CC BY
56
Влияние индукторов интерферона на цитокиновый статус больных папилломавирусной инфекцией гениталий, вызванной вирусом папилломы человека 6-го или 11-го типов
Шперлинг Н.В.
Influence of interferon inducer on the cytocines status the
pathients
with genital papillomavirus infection сaused by Human Papilloma
Virus 6/11 types
Shperling N. V.
Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
© Шперлинг Н.В.
Выявлены изменения содержания цитокинов в крови больных инфекцией гениталий, вызванной вирусами папилломы человека 6-го или n-го типов, до и после лечения индукторами интерферона. Установлено, что йодантипирин более выраженно и продолжительно повышал уровень в крови а-, р-, у-интерферонов, интерлейкина-2, нормализовал содержание интерлейкина-ю; циклоферон и амиксин повышали уровень а-, у-интерферона и фактора некроза опухолей-а. Динамика содержания цитокинов под влиянием терапии зависела от исходного состояния цитокиновой системы: была минимальной при рецидивирующем течении и более выраженной при первом эпизоде инфекции. Положительное влияние индукторов интерферона на статус цитокинов является патогенетическим обоснованием применения этих препаратов в программах лечения инфекции гениталий, вызванной вирусами папилломы человека 6-го или n-го типов.
Ключевые слова: папилломавирусная инфекция, индукторы интерферона, цитокиновый статус.
Changes of cytocines maintenance in blood at the genitals human papilloma caused by viruses 6/11 types before treatment with interferon inducers, are revealed. lodantipyrine raised a level in blood of а-, p-, y-interferon, interleykin-2 more strongly and more for a long time, normalized the interleykin-10 level; cycloferon and amixine raised а- and y-interferon, the tumor necrosis factor-а level. Dynamics of cytocines maintenance under influence of therapy depends on an initial condition of cytocin systems. It was minimal at plural relapses and more positive — at the first infection episode. Positive influence of interferon inducers on the cytocines status is a pathogenetic substantiation of application of these preparations in treatment programs of the genital infection, caused by human papilloma virus of 6/11 types.
Key words: papillomavirus infection, interferon inducer, the cytocines status.
УДК 618.1-006.52-022.6.-097:616.998:615.37
Введение
В последние годы увеличивается заболеваемость папилломавирусной инфекцией (ПВИ), вызываемой вирусом папилломы человека (ВПЧ). В 2007 г. в России частота случаев заболевания ассоциированными с ВПЧ аногени-тальными кондиломами составляла 32,1 на юо тыс. населения. Распространенность ПВИ, разнообразие ее клинических проявлений, вы-
сокий онкогенный потенциал, резистентность к лечению представляют клиническую проблему
[5, 12].
Развитие ПВИ тесно связано с иммунными нарушениями. Инфекция инициирует иммунодефицит, снижает противовирусную защиту, способствуя персистенции возбудителя. В связи с этим оптимальной тактикой лечения ПВИ является иммунокорригирующая терапия, направ-
ленная на активацию реакций неспецифической противовирусной защиты и формирование специфического вирусонаправленного иммунного ответа [11]. В этих процессах важную функцию выполняют цитокины: интерфероны (ИФН), ин-терлейкины (ИЛ), факторы некроза опухолей (ФНО), трансформирующие факторы роста и др. [1]. При ПВИ развивается дисбаланс цито-кинов, что способствует снижению эффективности противовирусной защиты [з].
Нарушения в иммунной системе при ПВИ обосновали применение при данной патологии индукторов ИФН — веществ природного или синтетического происхождения, способных стимулировать в клетках-продуцентах ИФН в физиологических количествах. Широкий спектр действия ИФН, лежащий в основе их противовирусного, иммуномодулирующего и антипролиферативного эффектов, объясняет клиническую эффективность при вторичных иммунодефицитах, вирусных, ревматических и онкологических заболеваниях [2]. Фармакологические свойства появляющихся в последнее время на фармацевтическом рынке новых индукторов ИФН изучены недостаточно, что диктует необходимость систематизации знаний о механизмах их лечебного действия с целью расширения показаний к применению при вирусных инфекциях.
Цель исследования — выявить влияние индукторов интерферона на цитокиновый статус больных папилломавирусной инфекцией гениталий, вызванной ВПЧ 6-го или 11-го типов.
Материал и методы
Дизайн исследования включал подбор когорт больных, формирование исследуемых групп, лечение и динамическое наблюдение.
Материалом исследования служили результаты клинико-лабораторного обследования 66 пациентов (31 мужчина и 35 женщин в возрасте 18—56 лет), страдающих ПВИ гениталий, вызванной ВПЧ 6-го или
11-го типов ( с кондиломами размером до 1 см). Больные находились на амбулаторном лечении в научно-практическом медицинском объединении « Здоровье» г. Томска. Все пациенты были
осведомлены об условиях исследования, дали добровольное согласие на участие в нем. Диагноз ПВИ гениталий был установлен на основании анализа жалоб, анамнеза, общего и локального (гинекологического или урологического) статуса, наличия койлоцитов при цитологи-ческом исследовании соскобов с пораженных тканей кожных и слизистых покровов, переднего и заднего сводов влагалища, уретры, шейки матки, вульвы, выявление ВПЧ 6-го или 11-го типов при полимеразной цепной реакции (ПЦР). Дифференциальную диагностику кондилом проводили с широкими кондиломами при сифилисе.
Больные в зависимости от клинической формы заболевания были распределены на две группы по 33 пациента в каждой: пациенты с впервые выявленным кондиломатозом гениталий (I группа) и с рецидивирующим течением с частотой рецидивов 2—7 раз в год (II группа). Далее каждая группа была разделена на подгруппы по 10—12 человек в зависимости от назначенного лечения, включавшего прием индукторов ИФН: йодантипирина — подгруппа А, цик-лоферона — подгруппа Б, амиксина — подгруппа В. У всех больных удаляли кондиломы с помощью аппликации солкодерма, диатермоэлектро-коагуляции.
В исследовании использованы индукторы ИФН с зарегистрированными показаниями для применения при ПВИ (циклоферон) и потенциально перспективные для ее лечения (амиксин, йодантипирин), проявляющие высокую терапевтическую эффективность при других вирусных инфекциях [2, 7]. Больные в подгруппах получали интерферонотерапию: циклоферон — внутримышечно 2 мл 12,5%-го раствора 1 раз в день в 1, 2, 4, 6, 8, 11, 14, 17, 20, 23-й дни лечения, амик-син — внутрь таблетки по 250 мг 1 раз в день в течение 2 дней, затем 125 мг через день 12 дней; йодантипирин — внутрь таблетки по 100 мг 2 раза в день в течение 25 дней, затем 100 мг 1 раз в день на протяжении 50 дней. Циклоферон и амиксин назначали в соответствии с инструкциями по применению препаратов, йодантипирин — по авторской схеме ( патент
№ 2221562 ).
Группу контроля составили 15 практически здоровых лиц (7 мужчин и 8 женщин) в возрасте 22—46 лет.
У всех больных до приема препаратов, через 40 сут и з мес от начала наблюдения в крови определяли уровень а- и у-ИФН методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с помощью наборов реагентов « Альфа -Интерферон - И ФА- Бест » и « Гамма-Интерферон-ИФА-Бест» («Вектор-Бест», Россия); содержание р-ИФН — методом твердофазного иммуноферментного сэндвича (Elysa) с помощью набора реагентов «HuINF-Р» (BioSource International, США);
содержание ИЛ-2 и ИЛ-10 — методом твердофазного ИФА с помощью наборов «IL-2» и «IL-10» (BioSource International, США); уровень ФНО-а — с помощью набора реагентов «Альфа-ФНО-ИФА-Бест» («Вектор-Бест»).
Все результаты представлены в виде X ± m, где X — среднее значение, m — стандартная ошибка среднего. Сравнение средних значений измеряемых показателей проводили с использованием t-теста для независимых выборок. Различия считали статистически значимыми на уровне значимости p < 0,05. Данные обрабатывали с использованием стандартного пакета прикладных программ Excel 2003.
Результаты
При первом клиническом эпизоде кондилом, вызванных ВПЧ 6-го или 11-го типов, уровень
а-, в- и у-ИФН, ИЛ-2 и ФНО-а был соответственно в 4,6; 5,6; 5,7; 1,9 и 1,5 раза выше, концентрация ИЛ-10 — в 2,2 раза ниже, чем у здоровых доноров. При рецидивирующем течении ПВИ, напротив, содержание большинства цито-кинов было статистически значимо ниже показателей контроля на фоне повышения уровня ИЛ-10. При этом содержание у-ИФН было ниже нормы в 9,2 раза (таблица). Выявленные изменения свидетельствуют об активации цитокинового звена противовирусного иммунитета при первом клиническом эпизоде и угнетении цитокиногене-за при рецидивирующей форме кондиломатоза.
Динамическое исследование цитокинограмм пациентов в I группе показало, что через 40 сут после начала лечения индукторами ИФН в крови всех пациентов снижался исходно повышенный уровень а-ИФН, у-ИФН и ФНО-а, возрастало содержание ИЛ-10. Концентрация в-ИФН увеличивалась под влиянием йодантипирина и снижалась после лечения циклофероном и амиксином. Циклоферон восстанавливал содержание ИЛ-2 до уровня нормы. В отдаленные сроки наблюдения (з мес от начала лечения) циклоферон и амиксин нормализовали соотношение цитокинов в крови
(за исключением низкого содержания в-ИФН). У пациентов, принимавших йодантипирин, напряженность цитокиногенеза сохранялась, при этом концентрация в-ИФН оставалась в 3,3 раза выше нормы (таблица).
Влияние индукторов интерферона на цитокиновый статус больных с папилломавирусной инфекцией гениталий,
вызванной ВПЧ 6-го или 11-го типов (X ± т)
Показатель Здоровые доноры Группа пациентов До лечения После лечения
А Б В
а-ИФН, пг/мл 15,3 ± 1,1 I 69,9 ± 5,3***++ + 21, 9 ± 1 , 8**** 27,9 ± 2,1****** 1 2,2 ± 1 ,0*** 11,9 ± 0,9*** 2 3,0 ± 1 , 9 ***** 12,3 ± 1,1***
II 10,0 ± 0,9** 26, 4 ± 2, 2 ****** 22,9 ± 1,9***** 1 3,0 ± 1 , 4* 11,5 ± 1,3 1 2,3 ± ,3 15,5 ± 1,6*
р-ИФН, пг/мл 3,0 ± 0,6 I 17,2 ± 1,4*** + + + 87, 0 ± 6, 1 ****** 10,0 ± 0,8***** 7 , 0 i 0, 7****** 0,2 ± 0,1****** 1 , 1 ± 1, 1**** 1,8 ± 0,3****
II 1,0 ± 0,3** 87, 6 ± 7, 3 ****** 29,6 ± 3,4****** 7 ,8 ± 0, 7* 1,0 ± 0,2** 1 ,8 ± 0, 1** 2,1 ± 0,6
у-ИФН, пг/мл 17,5 ± 1,4 I 99,1 ± 7,4*** ++ + 28, 9 ± 2, 1 ****** 17,1 ± 1,4*** 1 8,0 ± 1 , 4*** 10,0 ± 1,1***** 53, 7 ± 4, 2 ****** 24,1 ± 1,9******
II 1,9 ± 0,3*** 1 7, 1 ± 1 , 5*" 4,8 ± 0,7****** 2 4, 1 ± , 8 ******
28,9 ± 2,1****** 14,8 ± 1,3**** 23,1 ± 1,8******
ИЛ-2, пг/мл 11,9 ± 1,3 I 22,1 ± 1,9*** *** 23, 7 ± 2, 1 *** 13,2 ± 1 ,5*** 2 3,0 ± 2, 2 ***
23,0 ± 2,0*** 10,7 ± 1,1*** 10,2 ± 1,2***
II 4,4 ± 0,9*** 1 4, 6 ± 1 , 5*** 1 ,б + 0, 1*** 8,9 ± 1,0*** 10,2 ± ,2***
23,7 ± 1,8****** 14,2 ± 1,5***
ИЛ-10, пг/мл 7,2 ± 1,1 I 3,3 ± 0,8** *** 1 7,9****** 1 ,5 ± 1 , 1 4,9 ± 1,1 1 2, 7 ± , 5 *****
4,6 ± 1,0* 4,1 ± 0,8*
II 27,7 ± 3,1*** 1 2, 1 ± 1 , 7****** 1 3, 7 ± 1 , 8 ****** 1 4, 1 ± 1 , 7******
07,9 ± 1,2*** 16,7 ± 2,1****** 13,7 ± 1,6******
ФНО-а, пг/мл 16,1 ± 1,8 I 23,8 ± 2,3*** *** 6,0 ± 0, 9****** 4,8 ± 0, 1****** 6,7 ± 1,0****** 5,7 ± 0, 8******
13,1 ± 1,7*** 24,3 ± 2,4***
II 5,7 ± 1,0*** 37, 1 ± 2 , 7****** 9,5 ± 1 , 3 **** 24,7******
6,0 ± 1,0*** 15,6 ± 1,6*** 16,1 ± 1,7***
Примечание. В числителе - показатели через 40 сут, в достоверность различий относительно соответствующих значений два, три знака соответственно р < 0,05; р < 0,01; р < 0,001 ({--тест).
Лечение индукторами ИФН больных рецидивирующей формой ПВИ гениталий, ассоциированной с ВПЧ 6-го или 11-го типов, также улучшало цитокиновый статус. Максимальный терапевтический эффект оказывал йодантипи-рин. Через 40 сут у больных, принимавших этот препарат, в крови повышался уровень а-ИФН в 2,6 раза, Р-ИФН - в 87,6 раза, у-ИФН -в 9 раз, ИЛ-2 - в з,з раза, ФНО-а - в 6,5 раза; уровень ИЛ-10 снижался в 2,3 раза относительно показателей до лечения. Динамика содержания цитокинов в данный период исследования под влиянием циклоферона была минимальной, амиксин стимулировал продукцию у-ИФН, ИЛ-2, ФНО-а и снижал уровень ИЛ-10. Продолжительность эффектов индукторов интерферона была наибольшей у пациентов, лечившихся йодантипирином: даже через з мес от начала лечения в крови отмечались признаки повышенной цитокинсинтетической функции иммунокомпетентных клеток. При этом уровень а-, Р-, у-ИФН и ИЛ-2 был выше исходных показателей нормы; концентрация ИЛ-10 снижалась до нормы. Циклоферон и амиксин проявили меньшую эффективность: у больных сохранялся повышенный уровень ИЛ-10. Вместе с тем для циклоферона была характерна положительная динамика показателей у-ИФН, для амиксина - стабильная
у-ИФН-стимулирующая активность (таблица).
Обсуждение
знаменателе - через з мес после начала лечения; *, •, * -в группе здоровых доноров, до лечения, во 11 группе. Один,
Индукторы ИФН существенно влияли на соотношение цитокинов в ранние (40 сут) и отдаленные (з мес) сроки от начала приема, что имеет важное значение для восстановления баланса ™- и -^-зависимых механизмов иммунной защиты. Между ™ и тъ2 существуют отношения антагонизма, реализуемые с участием их продуктов. Доминирование одного типа хел-перов над другим определяет преобладающую форму иммунного ответа [13].
Ключевыми цитокинами, секретируемыми лимфоцитами типа ты, являются у-ИФН и ИЛ-2. ИЛ-2 образуется под влиянием антигенов и служит фактором роста Т-клеток, обеспечивает дифференцировку цитотоксических лимфоцитов, вызывает функциональную активацию Т- и В-лимфоцитов, Nк-клеток (естественных киллеров), моноцитов, тканевых макрофагов. у-ИФН как провоспалительный цитокин активирует макрофаги, обладает противовирусной активностью в результате стимуляции Nк-клеток и специфического цитостатистического иммунитета, стимулирует образование ты-лимфоцитов и CD8- (цитотоксических) лимфоцитов, которые вызывают гибель инфицированных клеток и секретируют противовирусные факторы (а-ИФН, ФНО-а) [8, 9, 14].
Лимфоциты типа Т12 стимулируют гуморальный ответ и вырабатывают комплекс цитокинов, в том числе ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6 и ИЛ-10, оказывающих противовоспалительное действие преимущественно за счет антагонизма с у-ИФН. Так, ИЛ-4 стимулирует пролиферацию и дифферен-
цировку В-лимфоцитов, тормозит освобождение провоспалительных цитокинов; ИЛ-10 ингибиру-ет функциональную активность макрофагов, продукцию провоспалительных цитокинов моноцитами и макрофагами, повышает пролиферацию В-лимфоцитов и секрецию иммуноглобулинов, активирует биосинтез и высвобождение ги-стамина и лейкотриенов [4, 8].
ИФН регулируют пролиферативную активность тканей [2]. в-ИФН селективно ингибирует транскрипцию Еб и Е7 матричных РНК ВПЧ, подавляет пролиферацию клеток кожно-мышечной системы, мезенхимальной и эпителиальной тканей ( фибробласты этих тканей активно продуцируют в-ИФН) [6]. Повышение концентрации этого цитокина под воздействием индукторов ИФН, особенно йодантипирина, свидетельствует о высоком антипролиферативном потенциале данных препаратов при ПВИ гениталий.
Важную роль в формировании противовирусного иммунного ответа играет основной продукт секреции нейтрофилов ФНО-а. Он стимулирует фагоцитарную и цитотоксическую активность иммунокомпетентных клеток, инициирует апоптоз инфицированных клеток, регулирует процессы иммунного воспаления [4, 10]. Гиперпродукция ФНО-а считается одним из основных механизмов активации инфекционного процесса при его переходе из латентного состояния в фазу клинических проявлений и свидетельствует о прогрессировании заболевания. Угнетение продукции ФНО-а на стадии хронизации инфекционного процесса является результатом глубокой дисрегуляции иммунного ответа.
Заключение
Таким образом, индукторы ИФН (йодантипи-рин, циклоферон, амиксин) при ПВИ гениталий, вызванной ВПЧ 6-го и 11-го типов, стимулировали выработку широкого спектра цитокинов (а-, в-, у-ИФН, ИЛ-2, ФНО-а), участвующих в реакциях противовирусной защиты. Йодантипирин более выраженно и продолжительно повышал уровень в крови а-, в-, у-ИФН, ИЛ-2, нормализовал содержание ИЛ-10; циклоферон и амиксин повышали уровень а-, у-ИФН и ФНО-а. Динамика уровня цитокинов под влиянием терапии зави-
села от исходного состояния цитокиновой системы: была минимальной при рецидивирующем течении и более выраженной при первом эпизоде инфекции. Положительное влияние индукторов интерферона на статус цитокинов является патогенетическим обоснованием применения этих препаратов в программах лечения ПВИ гениталий, вызванной ВПЧ 6-го или 11-го типов.
Литература
1. Бурместер Г.Р., Пеццуто А. Наглядная иммунология. Пер. с англ. М.: Бином; Лаборатория знаний,
2007. 320 с.
2. Ершов Ф.И., Киселёв О.И. Интерфероны и их индукторы (от молекул до лекарств). М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. 368 с.
3. Исаков В.А., Ермоленко Д.К., Ермоленко Е.И. Гер-песвирусные и папилломавирусные инфекции // Инфекции, передаваемые половым путем / Под ред. В.А. Аковбяна, В.И. Прохоренкова, Е.В. Соколовского. М.: Медиа Сфера, 2007. С. 448—513.
4. Кашкин К.П. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность // Клинич. лаб. диагностика. 1998. № 11.
С. 21—32.
5.
Шперлинг Н.В.
6. Кубанов А.А. Современные подходы к лечению папилломавирусной инфекции кожи и слизистых оболочек // Вестн. дерматологии и венерологии.
2005. № 4.
С. 8—12.
7. Кузнецов В.П. Интерфероны в каскаде цитокинов: исторический и современный аспекты // Антибиотики и химиотерапия. 1998. Т. 43. № 5. С. 28—40.
8. Лепёхин А.В., Саратиков А.С., Пучкова Н.Н. и др. Йодантипирин — новое эффективное средство для профилактики гриппа и других ОРВИ // Сиб. мед. журн. 2000. № 2. С. 19—21.
9. Симбирцев А.С. Цитокины: классификация и биологические функции // Цитокины и воспаление. 2004. Т. 3. № 2. С. 16—21.
ю. Фрейдлин И.С., Тотолян А.А. Клетки иммунной системы. СПб.: Наука, 2001. 390 с.
11. Царегородцева Т.М., Серова. Т.И. Цитокины в гастроэнтерологии. М.: «Анахарсис», 2003. 96 с.
12. Arany I., Tyring S. Systemic immunosuppression by HIV infection influences HPV transcription and thus local immune responses in condyloma acuminatum // Int. J. STD AIDS. 1998. V. 3. № 2. Р. 268 —271.
13. Jablonska S. Traditional therapies for the treatment of condylomata acuminata (genital warts) // Austral. J. Dermatol. 1998. V. 39. № 1. P. 2—4.
14. Romagnani S. The Th1/Th2 paradigm // Immunol. Today. 1997. V. 18. № 3. P. 263—266.
15. Samuel C.E. Antiviral Actions of Interferons // Clinical Microbiology Reviews. 2001. V. 14. № 4. P. 778—809.
Поступила в редакцию 20.01.2009 г.
Сведения об авторах
Н.В. Шперлинг — канд. мед. наук, докторант кафедры фармакологии СибГМУ (г. Томск). Для корреспонденции
Шперлинг Наталья Владимировна, тел.: 8-903-950-08-42, 8-905-990-15-14, e-mail: [email protected]
