ВЛИЯНИЕ НЕЙРОТРОФИНА-3 НА ПРЯМО РЕПРОГРАММИРОВАННЫЕ НЕРВНЫЕ КЛЕТКИ-ПРЕДШЕСТВЕННИКИ И КЛЕТКИ НЕЙРОБЛАСТОМЫ SK-N-BE(2) Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

УДК 612.822.56

ВЛИЯНИЕ НЕЙРОТРОФИНА-3 НА ПРЯМО РЕПРОГРАММИРОВАННЫЕ НЕРВНЫЕ КЛЕТКИ-ПРЕДШЕСТВЕННИКИ И КЛЕТКИ НЕЙРОБЛАСТОМЫ SK-N-BE(2)

DOI 10.24412/CL-37228-2024-154-156

Е. А. Архиреева1, С. М. Кузнецова2, Г. М. Юсубалиева12, В. П. Баклаушев1,2

'Федеральный центр мозга и нейротехнологий ФМБА России, Москва, Россия

2Федеральный научно-клинический центр специализированных видов

ФМБА России, Москва, Россия E-mail: katerina.andreevna.mos98@list.ru

Аннотация. Было показано положительное влияние нейротрофина-3 на пролиферацию, жизнеспособность клеток и аксональный рост у клеток нейробластомы SK-N-BE(2) и прямо репрограммированных нервных клеток-предшественников с помощью тест-системы iCELLigence и флюоресцентной микроскопии.

Ключевые слова: нейротрофин-3, пролиферация, жизнеспособность, аксональный рост, drNPC, SK-N-BE(2).

Нейротрофин-3 (НТ-3) — белок, принадлежащий к семейству нейротрофинов. Он стимулирует рост симпатических и сенсорных нейронов, регулирует выживание, дифференцировку и пролиферацию клеток различных популяций в тканях центральной и периферической нервной системы. Благодаря своим хемотрофическим свойствам нейротрофин-3 способствует аксональному росту нейронов, возобновление которого критически важно для восстановления после спинальной травмы [1; 3]. Из-за неблагоприятных условий, развивающихся в месте повреждения, блокируется регенерация проводящих путей [2]. Нарушение трофики тканей приводит к снижению жизнеспособности как эндогенных клеток, так и применяемых в терапии клеточных культур. Экзогенное введение в место травмы факторов роста, в частности НТ-3, совместно с прямо репрограммированными нейрональными предшественниками мо-

жет оказать существенное содействие их приживлению, стимулировать нейрогенез, тем самым способствуя процессам заживления и росту аксонов [2; 3]. Целесообразно будет изучить воздействие НТ-3 на пролиферативный потенциал нервных клеток и рост аксонов in vitro.

Работа была выполнена на двух клеточных линиях: SK-N-BE(2) и drNPC (direct reprogrammed Neural Progenitor Cells). SK-N-BE(2) — клеточная линия нейробластомы, созданная в 1972 году на основе биопсии костного мозга, используется в неврологических исследованиях. Клетки drNPC, меченные GFP, были получены по протоколу Jan Eric Affort.

Для выявления функционального воздействия НТ-3 клетки SK-N-BE культивировали в планшете с адгезивной поверхностью в полной ростовой среде DMEM/F12 + 10% FBS + 1% pen-strep, а клетки drNPC — в планшете, дно лунок которого было покрыто матригелем Matrigel ® Matrix, в среде Neurocult + 10% Supplement Ns-A + 1% pen-strep + B27 + EGF. После постепенного удаления в процессе культивирования факторов, имеющих положительное влияние на жизнеспособность и рост аксонов, наблюдали изменения в морфологии клеток и их пролиферации, а также укорочение длины отростков, либо отсутствие их роста. Затем в среду добавляли НТ-3 и наблюдали его дозозависимый эффект. В качестве контролей использовались клетки, выращиваемые в чистой среде или с добавлением различных комбинаций питательных компонентов. Результаты анализировались с помощью микроскопа ZEISS Primovert, системы визуализации Celena S и системы мониторинга пролиферации в реальном времени iCELLigence.

Работа выполнена в рамках государственного задания ФМБА России (НИР «Нейромат») и гранта РНФ 21-74-20110.

Список литературы

1. Grill R., Murai K., Blesch A., Gage F. H., Tuszynski M. H. Cellular delivery of neurotrophin-3 promotes corticospinal axonal growth and partial functional recovery after spinal cord injury // J Neuros-ci. — 1997 Jul. — V. 15. — No 17 (14). — P. 5560-5572.

2. Fawcett J. W., Asher R. A. The glial scar and central nervous system repair // Brain Res Bull. — 1999 Aug. — No 49 (6). — P. 377-391.

3. Bregman B. S., Coumans J.-V., Ning Dai Hai, Kuhn P. L., Lynskey J., McAtee M., Sandhu F. Transplants and neurotrophic factors increase regeneration and recovery of function after spinal cord injury // Prog Brain Res. — 2002. — No 137. — P. 257-273.

THE EFFECT OF NEUROTROPHIN-3 ON DIRECTLY REPROGRAMMED NERVE PROGENITOR CELLS AND NEUROBLASTOMA CELLS SK-N-BE(2)

Abstract. The positive effect of neurotrophin-3 on proliferation, cell viability and axonal growth in neuroblastoma cells SK-N-BE(2) and directly reprogrammed nerve progenitor cells (drNPC) was shown using the iCELLigence test system and fluorescence microscopy.

Key words: neurotrophin-3, proliferation, viability, axonal growth, drNPC, SK-N-BE(2).