CC BY
22
© Е.А.Корнева, Н.С.Новикова, Т.В.Абрамова, С.В.Перекрест, В.Роджерс, 2006 УДК 611.77:615.832.42]:611.814.1-092.4
Е.А. Корнева, Н.С. Новикова, Т.В. Абрамова, С.В. Перекрест, В. Роджерс
ВЛИЯНИЕ КВЧ-ОБЛУЧЕНИЯ КОЖИ НА ИНТЕНСИВНОСТЬ АКТИВАЦИИ КЛЕТОК ГИПОТАЛАМИЧЕСКИХ СТРУКТУР, ИНДУЦИРОВАННУЮ ВВЕДЕНИЕМ ЦИКЛОФОСФАМИДА
E.A. Korneva, N.S. Novikova, T.V. Abramova, S.V. Perekrest, W. Rogers
EFFECTS OF EHF IRRADIATION OF THE SKIN ON INTENSITY OF ACTIVATION OF THE HYPOTHALAMIC STRUCTURE CELLS INDUCED BY ADMINISTRATION OF CYCLOPHOSPHAMIDE
Отдел общей патологии и патофизиологии Научно-исследовательского института экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург; Россия, Институт биоинформационных исследований, Вэйн, Филадельфия, США
РЕФЕРАТ
ЦЕЛЬЮ ИССЛЕДОВАНИЯ являлось изучение интенсивности активации клеток гипоталамических структур (VMH и LHA) при введении циклофосфамида (ЦФ) и установлении возможности модулирующего эффекта КВЧ-облучения кожи на этот процесс. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ. Работа выполнена на 18 крысах-самцах породы «Wistar» массой 250 г Выявление активации клеток гипоталамуса (по экспрессии гена c-fos) после введения циклофосфамида в дозах 20 и 40 мг/кг веса животного и КВЧ-облучения кожи проводили непрямым иммуногистохимическим методом. РЕЗУЛЬТАТЫ. Показан различный паттерн активации зон VMH и LHA при введении разных доз ЦФ. Выявлены определенные зоны, клетки которых реагируют экспрессией c-Fos на введение 20 мг/кг ЦФ, в то время, как введение ЦФ в дозе 40 мг/кг приводит к активации клеток всех исследованных структур. Эффект КВЧ-облучения кожи проявлялся в снижении количества c-Fos-позитивных клеток только при введении 20 мг/кг ЦФ, при увеличении дозы нивелирующего действия КВЧ-облучения кожи не наблюдалось. ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Выявлена активация клеток LHA и VMH, свидетельствующая в пользу возможного участия конкретных групп нейронов в процессах, развивающихся в мозге при введении ЦФ. Впервые показано модулирующие действие КВЧ-облучение кожи на степень активации клеток мозга, индуцированной введением ЦФ. Ключевые слова: циклофосфамид, КВЧ-облучение, c-Fos, гипоталамус
ABSTRACT
THE AIM of the investigation was to study the intensity of activation of the hypothalamic structure cells (VMH and LHA) after administration of cyclophosphamide (CPh) and attainment of possibility of a modulating effect of EHF irradiation of the skin on this process. MATERIAL AND METHODS. The work was carried out in 18 male Wistar rats weighing 250g. The detection of activation of the hypothalamus cells (by c-fos gene expression) following injection of CPh in dosage 20 and 40 mg/kg of body mass and EHF irradiation of the skin was made using an indirect immunohistochemical method. RESULTS. Different patterns of activation of VMH and LHA zones were shown after injections of different doses of CPh. Certain zones were established in which the cells reacted by c-Fos expression to the CPh dose of 20 mg/kg, while the dose 40 mg/kg resulted in activation of the cells of all the structures under investigation. The effect of EHF irradiation of the skin was observed as a decreased number of c-Fos positive cells but after 20 mg/kg of CPh. Greater doses had no grading effect of EHF irradiation of the skin. CONCLUSION. Activation of LHA and VMH cells was detected suggesting a possible participation of specific groups of neurons in the processes developing in the brain in response to administration of CPh. The modulating action of EHF irradiation of the skin was first shown on the degree of brain cell activation induced by administration of CPh.
Key words: cyclophosphamide, EHF irradiation, c-Fos, hypothalamus.
ВВЕДЕНИЕ
В комплексной терапии нефрологических заболеваний различной этиологии, в том числе аутоиммунных и онкологических, применяются цитостатики, в частности циклофосфамид (ЦФ) [1]. Этот препарат имеет низкую избирательность ци-тостатического эффекта и отрицательно влияет на функционирование кроветворной и иммунной систем [2]. Побочные эффекты действия цитостатических препаратов столь выражены, что часто обуславливают необходимость приостановки лечения [3].
Существуют единичные данные о воздействии сублетальных доз (100мг/кг) ЦФ на морфо-функ-циональные характеристики нейросекреторных клеток супраоптического и паравентрикулярного ядер гипоталамуса и уровень нейросекрета в задней доле гипофиза крыс [4]. Современная литература содержит ограниченное количество данных о влиянии ЦФ на активность клеток гипоталамичес-ких структур, в том числе и участвующих в регуляции функций иммунной системы. Участие ЦНС в регуляции функций иммунной системы была ус-
тановлена в середине XX века. Е.А. Корневой и Л.М. Хай впервые было показано участие заднего гипоталамического поля в модуляции функций иммунной системы [5]. Позднее было определено, что такие структуры гипоталамуса, как вентроме-диальное ядро (УМИ) и латеральное гипоталами-ческое поле (ЬИЛ), участвуют в регуляции цитотоксической активности натуральных киллер-ных (НК) клеток [6,7]. С другой стороны, введение антигена приводит к активации этих же структур [8]. Повреждающее действие цитоксана на клетки гипоталамуса впервые показано Е.Г.Рыбакиной и соавт. в 2006 г. [9]. Не исключена возможность, что причиной появления морфологических изменений клеток УМИ и ЬИЛ, описанных в этой работе, явилось сочетанное действие циклофосфамида и диуретика маннитола, входящих в состав этого препарата. Известно, что одним из свойств маннитола является нарушение гематоэнцефалическо-го барьера [10,11], возникающее в результате апоптоза эндотелиальных клеток [12]. Таким образом, исследование действия только ЦФ на морфо-функциональное состояние клеток гипоталамуса представляет существенный интерес, поскольку позволит выяснить эффекты действия ЦФ на процесс активации гипоталамических структур, в том числе и связанных с регуляцией функций иммунной системы, что особенно важно для понимания механизмов развития побочных эффектов при проведении терапии ЦФ-содержащими препаратами.
В современной физиологии для изучения активации нейрональных клеток при действии стимулов различной природы широко используется определение интенсивности экспрессии гена немедленного ответа - е-й^, как общепризнанного маркера активации нейронов. Количество е-Бо8-позитивных клеток и их локализация в структурах мозга зависит от характера и интенсивности применяемого воздействия [13]. Анализ пространственного паттерна активации клеток гипоталамуса (по количеству е-Бо8-позитивных клеток) позволяет судить о степени влияния различного рода внешних воздействий на активацию структур гипоталамуса [14].
Одним из способов нивелирования побочных эффектов химиотерапии является электромагнитное облучение кожи в диапазоне крайне высоких частот (КВЧ-облучение) [15]. Кроме того, КВЧ-облучение кожи влияет на функции иммунной системы [16]. Механизм этих эффектов не ясен, но известно, что КВЧ-облучение кожи активирует клетки определенных структур ЦНС [14]. Показано, что в результате КВЧ-облучения кожи происходит восстановление функциональной активности НК клеток селезенки, сниженной в результате элект-
роболевого раздражения, коррелирующее с динамикой изменения степени активации VMH и LHA [7].
Целью данного исследования являлось изучение интенсивности активации нейронов гипотала-мических структур (VMH и LHA) при введении циклофосфамида и возможности модулирующего эффекта КВЧ-облучения кожи на этот процесс.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Эксперименты выполнены на 18 крысах-самцах «Wistar» массой 250 г. Животных содержали в условиях вивария при комнатной температуре с 12-часовым циклом свет/темнота, свободным доступом к воде и пище, на стандартной диете в соответствии с нормами содержания лабораторных животных. До введения в эксперимент всех животных, за исключением интактных, в течение 5 дней адаптировали к экспериментальной обстановке: крыс помещали в контейнеры, которые ограничивали движения животных. Через 5 дней крысы спокойно находились в этих контейнерах.
Животные, используемые в каждом эксперименте:
1. Контрольное животное 1 - адаптированное животное, подвергнутое однократной в/б инъекции физиологического раствора.
2. Животное, подвергнутое однократной в/б инъекции ЦФ в дозе 20 мг/кг веса животного.
3. Животное, подвергнутое однократной в/б инъекции ЦФ в дозе 40 мг/кг веса животного.
4. Контрольное животное 2 - животное, подвергнутое электромагнитному облучению кожи крайне высоких частот до и после в/б введения физиологического раствора.
5. Животное, получившее сочетанное воздействие - КВЧ-облучение кожи до и после в/б введения ЦФ в дозе 20 мг/кг веса животного.
6. Животное, получившее сочетанное воздействие - КВЧ-облучение кожи до и после введения ЦФ в дозе 40 мг/кг веса животного.
Введение препарата циклофосфамида
Циклофосфамид (Sigma) растворяли в физиологическом растворе и вводили внутрибрюшинно (в/б) в дозе 20 или 40 мг/кг веса животного в объеме 1 мл.
Модель КВЧ-облучения кожи
Источником КВЧ-облучения служил генератор электромагнитного поля Г4-141 (Puschino, Russia), работающий в диапазоне частот 37-53 GHz, с длиной волны 7,1мм и мощностью 20 мВт. Крысы были облучены в 3-х областях: обе голени в 3 мм ниже и 3 мм латеральнее от центра коленного сустава и задняя поверхность шеи на уровне 7-го шейного и 1-го грудного позвонков по срединной линии
Извлечение и фиксация мозга После эксперимента животных помещали в обычные клетки и через 120 мин наркотизировали фенобарбиталом (в/б 60мкг/кг веса животного). Интракардиальную перфузию проводили теплым физиологическим раствором, содержащим гепарин (10ед/мл.), и затем охлажденным фиксирующим раствором (100мл 4% параформальдегида на 0,1М фосфатно-солевом буфере (PBS) и 0,2% пикриновой кислоты, рН 7,4). Через 1 час после перфузии мозг извлекали и погружали в свежий фиксирующий раствор, не содержащий пикриновую кислоту, на 12 часов при температуре +4o С, с последующим заключением в парафин.
Иммуногистохимическое окрашивание Серийные парафиновые фронтальные срезы толщиной 5 мкм монтировали на стекла. Обеспа-рафинивание срезов проводили в орто-ксилоле при температуре +56oC в течение 30 мин с последующей регидратацией в снижающемся градиенте этанола до 0,1 М фосфатно-солевого буфера (pH 7,4).
C-Fos-позитивные клетки были выявлены непрямым иммуногистохимическим методом с использованием первичных антител к c-Fos белку 1:500 (Sigma) и Ig против первичных кроличьих антител, меченных пероксидазой, в качестве вторых антител 1:300 (Sigma), с последующей детекцией 3'3'-диаминобензидином.
Учитывая морфо-функциональную неоднородность исследуемых структур, мозг всех животных
Рис. 1. Схема гипоталамических структур мозга крысы, уровень 28 (по атласу Swanson's): A - зоны вентромедиального ядра (VMH); B - зоны латерального гипоталамического поля (LHA).
после применения различных видов воздействии анализировали на 28-м уровне с разделением на зоны внутри каждоИ структуры, согласно атласу Swanson's [17]. С помощью программы ВидеоТест Мастер 4 были определены следующие показатели:
1) количество c-Fos позитивных клеток в структурах гипоталамуса на фронтальных срезах;
2) оптическая плотность (ОП) межклеточного вещества и c-Fos позитивных клеток;
3) площадь среза, на котором проводился подсчет клеток.
Количество активированных клеток после различного рода воздеиствии на животных определяли в следующих зонах LHA: juxtadorsomedial region (LHAjd), suprafornical region (LHAs), dorsal region (LHAd), lateral region (LHAl) и basal region (LHAbas), - и VMH: dorsomedial region (VMHdm), central region (VMHc) и ventrolateral region (VMHvl), - c пересчетом для каждоИ зоны на площадь 10000 мкм2.
Для проведения сравнительного анализа степени активации различных структур вычисляли относительный коэффициент активации по следующей формуле:
ОКА= количество c-Fos-позитивных клеток после введения ЦФ
количество c-Fos-позитивныж клеток после введения физ. р-ра
Все морфометрические измерения проводили слепым методом.
Статистическую обработку данных экспериментов проводили с применением t-критерия Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ
В предыдущих исследованиях [9] выявлено, что после введения циток-сана - фармокологического препарата, состоящего из циклофосфамида и манита, происходит активация клеток, интенсивность которой варьирует в различных зонах УМИ и ЬИЛ. Эти структуры содержат клетки, различающиеся морфологически и функционально, что и обуславливает их разделение на несколько зон [17] (рис. 1).
В настоящем исследовании проведен морфометрический анализ клеток каждой зоны УМИ: УМШш, УМИе и УМИу1 (рис. 1Л), согласно атласу Swanson's. В исследуемых зонах УМИ ядра количество активированных клеток варьировало в зависимости от примененных воздействий (рис. 2). После в/б введения циклофосфамида
А)
20 -,
В)
"s 20 -,
1 15 -
о
о 10 -
Й
И 5 -
и 0 -
VMHvl
VMHc
(рис.1Б). После применяемых воздействий количество активированных клеток было различно в исследуемых зонах латерального гипоталамичес-кого поля (табл. 1).
Введения ЦФ в дозе 20 мг/кг массы животного приводило к увеличению количества c-Fos позитивных клеток только в зонах LHAs и LHAbas. Повышение дозы вводимого ЦФ (40 мг/кг массы животного) приводит к более интенсивной активации всех исследованных зон (табл. 1). Наиболее выраженный ответ (по величине относительного коэффициента активации) наблюдался в LHAbas, LHAd и LHAs (табл 2). Эффект КВЧ-облучения кожи выражался в снижении количества c-Fos позитивных клеток, активированных введением ЦФ, и проявлялся только в зоне LHAbas при введении ЦФ в дозе 20 мг/кг массы животного (табл. 1).
VMHdm
Рис. 2. Количество c-Fos-позитивных клеток в зонах VMH ядра после в/б введения ЦФ в дозах 20 и 40мг/кг веса животного и КВЧ-облучения кожи. Ось Y - количество c-Fos позитивных клеток на 10 000 мкм2; Ось X - виды воздействия введение: 1 —физиологического раствора, 2 — физиологического раствора на фоне КВЧ-облучения кожи, 3 — циклофосфамида в дозе 20 мг/кг, 4 — циклофосфамида в дозе 20 мг/кг на фоне КВЧ-облучения кожи, 5 — цикло-фосфамида в дозе 40 мг/кг, 6 — циклофосфамида в дозе 40 мг/кг на фоне КВЧ-облучения кожи. *- P< 0,05 по сравнению с количеством c-Fos-позитивных клеток у животных после введения физиологического раствора, # - P< 0,05 по сравнению с количеством c-Fos-позитивных клеток у животных после введения физиологического раствора и КВЧ облучения кожи.
ОБСУЖДЕНИЕ
Иммуногистохимическое выявление c-Fos белка является общепринятым методом определения активации клеток нервной системы. Использование данного метода позволило выявить различия в паттернах активации изученных структур гипоталамуса при введении ЦФ в дозах 20 и 40 мг/кг веса животного, КВЧ-облучении кожи и сочетанном применении этих воздействий. Показано, что через 2 часа после введения ЦФ в обеих использованных дозах, в клетках исследованных зон гипоталамических структур происходит активация экспрессии c-fos гена в различной степени, что может быть инициировано комплексом реакций, вызванных действием цитостатика или непосредственным его влиянием на ЦНС. Как известно, характер активации структур гипоталамуса зависит не только от природы, но и от интенсивности воздействия [13,14].
Таблица 1
К оличествое-Р ов-пизитивныхкле ток в различных зонах латерального гипотанам ического поля крыс ;аг после в/б введения циклофосфамида
и КВЧ-облучения кожи (Х ±т)
Виды воздействий
Количествс с-гов позитивных клеток в 1_НА на площади среза 10000мкм2 в зонах латерального гипоталамического поля
LHAI LHAbas LHAd LHAjd LHAs
Инъекция физиологичес кого раствора 9,57+Г,89 6,29+2,12 9,00+2,09 8,65+2,52 7,47+1,68
Инъекция физиологического раствора
на фоне КВЧ-облучения кожи 4,89+1,31 5,49+1,31 7,52+3,30 10,42+1,9 7,33+1,68
анъекция ЦФ и дозе 2 0мг/кг маисы 7,12+6 , 97 10,08+0,83 10,47+0,9 8,34+1,45 13,24+1,04#
Инъекция ЦФ в дозе 20мг/кг массы
на фоне КВЧ-облучения кожи 6,97+1,03 5,53+0,86* 9,9+0,72 7,8+2,53 12,64+1,3
Инъекция ЦФ в дозе 40мг/кг массы 1Т, 52+0,29* 14,69+1,21#* 20,7+4,36# 15,25+3,41 16,52+2,73#
Ииъекция НФ в дозе 40мг/кг массы
нт фоне КВЧ-облучения кожи 11,69+3 ,41 10,35+6,47 13,66+3,66 11,61+2,94 17,29+4,32
*- Р<0,05 по сравнению с количеством с-Ров-позитивннк после введения ЦФ в дозе 20 мг/кг массы животного, # - Р< 0,05 по сравнению с количеством с-ьов-пнзитивных после введения физиологического раствора. В каждой группе п = 3.
Относительные коэффициент активации клеток в зонах 1.ИД после введения ЦФ (Х±т)
Таблица 2
Виды воздействий
Относительный коэффициент активации клеток в зонах LHA
LHAl LHAbas LHAd LHAjd LHAs
Инъекция ЦФ в дозе 20мг/кг массы Инъекция ЦФ в дозе 40мг/кг массы 0,74±0,075 1,41±0,031 1,6±0,131* 2,34±0,192* 1,16±0,099 2,3±0,485* 1,0±0,140 1,76±0,395 1,77±0,139* 2,21±0,364*
*- Р < 0,05 по отношению к количеству с-Ров-позитивных клеток после введения физиологического раствора.
При исследовании различных зон УМН после введения ЦФ также был выявлен дискретный характер активации клеток. Активация клеток была более выражена в УМНс. Данная зона характеризовалась не только интенсивной реакцией на действие ЦФ, но и снижением степени их выраженности при КВЧ-облучении кожи, сочетанном с в/б введением ЦФ в дозе 20 мг/кг веса животного. Клетки УМНу1 также активируются при в/б введении ЦФ. Однако КВЧ-облучение кожи не отменяет этого эффекта. Клетки УМШш зоны не отвечали активацией на все примененные воздействия (по экспрессии в них с-Бо8 белка).
При сравнительном анализе степени активации клеток различных зон латерального гипоталами-ческого поля показано, что в ЬНА8 и ЬНАЪа8 происходит увеличение количества с-Бо8-позитивных клеток при введении ЦФ в дозе 20 мг/кг. Отмена эффекта действия ЦФ при воздействии КВЧ-об-лучения наблюдалась только в зоне ЬНАЪа8, что может свидетельствовать о функциональном различии исследованных зон ЬНА.
Увеличение дозы вводимого ЦФ (40 мг/кг) приводит к активации всех исследованных зон ЬНА, но модулирующее действие КВЧ-облучения кожи в этих условиях не проявляется.
Полученные данные позволяют сделать предположение о механизмах положительного влияния КВЧ-облучения на иммунную систему, описанного в современной литературе [15, 18]. По-видимому, центральные регуляторные системы вовлечены в механизмы регуляции эффектов действия КВЧ, о чем свидетельствует и наблюдаемая нами отмена активирующих эффектов циклофосфамида на клетки УМН и ЬНА под влиянием КВЧ-облуче-ния. Важно отметить и недавно установленный факт существования полисинаптической связи ЬНА и УМН с селезенкой и красным костным мозгом [19,20], что делает возможным участие ЬНА и УМН в регуляции функций указанных органов иммунной системы. Соответственно, модификация степени активации клеток этих структур гипоталамуса может сказываться на функциональной активности иммунной системы.
Кроме того, известно, что КВЧ-облучение вли-
яет на функциональное взаимодействие нервной, эндокринной и иммунной систем [21], и характер его эффекта зависит от физиологического состояния клеток [22].
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, впервые продемонстрировано изменение паттерна активации определенных зон LHA и VMH при введении ЦФ и КВЧ-облучении кожи. Полученные данные трудно интерпретировать, но очевидно, что наблюдаемые реакции связаны с функциональным различием зон LHA и VMH. Выявленная активация исследованных структур гипоталамуса свидетельствует в пользу возможного участия конкретных групп нейронов в процессах, развивающихся в мозге после применяемых воздействий, а также проливает свет на один из возможных механизмов позитивного действия КВЧ-облучения кожи на проявление побочных эффектов действия ЦФ.
Работа выполнена при поддержке Института Биоинформационных Исследований Ричарда Дж. Фокса, Вэйн, Филадельфия, США
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1. Donadio JVJr, Glassock RJ. Immunosuppressive drug therapy in lupus nephritis. Am J Kidney Dis 1993; 21(3): 239250
2. Strauss G, Osen W, Debatin KM. Induction of apoptosis and modulation of activation and effector function in T cells by immunosuppressive drugs. Clin Exp Immunol 2002; 128: 225266
3. Knight A, Askling J, Granath F et al. Urinary bladder cancer in Wegener's granulomatosis: risks and relation to cyclophosphamide. Ann Rheum Dis 2004; 63: 1307-1311
4. Salzmann G. The effect of CY on the diencephalohypophyseal system of the rat. Strahlentherapie 1973; 145(3): 334-345
5. Корнева ЕА, Хай ЛМ. О влиянии раздражения различных структур промежуточного мозга на протекание иммунологических реакций. Физиол журн СССР 1967; 53 (1): 42-47
6. Wenner M, Kawamura N, Ishikawa T. Reward linked to increased natural killer cell activity in rats. NeuroImmuno Modulation 2000; (7): 1-5
7. Shanin SN, Rybakina EG, Novikova NN et al. Natural killer cell cytotoxic activity and c-Fos protein synthesis in rat hypothalamic cells after painful electric stimulation of the hind limbs and EHF irradiation of the skin. Med Sci Monit 2005; 11(9): BR309-315
8. Корнева ЕА, Казакова ТБ, Носов МА. Экспрессия c-fos мРНК и c-Fos-подобных белков в клетках гипоталами-ческих структур при введении антигена. Аллергология и Иммунология 2001; (1): 37-44
9. Рыбакина ЕГ, Новикова НН, Абрамова ТВ и др. Экспрессия c-Fos-гена в клетках гипоталамических структур и цитотоксическая активность естественных клеток-киллеров селезенки крыс после введения цитоксана. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2006; 141(4): 375378
10. Cosolo WC, Martinello P, Louis WG, Christophidis N. Blood-brain barrier disruption using mannitol: time course and electron microscopy studies. Am J Physiol Regulatory Integrative Comp Physiol 1989; 256: 443
11. Chi OZ, Lee DI, Liu X, Weiss HR. The effects of morphine on blood-brain barrier disruption caused by intracarotid injection of hyperosmolar mannitol in rats. Anesth Anal 2000; 90(3): 603-608
12. Malek AM, Goss GG, Jiang L et al. Mannitol at clinical concentrations activates multiple signaling pathways and induces apoptosis in endothelial cells. Stroke 1998; 29: 26312640
13. Kova'cs K. C-Fos as a transcription factor: a stressful (re) view from a functional map. Neurochem Int 1998; 33: 287297
14. Новикова НС, Казакова ТБ, Роджерс В, Корнева ЕА. Сравнительный анализ локализации и интенсивности экспресс c-fos гена в клетках определенных структур гипоталамуса при механическом и электрическом болевом раздражениях. Патогенез 2004; 2 (2): 73-79
15. Makar VR, Logani MK, Bhanushall A et al. Effect of millimeter waves on natural killer cell activation. Bioelectromagnetics 2005; 26: 10-19
16. Logani MK, Ziskin MC Millimeter waves enhance delayed-type hypersensitivity in mouse skin. Electro and magnetobiology 1999; 18: 165-176
17. Swanson LW. Brain maps III. Structure of the rat brain, 3rd ed. Elsevier acad. press, San-Diego, Cal. USA, 2004; 72-73
18. Gapeyev AB, Yakushina VS, Chemeris NK, Fesenko EE. Modification of production of reactive oxygen species in mouse peritoneal neutrophils on exposure to low-intensity modulated millimetre wave radiation. Bioelectrochemistry and Bioenergetics 1998; 46: 267-272
19. Denes A, Boldogkoi Z, Uhereczky G et al. Central autonomic control of the bone marrow: multisynaptic tract tracing by recombinant pseudorabies virus. Neuroscience 2005; 134: 947-963
20. Cano G, Sved AF, Rinamen L et al. Characterization of the central nervous system innervation of the rat spleen using viral trasneuronal tracing. J Comp Neurol 2001; 439: 1-18
21. Лушников КВ, Гапеев АВ, Чемерис НК. Влияние электромагнитного излучения крайне высоких частот на иммунную систему и системную регуляцию гомеостаза. Радиационная биология, радиоэкология 2002; 42(5): 533545
22. Гапеев АБ, Чемерис НК. Действие непрерывного и модулированного ЭМИ КВЧ на клетки животных. Часть III. Биологические эффекты непрерывного ЭМИ КВЧ. Вестник новых медицинских технологий 2000; VII: 20-25
Поступила в редакцию 22.05.2006 г.
