CC BY
72
Исследования по диссертационным темам
УДК 612. 361.36:612.746:612.741.15
ВЛИЯНИЕ ГЕПАРИНА НА ГИПОДИНАМИЮ КРЫС,
ВЫЗВАННУЮ ЭТИЛОВЫМ СПИРТОМ
К.А. Пурсанов1, А.Е. Хомутов2, В.С. Слободенюк2, А.В. Бочкарева2,
'ГОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития»,
2ГОУ ВПО «Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского»
Пурсанов Кузьма Анастасович, к. м. н., доцент - раб. тел.: (831) 465-59-60, e-mail: kpursanov@yandex.ru
В экспериментах на лабораторных крысах, которым внутрибрюшинно вводился этанол, регистрируется резкое снижение двигательной активности. Предварительное введение гепарина или введение смеси этанол-гепарин, при определенных соотношениях реагентов, сопровождается снижением гиподинамических свойств этанола. Введение протамин сульфата потенцирует гиподинамический эффект этилового спирта. Взаимодействие гепарина с этанолом in vitro сопровождается увеличением оптической плотности раствора.
Ключевые слова: этанол, гепарин, протамин сульфат, гиподинамия, фотоэлектроколориметрия.
The experiments on laboratory rats which were given intraperitoneal introduction of ethanol have shown sharp reduction of motion activity. Preliminary introduction of heparin or mixture of ethanol-heparin in certain proportions is accompanied by lowering hypodynamic properties of ethanol. Introduction of protamine sulphate provides hypodynamic effect of ethyl alcohol. Interaction of heparin with ethanol in vitro is accompanied by optical density growth of the solution.
Key words: ethanol, heparin, protamine sulphate, hypodynamia, photoelectrocolorimetry.
По фармакологическим свойствам спирт этиловый относится к наркотическим веществам жирного ряда. Наиболее чувствительны к этиловому спирту клетки ЦНС, особенно клетки коры больших полушарий, воздействуя на которые, он вызывает характерное алкогольное возбуждение, связанное с ослаблением процессов торможения. Затем наступает ослабление процессов возбуждения в коре, угнетение спинного и продолговатого мозга с подавлением деятельности центра дыхания [1].
Ранее нами было установлено, что внутрибрюшинное введение этанола в дозе 4,5 г/кг сопровождается этаноловым сном продолжительностью 94,0±8,8 мин. Совместное введение этанола с гепарином в значительной степени снижало продолжительность этанолового сна, а предварительное введение блокатора эндогенного гепарина - протамин сульфата - потенцировало наркотический сон, вызванный этанолом [2].
Цель работы - изучение двигательной активности лабораторных крыс при сочетанном введении этанола и гепарина в возрастающих дозах.
Материалы и методы. Эксперименты были выполнены на 80 половозрелых белых крысах-самцах, массой 200±10 г. До опыта животные находились на обычном рационе вивария.
Этанол вводили внутрибрюшинно в дозе 2 г/кг в объеме 1 мл. В работе использовали гепарин (АО «Курган»), содержащий 5000 МЕ в 1 мл, а также протамин сульфат (1% раствор). Для спектрофотометрических исследований использовали сухой гепарин (производство Франция), содержащий 130 МЕ в 1 мг, разведенный в дистиллированной воде. При использовании смеси гепарин-этанол смешивали реагенты in vitro и выдерживали при комнатной температуре в течение 10 мин., затем вводили в объеме 1 мл. При предварительном введении гепарина и протамин сульфата латентный период составлял 10 мин., после чего вводили этанол.
Изучение гиподинамии, вызванной наркотическим действием этилового спирта, проводилось на тредбане, который представлял плексигласовую камеру размером 1500 х 150 х 150 мм. Пол камеры представлял движущуюся ленту, причем скорость лентопротяжки регулировалась редуктором в широких пределах. Через каждые 150 мм на верхней панели камеры устанавливались легкие металлические флажки. До введения исследуемых веществ подбиралась такая скорость лентопротяжки (100 мм/с), при которой интактное животное могло воспроизводить заданный ритм в течение 2 часов. Если животное после введения этанола не выдерживало ритма движения, то передвигалось по ходу движения ленты тредбана, задевая за флажки. Этот процесс фиксировался визуально и номинировался как падение с тредбана в течение 1 мин.
Результаты и обсуждение. При внутрибрюшинном введении этанола в дозе 2 г/кг через 1 мин. после инъекции двигательная активность крыс не отличалась от интактных животных. С течением времени двигательная активность экспериментальных животных снижается, что выражается в увеличении количества падений с тредбана. Максимальный эффект гиподинами-ческой реакции, вызванной этанолом, наблюдается через 20 мин. после введения и соответствует 4,1±0,5 падений (таблица 1).
Введение гепарина в дозе 25 МЕ/кг в смеси с этанолом (2 г/ кг) несколько снижает гиподинамический эффект этанола, но, тем не менее, показатели двигательной активности животных практически соответствуют показателям первой серии экспериментов (таблица 1).
Увеличение дозы гепарина в смеси с этанолом до 2500 МЕ/ кг блокирует тестовую дозу этанола, и количество падений с тредбана в большинстве случаев равно нулю. Аналогичные результаты были получены при предварительном введении гепарина в дозе 2500 МЕ/кг с последующей инъекцией этанола (таблица 1).
I vi
Исследования по диссертационным темам
Как известно, протамин сульфат является классическим антагонистом гепарина, блокирующего проявление его свойств как in vivo, так и in vitro. В наших экспериментах предварительное введение протамин сульфата в дозе 10 мг/кг сопровождалось повышением уровня гиподинамии животных, что выражалось в увеличении количества падений с тредбана до 7,9±0,4 через 40 мин. после введения этанола (таблица 1).
таблица 1.
Торможение гепарином гиподинамии крыс, вызванной введением этанола
*- р < 0,05 относительно интактной группы животных.
Таким образом, совместное применение гепарина с этанолом в виде смеси, а также предварительное введение экзогенного гепарина в значительной степени снижало гиподинами-ческий эффект этанола. Блокада эндогенного гепарина протамин сульфатом напротив пролонгировала этот эффект этилового спирта.
На наш взгляд, в основе этого феномена лежит хорошо
известное свойство гепарина образовывать комплексные соединения с большим спектром биологически активных веществ. При этом различные биологически активные вещества в значительной мере теряют свои специфические свойства, что и продемонстрировано нами на примере этанола.
Одним из показателей образования комплексного соединения в растворе является изменение его оптической плотности, регистрируемое на фотоэлектроколориметре. Для того чтобы определить возможность взаимодействия гепарина с этанолом, нами было проведено исследование смеси гепарин-этанол на фотоэлектроколориметре при длине волны 400 нм.
Для этого у 1 мл (96%) этанола добавляли возрастающие концентрации сухого гепарина (производство Франции),
содержащего 130 МЕ в 1 мг, разведенного в дистиллированной воде до нужной концентрации. При добавлении к 1 мл 96% этанола 100 МЕ гепарина оптическая плотность визуально не изменялась, однако прибор фиксировал экстинкцию, соответствующую 0,01 (таблица 2).
таблица 2.
Изменение показателей экстинкции смеси гепарин этанол при увеличении концентрации гепарина в растворе
Концентрация гепарина (МЕ/мл)
100 500 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000
Экстинкция
0,01 0,02 0,18 0,5 0,7 0,78 0,94 0,55 0,01 0
Далее при увеличении концентрации гепарина в растворе оптическая плотность повышается и при концентрации 5000 МЕ/мл достигает максимума (0,94). Дальнейшее повышение концентрации гепарина в растворе сопровождается снижением оптической плотности, а при содержании гепарина в растворе 8000 МЕ/мл оптическая плотность равна нулю (таблица 2).
Заключение. Полученные экспериментальные данные позволяют утверждать, что как экзогенный, так и эндогенный гепарин в значительной степени снижают гиподинамическое действие этилового спирта. В основе этого явления, на наш взгляд, лежит способность гепарина взаимодействовать с этанолом с образованием комплексного соединения. Способность гепарина взаимодействовать с различными высокомолекулярными и низкомолекулярными веществами отмечена во многих работах, посвященных этому гликозамингликану. Именно данное свойство определяет широту спектра его биологической активности [3-9]. ^
ЛИТЕРАТУРА
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Новая волна, 2002.
2. Бакаринов П.В., Хомутов А.Е., Зимин Ю.В., Козин Д.В. Влияние экзогенного гепарина на физическое состояние крыс через сутки после этанолового сна// Физиологические механизмы природных адаптаций. Иваново. 1999. С. 56-57.
3. Ерзикян К.Л., Розенфельд М.А., Тер-Маркарян А.Г. Спектрофотометрические исследования реакции комплексообразования фибриногена с антикоагулянтом гепарином. Известия АН СССР. 1974. 6. 920-924.
4. Кудряшов Б.А., Ляпина Л.А. Образование комплекса гепарина с кальцием. Вопросы медицинской химии. 1987. № 28 (5). С. 112-115.
5. Алекперов А.Ф., Алиев А.М. Комплексообразование гепарина с органическими катионами. Фармация, 1987. № 36 (1). С. 80-85.
6. Ляпина Л.А., Азиева Л.Д. Ингибиторы гепарина и их физиологическое действие. Успехи современной биологии. 1989. № 109 (2). С. 224-237.
7. Хомутов А.Е., Орлов Б.Н. Физиологическая роль гепарина. Горький. 1987.
8. Хомутов А.Е., Зимин Ю.В., Бакаринов П.В. Механизм влияния гепарина на гиподинамию кроликов, вызванную дроперидолом// Химия для медицины и ветеринарии. 1998. С. 203-205.
9. Хомутов А.Е., Плохов Р.А. Влияние даларгина на устойчивость животных к гипоксии в условиях модификации гепаринового статуса и нейролепсии // Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция. М. 2005. С. 117-118.
Условия эксперимента Время от введения (мин.)
10 20 30 40 50 60
Этанол (2 г/кг) 3,3±0,3* 4,1±0,5* 3,7±0,6* 2,8±0,3* 2,6±0,5* 1,6±0,6*
Этанол + Гепарин (25 МЕ/кг) 2,8±0,7* 3,3±0,5* 3,6±0,3* 3,6±0,3* 3,0±0,3* 2,9±0,4*
Этанол + Гепарин (250 МЕ/кг) 2,0±0,3* 3,9±0,5* 3,1±0,4* 2,2±0,2* 2,4±0,3* 1,0±0,4
Этанол + Гепарин (2500 МЕ/кг) 0,1±0 0,3±0,2 0,1±0 0 0 0
Этанол + Гепарин (5000 МЕ/кг) 2,0±0,4* 2,3±0,5* 3,3±0,4* 1,6±0,3* 1,8±0,5* 1,2±0,6*
Этанол на фоне Гепарина (2500 МЕ/кг) 0,3±0,2 0,7±0,4 0,6±0,2 0,4±0,2 0 0
Этанол на фоне протамин сульфата (10 мг/кг) 4,7±0,5* 7,2±0,б* 7,8±0,5* 7,9±0,4* 6,0±0,4* 6,0±0,4*
