CC BY
52
С. И. Рябов, И. А. Ракитянская, Т. С. Рябова
ВЛИЯНИЕ ЛИМФОИДНОЙ ИНФИЛЬТРАЦИИ ПОЧЕЧНОЙ ТКАНИ БОЛЬНЫХ IgA-НЕФРОПАТИЕЙ НА КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНУЮ КАРТИНУ ЗАБОЛЕВАНИЯ С УЧЕТОМ ВОЗРАСТА
СПб ГУЗ «Больница Святого Великомученика Георгия»;
Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН
Функции иммунной системы играют жизненно важное значение для обеспечения защиты организма хозяина от постоянного воздействия чужеродных микроорганизмов и патогенов. У людей пожилого возраста изменяется способность реагировать на инфекционные патогены за счет возрастных изменений адаптивного иммунного ответа, что приводит к более высокому уровню распространенности инфекционных, онкологических и аутоиммунных заболеваний [1-3]. Возрастные изменения компонентов адаптивной иммунной системы достаточно хорошо исследованы, однако детальный анализ влияния пожилого возраста на иммунную систему остается до конца не ясным. Имеются указания на дисфункцию врожденного иммунитета у пожилых людей. Показано, что старение организма человека связано с повышением продукции провоспалительных цитокинов макрофагами и фибробластами, так как повышенная концентрация в крови этих цитокинов ответственна за большинство возрастных заболеваний, в основе патогенеза которых лежит иммуновоспалительная реакция [4, 5]. На основании этого был введен термин «inflamm-ageing» и выдвинута гипотеза, что постоянная антигенная стимуляция в совокупности с продукцией провоспалительных цитокинов может вызывать развитие воспалительных заболеваний. Развивающийся на этом фоне дисбаланс между про- и противовоспалительными цитокинами играет роль индикатора в развитии снижения функций иммунной системы и смертности в пожилом возрасте [6]. Так же у пациентов старше 60 лет выявлено снижение фагоцитарной активности клеток и уменьшение экспрессии Toll-like рецепторов на анти-ген-презентирующих клетках [7], увеличение количества CD56-NK-клеток с низкой цитолитической активностью и пониженной способностью к секреции цитокинов по сравнению с более представительной субпопуляцией CD56+NK-клеток [8].
В развитии и прогрессировании хронического гломерулонефрита, независимо от морфологической формы, огромное значение играет лимфоидный инфильтрат почечной ткани. Состав лимфоидного инфильтрата весьма вариабелен, и это свидетельствует о заинтересованности лимфоцитов в механизмах повреждения почечной ткани [9-11].
Наиболее объективное представление о взаимоотношениях между почечной тканью, пролиферативный процесс которой подвергается регулированию, и мононукле-арами лимфоидного инфильтрата могут дать иммуноморфологические методы исследования, позволяющие визуально оценивать эти соотношения непосредственно в почечной ткани больного. Механизм реализации, как стимулирующего, так и иммуно-
© С. И. Рябов, И. А. Ракитянская, Т. С. Рябова, 2011
депрессивного влияния мононуклеаров на местный иммунный ответ, и развивающиеся в результате этого воздействия морфологические изменения ткани можно оценить при использовании иммунофлюоресцентного метода исследования субпопуляцион-ного состава лимфоидного инфильтрата в прижизненном биоптате почечной ткани у больных ^А-нефропатией.
Первые исследования, посвященные изучению роли лимфоидного инфильтрата почечной ткани в развитии и прогрессировании ^А-нефропатии стали проводиться в конце 80-х годов ХХ века. Тем не менее, до настоящего времени эта проблема остается не уточненной и до конца не исследованной [12-14].
В наиболее ранних работах по изучению лимфоидного инфильтрата у больных ^А-нефропатией показано повышенное содержание Т-зирргеззог/су^охгс лимфоцитов (ОКТ8+клетки) в сочетании с незначительным повышением числа Т^е1регЛ^исег лимфоцитов ^еи3А+клетки) и моноцитов [12]. Более выраженная Т-лимфоидная инфильтрация в ткани была выявлена у больных с нарушением скорости клубочковой фильтрации (СКФ) во время проведения биопсии при сравнении с больными с нормальной СКФ. Авторы работы показали, что при ухудшении функции почек у больных увеличивается не только количество ОКТ8 + клеток в составе инфильтрата, но и Leu3A+клеток и моноцитов.
В более поздних работах было показано, что при прогрессировании ^А-нефропатии повышается местная и системная активация Т-клеток с помощью ко-стимуляторных сигналов посредством связывания рецептора CD28 с родственными лигандами (CD80/CD86), которые локализованы в антиген-презентирующих клетках (АРС). Эта активация приводит к накоплению Т-клеток (CD45RO+), моноцитов (CD14+), макрофагов (CD68+), экспрессии CD86 в клубочке, перигломерулярной зоне и в перитубулярном интерстиции [15]. При этом авторы выявили положительную корреляцию между экспрессией CD86 и количеством CD45RO, CD14 и CD68 позитивных клеток, а количество CD86+клеток (в основном моноциты/макрофаги) и процентное содержание клеток-канальцев, экспрессирующих CD80, достоверно связано с функцией почек у больных.
Выявленная экспрессия 1САМ-1 на эндотелиальных клетках сосудов почки у больных ^А-нефропатией ассоциируется с количеством интерстициальных мононуклеа-ров и коррелирует с присутствием в интерстициальном пространстве клеток фенотипа CD45+, CD14+ и CD3+ [16]. При прогрессировании функции почек (повышение кре-атинина сыворотки на 50%) у больных значительно повышается количество CD14+ и CD3+клеток и экспрессия 1САМ-1+ в интерстиции, что дает основание рассматривать эти изменения как маркер тубулоинтерстициального поражения при ^А-нефропатии [17, 18].
Однако нам не удалось найти литературные данные о возрастных особенностях лимфоидного инфильтрата у больных ^А-нефропатией и о его влиянии на клиническую картину заболевания у больных старшей возрастной группы.
Целью данного исследования явилось изучение влияния субпопуляционного состава лимфоидного инфильтрата почечной ткани на клинико-лабораторную картину заболевания у больных ^А-нефропатией с учетом возраста.
Пациенты и методы. В исследование были включены 117 больных ^А-неф-ропатией от 19 до 74 лет, средний возраст составил 36,37 ± 1,56 лет. Женщин и мужчин было 29% и 71% соответственно. Диагноз был подтвержден при проведении световой
и иммунофлюоресцентной микроскопии биоптатов ткани почек, полученных путем прижизненной пункционной биопсии. IgA-нефропатия при геморрагическом васкули-те Шенлейн—Геноха в исследование не включалась. Кроме диагностической световой и иммунофлюоресцентной микроскопии у всех больных проводилось исследование состава лимфоидного инфильтрата в клубочке и в интерстиции. Абсолютное количество клеток в составе инфильтрата рассчитывалось на каждый клубочек, аналогично в пяти полях зрения в интерстиции. Определяли абсолютное количество клеток с помощью моноклональных антител CD3, CD4, CD8, CD71, CD25, CD19/X, CD19/k, CD38, TdT+клетки, (APO-1/FAS)CD95, HLA-DR-DP-DQ/CD8 с Fitc-меткой («Dako» Германия). Оценка степени пролиферации мононуклеаров в составе лимфоидного инфильтрата клубочка и интерстиция изучалась с помощью моноклонального антитела BrdU (анти-бромдеоксиуридин) («Dako» Германия) с использованием пероксидазной метки.
В ходе работы нами был проведен анализ:
1) клинической картины (начало болезни — связь с простудными заболеваниями, длительность болезни, первые клинические проявления — макрогематурия, отеки, гипертензия, цифры артериального давления);
2) лабораторных показателей (выраженность гематурии, протеинурия, суточная потеря белка, уровень креатинина, мочевины, сыворотки крови, уровень гемоглобина, IgA сыворотки крови).
Длительность заболевания от первой клинической манифестации до проведения морфологического исследования и постановки диагноза составила 37,20 ± 8,8 месяцев, т. е. около 3 лет.
В ходе исследования больные были разделены на две возрастные группы: I группу составили 98 пациентов в возрасте до 59 лет включительно (средний возраст 36,92 ± 1,96 года); II группу — 19 пациентов старше 60 лет (средний возраст 68,80 ± 1,44 лет).
Статистическая обработка результатов проводилась с использованием параметрических и непараметрических критериев с помощью программы STATISTICA (версия 6). Групповые результаты представлены в виде средней ± стандартная ошибка от средней (М ± Standard Error). Критический уровень значимости различия показателей принимали равным 0,05.
Результаты. У 69% больных IgA-нефропатией развитие первых симптомов заболевания было связано с перенесенными простудными заболеваниями (ОРЗ, ангины, переохлаждение). Достоверных различий в разных возрастных группах выявлено не было (70% в I группе и 65% во II группе). Среди первых симптомов заболевания чаще всего выявлялась гематурия — 72% больных (при этом 40,9% больных отмечали появление мочи цвета «мясных помоев»), далее 36% больных отмечали появление отеков (на лице и нижних конечностях) и 20% — появление артериальной гипертензии.
Был проведен анализ лабораторных показателей у больных IgA-нефропатией на момент проведения биопсии. При проведении сравнительного анализа лабораторных показателей и цифр артериального давления оказалось, что группы больных достоверно отличались по цифрам систолического артериального давления, уровню холестерина сыворотки крови и выраженности суточной потери белка. Эти показатели были достоверно выше у лиц старше 60 лет. По остальным показателям достоверных различий в возрастных группах выявлено не было.
Следующим этапом работы было проведение анализа субпопуляционного состава лимфоидного инфильтрата в гломерулярной зоне и интерстициальном пространстве
у больных IgA-нефропатией в разных возрастных группах. Полученные результаты представлены в таблице 1.
Таблица 1. Субпопуляционный состав лимфоидной инфильтрации в гломерулярной зоне и интерстициальном пространстве в разных возрастных группах больных IgA-нефропатией
Исследуемый показатель I группа II группа
клубочек (1) интерстиций (2) клубочек (3) интерстиций (4)
TdT 0,8б ± 0,05 4,30 ± 0,75 Р(1-2) = 0,003 0,35 ± 0,07 1,22 ± 0,бб Р(3-4) = 0,03
CD3 2,87 ± 0,45 8,50 ± 1,4б Р(1-2) = 0,03 1,20 ± 0,28 5,71 ± 1,21 Р(3-4) = 0,02
CD4 4,95 ± 0,б0 5,3 ± 1,4 б,б2 ± 0,35 17,3 ± 1,2 Р(3-4) = 0,04
CDS 2,39 ± 0,58 3,7 ± 1,3 4,37 ± 0,28 7,б4 ± 0,9 Р(2-4) = 0,04
HLA-DR-DP-DQ/CDS 3,9 ± 0,70 9,25 ± 1,74 1,0 ± 0,57 8,37 ± 1,13 Р(3-4) = 0,003
CD25 1,0 ± 0,бб 5,5б ± 1,б9 Р(1-3) = 0,03 1,4 ± 0,92 7,89 ± 1,б1 Р(3-4) = 0,002
CD71 0,б ± 0,35 1,4 ± 0,8 1,5 ± 0,48 б,9 ± 1,7 Р(3-4) = 0,03
CD3S 0,30 ± 0,02 4,08 ± 1,78 Р(1-3) = 0,004 0,11 ± 0,01 2,44 ± 0,80 Р(3-4) = 0,01
CD19/X 27,7 ± 2,S6 31,5 ± 4,3 12,72 ± 1,05 1б,45 ± 2,4
CD19/K 24,5 ± 1,7б Зб,7 ± 3,90 Р(1-2) = 0,03 14,бЗ ± 1,90 20,б4 ± 2,7 Р(3-4) = 0,03
(APO-1/FAS)CD95 1,б8 ± 0,05 б,17 ± 1,23 Р(1-2) = 0,04 б,50 ± 0,73 9,бб ± 1,14
BrdU ^фаза) 2,бЗ ± 0,50 3,75 ± 0,91 1,50 ± 0,34 2,0 ± 0,02
Как видно из представленной таблицы, в составе инфильтрата в гломерулярной зоне и в интерстициальном пространстве присутствуют все исследуемые субпопуляции мононуклеаров. При сравнительном анализе состава лимфоидного инфильтрата в гломерулярной зоне и интерстициальном пространстве в разных возрастных группах выявлено достоверное увеличение содержания в интерстиции клеток фенотипа CD3, CD38, CD4, CD25, CD71, CD19/k, TdT+, (APO-1/FAS)CD95. Лимфоидный инфильтрат в интерстициальном пространстве более богат по количественному составу мононукле-аров, чем в гломерулярной зоне. Следовательно, можно говорить о том, что интерстициальное пространство является наиболее активной частью нефрона.
Далее был проведен анализ субпопуляционного состава лимфоидной инфильтрации в гломерулярной зоне у больных IgA-нефропатией в разных возрастных группах (табл. 2).
Как видно из представленной таблицы, субпопуляционный состав лимфоидного инфильтрата в гломерулярной зоне у больных IgA-нефропатией различался в зависимости от возраста больного. В старшей возрастной группе отмечается достоверное снижение количества TdT+клеток, что указывает на нарушение регенераторных процессов, прогрессирующих с возрастом больного. Содержание клеток фенотипа CD3 и
Таблица 2. Субпопуляционный состав лимфоидной инфильтрации в гломерулярной зоне больных IgA-нефропатией в разных возрастных группах
Исследуемый показатель I группа II группа р
тат+ 0,86 ± 0,05 0,35 ± 0,07 0,04
CD3 2,87 ± 0,45 1,20 ± 0,28 0,04
CD4 4,95 ± 0,60 6,62 ± 0,35 —
CD8 2,39 ± 0,58 4,37 ± 0,28 0,04
3,9 ± 0,70 1,0 ± 0,57 0,03
CD25 1,0 ± 0,66 1,4 ± 0,92 —
CD71 0,6 ± 0,35 1,5 ± 0,48 0,02
CD38 0,30 ± 0,02 0,11 ± 0,01 —
CD19/X 27,7 ± 2,86 12,72 ± 1,05 0,004
CD19/к 24,5 ± 1,76 14,63 ± 1,9 0,03
(APO-1/FAS)CD95 1,68 ± 0,05 6,50 ± 0,73 0,001
ВгШ ^фаза) 2,63 ± 0,50 1,50 ± 0,34 0,04
HLA-DR-DP-DQ/CD8 также достоверно уменьшено в составе инфильтрата в старшей возрастной группе, что свидетельствует об изменениях субпопуляционного состава зрелых иммунокомпетентных клеток в сторону их истощения у больных старше 60 лет.
CD19/\ и CD19/к являются клетками В-ряда, синтезирующими к и X легкие цепи при попадании инфекционного антигена в почечную ткань и развитии противовирусного местного иммунного ответа. С возрастом у больного наблюдается уменьшение общей субпопуляции В-лимфоцитов, приводящее к снижению гуморального иммунного ответа с низкой продукцией антител, повышается чувствительность больного старшего возраста к развитию инфекционного поражения ткани почки.
Кроме того, у больных старшей возрастной группы выявлено выраженное ускорение процесса апоптоза мононуклеаров лимфоидного инфильтрата в гломерулярной зоне. Повышение количества супрессорных клеток фенотипа CD8 в составе лимфоидного инфильтрата гломерулярной зоны у больных старшей возрастной группы свидетельствует о развитии супрессии иммунного ответа, которая усугубляется на фоне поражения ткани почки инфекционным патогеном.
Увеличение содержания клеток CD71 в составе инфильтрата свидетельствует о повреждающем воздействии на структуру базальной мембраны, на подавление процессов репаративной регенерации, что подтверждается уменьшением количества TdT+клеток в инфильтрате клубочка у больных старшей возрастной группы, параллельно этим изменениям выявлено снижение пролиферативной активности мононуклеаров в составе инфильтрата.
Далее был проанализирован субпопуляционный состав лимфоидного инфильтрата в интерстициальном пространстве у больных ^А-нефропатией в разных возрастных группах (табл. 3).
Характер изменения состава лимфоидного инфильтрата в интерстициальном пространстве аналогичен изменениям в гломерулярной зоне. Здесь также отмечалось
Таблица 3. Субпопуляционный состав лимфоидной инфильтрации в интерстициальном пространстве больных IgA-нефропатией в разных возрастных группах
Исследуемый показатель I группа II группа р
TdT 4,30 ± 0,75 1,22 ± 0,66 0,01
CD3 8,50 ± 1,46 5,71 ± 1,21 —
CD4 5,3 ± 1,4 17,3 ± 1,2 0,01
CD8 3,7 ± 1,3 7,64 ± 0,9 0,05
тА^^Р^^8 9,25 ± 1,74 8,37 ± 1,13 —
CD25 5,56 ± 1,69 7,89 ± 1,61 —
CD71 1,4 ± 0,8 6,9 ± 1,7 0,01
CD38 4,08 ± 1,78 2,44 ± 0,80 —
CD19/X 31,5 ± 4,3 16,45 ± 2,4 0,01
CD19/к 36,7 ± 3,9 20,64 ± 2,7 0,01
(APO-1/FAS)CD95 6,17 ± 1,23 9,66 ± 1,14 0,01
В^и ^фаза) 3,75 ± 0,91 2,0 ± 0,02 0,04
достоверное увеличение количества клеток фенотипа CD4, CD8, CD71 и снижение количества TdT+клеток и клеток В-ряда (CD19/X и CD19/к) у больных старшей возрастной группы. В этой же группе наблюдается достоверное падение пролиферативной активности мононуклеаров в составе лимфоидного инфильтрата и ускорение процессов апоптоза мононуклеаров.
Следующим этапом был проведен корреляционный анализ влияния субпопуля-ционного состава лимфоидного инфильтрата на клинико-лабораторную картину заболевания, были последовательно проанализированы обе возрастные группы больных. При проведении корреляционного анализа у больных ^А-нефропатией в I группе были получены следующие результаты:
1. Количество клеток в составе инфильтрата клубочка фенотипов CD3 (т = 0,341; р = 0,047), CD25 (т = -0,330; р = 0,023), TdT+ (г = 0,599; р = 0,007) зависит от возраста больного.
2. На длительность заболевания влияет количество клеток CD3 в инфильтрате гломерулярной зоны (г = 0,620; р = 0,014).
3. На цифры систолического АД влияние оказывает количество клеток CD71 (т = -0,342; р = 0,025) и (APO-1/FAS)CD95 (т = -0,315; р = 0,040) в составе инфильтрата в гломерулярной зоне.
4. На цифры диастолического АД оказывает влияние количество клеток CD71 (т = -0,378; р = 0,013) и (APO-1/FAS)CD95 (т = -0,366; р = 0,016) в инфильтрате гломерулярной зоны.
5. На выраженность отечного синдрома достоверное влияние оказывает количество клеток фенотипа CD4 в зоне клубочка (т = -0,352; р = 0,021) и в интерстициальном пространстве (т = 0,342; р = 0,025). Кроме того, на развитие отечного синдрома влияет количество клеток CD71 в составе инфильтрата клубочка (т = 0,344; р = 0,029).
6. На уровень креатинина сыворотки крови влияют клетки в стадии апоптоза в зоне клубочка (APO-1/FAS)CD95 (г = -0,549; р = 0,015 и т = -0,401; р = 0,008). Помимо этого, количество клеток CD71 в составе инфильтрата интерстициального пространства (т = 0,330; р = 0,031) оказывает влияние на уровень креатинина сыворотки крови.
7. Выраженность разовой протеинурии определялась количеством клеток CD19/к в инфильтрате клубочка (г = 0,484; р = 0,036 и т = 0,341; р = 0,030). В интерстиции на этот показатель влияет количество клеток фенотипа CD3 (г = -0,600; р = 0,011), CD38 (т = -0,316; р = 0,036), CD19/к (г = 0,483; р = 0,036) в составе инфильтрата.
8. Выраженность суточной протеинурии достоверно зависит от количества клеток фенотипа CD4 (т = 0,514; р = 0,001), CD19/X (т = 0,424; р = 0,005) и CD19/к (т = 0,533; р = 0,0007) в гломерулярной зоне.
9. На выраженность гематурии оказывают влияние количество клеток CD38 (т = -0,455; р = 0,003) в гломерулярной зоне.
При проведении корреляционного анализа во II группе больных ^А-нефропатией были получены следующие данные:
1. Количество в составе инфильтрата клубочка ранних TdT+клеток (г = 0,567; р = 0,004) зависит от возраста больного.
2. На цифры систолического АД влияние оказывают клетки в стадии апоптоза (APO-1/FAS)CD95 (т = -0,318; р = 0,033) в составе инфильтрата клубочка.
3. На цифры диастолического АД оказывает влияние количество клеток в стадии апоптоза (APO-1/FAS)CD95 (т = -0,358; р = 0,008) в инфильтрате гломерулярной зоны.
4. На развитие отечного синдрома влияет количество клеток CD4 в инфильтрате гломерулярной зоны (т = 0,308; р = 0,003) и в интерстициальном пространстве (г = 0,482; р = 0,037).
5. На уровень сывороточного креатинина влияет присутствие в инфильтрате клубочка клеток фенотипа CD25 (г = 0,507; р = 0,022).
6. Выраженность разовой протеинурии определялась количеством клеток CD19/к в составе инфильтрата (г = -0,448; р = 0,042 и т = -0,394; р = 0,001).
7. Выраженность суточной потери белка зависит от наличия клеток CD4 (т = 0,444; р = 0,002) и CD19/к в зоне клубочка (г = 0,587; р = 0,013 и т = 0,331; р = 0,020).
В результате проведенного анализа показано, что субпопуляционный состав лимфоидного инфильтрата почечной ткани (в гломерулярной зоне или интерстициальном пространстве) оказывает непосредственное влияние на клиническую картину заболевания в обеих возрастных группах.
Обсуждение. Старение организма связано с прогрессирующим снижением функции иммунной системы и повышением частоты инфекций, аутоиммунных и онкологических заболеваний. Среди иммунных функций в процессе старения преобладает снижение Т-клеточных функций. Для лиц пожилого возраста характерно развитие супрессии иммунного ответа за счет снижения абсолютного числа общих Т-клеток (CD3+), CD4+ и CD8 + субпопуляций и функциональной активности, увеличения NK-клеток с хорошо сохранившимися цитотоксическими функциями, уменьшения количества В-клеток, снижения продукции цитокинов, нарушения процесса апоптоза [19]. Одной из основных характеристик иммунной системы в процессе старения является прогрессивное, возраст-зависимое снижение CD95-T-клеток (CD95-), что особенно выражено на уровне CD8+субпопуляции мононуклеаров у пожилых больных. Прогрессивное истощение субпопуляции CD8+Т-клеток, которая ответственна за защиту от новых
антигенов (вирусные, опухолевые, бактериальные и др.), может быть следствием как инволюции тимуса, так и хронической антигенной стимуляции. Истощение с возрастом ^клеток (CD95-) приводит к увеличению содержания CD28-T-клеток, находящихся в фазе репликативного старения, и характеризуется снижением пролиферативной активности. Кроме этого, у клеток памяти CD8+ в стадии репликативного старения развивается специфичность к отдельным инфекциям, в частности это показано к ци-томегаловирусу (CMV), что приводит к выраженной экспансии СМ^специфического CD8+T-клеточного клона в пожилом возрасте [19]. Положение об иммуносупрессии подтверждается и снижением пролиферативной активности мононуклеаров инфильтрата у больных старше 60 лет.
Нам не удалось найти данных в литературе о влиянии субпопуляционного состава лимфоидного инфильтрата почечной ткани на клиническую картину ^А-нефропатии у больных старше 60 лет. Однако имеются немногочисленные исследования о различии влияния макрофагов и Т-лимфоцитов, инфильтрирующих клубочек и интерстиций, на клиническую картину у детей и взрослых с ^А-нефропатией [9, 20-23]. Авторы исследования показали, что выраженная гломерулярная инфильтрация моноцитами/макрофагами и Т-клетками у детей и взрослых коррелирует с выраженностью протеинурии, а у взрослых интерстициальная инфильтрация этими клетками влияет на снижение функции почек. Гломерулярная инфильтрация макрофагами способствует пролиферации мезангиальных клеток посредством продукции клетками PDGF-P и Ш-1 [23]. Кроме этого, макрофаги участвуют в презентации антигена пагуе Т-клеткам, что приводит к развитию повреждения почечной ткани. В зоне скопления макрофагов выявлена повышенная продукция цитокинов Ш-1а, Ш-6, Ш-12р40/70 и TNF-а [24].
В нашем исследовании в составе лимфоидного инфильтрата в клубочке и интер-стиции у больных обеих групп выявлены все исследуемые фенотипы клеток, однако наиболее богат по своему составу инфильтрат в интерстициальном пространстве. Это подтверждается в работах других исследователей. В частности, Li Н. L. и соавт. (1990) [13] в своем исследовании выявили увеличение содержания Т-лимфоцитов и моноцитов в пять раз (р < 0,01), а количество CD25 клеток на 20% (р < 0,01) в интерстициальном пространстве по сравнению с зоной клубочка у больных ^А-нефропатией. При прогрессировании интерстициальных изменений в почечной ткани происходит интенсивное накопление в этой зоне Т-клеток, в частности CD3+, не обладающих цитотоксиче-ской активностью естественных клеток-киллеров, а принимающих участие в развитии интерстициального воспаления [25]. В ранних работах А1ехорои1оз Е. е! а1 (1989) [9] было показано, что в интерстициальном пространстве в большей степени, чем в зоне клубочка, накапливаются клетки фенотипа CD4+, CD8+, DR+ и NK клетки независимо от функции почек. Авторы работы не выявили влияния лимфоидного инфильтрата на клинико-лабораторную картину ^А-нефропатии, т. е. было показано, что мононукле-ары СD4+ и CD8+Т-клетки, моноциты/макрофаги в интерстициальном пространстве и гломерулярной зоне не коррелируют с возрастом больного, развитием гематурии и протеинурии. В нашем исследовании получено достоверное уменьшение количества зрелых клеток фенотипа CD3, HLA-DR-DP-DQ/CD8 и В-клеток, синтезирующих легкие цепи (CD19/X и CD19/к) в составе инфильтрата в старшей возрастной группе, что подтверждает положение об истощении зрелого ростка лимфопоэза и развитии иммуносупрессии у больных в пожилом возрасте. Это положение подтверждается зависимостью количества клеток фенотипа CD3 от возраста больного, влиянием ее на длительность
заболевания и на развитие разовой протеинурии у больных до 60 лет. По мере развития иммуносупрессии зрелого ростка лимфопоэза после 60 лет, утрачивается влияние этой субпопуляции клеток на клиническую картину заболевания. В меньшей степени истощается субпопуляция CD4+Т-клеток, так как ее влияние на выраженность отечного синдрома и развитие суточной потери белка сохраняется у лиц пожилого возраста. Мононуклеары средней степени зрелости фенотипа CD71 оказывают существенное влияние на клинико-лабораторную картину заболевания до 60 лет: на цифры АД (систолического и диастолического), отечный синдром и уровень креатинина сыворотки крови. После 60 лет влияние этой субпопуляции полностью утрачивается.
При проведении анализа с учетом возраста больного, было показано, что в старшей возрастной группе отмечается достоверное снижение количества TdT+клеток в составе инфильтрата клубочка, обладающих трофической и морфогенетической активностью в отношении поврежденной ткани базальной мембраны, что указывает на нарушение регенераторных процессов, прогрессирующих с возрастом больного. Это подтверждается полученной зависимостью количества TdT+клеток в составе инфильтрата от возраста больного в обеих исследованных группах.
При старении организма выявляется не только снижение функций Т-клеток, но и многочисленные изменения в субпопуляциях В-лимфоцитов. Отмечается уменьшение числа CD5+ и CD40+ В-клеток, в то время как количество CD27+В-лимфоцитов незначительно уменьшается после 60 лет. Эти данные в совокупности с увеличением числа NK клеток в процессе старения свидетельствуют о развитии снижения гуморального иммунного ответа с нарушением продукции антител, в результате чего развивается повышенная чувствительность больного старшего возраста к инфекционному поражению ткани почки [26]. Ранее было показано увеличение числа В-клеток (CD20) в составе инфильтрата интерстиция в большей степени, чем в зоне клубочка, при развитии тубулоинтерстициальных повреждений при IgA-нефропатии [27]. В нашей работе показано, что количество В-клеток, синтезирующих X и к легкие цепи (CD19/X и CD19/k) на инфекционный патоген в почечной ткани, достоверно уменьшается у больных после 60 лет как в гломерулярной зоне, так и в интерстициальном пространстве. Однако количество этих клеток настолько велико в ткани, что их влияние на выраженность протеинурии (как разовой, так и суточной) не зависит от возраста и выявляется в обеих возрастных группах.
В проведенном исследовании выявлено достоверное ускорение процесса апоптоза мононуклеаров лимфоидного инфильтрата в гломерулярной зоне у больных старшей возрастной группы. Данные литературы по этому вопросу в настоящее время весьма дискутабельны. Так, существует точка зрения о снижении чувствительности клеток периферической крови к апоптотическим сигналам, что в результате приводит к торможению процессов апоптоза [28]. Однако имеются данные, указывающие на увеличение чувствительности мононуклеаров периферической крови к TNF-a-индуцированному апоптозу у лиц пожилого возраста [29]. Повышение чувствительности naive и CD8+T-клеток у пожилых больных к TNF-a-индуцированному апоптозу обусловлено повышенной активацией caspase-8 и caspase-3 по сравнению с молодыми людьми. Однако связи между чувствительностью/резистентностью CD4+ или CD8+T-клеток к CD95-опосредованному апоптозу и экспрессии CD95 выявлено не было [30, 31]. Это позволило авторам предположить, что увеличение CD95-опосредованного апоптоза CD8+ и CD4+Т-клеток играет определенную роль в снижении их количества в пожилом воз-
расте. По-видимому, полученные нами результаты согласуются с данными этих работ и свидетельствуют о том, что у больных старшей возрастной группы в гломерулярной зоне и в интерстициальном пространстве резко повышается чувствительность моно-нуклеаров в составе инфильтрата к индуцированному апоптозу. Это подтверждается влиянием мононуклеаров в стадии апоптоза на развитие артериальной гипертензии и повышение уровня креатинина сыворотки крови у больных до 60 лет, а также сохранением влияния процесса апоптоза мононуклеаров на цифры артериального давления у больных пожилого возраста.
Следовательно, субпопуляционный состав лимфоидного инфильтрата в почечной ткани определяет клинико-лабораторную картину заболевания, а различия субпопу-ляционного состава инфильтрата у лиц разных возрастных групп выявляют особенности этих влияний.
Литература
1. Gomez C. R., Boehmer E. D., Kovacs E. J. The aging innate immune system// Curr Opin Immunol. 2005. Vol. 17. P. 457-62.
2. Plackett T. P., Boehmer E. D., Faunce D. E., Kovacs E. J. Aging and innate immune cells// J. Leukoc. Biol. 2004. Vol. 76. P. 291-9.
3. Lord J. M., Butcher S., Killampali V., Lascelles D., Salmon M. Neutrophil ageing and immunesenes-cence // Mech Ageing Dev. 2001. Vol. 122. P. 1521-35.
4. De Martinis M., Franceschi C., Monti D., Ginaldi L. Inflamm-ageing and lifelong antigenic load as major determinants of ageing rate and longevity// FEBS Lett. 2005. Vol. 579. P. 2035-9.
5. Licastro F., Candore G., Lio D. et al. Innate immunity and inflammation in ageing: a key for understanding age-related diseases // Immun Ageing. 2005. Vol. 2. P. 8.
6. Van den Biggelaar A. H., Huizinga T. W., de Craen A. J. et al. Impaired innate immunity predicts frailty in old age. The Leiden 85-plus study// Exp Gerontol. 2004. Vol. 39. P. 1407-14.
7. Plowden J., Renshaw-Hoelscher M., Engleman C., Katz J., Sambhara S. Innate immunity in aging: impact on macrophage function // Aging Cell. 2004. Vol. 3. P. 161-7.
8. Borrego F., Alonso M. C., Galiani M. D. et al. NK phenotypic markers and IL2 response in NK cells from elderly people // Exp Gerontol. 1999. Vol. 34. P. 253-65.
9. Alexopoulos E., Seron D., Hartley R. B. et al. The role of interstitial infiltrates in IgA ephropathy: a study with monoclonal antibodies// Nephrol Dial Transplant. 1989. Vol. 4. P. 187-95.
10. Ракитянская И. А., Рябов С. И. Роль мононуклеаров в поражении нефрона у больных хроническим гломерулонефритом // Нефрология. 1997. Т. 1. С. 45-52.
11. Рябов С. И. Нефрология. СПб.: СпецЛит, 2000. С. 37-69.
12. Sabadini E., Castiglione A., Colasanti G. et al. Characterization of interstitial infiltrating cells in Berger’s disease // Am J Kidney Dis. 1988. Vol. 12, N 4. P. 307-15.
13. Li H. L., Hancock W. W., Hooke D. H. et al. Mononuclear cell activation and decreased renal function in IgA nephropathy with crescents // Kidney Int. 1990. Vol. 37, N 6. P. 1552-6.
14. Ootaka T., Saito T., Soma J. et al. Mechanism of infiltration and activation of glomerular monocytes/macrophages in IgA nephropathy // Am J Nephrol. 1997. Vol. 17, N 2. P. 137-45.
15. Wu Q., Jinde K., Endoh M., Sakai H. Clinical significance of costimulatory molecules CD80/ CD86 expression in IgA nephropathy // Kidney Int. 2004. Vol. 65, N 3. P. 888-96.
16. Arrizabalaga P., Sole M., Quinto L. et al. Leukocyte infiltration and intercellular adhesion molecule-1-mediated cell interactions in immunoglobulin A nephropathy // Arch Pathol Lab Med. 1998. Vol. 122, N 9. P. 817-22.
17. Arrizabalaga P., Sole M., Abellana R. et al. Renal expression of intercellular adhesion molecule-1 in immunoglobulin A nephropathy: tubulointerstitial injury and prognosis // Virchows Arch. 2001. Vol. 439, N 1. P. 27-34.
18. Arrizabalaga P., Sole M., Abellana R. et al. Tubular and interstitial expression of ICAM-1 as a marker of renal injury in IgA nephropathy // Am J Nephrol. 2003. Vol. 23, N 3. P. 121-8.
19. Sansoni P., Vescovini R., Fagnoni F. et al. The immune system in extreme longevity// Exp Gerontol. 2008. Vol. 43, N 2. P. 61-5.
20. Arima S., Nakayama M., Naito M., Sato T., Takahashi K. Significance of mononuclear phagocytes in IgA nephropathy // Kidney Int. 1991. Vol. 39. P. 684-692.
21. Ootaka T., Yusa A., Munakata T., Soma J., Abe K. Contribution of cellular infiltration to the progression of IgA nephropathy: a longitudinal, immunocytochemical study on repeated renal biopsy specimens // Nephrology. 1995. Vol. 1. P. 135-142.
22. Hisano S., Sasatomi Y., Kiyoshi Y., Takebayashi S. Macrophage subclasses and proliferation in childhood IgA glomerulonephritis // Am J Kidney Dis. 2001. Vol. 37. P. 712-719.
23. Ikezumi Y., Suzuki T., Hayafuji S. et al. The sialoadhesin (CD169) expressing a macrophage subset in human proliferative glomerulonephritis // Nephrol Dial Transplant. 2005. Vol. 20. P. 2704-2713.
24. Kinsey G. R., Li Li., Mark D. Okusa. Inflammation in Acute Kidney Injury // Nephron Exp Nephrol. 2008. Vol. 109, N 4. P. 102-107.
25. Ohashi R., Kitamura H., Yamanaka N. Peritubular Capillary Injury during the Progression of Experimental Glomerulonephritis in Rats // Am Soc Nephrol. 2000. Vol. 11. P. 47-56.
26. Heller F., Lindenmeyer M. T., Cohen C. D. et al. The Contribution of B Cells to Renal Interstitial Inflammation // Am J Pathol. 2007. Vol. 170, N 2. P. 457-468.
27. Salvioli S. et al. Age-dependent changes in the susceptibility to apoptosis of peripheral blood CD4+ and CD8+ T lymphocytes with virgin or memory phenotype // Mech Ageing Dev. 2003. Apr. Vol. 124, N 4. P. 409-18.
28. Colonna-Romano G., Bulati M., Aquino A. et al. B cells in the aged: CD27, CD5, and CD40 expression // Mech Ageing Dev. 2003. Vol. 124, N 4. P. 389-93.
29. Aggarwal S., Gollapudi S., Gupta S. Increased TNF-alpha-induced apoptosis in lymphocytes from aged humans: changes in TNF-alpha receptor expression and activation of caspases // J Immunol. 1999. Vol. 162, N 4. P. 2154-61.
30. Gupta S., Gollapudi S. TNF-alpha-induced apoptosis in human naive and memory CD8+ T cells in aged humans // Exp Gerontol. 2006. Vol. 41, N 1. P. 69-77.
31. Gupta S., Gollapudi S. CD95-mediated apoptosis in naive, central and effector memory subsets of CD4+ and CD8+ T cells in aged humans // Exp Gerontol. 2008. Vol. 43, N 4. P. 266-74.
Статья поступила в редакцию 1 июня 2011 г.
