CC BY
53
БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ И ФИЗИКА
УДК: 616.248-053-085.23-091 ББК 31.6
Бабайлов Михаил Сергеевич
аспирант
кафедра детских болезней и поликлинической педиатрии №1 Челябинская государственная медицинская академия
г. Челябинск Брюхин Геннадий Васильевич доктор медицинских наук, профессор,
кафедра гистологии, эмбриологии и цитологии Челябинская государственная медицинская академия
г. Челябинск Жаков Ярослав Игоревич доктор медицинских наук, профессор
кафедра детских болезней и поликлинической педиатрии №1 Челябинская государственная медицинская академия
г. Челябинск Babaylov Mikhail Sergeevich Post-graduate
Chair of Children’s Diseases and Polyclinic Pediatry №1 Chelyabinsk State Medical Academy Chelyabinsk Brukhin Gennady Vasilievich Doctor of Medicine,
Professor
Chair of Histology, Embryology and Cytology Chelyabinsk State Medical Academy Chelyabinsk Zhakov Yaroslav Igorevich Doctor of Medicine,
Professor
Chair of Children’s Diseases and Polyclinic Pediatry №1 Chelyabinsk State Medical Academy Chelyabinsk
Влияние кромонов на морфофункциональное состояние бронхоальвеолярных макрофагов детей с бронхиальной астмой The Chromones Influence on Bronchoalveolar Macrophages’ Morphofunctional State of Children Suffering Bronchial Asthma
Проведена оценка морфофункционального состояния
бронхоальвеолярных макрофагов у детей с легкой персистирующей бронхиальной астмой использующих в качестве базисной терапии
стабилизаторы мембран тучных клеток (кромоны). Выявлено положительное влияние данной группы препаратов на функциональное состояние бронхоальвеолярных макрофагов.
This article gives evaluation of bronchoalveolar macrophages’ morphofunctional state of children suffering from light long-lasting bronchial asthma, and using stabilizers of mast cell membranes (kromony) as a basic therapy. A positive impact of this group of drugs on the functional state of bronchoalveolar macrophages has been revealed.
Ключевые слова: бронхиальная астма, дети, бронхоальвеолярные
макрофаги.
Key words: bronchial asthma, children, bronchoalveolar macrophages.
Эпидемиологические исследования последних лет показывают высокую распространённость бронхиальной астмы у детей и взрослых, которая варьирует в среднем от 5 до 10% [2, с. 5-6]. Продолжающееся увеличение числа больных бронхиальной астмой свидетельствует о том, что до сих пор до конца не изучены все патогенетические звенья этого заболевания.
Бронхиальная астма является хроническим воспалительным заболеванием дыхательных путей, в котором принимают участие многие клетки и клеточные элементы [3, с. 108]. Общепризнанно, что в бронхах при бронхиальной астме всегда, как в фазу ремиссии, так и в фазу обострения, присутствует воспалительный процесс. С целью снижения интенсивности воспаления в дыхательных путях, а также с целью уменьшения частоты клинических проявлений заболевания (вплоть до их исчезновения) используются препараты базисной терапии, в том числе стабилизаторы мембран тучных клеток (препараты группы кромонов). Вместе с тем, имеющиеся данные о роли кромонов в лечении бронхиальной астмы носят противоречивый характер. С одной стороны преимуществом использования кромонов у детей с бронхиальной астмой является их высокий профиль безопасности [8]. С другой стороны, данная группа препаратов менее эффективна в сравнении с низкими дозами ингаляционных глюкокортикостероидов [9]. По данным Глобальной стратегии лечения и профилактики бронхиальной астмы (GINA, пересмотр 2007г.), применение препаратов группы кромонов, улучшает функциональные показатели легких, уменьшает неспецифическую гиперреактивность бронхов [3, с. 108].
На сегодняшний день является общепризнанным, что в формировании специфических реакций иммунитета гуморального и клеточного типов, а также неспецифической резистентности организма, важную роль играет система мононуклеарных фагоцитов [4, с. 344].
Исходя из вышеизложенного, целью настоящего исследования явилась комплексная оценка морфофункционального состояния бронхоальвеолярных макрофагов у детей с легкой персистирующей бронхиальной астмой, использующих в качестве базисной терапии стабилизаторы мембран тучных клеток (кромоны).
Материалы и методы исследования.
В исследование были включены дети, находящиеся на обследовании и лечении в детском аллергологическом отделении МУЗ КГБ№1 г. Челябинска.
Критерии включения детей в исследование:
1.Возраст детей от 5 до 15 лет.
2.Отсутствие острых респираторных заболеваний в течение 1 месяца, предшествующего исследованию.
3.Согласие родителей участвовать в исследовании.
4.Дети, не получавшие базисную терапию в течение 4 месяцев до момента исследования;
Критерии исключения детей из исследования:
1.Табакокурение.
Согласно критериям включения /исключения, в исследовании было включено 30 человек. Средний возраст обследованных детей составил 11 лет.
Исследуемую группу составили 20 детей с легкой персистирующей бронхиальной астмой. Стаж заболевания бронхиальной астмой у обследуемых детей составил в среднем 3 года. Контрольную группу составили дети, не имеющие аллергических заболеваний (10 человек).
У всех детей в начале исследования была проведена оценка фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов. На следующий день всем детям назначалась базисная терапия. В качестве базисной терапии использовались препараты группы кромонов (Интал, Тайлед). Через 3 месяца на фоне
получаемой базисной терапии у этих же детей проводилась повторная оценка фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов.
Индукция мокроты у детей проводилась с использованием гипертонического раствора хлорида натрия по модифицированному протоколу [5, с. 10]. Альвеолярные макрофаги из мокроты выделяли общепринятым методом в нашей модификации (подана заявка на выдачу патента РФ на изобретение, получена приоритетная справка №2010138744 от 20.09.2010).
Согласно клиническим постулатам И.И.Мечникова, фагоцитоз включает, прежде всего, поглощение и переваривание поглощенных частиц. В связи с этим, фагоцитарную функцию бронхоальвеолярных макрофагов детей с бронхиальной астмой мы изучали по их способности к захвату сфер латекса [7, с. 13-14].
Изучение фагоцитарной активности бронхоальвеолярных макрофагов проводили на модели поглощения частиц латекса диаметром 1,2мкм. Культивирование производили в термостате при t 37°С в течение 1 часа в условиях влажной камеры. После культивирования мазки фиксировали метиловым спиртом и окрашивали азуром 11 и эозином по Романовскому -Гимза. При оценке результатов определяли фагоцитарный показатель, отражающий процент макрофагов, содержащих частицы латекса, а также фагоцитарный индекс (количество частиц латекса в 100 макрофагах в перерасчете на 1 клетку). Кроме того, определяли общую фагоцитарную активность по формуле Астальди и Верга [1, с. 63-65].
Для оценки лизосомальной активности нами использовался метод, основанный на инкубации мононуклеарных фагоцитов в среде, содержащей флюоресцирующий краситель - акридиновый оранжевый, который вызывает избирательное свечение лизосом [7, с. 13-14]. О лизосомальной активности макрофагов судили на основании анализа числа акридинпозитивных клеток и индекса лизосомальной активности, отражающего среднюю активность лизосомальных энзимов.
Активность кислой фосфатазы, являющейся индикатором лизосомальной активности, изучали с помощью реакции азосочетания по методу Goldberg и
Багка [6, с. 544] с использованием нафтол-АБ-фосфата и парарозанилина. Интенсивность гистохимической реакции оценивали с помощью цитофотометрической насадки ФМЭП-1А с умножителем ФЭУ-79 и микроскопа «Люмам И-ЭУ42».
Статистическая обработка полученных данных проводилась при помощи статистической программы БТАИБИСЛ 6.0 (81а18ой, 2001).
Результаты исследования. Анализ полученных результатов позволяет сделать заключение, что у детей с бронхиальной астмой получающих в качестве базисной терапии препараты группы кромонов, функциональное состояние бронхоальвеолярных макрофагов существенно отличалось от такового при отсутствии базисной терапии. Как видно из табл. 1, у детей исследуемой группы до получения базисной терапии число фагоцитов (фагоцитарный показатель) составило 91,36±13,01, на фоне лечения кромонами 98,32±3,35. В группе сравнения данный показатель оказался равным 93,9±2,47.
Таблица 1
Показатели фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов.
Дети с БА до получения кромонов Дети с БА через 3 . лечения кромонами Контрольная группа
Фагоцитарный показатель, % 91,36±13,01 98,32±3,35 93,9±2,47
Фагоцитарный индекс 13,13±5,02* 16,8±4.43 24,85±5,47
П р и м е ч а н и е:* - значимость различий (р<0,05) с контрольной группой.
Обращает на себя внимание тот факт, что у детей с БА через 3 месяца лечения кромонами, фагоцитарный показатель бронхоальвеолярных макрофагов превышает таковой у этих же детей при отсутствии базисной терапии и у детей контрольной группы. В то же время фагоцитарный индекс бронхоальвеолярных макрофагов у детей с бронхиальной астмой как без базисной терапии, так и на фоне лечения кромонами оказался существенно
сниженным по сравнению с контрольной группой (табл. 1). Так, если у детей контрольной группы фагоцитарный индекс составил 24,85±5,47, то у детей с бронхиальной астмой без базисной терапии и через 3 месяца после получения базисной терапии, исследуемый показатель составил соответственно 13,13±5,02 и 16,8±4.43. При этом обращает на себя внимание, что наиболее сниженным фагоцитарный индекс оказался до назначения базисной терпии (р<0,05).
Таким образом, результаты данной серии исследований позволяют констатировать, что у детей с легкой персистирующей БА, как без базисной терапии, так и через 3 месяца получения кромонов, имеет место снижение фагоцитарного индекса бронхоальвеолярных макрофагов по сравнению с контрольной группой. При этом наиболее выраженное снижение данного показателя выявлено у детей до приема базисной терапии.
Киллинговая функция макрофагов во многом определяется уровнем активности лизосомальных энзимов. Для оценки лизосомальной активности макрофагов нами использован метод флюоресцентного зондирования [7, с. 1314]. Полученные результаты отражены на рис.1.
Рис. 1. Оценка лизосомальной активности альвеолярных макрофагов, %.
П р и м е ч а н и е. Значимость различий (р<0,05): * - с контрольной группой, ** - при сравнении с 1 группой.
Как видно из рисунка, число акридиноранжпозитивных клеток (АО+) среди бронхоальвеолярных макрофагов у детей исследуемой группы как до, так и на фоне лечения кромонами снижено по сравнению с таковым в контрольной группе. Так, если у детей контрольной группы данный показатель составил
До базис. тер. На фоне базис. тер Контроль. группа
94,5%, то у больных детей исследуемых групп число акридиноранжпозитивных клеток оказалось равным соответственно 85% и 90,7%.
Наиболее важным индикатором лизосомальной активности является индекс, отражающий средний уровень лизосомальной активности из расчета на одну макрофагальную клетку (индекс лизосомальной активности).
Установлено, что индекс лизосомальной активности бронхоальвеолярных макрофагов детей с бронхиальной астмой обеих исследуемых групп снижен по сравнению с таковым в группе сравнения. Так, если у детей контрольной группы индекс лизосомальной активности макрофагов оказался равным 1,99±0,1, то у больных детей бронхиальной астмой исследуемый показатель составил 1,41±0,23 (дети без базисной терапии) и 1,68±0,25 (на фоне терапии кромонами). Обращает на себя внимание тот факт, что наиболее выраженное снижение индекса лизосомальной активности выявлено у больных детей, до получения базисной терапии.
Аналогичная закономерность выявлена и при исследовании интенсивности цитохимической реакции на гидролитический лизосомальный энзим - кислую фосфатазу (рис. 2).
2
1,5 у.е. 1
0,5 0
Г руппа 1 Г руппа 2 Контроль. группа
Рис. 2. Оценка интенсивности цитохимической реакции на кислую фосфатазу,
(р>0,05).
Нами установлено, что у детей с бронхиальной астмой, принимавших кромоны, активность кислой фосфатазы в альвеолярных макрофагах превысила таковую у детей до получения базисной терапии, о чем свидетельствует средний гистохимический показатель (соответственно
1,44±0,12 и 1,28±0,31). В контрольной группе средний гистохимический показатель кислой фосфатазы был выше относительно исследуемых групп и составил 1,54±0,34.
В целом, результаты настоящего исследования свидетельствуют о положительном влиянии кромонов на морфофункциональное состояние бронхоальвеолярных макрофагов, на что указывает увеличение фагоцитарного индекса и усиление лизосомальной активности (увеличение числа акридиноранжпозитивных клеток и индекса лизосомальной активности, усиление интенсивности энзимогистохимической реакции на кислую фосфатазу).
Библиографический список
1. Брюхин, Г.В. Функциональное состояние элементов системы мононуклеарных фагоцитов у потомства матерей с хроническим поражением печени различной этиологии / Г.В. Брюхин // Иммунология. - 1993. - № 4. - С. 63-65.
2. Геппе, Н.А. Перспективы развития и проблемы детской пульмонологии в России / Н.А. Геппе, И.К. Волков // Пульмонология. - 2007. - № 4. - С. 5-6.
3. Глобальная стратегия лечения и профилактики бронхиальной астмы. Пересмотр 2007 г. / под ред. А.Г. Чучалина - М.: Атмосфера, 2008. - 108 с.
4. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский - Новосибирск: Наука, 1989. - 344 с.
5. Пат. 2364341 РФ Способ получения индуцированной мокроты у детей для оценки
степени и характера воспаления слизистой бронхов / В.И. Куличков, Ю.Л. Мизерницкий, О.Г. Рыбакова, Е.Е. Минина, Я.И. Жаков. - №2008116364; заявл. 24.04.2008; опубл.
20.08.2009, Бюл. № 23. - 10 с.
6. Саркисов, Д.С. Микроскопическая техника / Д.С. Саркисов, Ю.Л. Перов - М.: Медицина, 1996. - 544 с.
7. Фрейдлин, И.С. Некоторые морфологические и функциональные характеристики моноцитов периферической крови человека, культивируемых in vitro / И.С. Фрейдлин, С.В. Немировский, Т.А. Рудакова // Факторы естественного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях - Омск, 1976. - В. 4. - С. 13-14.
8. Sridhar, A.V. Nedocromil sodium for chronic asthma in children / A.V. Sridhar, M. McKean // Cochrane Database Syst Rev. 2006 Jul 19;Vol. 3. - Р. CD004108. Review.
9. Guevara, J.P. Inhaled corticosteroids versus sodium cromoglycate in children and adults with asthma. J.P. Guevara, F.M. Ducharme, R. Keren, et al. Cochrane Database Syst Rev. 2006 Apr 19; Vol. 2. - P. CD003558. Review.
Bibliography
1. Brukhin, G.V. Functional State of Posterity’s Mononuclear Phagocyte Elements System from Mothers with Inveterate Liver Damages of Various Ethiology / G.V. Brukhin // Immunology. - 1993. - № 4. - P. 63-65.
2. Freydlin, I.S. Some Morphological and Functional Characterictics of a Man’s Peripheral Blood Monocytes Culticated in Vitro / I.S. Freydlin, S.V. Nemirovsky, Т.А. Rudakova // The Inborn Immunity Factors ar Various Physiological and Pathologic States. - Omsk, 1976. - Iss. 4. - P. 13-14.
3. Guevara, J.P. Inhaled Corticosteroids Versus Sodium Cromoglycate in Children and Adults with Asthma / J.P. Guevara, F.M. Ducharme, R. Keren, et al. - Cochrane Database Syst Rev.
2006 Apr 19; Vol. 2. - P. CD003558. Review.
4. Heppe, N.Ä. Development Perspectives and Problems of Children’s Pulmonology in Russia / NA.Heppe, I.K Volkov // Pulmonology. - 2007. - № 4. - P. 5-6.
5. Mayansky, Ä.N. Sketches on Neutrophil and Macrophage / Ä.N. Mayansky, D.N. Mayansky. - Novosibirsk: Science, 1989. - 344 p.
6. Pat. 2364341 Russian Federation. The Way of Children’s Induced Phlegm Receiving for Level and Character Evaluation of Bronchi Mucosa Inflammation / V.I. Kulichkov, Yu.L. Mizernitsky, О.G. Rybakova, Е.Е. Minina, Ya.I. Zhakov. - №2008116364; Applic. 24.04.2008; Published 20.08.2009, Bul. № 23. - 10 p.
7. Sarkisov, D.S. Microscopic Equipment / D.S. Sarkisov, Yu.L. Perov. - М.: Medicine, 1996. - 544 p.
8. Sridhar, A.V. Nedocromil Sodium for Chronic Asthma in Children / A.V. Sridhar, M. McKean // Cochrane Database Syst Rev. 2006 Jul 19;Vol. 3. - Р. CD004108. Review.
9. The Global Strategy of Bronchial Asthma Treatment and Preventive Measures. Review
2007 / Under the Edit. of A.G. Chuchalin.- М.: Atmosphere, 2008. - 108 p.
