bhatt D.L., Steg P.G., Ohman E.M., et al. International prevalence, recognition, and treatment of cardiovascular risk factor in outpatient with atherothrombosis // JAMA. - 2006. -Vol. 295. №2. - Р.180-189.
8. Buckberg G.D. Myocardial protection: entering the new millennium // J Card Surg. - 2002. - №17. - Р.447-450.
9. Jackevicius C.A., Alter D., Cox J., et al. Acute treatment of myocardial infarction in Canada 1999-2002 // Can J Cardiol. -2005. - Vol. 21. №2. - Р.145-152.
10. Jongman R.M., Zijlstra J.G., Kok W.F., et al. Off-pump
CABG surgery reduces systemic inflammation compared with on-pump surgery but does not change systemic endothelial responses: a prospective randomized study // Shock. - 2014. -Vol. 42. №2. - P.121-128.
11. Karu I., Starkopf J., Zilmer K., Zilmer M. Growth factors serum levels in coronary artery disease patients scheduled for bypass surgery: perioperative dynamics and comparisons with healthy volunteers // Biomed Res Int. - 2013. - Vol. 2013. -P.985404.
12. Kovacevic R., Majkic-Singh N., Ignjatovic S., et al. Troponin T levels in detection of perioperative myocardial infarction after coronary artery bypass surgery // Clin Lab. - 2004. - Vol. 50. -P.437-445.
13. Li P.J., Wei M.X., Liu J.S., et al. Effect of pericardial suction blood re-transfusion in off-pump coronary artery bypass grafting on inflammatory cytokines, myocardial injury and pulmonary function // Zhonghua. Wai. Ke. Za. Zhi. - 2008. - Vol. 46. №9. -P.677-680.
14. Mirhafez S.R., Zarifian A., Ebrahimi M., et al. Relationship between serum cytokine and growth factor concentrations and coronary artery disease // Clin Biochem. - 2015. - Vol. 48. №9. - P.575-580.
15. Miwa K., Tanaka M., Okazaki S., et al. Association between interleukin-6 levels and first-ever cerebrovascular events in patients with vascular risk factors // Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 2013. - Vol. 33. - P.400-405.
16. Packard R.S., Libby P. Inflammation in atherosclerosis: from vascular biology to biomarker discovery and risk prediction // Clin. Chem. - 2008. - Vol. 54 - P.24-38.
17. Palmerini T., Marzocchi A., Marrozzini C., et al. Preprocedural levels of C-reactive protein and leukocyte counts predict 9 month mortality after coronary artery stenosis // Circulation. - 2005. - Vol. 112. - P.2332-2338.
18. Roy S., Saha K., Mukherjee K., et al. Activation of coagulation and fibrinolysis during coronary artery bypass grafting: a comparison between on-pump and off-pump techniques // Indian J Hematol Blood Transfus. - 2014. - Vol. 30. №4. - P.333-41.
19. Uyar I.S., Onal S., Uysal A., et al. Evaluation of systemic inflammatory response in cardiovascular surgery via interleukin-6, interleukin-8, and neopterin // Heart Surg Forum. - 2014. -№17(1). - P. E13-17.
REFERENCES
1. Oganov R.G., Kontsevaya A.V., Kalinina A.M. Economic burden of cardiovascular disease in the Russian Federation // Kardiovaskulyarnaya terapiya i profilaktika. - 2011. - №10(4). -P.4-9. (in Russian)
2. Panchenko E.P., Belenkov Y.N. Characteristics and outcomes of atherotrombosis in outpatients in Russian Federation (REACH registry) // Kardiologiya. - 2008. - №2. - P.17-24. (in Russian)
3. Rubanenko O.A. Correction of dyslipidemia in patients with coronary artery disease categories of high and very high risk of heart // Aspirantskiy vestnik Povolzhya. Meditsina. Nauchnyie stati molodyih uchenyih. - 2009. - №3-4. - P.65-68. (in Russian)
4. Chasova I.E., Chuchalin A.G., Zyikov K.A. Diagnostics and treatment of patients with hypertension and obstructive lung disease (Guidelines of Russian medical society of hypertension and Russian respiratory society) // Sistemnyie Gipertenzii. - 2013. - №10. - P.5-34. (in Russian)
5. Shalnova S.A., Konradi A.O., Karpov Yu.A., et al. The analysis of cardiovascular death in 12 regions of Russian
Federation, enrolled in the study "Epidemiology of cardiovascular disease in different regions of Russian Federation" // Rossiyskiy kardiologicheskiy zhurnal. - 2012. - №5. - P.6-11. (in Russian)
6. Efros L.A., Kaleev O.F. Comorbidities in patients with coronary heart disease after coronary artery bypass graft // Polipatii v semeynoy i klinicheskoy meditsine: materialyi vseros. nauch.-praktich. konf., posvyasch. 75-letiyu zasluZhennogo deyatelya nauki RF, professora O.F. Kaleva - Chelyabinsk: Izd-vo GOU VPO ChelGMA Roszdrava, 2013. - P.228-234. (in Russian)
7. Bhatt D.L., Steg P.G., Ohman E.M., et al. International prevalence, recognition, and treatment of cardiovascular risk factor in outpatient with atherothrombosis // JAMA. - 2006. -Vol. 295. №2. - P.180-189.
8. Buckberg G.D. Myocardial protection: entering the new millennium // J Card Surg. - 2002. - №17. - P.447-450.
9. Jackevicius C.A., Alter D., Cox J., et al. Acute treatment of myocardial infarction in Canada 1999-2002 // Can J Cardiol. -2005. - Vol. 21. №2. - P.145-152.
10. Jongman R.M., Zijlstra J.G., Kok W.F., et al. Off-pump CABG surgery reduces systemic inflammation compared with on-pump surgery but does not change systemic endothelial responses: a prospective randomized study // Shock. - 2014. -Vol. 42. №2. - P.121-128.
11. Karu I., Starkopf J., Zilmer K., Zilmer M. Growth factors serum levels in coronary artery disease patients scheduled for bypass surgery: perioperative dynamics and comparisons with healthy volunteers // Biomed Res Int. - 2013. - Vol. 2013. -P.985404.
12. Kovacevic R., Majkic-Singh N., Ignjatovic S., et al. Troponin T levels in detection of perioperative myocardial infarction after coronary artery bypass surgery // Clin Lab. - 2004. - Vol. 50. -P.437-445.
13. Li P.J., Wei M.X., Liu J.S., et al. Effect of pericardial suction blood re-transfusion in off-pump coronary artery bypass grafting on inflammatory cytokines, myocardial injury and pulmonary function // Zhonghua. Wai. Ke. Za. Zhi. - 2008. - Vol. 46. №9. -P.677-680.
14. Mirhafez S.R., Zarifian A., Ebrahimi M., et al. Relationship between serum cytokine and growth factor concentrations and
coronary artery disease // Clin Biochem. - 2015. - Vol. 48. №9. - P.575-580.
15. Miwa K., Tanaka M., Okazaki S., et al. Association between interleukin-6 levels and first-ever cerebrovascular events in patients with vascular risk factors // Arterioscler Thromb Vasc Biol. - 2013. - Vol. 33. - P.400-405.
16. Packard R.S., Libby P. Inflammation in atherosclerosis: from vascular biology to biomarker discovery and risk prediction // Clin. Chem. - 2008. - Vol. 54 - P.24-38.
17. Palmerini T., Marzocchi A., Marrozzini C., et al. Preprocedural levels of C-reactive protein and leukocyte counts predict 9 month mortality after coronary artery stenosis // Circulation. - 2005. - Vol. 112. - P.2332-2338.
18. Roy S., Saha K., Mukherjee K., et al. Activation of coagulation and fibrinolysis during coronary artery bypass grafting: a comparison between on-pump and off-pump techniques // Indian J Hematol Blood Transfus. - 2014. - Vol. 30. №4. - P.333-41.
19. Uyar I.S., Onal S., Uysal A., et al. Evaluation of systemic inflammatory response in cardiovascular surgery via interleukin-6, interleukin-8, and neopterin // Heart Surg Forum. - 2014. -№17(1). - P. E13-17.
Информация об авторе:
Рубаненко Олеся Анатольевна - к.м.н., ассистент кафедры факультетской терапии, e-mail: olesya.rubanenko@gmail.com.
Information About the Author:
Rubanenko Olesia Anatol'evna - MD, PhD, assistant to department of faculty therapy, e-mail: olesya.rubanenko@gmail.com.
© ЛАЗИЦКАЯ А.М., ИЛЛАРИОНОВА Е.А. - 2016 УДК 543.544.943.3.068.7:615.07
спектрофотометрический анализ флуоксетина
Анна Марковна Лазицкая, Елена Анатольевна Илларионова (Иркутский государственный медицинский университет, ректор - д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра фармацевтической и токсикологической химии, зав. - д.х.н., проф. Е.А. Илларионова)
Резюме. Разработана унифицированная методика спектрофотометрического определения флуоксетина в субстанции и капсулах, отличающаяся использованием в качестве образца сравнения калия дихромата и калия феррицианид. Обоснованы оптимальные условия определения: выбор раствора сравнения, растворитель - 0,1М раствор хлористоводородной кислоты, аналитическая длина волны - 262 нм. Определен коэффициент пересчета. Относительное стандартное отклонение разработанной методики для субстанции составило не более 0,006, для таблеток не более 0,006.
Ключевые слова: спектрофотометрическое определение, УФ спектр, оптический образец сравнения, коэффициент пересчета, флуоксетин, калия дихромат, калия феррицианид.
SPECTROPHOTOMETRIC ANALYSIS OF FLUOxETINE
A.M. Lazitskaya, E. A. Illarionova (Irkutsk State Medical University, Russia)
Summary. The unified technique of spectrofotometric definition of fluoxetine in substance and capsules differing in use as an example of comparison of potassium dichromate and potassium ferricyanide has been developed. Optimum conditions of definition have been substantiated: a comparison solution choice, solvent - 0,1M solution of hydrochloric acid, analytical wavelength - 262 nm. The recalculation coefficient is defined. The relative standard deviation of the developed technique for substance amounted to no more than 0,006, for capsules - no more than 0,006.
Key words: spectrophotometric determination, UV spectrum, optical reference sample, conversion factor, fluoxetine, potassium dichromate, potassium ferricyanide.
Широкое применение в медицинской практике находит антидепрессивное лекарственное средство - флуоксетин. Этот препарат рекомендуют при разных видах депрессии (особенно сопровождающихся страхом), в том числе в случаях устойчивости к действию других антидепрессантов [5].
Критический анализ данных литературы и нормативной документации (НД) показал, что для количественного определения флуоксетина предложен метод кислотно-основного титрования в среде ледяной уксусной кислоты [6]. Указанный метод является длительным, трудоемким, требует использования летучих и токсичных растворителей. Анализ капсул флуоксети-
на проводится спектрофотометрическим методом или методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием рабочего стандартного образца [7]. Метод ВЭЖХ требует использования дорогостоящих импортных хроматографов, сорбентов, растворителей. Спектрофотометрический метод отличается доступностью, простотой методик анализа, экспрессностью, высокой чувствительностью, воспроизводимостью, низкой токсичностью. Более широкому использованию данного метода для анализа субстанций препятствует отсутствие образцов сравнения. В связи с этим оптимизация спектрофотометрического определения флуоксетина с использованием оптических об-
разцов сравнения является актуальной проблемой.
Цель настоящего исследования - разработать новую методику количественного определения флуоксетина спектрофотометрическим методом с использованием оптических образцов сравнения.
Материалы и методы
В работе использовали фармацевтическую субстанцию флуоксетина и капсулы флуоксетина по 20 мг, отвечающие требованиям нормативных документов, калия дихромат хч, калия феррицианид хч, 0,1М раствор натрия гидроксида, приготовленный из фиксанала, 0,1М раствор хлористоводородной кислоты, приготовленный из фиксанала, спирт этиловый 95%, воду очищенную. Оптическую плотность растворов измеряли на спектрофотометре СФ-2000 в кюветах 1 см на фоне растворителя. Величину рН контролировали с помощью рН-метра ИТ-1101.
При статистической обработке результатов анализа использовали методы Стьюдента и Фишера [2] Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез р=0,05.
Результаты и обсуждение
С целью оптимизации условий спектрофотометри-ческого определения флуоксетина были изучены спектры поглощения растворов флуоксетина в области от 200 до 400 нм в интервале рН 1,1 - 13,0 (рис. 1).
Рис. 1. УФ спектр 0,05% раствора флуоксетина гидрохлорида при различных значениях рН: 1 - рН=1,3; 2 - рН=7,1; 3 - рН=6,2; 4 - рН=13,2.
Из представленных экспериментальных данных видно, что УФ-спектр поглощения флуоксетина характеризуется двумя полосами поглощения с максимумами поглощения при длинах волн 224±1 нм, 262±1 нм (рН 1,3; 7,1) и при длинах волн 228±1 нм, 262±1 нм (рН 6,2; 13,2). Следует отметить, что при переходе от рН = 1,3 к рН = 13,2 наблюдается гиперхром-ный эффект. Изучение стабильности растворов флуоксетина показало, что сохранение оптических свойств наблюдается при рН = 1,3 и рН = 6,2. При других значениях рН растворы менее стабильны.
В качестве растворителя для анализа флу-оксетина был выбран 0,1М раствор хлористоводородной кислоты. В данном растворителе раствор флуоксетина (рН 1,3) наиболее стабилен. Для приготовления растворов первого разведения использовали воду очищенную, так как она является наиболее доступным растворителем, и анализируемое вещество в воде умеренно растворимо.
В качестве аналитической выбрали длину волны 262 нм, соответствующую длинноволновому максимуму поглощения флуоксетина
в 0,1М растворе хлористоводородной кислоты.
Методом наименьших квадратов определено уравнение градуировочного графика для спектрофотометри-ческого определения флуоксетина А = 0,0023С - 0,00001, 8Д=0,002 (рН=1,3) при аналитической длине волны 262 нм (А - оптическая плотность растворов, С - концентрация растворов, мкг/мл).
Для количественного определения флуоксетина в субстанции спектрофотометрическим методом необходимо выбрать образец сравнения. Выбор оптических образцов сравнения осуществляли, исходя из аналитической длины волны лекарственного вещества, оптимального растворителя и оптимальной области поглощения образца сравнения [1,3,4].
В качестве оптических образцов сравнения для определения флуоксетина использовали вещества неорганической природы калия дихромат и калия феррици-анид [1,3,4]. Калия дихромат и калия феррицианид выпускаются серийно промышленностью квалификации хч, на них имеются ГОСТы (ГОСТ 4220-75, ГОСТ 420675 соответственно), регламентирующие их качество, они доступны, имеют низкую стоимость, содержание основных веществ определено химическим методом и составляет не менее 99,9%.
Спектры поглощения растворов калия дихромата [3] в интервале рН 10,0-13,0 характеризуются двумя полосами с максимумами поглощения при 275±1 нм и 373±1 нм. При уменьшении кислотности среды (рН 7,5) наблюдается уменьшение интенсивности поглощения вещества без изменения максимумов. Дальнейшее изменение рН растворов в сторону кислотности (рН 5,0-1,1) приводит к гипсохромному сдвигу максимумов поглощения. При уменьшении кислотности среды в спектрах поглощения калия дихромата наблюдаются максимумы при 257±1 нм и 350±1 нм. Изучение стабильности растворов дихромата калия при оптимальных значениях рН показало, что в течение суток раствор дихромата калия более стабилен при рН 1,1.
Спектр поглощения раствора калия фер-рицианида [1,4] в интервале рН 1,1-13,0 характеризуется тремя полосами поглощения с максимумами при 261±1 нм, 303±1 нм и 421±1 нм и минимумами при 243±1 нм, 273±1 нм и 355±1 нм. При уменьшении кислотности среды спектр поглощения не меняется. Изучение стабильности раствора калия феррициани-да показало, что в течение суток оптические характеристики растворов изменяются незначительно, а в дальнейшем происходит гидролиз соли, что приводит к изменению интенсивности поглощения растворов и гипсохромному смещению максимумов поглощения.
На рисунках 2 и 3 представлены спектры поглощения растворов флуоксетина гидрохлорида, калия дих-
Рис. 2. УФ-спектры поглощения растворов флуоксетина гидрохлорида и калия феррицианида.
ромата и калия феррицианида в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты.
Рис. 3. УФ-спектры поглощения растворов флуоксетина гидрохлорида и калия дихромата.
Результаты определения коэффициента пересчета
Образец сравнения Метрологические характеристики п=10, р= 95%
К Б2 Б Б X ДХ Е% Б Г
Калия дихромат 6,0709 0,005256 0,072500 0,022943 0,0519 0,85 0,003
Калия феррицианид 1,6907 0,000351 0,018726 0,005926 0,01339 0,79 0,004
Результаты спектрофотометрического определения флуоксетина в субстанции
Образец сравнения Метрологические характеристики (п=10, р=95%)
X , % Б2 Б Б X ДХ Е% Б Г
Калия дихромат 100,45 0,071933 0,268203 0,084874 0,191815 0,19 0,003
Калия ферроцианид 100,4 0,324244 0,569424 0,180197 0,407245 0,41 0,006
Из данных рисунков видно, что полосы поглощения флуоксетина, калия дихромата и калия феррицианида в области аналитической длины волны сходны, но различаются по интенсивности поглощения в связи с чем, вводится коэффициент пересчета, являющийся отношением удельных показателей поглощения оптического Е и рабочего Е образцов сравнения К
оос г ос г ^ г пер
= Е / Е , где Е - удельный показатель по-
оос ос оос
глощения оптического образца сравнения, Еос - удельный показатель поглощения рабочего образца сравнения определяемого (исследуемого) вещества.
Результаты определения коэффициента пересчета представлены в таблице 1.
Результаты спектрофотометрического определения флуоксетина в субстанции и капсулах представлены в таблице 2.
Проведена валидационная оценка разработанной методики по критериям: специфичность, сходимость, воспроизводимость, линейность результатов, аналитическая область методики (табл. 4).
Полученные результаты свидетельствуют о пригодности предложенных методик.
Анализ приведенных результатов показывает, что относительная погрешность количественного определения флуоксетина по различным образцам сравнения не превышает 0,41%. Методика спектрофотометрического определения с использованием оптических образцов сравнения характеризуется хорошей воспроизводимостью (8г не превышает 0,006). Разработанная методика спектрофотометри-ческого определения по оптическим образцам сравнения отличается доступностью, экс-прессностью, высокой воспроизводимостью, отсутствием высокотоксичных реактивов.
Таблица 1
Таблица 2
Количественное определение флуоксетина в капсулах
Метрологические характеристики
№ серии X ,% X ,% Б2 Б Б X ДХ Е% Б Г
5Е107А Калия дихромат 100,4 0,158178 0,397716 0,125859 0,2844 0,28 0,004
5Е106А 100,2 0,064653 0,254256 0,080461 0,2544 0,36 0,006
120715 100,1 0,137685 0,371059 0,117424 0,2665 0,27 0,004
5Е107А Калия феррицианид 100,4 0,154133 0,392598 0,124284 0,2808 0,28 0,004
5Е106А 99,9 0,113864 0,337437 0,106784 0,2413 0,24 0,003
120715 100,1 0,124736 0,353180 0,111766 0,2526 0,25 0,004
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Прозрачность исследования.
Исследование не имело спонсорской поддержки. Исследователи несут полную ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать. Таблица 3 Декларация о финансовых и иных взаимодействиях. Все авторы принимали участие в разработке концепции и дизайна исследования и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за исследование.
Работа поступила в редакцию: 12.01.2016 г.
Результаты валидационной оценки методики спектрофотометрического определения флуоксетина
Таблица 4
Параметры Критерии валидности Результаты испытания по стандартам
Калия дихромат Калия феррицианид
1.Специфичность Специфична Специфична
2.Сходимость ВБй < 2% ^ й t табл выч ВБй=0,27 t =1,78 (С=2,26), п=10 ВБй=0,39 t =2,23 (С=2,26), п=10
3.Воспроизводимость ВБй < 3% ^ й t табл выч ВБй=0,16 t =0,95 (Г =2,26), пт=бл0 ВБй=0,34 t = 1,86 (Гб =2,26), пт=бл0
4. Линейность результатов Г й 0,99 Г = 0,9974; у = 0,0023С - 0,00001 Г = 0,9974; у = 0,0023С - 0,00001
5. Аналитическая область методики интервал концентраций 5 - 45 мг/мл 5 - 45 мг/мл
литература
Артасюк Е.М., Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Пантелеева Н.М. Спектрофотометрическое определение нимесулида // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2006. - Т. 63. №5.
- С.33-36.
2. Государственная Фармакопея СССР. - Вып. 1. Общие методы анализа. - 11-е. изд., доп. - М.: Медицина, 1987.
- 336 с.
3. Илларионова Е.А., Сыроватский И.П., Иноземцев П.О. Новый вариант спектро-фотометрического определения дротаверина // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). -2011. - Т. 88. №5. - С.75-77.
