CC BY
30
УДК 611.451:59.085+615.37
ВЛИЯНИЕ ИМУНОФАНА НА ОРГАНОМЕТРИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ НАДПОЧЕЧНИКОВ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ © Кащенко С.А., Семенчук С.Н.
ГУ ЛНР «Луганский государственный медицинский университет имени Святителя Луки», Луганская Народная Республика, 91045, Луганск, кв. 50-летия Обороны Луганска, 1г
Резюме
Цель. Изучение изменений органометрических параметров надпочечников лабораторных животных после введения иммуномодулятора имунофана.
Методика. Исследование выполнено на 60 белых беспородных крысах самцах молодого возраста репродуктивного периода. Животные были разделены на две группы. Первая группа получала имунофан в дозировке 50 мкг пятикратно по схеме. Вторая группа служила контролем и получала 0,9% №С1. Измеряли абсолютную массу органа и линейные размеры (высоту, толщину, ширину), рассчитывали относительную массу и объем.
Результаты. В ходе исследования было выявлено, что в ранние сроки наблюдения (1, 7 и 15 сут.) достоверные отличия между исследуемыми органометрическими параметрами надпочечников лабораторных животных экспериментальной и контрольной групп отсутствовали. Статистически значимые изменения морфометрических параметров отмечались на 30 и 60 сут. после окончания введения имунофана, что характерно для медленной фазы действия препарата, которая проявляется нормализацией показателей клеточного и гуморального иммунитета и увеличением выработки специфических антител.
Заключение. В результате статистической обработки данных были получены результаты, свидетельствующие об активной реакции со стороны надпочечников.
Ключевые слова: надпочечник, крысы репродуктивного периода, имунофан, органометрия, иммуномодуляция
INFLUENCE OF IMUNOFAN ON THE ORGANOMETRIC PARAMETERS OF THE ADRENAL GLANDS OF LABORATORY ANIMALS IN THE EXPERIMENT Kashchenko S.A., Semenchuk S.N.
St. Luke Lugansk State Medical University, 1g, Kv. 50-letija Oborony Luganska, 91045, Lugansk, Lugansk People's Republic
Abstract
Objective. The aim of the experiment was to study the changes of the organometric parameters of the adrenal glands of laboratory animals after administration of the imunofan as immunomodulator.
Methods. The study was carried out on 60 white young age male-rats of the reproductive age. The animals were divided into two groups. The first group received imunofan at a dosage of 50 ^g five times according to the scheme. The second group was the control one and received 0.9% NaCl. The absolute mass of the organ and the linear dimensions (height, thickness, width) were measured; relative mass and volume were calculated.
Results. As the result of the study, it was revealed that there were no significant differences between the investigated organometric parameters of the adrenal glands of the laboratory animals of the experimental and control groups in the early observation periods (1, 7 and 15 days). Statistically significant changes in morphometric parameters on the 30th and 60th days after the finishing of imunofan administration were noted, which is typical for the slow phase of the drug that manifests itself by normalization of the parameters of cellular and humoral immunity and increased production of specific antibodies.
Conclusion. After the statistical processing of received data, the obtained results indicated an active reaction of the adrenal glands.
Keywords: adrenal gland, rats of the reproductive period, imunofan, organometry, immunomodulation
Введение
Развитие промышленного комплекса, ухудшение экологической ситуации, преобладание сидячего образа жизни и психоэмоциональные нагрузки оказывают значительное влияние на здоровье человека. За последние 30 лет учеными проведены широкие клинико-иммунологические исследования в условиях крупных промышленных регионов, в результате которых установлено значительное распространение синдрома экологического иммунодефицита. По данным В.М. Фролова (1998) наиболее остро экологические проблемы стоят в промышленно развитых регионах Донбасса, что подтверждается ростом числа иммунологических нарушений среди детей и в профессиональных группах населения (шахтеры-угольщики, металлурги, коксохимики и др.) [6,7]. Клинические исследования последних лет позволили внедрить в медицинскую практику иммунотропные препараты с направленным действием, представителем которых является имунофан - гексапептид, являющийся аналогом тимопоэтина IV поколения, созданный при помощи нанотехнологий [3]. В доступной литературе нет данных о морфореактивности надпочечников после применения иммуномодулятора имунофана, что вызывает особый интерес к изучению данного вопроса.
Целью работы явилось изучение органометрических параметров надпочечников белых крыс после введения имунофана.
Методика
Эксперимент выполнен на 60 белых беспородных крысах самцах молодого возраста репродуктивного периода массой 210-240 г [2]. Животные были получены из вивария лабораторных животных университета. Для исключения циклического влияния половых гормонов на лабораторных крыс исследование выполнялось на крысах самцах. Животные были разделены на две группы. Первая группа состояла из животных, получавших пятикратно в дозировке 50 мкг имунофан по схеме на 1, 3, 5, 7, 9 сут. Во вторую группу входили животные, получавшие 0,9% раствор NaCl в эквивалентном объеме. Расчет дозировки препарата для введения выполнялся с учетом константы видовой устойчивости, рекомендованной Ю.Р. и Р.С. Рыболовлевыми (1979) по формуле:
доза для крысы = r х доза для человека / R,
где г - коэффициент видовой устойчивости для крысы =3,62; R - для человека =0,57 [5].
Крыс выводили из эксперимента на 1, 7, 15, 30, 60 сут. после окончания введения препарата, что согласовано с механизмом действия препарата и фазами иммунного ответа. По окончанию наблюдения животных выводили из эксперимента путем декапитации под ингаляционным наркозом хлороформом в одно и то же время суток с учетом положений Директивы 2010/63/EU Европейского Парламента и Совета Европейского Союза от 22 сентября 2010 г. по охране животных, используемых в научных целях (Ст. 27), а также требований и рекомендаций «Руководства по содержанию и использованию лабораторных животных» («Guide for the Care and Use of Laboratory Animals», National Academy Press, USA, 2011). Животных взвешивали на технических весах ВА-4М. Правый и левый надпочечники извлекали с последующим определением их массы на торсионных весах WT-1000. Измеряли линейные размеры при помощи штангенциркуля 11111-1 высоту - от почечной поверхности до верхушки, длину - от латерального края до медиального, толщину - от передней до задней поверхности. Относительную массу органа рассчитывали по формуле: тотн=тнадп/тжив, где тотн - относительная масса, тнадп - масса железы, тжив - масса животного.
Вычисление объема производили по формуле: V=nABC/6, где V - объем надпочечника,
A - длина, B - толщина, C - высота органа.
Результаты исследования и их обсуждение
В ранние сроки наблюдения (1, 7 и 15 сут.) достоверных отличий между исследуемыми органометрическими параметрами надпочечников лабораторных животных экспериментальной и контрольной групп не было выявлено.
Статистически значимые изменения морфометрических параметров отмечались на 30 и 60 сут. после окончания введения имунофана, что характерно для медленной фазы действия препарата, которая проявляется нормализацией показателей клеточного и гуморального иммунитета и увеличением выработки специфических антител.
Так, абсолютная масса органа в поздние сроки наблюдения (30, 60 сут.) после введения иммуномодулятора снижалась на 7,88% и 9,64% по отношению к данному параметру контрольной группы соответственно (рис. 1). Относительная масса железы претерпевала сходные изменения. Этот показатель уменьшался на 8,69% и 10,04% в сравнении с относительной массой надпочечников контрольных животных соответственно 30 и 60 суткам наблюдения. Линейные размеры органа изменялись следующим образом: высота уменьшалась на 3,66% и 6,57%, длина на 4,37% и 5,93%, толщина на 5,96% и 7,23% соответственно этим же значениям надпочечников контрольной группы животных на 30 и 60 сут. (табл.). Стоит отметить, что снижение этих параметров отмечалось и на 15 сут., но не имело статистической значимости. Наибольшие изменения претерпевал объем железы. Значения объема по отношению к этой же характеристике надпочечников контрольной группы животных снижались на 12,7% (30 сут.) и 18,59% (60 сут.) (рис. 2).
Полученные результаты коррелируют с данными литературы. В.Н. Морозов с В.И. Лузиным (2014) в своем исследовании показали уменьшение органометрических параметров надпочечников после 60-дневного введения бензоата натрия и тартразина [4]. По данным И. А. Белик, 60-дневные ингаляции толуола с последующим введением тиотриазолина, также приводят к снижению массы органа во всех сроках наблюдения и уменьшению линейных параметров в ранних сроках эксперимента [1]. Уменьшение массы надпочечников наступало и вследствие орхиэктомии, что показано в работе Luiz Ronaldo Alberti с соавт. [8].
Высокая реактивность органометрических параметров надпочечников после введения иммуномодулятора IV поколения может свидетельствовать о том, что крысы, полученные из вивария лабораторных животных и находящиеся в стандартных условиях, подвержены явлениям экологического иммунодефицита. Это объясняется неблагоприятной экологической обстановкой региона. На наш взгляд, условия иммуносупрессии приводят к развитию компенсаторно-приспособительных процессов, приводящих к увеличению морфометрических параметров органа.
Вероятно, что введение имунофана восстанавливает гомеостаз иммунной системы организма путем усиления фагоцитарной активности, восстановления субпопуляций Т-лимфоцитов и элиминации циркулирующих иммунных комплексов и вслед за этим приводит к уменьшению органометрических характеристик железы.
Таблица. Линейные размеры надпочечников крыс экспериментальной и контрольной групп в разные сроки наблюдения _
Параметр мм, (М±т) Группа животных Сроки наблюдения (сут.)
1 7 15 30 60
Правый надпочечник высота имунофан 3,17±0,02 3,32±0,09 3,19±0,03 3,21±0,03* 3,22±0,04*
контроль 3,15±0,01 3,27±0,12 3,26±0,14 3,32±0,08 3,45±0,12
длина имунофан 3,39±0,11 3,44±0,11 3,36±0,13 3,28±0,06* 3,33±0,08*
контроль 3,33±0,24 3,41±0,09 3,42±0,07 3,43±0,12 3,54±0,35
толщина имунофан 2,58±0,04 2,61±0,09 2,65±0,07 2,58±0,07* 2,59±0,06*
контроль 2,61±0,07 2,59±0,04 2,67±0,12 2,74±0,14 2,79±0,04
Левый надпочечник высота имунофан 3,22±0,04 3,34±0,12 3,29±0,05 3,23±0,06* 3,24±0,11*
контроль 3,18±0,08 3,32±0,19 3,34±0,11 3,41±0,21 3,49±0,11
длина имунофан 3,42±0,09 3,51±0,14 3,49±0,13 3,31±0,08* 3,46±0,14*
контроль 3,39±0,16 3,48±0,02 3,51±0,22 3,52±0,25 3,61±0,06
толщина имунофан 2,62±0,02 2,66±0,04 2,69±0,11 2,59±0,21* 2,63±0,17*
контроль 2,60±0,03 2,67±0,17 2,72±0,07 2,79±0,12 2,86±0,03
Примечание: * - р<0,05 в сравнении с контролем
Выводы
1. Введение имунофана в дозировке 50 мкг по схеме белым беспородным крысам-самцам молодого возраста репродуктивного периода сопровождается выраженными изменениями органометрических параметров надпочечников, что свидетельствует об активной реакции со стороны железы.
2. В ранние сроки наблюдения (1, 7 и 15 сут.) статистически значимых отличий органометрических показателей надпочечников с контрольными группами не выявлено.
3. На 30 и 60 сут. отмечалось уменьшение абсолютной и относительной массы, объема и всех линейных размеров органа.
4. В последующих публикациях планируется осветить гистоструктуру надпочечников после применения имунофана в различные сроки эксперимента.
5.
0 Правый надпочечник эксперимента
20
Абсолютная 15 масса (мг)
льная группа □ Правый
надпочечник
контрольная
группа ОЛевый надпочечник эксперимента льная группа ПШЛевый надпочечник контрольная группа
1 сутки 7 сутки 15 сутки 30 сутки 60 сутки
Рис. 1. Динамика абсолютной массы правого и левого надпочечников экспериментальной и контрольной групп в разные сроки наблюдения
Рис. 2. Динамика объема правого и левого надпочечников экспериментальной и контрольной групп в разные сроки наблюдения
Литература (references)
1. Белик И. А. Динамика изменений органометрических показателей надпочечных желез крыс-самцов после завершения ингаляций толуола и введения тиотриазолина / Проблеми еколопчно! та медично! генетики i клшчно! iмунолоril. - 2010. - №4. - С. 367-373. [Belik I.A. Problemy ekolohichnoi ta medychnoi henetyky i klinichnoi imunolohii. Problems of ecological and medical genetics and clinical immunology. - 2010. - №4. - P. 367-373. (in Russian)]
2. Лабораторные животные / Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А. и др. - К.: Вища школа, 1983. -383 с. [Zapadnjuk I.P., Zapadnjuk V.I., Zaharija E.A. i dr. Laboratornye zhivotnye. Laboratory animals. - Kiev: High school, 1983. - 383 p. (in Russian)]
3. Лебедев В. В., Покровский В. И. Имунофан - синтетический пептидный препарат нового поколения // Вестник Российской АМН. - 1999. - №4. - С. 56-61. [Lebedev V. V., Pokrovskij V. I. Vestnik Rossijskoj AMN. Bulletin of the Russian Academy of Medical Sciences. - 1999. - №4. - P. 56-61. (in Russian)]
4. Морозов В.Н., Лузин В.И. Органометрические параметры надпочечных желез крыс в период реадаптации после 60-ти дневного введения тартразина и использования мексидола // Вюник проблем бюлогп i медицини - 2014. - Вып.3, Т.1(110) - С. 238-241. [Morozov V.N., Luzin V.I. Visnyk problem biolohii i medytsyny. Bulletin of Biology and Medicine. - 2014. - Iss.3, V.1(110) - P. 238-241. (in Russian)]
5. Рыболовлев Ю.Р., Рыболовлев Р.С. Дозирование веществ для млекопитающих по константе биологической активности // Доклады АН СССР. - 1979. - Т. 247, №6. - С. 1513-1516. [Rybolovlev Ju.R., Rybolovlev R.S. DokladyANSSSR. Reports of the USSR Academy of Sciences. - 1979. - V.247, N6. - P. 15131516. (in Russian)]
6. Фролов В.М., Дранник Г.Н. Проблемы иммуноэкологии: от синдрома повышенной утомляемости до синдрома хронической усталости // 1ммунолопя та алерголопя. - 1998. - №1. - С. 69-81. [Frolov V.M., Drannik G.N. Immunolohia ta alerholohia. Immunology and Allergology. - 1998. - N1. - P. 69-81. (in Russian)]
7. Фролов В.М., Дранник Г.Н., Бариляк И.Р. Эпидемиологические и клинико-цитогенетические аспекты синдромов повышенной утомляемости и хронической усталости // Архив психiатрil. - 1998. - №1(16). -С. 46-62. [Frolov V.M., Drannik G.N., Bariljak I.R. Arkhyv psykhiatrii. Archive of Psychiatry. - 1998. -N1(16). - P. 46-62. (in Russian)]
8. Alberti L.R., Magalhaes Veloso D.F., De Souza Vasconcellos L. et al. Morphofunctional and Metabolic Alterations after Orchiectomy // Peertechz Journal of Biological Research and Development - 2016. - V.30. - P. 1-6.
Информация об авторах
Кащенко Светлана Аркадьевна - доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии ГУ ЛНР «Луганский государственный медицинский университет им. Святителя Луки». E-mail: kashchenko_s@list.ru
Семенчук Сергей Николаевич - аспирант кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии ГУ ЛНР «Луганский государственный медицинский университет им. Святителя Луки». E-mail: s.semenchuk.lgmu@mail.ru
