CC BY
22
основе МКЛ к антигену СБ34 1СО-115, к антигену СЭ50 1СО-6(), к антигену СОЗ ГСО-90 и антигену ЛГ4, являющемуся маркером эпителиальной железистой ткани, 1СО-25.
Материалы н методы: Эксперименты проводили на перевиваемых клеточных линиях, а также молельных системах. состоящих из смеси клеток перевиваемых клеточных линиГсМ каС-экспрессирует СПЗ антиген; Вко! - экспрессирует С050: КО 1 - экспрессирует С034; Сао\ — экспрессирует антиген, определяемый МКА 1СО-25; JY- не экспрессирует ни одного из исследуемых антигенов, а также на клетках периферической кропи больных хроническим ми-елолейкозом в стадии бластного криза (ХМЛ БК) илимфо-цитах периферической кровиздоровых доноров. Антигенный состав клеточной суспензии до инкубации с ИММС и несвязавшиеся фракции анализировали на проточном ци-тофлуориметре в реакции иммунофлуоресценции. Используемые МКД получены и охарактеризованы в РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН. В качестве основы для и.ммуно-сорбета использовали полистирольные микрос([)еры размером 4 микрон с включенными в них частицами Ес,Ог
Результаты: ИММС /шоснове МКА 1СО-115, направленных к антигену стволовых клеток С034, с высокой эффективностью (97%) извлекал С034-позитнвные клетки из культуры линии К01, экспрессирующей С034 антиген на 100% клеток. В молельной системе из смеси клеток линий К01 и.1У неэкспрессирующейС034, ИММС разделял клетки со 1 00% эффективностью при доле клеток С034+ в смеси от 1 до 10%. Аналогичные результаты получены при выделении СЭ34 клеток из периферической крови б-го К. с диагнозом ХМЛ БК и содержанием бластных С 1)34 клеток 80%. Показана специфичность полученного ИММС, в качестве нег ативного контроля использовали лимфоциты периферической крови здоровых доноров. ИММС на основе МКА 1СО-90, являющегося маркером зрелых Т-кле-ток, показал 100% специфичность в сепарации СЭЗ клеток в культуре линии ]игка(, атакже в выделении СОЗ мо-нонуклеарных клеток здоровых доноров. Получены достоверные результаты по сепарации С1Э50 - клеток в модельной системе из смеси СЭ50 -клеток ЗУ и С050-негативных клеток ЕбЫ. На основе МКА 1СО-25 получен ИММС, показавший специфическое связывание с клетками Саоу.
Заключение; Показана пригодность полученных иммуносорбентов на основе МКА для позитивной и негативной селекции нормальных и опухолевых клеток.
Влияние клеточных факторов на продукцию нитроксид анионов макрофагами в норме и при опухолевом росте
Киселева Е. П.
Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН Санкт-Петербург, Россия
В настоящее время большое внимание уделяется вопросам регуляции ангиогенеза в норме и при росте опухо-
лей. Опухолевые клетки выделяют факторы, непосредственно стимулирующие ангиогенез — например, GM-CSF и VEGF. Кроме того, эти и другие опухолевые продукты могут активировать макрофаги, которые также выделяют ан-гногенные факторы. Продукция нитроксид анионов имеет большое значение для роста сосудов. Как показано рядом авторов, в зависимости or концентрации, нитроксид анионы могут ускорять или замедлять ангиогенез in vivo. Известно. что нормальный клеточный метаболит— молочная кислота, выделяется опухолевыми клетками в большом количестве. Недавно было показано, что культивирование макрофагов в присутствии лактата вызывает продукцию ими ангиогенных факторов —н частности. VEGF.
Целью настоящей работы было изучит!, продукцию нитроксид анионов макрофагами в присутствии лактата, а также супернатантов опухолевых и эндотелиальных клеток. Кроме того, эту же фукцию оценивали при ко-культивиропании макрофагами с клетками мышиной гепатомы 22а, фпбробластами L929 пли эндотелиальными клетками человека ECV304. В качестве модели использовали мышиные перитонеальные макрофаги от нормальных животных или опухоленосителей, которым инокулировалн клетки сингенпоп гепатомы 22а. Оценку продукции нитроксид анионов проводили с помощью измерения концентрации N02'n супернатантах клеток спектрофотометрическим методом.
Полученные результаты показали, что лактат натрия в концентрации 15 мМ является индуктором синтеза N02' как в макрофагах контрольных животных, гак и опухолено-сителеи. При исследовании этого показателя у мышей с гепатомой в динамике опухолевого роста было выявлено два пика усиления: на раннем этапе (I сут. после инокуляции) и на поздних сроках роста (30 сут. после инокуляции), когда опухоли достигали значителы ibix размеров.
Кокультивнрование макрофагов интактных животных с опухолевыми клетками гепатомы 22а и фпбробластами L929 в течение 48 час. вызывает активацию синтеза нитритов, причем фибробласты более активно стимулируют функцию макрофагов. При раздельном культивировании в супернатантах гепатомы 22а, фпбробластов или эндотелиальных клеток содержание нитритов нами не обнаружено. Культивирован и с макрофагов в присутствии супернатантов 72-часовых культур вышеперечисленных клеток стимулировало продукцию NOj' макрофагами, причем наиболее активным оказался супернатант гепатомы 22а.
Полученные данные позволяют заключить, что молочная кислота является индуктором синтеза нитроксид анионов в макрофагах и может иметь большое значение как стимулятор ангиогенеза при опухолевом росте. Наши исследования согласуются с данными других авторов о том, что культивирование макрофагов в присутствии опухолевых клеток приводит к стимуляции продукции нитроксид анионов. По-видимому, опухолевые клетки выделяют факторы, стимулирующие эту функцию макрофагов, что подтверждается также активностью супернатантов. Возможно, одним из таких факторов является повышенное содержание лактата. Впервые было показано, что супернатанты
эндотелиальных клеток также содержат факторы, вызывающие продукцию N0, макрофагами. Проведенные исследования имеют значение для оценки межклеточных взаимодействий при ангиогенезе.
Диагностика активной цитомегаловирусной инфекции у больных с воспалительными заболеваниями глаз
Крнчевская. Г.И., Анджелов В.О., Звонарев АЛО., Кулякина М.Н., Зайцев И.З., Катаргипа Л. А.
Московский научно-исследовательский институт глазных болезней ни. Гельмгольца, Россия Унитарное Государственное московское предприятие по производству бактерийных препаратов, Россия
Введение. Цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ) характеризуется широким распространением среди практически здорового населения, персистентным характером и склонностью к активизации под влиянием различных причин, приводящих даже к временной иммуносупрессии. Активизация латентной ЦМВИ в ряде случаев может привести к развитию клинически выраженного заболевания различных органов, включая глаз. Имеющиеся данные свидетельствуют о том, что ЦМВИ встречается значительно чаще, чем ЦМВ-заболевания. Существуют многочисленные методы лабораторной диагностики хронической ЦМВИ, однако для подтверждения этиопатогенетнческой роли ЦМВ в развитии заболевания у конкретного больного необходимо выявления активной ЦМВИ. С этой целью чаще всего определяют в сыворо тке крови анти-ЦМВ антитела класса ^ М, однако этот метод имеет ряд недостатков - в частности, возможность получения ложноположительных результатов при наличии в крови ревматоидного фактора. А.Ю.Звонаревым и соавторами разработана принципиально новая иммуноферментная тест-система для диагностики активной ЦМВИ, основанная на выявлении в сыворотке крови вирусспецифических анти тел класса й к сверхранним неструктурным белкам ЦМВ. Эти белки появляются в инфицированных клетках только в период репликации вируса и не входят в состав зрелого вири-она. Выявление антител к неструктурным белкам вируса позволяет дифференцировать активную и хроническую ЦМВИ.
Цель н задачи. В задачи настоящего исследования входило изучение частоты выявления антител к неструктурным сверхранним белкам ЦМВ у больных с различной воспалительной патологией глаз с целыо оценки их диагностического значения.
Материалы и методы. Обследован 381 ребенок в возрасте от 3 месяцев до 15 лет с врожденными и приобретенными заболеваниями глаз. Гуморальные антитела к ЦМВ определяли в иммуноферментом анализе (ИФА):^ в и ^ М антитела в тест-системах фирмы Абботт, США; антитела класса 1§ б к основному сверхраннему рекомбинантному не-
структурному белку вируса (CP-антитела) в тест-системе “I 1МВ-контроль”(ЗАО ПКБ им. И.И.Мечникова).
Основные результаты. 1цО-1ДМВ-антите.ча выявлены у большинства обследованных детей (78%). Активная ЦМВИ определялась значительно реже, чем хроническое инфицирование, однако СР-антитела выявлялись несколько чаще (5,7%) по сравнению с 1ц М антителами (2,5%) и в более высоких титрах. Обнаружение СР-антн-тел коррелировало с наличием активного воспалительного процесса в глазу, при этом они выявлялись при различных клинических формах заболевания, что вполне соответствует оппортунистическому характеру ЦМВИ.
Заключение. Иммуноферментная тест-система для выявления антител к неструктурным сверхранним рекомбинантным белкам ЦМВ высокочувствительна, специфична, не дает перекрестных реакций с другими вирусами группы герпеса, позволяет установить активную фазу ЦМВИ. Однако учитывая, что не всегда активная ЦМВИ приводит к развитию клинического заболевания, необходим индивидуальный анализ клинико-лаборатор-ных данных для решения вопроса об зтиопатогенетической роли ЦМВИ у данного больного.
Иммунный статус больных раком шейки матки I-III стадий при сочетанной лучевой терапии
Кузьмина Е.Г., Дорошенко Л.Н., Пантелеева Е.С., Нейрина Г.С., Сироткпна Н.П., Ватин О.Е.,
Крикунова Л.И.
Медицинский радиологический научный центр РАМН Обнинск, Россия
В последнее время большое внимание уделяется состоянию иммунной системы у онкологических больных, т. к. известно депрессивное влияние опухоли на иммунную, гормональную и другие системы, а также имму-носупрессивное действие агрессивных мет одой лечения онкобольных.
В настоящей работе проведена оценка состояния иммунитета больных раком шейки матки (PLUM) на этапах лечения и в отдаленные сроки после сочетанной лучевой терапии (СЛТ) в зависимости от стадии заболевания. На фоне СЛТ группа больных (8 человек) получала препарат — ’’биококтейль НК.” — смесь растительных компонентов, сквашенных по специальной технологии Е. coll, производимый израильской фирмой “БЕЛЬБО”.
Обследовано 40 больных с верифицированным диагнозом РШМ в возрасте от 24 до 76 лет, 25 из них — в 1-11 стадиях заболевания, по системе TNM, 15—в III. В периферической крови определяли численность циркулирующих лейкоцитов и лимфоцитов, анализировали содержание основных субпопуляций иммунокомпетентных клеток (моноклональные антитела фирмы BECTON DICKINSON и проточная цитофлюориметрия, FACScan). Оценивали реакцию бластиой трансформации Т-клеток на ФГА, цито-токсический индекс, уровни сывороточных иммуноглобу-
