CC BY
83
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
© Коллектив авторов, 2015 УДК:613.7:611.018.26:613.25:599.323.4
ВЛИЯНИЕ ФИЗИЧЕСКИХ НАГРУЗОК НА МОРФОМЕТРИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МЕЗЕНТЕРИАЛЬНОЙ И ПОДКОЖНОЙ ЖИРОВОЙ ТКАНИ КРЫС С ОЖИРЕНИЕМ, ИНДУЦИРОВАННЫМ ВЫСОКОЖИРОВОЙ ДИЕТОЙ
И.Ю. Якимович 1, Д.А.Бородин1, И.К. Подрезов1, В.В. Иванов1, В.Н. Васильев 1, М.Ю. Котловский 2, Л.В. Борисова1
Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск (1) Красноярский государственный медицинский университет им. В.Ф. Войно-Ясенецкого, г. Красноярск (2)
Распределение жировой ткани и ее количество (преобладание висцерального жирового депо), размер адипоцитов (гипертрофия клеток) могут являться определяющим фактором риска развития метаболических нарушений. В работе исследовано влияние аэробных и анаэробных физических нагрузок на морфометрические параметры мезентериальной и подкожной жировой ткани у крыс с ожирением, индуцированным высокожировой диетой.
Установлено, что у животных, находившихся на высокожировой диете, увеличение массы подкожной жировой ткани сопровождается преобладанием адипо-цитов малых размеров, что возможно играет адаптивную роль и защищает эктопические ткани от липотоксичности.
Анаэробные физически нагрузки снижают удельную массу мезентериальной жировой ткани у животных, находившихся на стандартной диете.
При высокожировой диете анаэробные физические нагрузки в большей степени снижают удельную массу и размер адипоцитов в мезентериальной жировой ткани, в то время как аэробные в подкожной.
Ключевые слова: жировая ткань, адипоциты, высокожировая диета, физические нагрузки.
Ожирение в настоящее время является одним из распространенных хронических заболеваний и приобретает характер глобальной эпидемии. Избыточный вес и ожирение приводят не только к косметическому дефекту, но и к развитию тяжелых и социально значимых заболеваний, таких как сахарный диабет, ише-мическая болезнь сердца, гипертоническая болезнь и другие [1, 2].
Выделяют два основных жировых депо: висцеральное и подкожное, при этом висцеральное депо у грызунов представлено мезентериальной, забрюшинной и эпидидимальной жировой тканью [5].
Увеличение массы жировой ткани идет двумя путями: за счет увеличения объема клеток-адипоцитов (гипертрофии) и увеличения числа адипоцитов (гиперплазии). Известно, что у людей при избыточном питании увеличение подкожной жировой ткани в ягодично-бедренной области происходит за счет увеличения числа клеток, а области передней брюшной стенки за счет увеличения размера адипоцитов [20]. У крыс, находившихся на высокожировой диете, развитие мезен-териальной и эпидимальной жировой ткани преимущественно происходит за счет гипертрофии клеток, в то время как
забрюшинной и подкожной жировой ткани за счет гиперплазии [19]. При этом размер адипоцитов определяет чувствительность к инсулину, синтез и секрецию адипокинов, в том числе провоспалитель-ных, наиболее активно синтезируемых в клетках больших размеров [6].
На сегодняшний день поиск методов, направленных на снижение объема определенных жировых депо остается актуальным и значимым. Физические упражнения остаются одним из средств комплексной терапии ожирения [3, 15, 21]. Физическая нагрузка создает
отрицательный энергетический баланс и уменьшает массу жировой ткани [18].
Тем не менее, несмотря на разнообразие методов снижения веса, остается открытым вопрос о влияние физических нагрузок разной направленности и интенсивности на объем жировых депо, размер жировых клеток.
Цель работы изучить влияние аэробной и анаэробной физической нагрузки на морфометрические параметры мезентериальной и подкожной жировой ткани крыс с ожирением, индуцированным высокожировой диетой.
Материалы и методы
Исследования проводили на белых крысах самцах Wistar. Животные находились в стандартных условиях содержания на естественном световом режиме при свободном доступе к воде и пище (температура воздуха в виварии 20±2°С, влажность - не более 80 %).
Содержание и все манипуляции, которым подвергались животные во время карантина и исследования, соответствовали правилам лабораторной практики, утвержденным приказом министра здравоохранения и социального развития от 23 августа 2010 г. N 708н «Об утверждении правил лабораторной практики», а также с соблюдением конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей, принятой Европейским союзом в 1986 году, и директивы 86/609 ЕЭС, основанной на тексте соглашения RobertHubrecht,
Current EU Legislation Controlling Animal Experiments".
Животные были разделены на шесть групп по 5 в каждой: 1 группа - животные со стандартной диетой без физических нагрузок, 2 группа - животные с высокожировой диетой без физических нагрузок, 3 группа - животные со стандартной диетой и аэробной физической нагрузкой, 4 группа - животные со стандартной диетой и анаэробной физической нагрузкой, 5 группа - животные с высокожировой диетой и аэробной физической нагрузкой, 6 группа - животные с высокожировой диетой и анаэробной физической нагрузкой. Животные 1, 3 и 4 групп принимали стандартную пищу «ПроКорм» для лабораторных крыс фирмы ЗАО «БиоПро» (г. Новосибирск) и воду ad libitum. Животные 2, 5 и 6 групп в течение 12 недель находились на высокожировой диете (жир - 29,6%, белок -14,8%, углеводы - 55,6%) и принимали воду ad libitum.
Физическая нагрузка проводилась в виде плавания. Адаптация к водной среде проходила в течение 15 дней в цилиндрической емкости с гладкой поверхностью. Диаметр емкости 60 см, глубина - 120 см, температура воды 31±1°C. Аэробный характер физической нагрузки был определен методом максимального стабильного содержания лактата (Maximal Lactate Stable State) в сыворотке крови крыс [16, 17]. Плавание с отягощением, равным 4% от массы тела крысы приводило к повышению уровня лактата в сыворотке крови крыс с последующей его стабилизацией, что свидетельствовало о преобладании процессов аэробного энергообеспечения. Данный режим тренировок определен как «аэробная нагрузка». Плавание с отягощением 8% от массы тела крысы приводило к нарастающему накоплению лакта-та в сыворотке крови крыс, что указывало на преобладание процессов анаэробного гликолиза, и данный режим тренировок определен как «анаэробная нагрузка».
В 3 и 5 группах проводилась аэробная тренировка через день в течение 1 часа с отягощением 4% от массы тела. В 4
и 6 группах проводилась анаэробная тренировка через день в течение 80 секунд с 8% отягощением от массы тела в три подхода с 5 минутными периодами отдыха между подходами. Продолжительность занятий составила 6 недель.
Спустя 6 недель тренировок, через 24 часа после последнего занятия животных выводили из эксперимента СО2- асфиксией.
Методом диссекции [5] выделялась и взвешивалась на аналитических весах жировая ткань (подкожная, мезентери-альная) и рассчитывалась ее удельная масса (масса жировой ткани на 100 г массы тела крысы). Для морфометрического исследования кусочки жировой ткани фиксировались в 10% нейтральном забу-ференном формалине (Biovitrum, Россия), обезвоживались в изопропиловом спирте - раствор IsoPrep (Biovitrum, Россия) и заливались в парафин (Histomix, Россия) по методике Ю.А. Криволапова [4]. На микротоме МЗП-01 (Техном, Россия) изготавливались срезы толщиной 5-7 мкм, которые затем монтировались на предметные стекла и окрашивались гематоксилином и эозином. Полученные микропрепараты просматривались в проходящем свете на микроскопе Биомед-3М (Россия) совместимом с компьютером. Изображения срезов оцифровывались для последующей оценки размеров адипоци-тов. Оцифрованные фотографии с хорошо выявленными границами клеток подвергались морфометрической обработке с использованием компьютерной программы ImageJ 1.46 [8]. Для каждой группы животных определялся средний диаметр 500 жировых клеток.
Полученные результаты выражены в виде медианы (Ме), верхнего и нижнего квартилей (Q1-Q3). Статистическую обработку данных проводили с использованием программного пакета SPSS 20.0. Различия считали достоверными при p<0,05.
Результаты и их обсуждение
В результате эксперимента установлено, что высокожировая диета у крыс приводит к увеличению массы тела жи-
вотных на 25% ф<0,01). При этом удельная масса подкожной жировой ткани возрастала в 5,5 раза ф<0,01), а мезентери-альной жировой ткани в 2,1 раза ф<0,01) соответственно по сравнению с группой крыс получавших стандартную диету (табл. 1).
Средний диаметр адипоцитов подкожной жировой ткани в группе животных, находившихся на высокожировой диете, был больше на 13% ф<0,05), а ме-зентериальной жировой ткани на 63% ф<0,005) по сравнению с группой крыс получавших стандартную диету (табл. 2, рис. 1, 2). В одном и том же жировом депо, жировые клетки увеличиваются в размере не синхронно и могут быть разделены на маленькие (диаметром до 50 мкм) и большие (диаметр от 50 до 100 мкм) [10]. Менее выраженное увеличение среднего размера адипоцитов подкожной жировой ткани по сравнению с мезенте-риальной жировой ткани, обусловленно преобладанием жировых клеток малых размеров. Согласно современным представлениям жировые клетки малых размеров выполняют защитную функцию органов и тканей от эктопического накопления жира [12, 13]. Размер адипоцитов и соотношение маленьких и больших клеток имеет важную роль, так как клетки малого размера секретируют адипонектин в большей, а воспалительные адипокины - в меньшей степени. Это способствует повышению чувствительности инсулино-вых рецепторов, что может являться механизмом снижения отрицательных эффектов избытка жировой ткани [9, 15].
Таким образом, увеличение массы подкожной жировой ткани при высокожировой диете возможно обусловлено преимущественно гиперплазией, в то время как в мезентериальном жировом депо - гипертрофией жировых клеток. Гипертрофия клеток мезентериальной жировой ткани и увеличение ее массы в значительной степени определяет риск развития заболеваний сопряженных с ожирением [2, 6, 13].
Физические нагрузки у животных в течение 6 недель не приводили к сущест-
венному снижению массы тела и удельной массы подкожной жировой ткани у тренированных животных в группах, находившихся на стандартной диете. В группе с анаэробной физической нагрузкой отмечалось снижение удельной массы мезентериальной жировой ткани на 22% ф<0,05) по сравнению с нетренированной группой (табл. 1).
У животных, находившихся на высокожировой диете, в процессе физических тренировок отмечалось снижение массы тела на 18% ф<0,05) и удельной массы подкожной и мезентериальной жировой ткани. При этом наибольшее снижение удельной массы подкожной на 70% ф<0,01) и мезентериальной жировой ткани на 56% ф<0,05) отмечалось при аэробной физической нагрузке по сравнению с нетренированной группой.
Несмотря на то, что висцеральная жировая ткань более чувствительна к адренер-гической активации, которую может стимулировать физическая нагрузка, продолжительные тренировки в аэробном режиме приводят к значительному уменьшению подкожного жирового депо [18].
В то же время при анаэробных нагрузках происходит более выраженное снижение удельной массы мезентериаль-ной жировой ткани по сравнению с подкожной (табл. 1).
В группе животных, получавших стандартную диету, при аэробной физической нагрузке в подкожной жировой ткани отмечено снижение количества клеток малого размера, а в мезентериальной жировой ткани увеличение клеток малого размера по сравнению с нетренированной группой животных (табл. 2, рис. 1, 2).
В процессе тренировок в группе животных, находившихся на высокожировой диете, отмечено уменьшение среднего диаметра адипоцитов подкожной и мезентериальной жировой ткани по сравнению с нетренированной группой (табл. 2). Более выраженный эффект отмечен при аэробном режиме занятий в мезентери-альной жировой ткани (средний диаметр адипоцитов снижался на 32% ф<0,05) по сравнению с группой нетренированных
крыс находящихся на высокожировой диете). В группах плавающих животных увеличилось количество клеток малых размеров, наибольшее увеличение клеток малого размера в мезентериальной ткани отмечено при аэробном режиме тренировок (рис. 1, 2), что возможно связано с уменьшением размеров гипертрофированных клеток мезентериальной жировой ткани при высокожировой диете. Показано, что уменьшение в размере гипертрофированных адипоцитов приводит к повышению секреции адипонектина, обладающего антидиабетической, противовоспалительной и антиатерогенной активностью [7]. При анаэробных нагрузках также происходит уменьшение среднего размера адипоцитов в мезентериальной жировой ткани в то время как в подкожной не наблюдается существенного изменения среднего размера жировых клеток (табл. 2). Полученные данные свидетельствует о том, что анаэробные физические нагрузки снижают размер адипоцитов и удельную массу мезентериальной жировой ткани, а аэробные оказывают более выраженное действие на подкожное жировое депо.
Выводы
1. У животных, находящихся на высокожировой диете, в подкожной жировой ткани преобладают адипоциты малых размеров, что возможно играет защитную роль от липотоксичности эктопических тканей.
2. У крыс, находящихся на стандартной диете аэробные физические нагрузки в большей степени снижают удельную массу мезентериальной жировой ткани.
3. Аэробные и анаэробные физические нагрузки снижают удельную массу и уменьшают размер адипоцитов мезентериальной и подкожной жировой ткани у животных, находящихся на высокожировой диете.
4. Анаэробные физические нагрузки при высокожировой диете преимущественно оказывают влияние на мезентери-альную жировую ткань, в то время как аэробные - на подкожную.
Таблица 1
Влияние высокожировой диеты и физических нагрузок на массу тела и удельную массу мезентериальной и подкожной жировой ткани крыс, Ме (Ц !- Ц)
Экспериментальные группы Масса тела, г удельная масса подкожной жировой ткани, г/100 г массы тела удельная масса мезентериальной жировой ткани, г/100 г массы тела
Me ГО 1 - Qз) изменения в % P Me ГО 1 - Qз) изменения в % P Me ГО 1 - Qз ) изменения в % P
¡.Стандартная диета, (п=5) 460 (440-480) 0,88 (0,85-0,91) 1,07 (1,06-1,11)
2.Высокожировая диета, (п=5) 577 (555-610) Т25 (2-1) Р2 _ 1 <0,01 4,89 (3,59-5,16) | 455 (2-1) Р2 _ 1 <0,01 2,26 (2,08-2,26) 1-111 (2-1) P2 _ 1 <0,01
З.Стандартная диета и аэробные нагрузки, (п=5) 439 (435-454) 15 (3-1) Рз _ 1 >0,05 0,89 (0,75-1,45) 12 (3-1) Рз _ 1 >0,05 0,96 (0,84-0,97) 111 (3-1) Рз _ 1 >0,05
4.Стандартная диета и анаэробные нагрузки, (п=5) 446 (418-455) 13 (4-2) р4 _ 1 >0,05 0,81 (0,64-0,87) 18 (4-1) р4 _ 1 >0,05 0,83 (0,82-0,87) 122 (4-1) р4 _ 1 <0,05
5.Высокожировая диета и аэробные нагрузки, (п=5) 472 (460-473) 118 (5-2) ps _ 2 <0,05 1,47 (1,39-1,61) |70 (5-2) Ps _ 2 <0,01 0,99 (1,1-1,26) 156 (5-2) ps _ 2 <0,05
б.Высокожировая диета и анаэробные нагрузки, (п=5) 476 (460-492) 118 (6-2) p6 _ 2 <0,01 3,07 (1,99-3,08) |27(6-2) p6 _ 2 <0,01 1,29 (1,26-1,38) 143 (6-2) p6 _ 2 <0,01
Примечание: п - число животных в группе; р - уровень статистической значимости
Таблица 2
Влияние высокожировой диеты и физических нагрузок на средний диаметр адипоцитов подкожной и мезентериальной жировой ткани крыс, Ме (Ц ± - Ц)
Экспериментальные группы Средний диаметр адипоцитов подкожной жировой ткани, мкм Средний диаметр адипоцитов мезентериальной жировой ткани, мкм
Me (Q 1 - Qз ) изменения в % Р Ме ГО 1 - Qз ) изменения в % Р
1.Стандартная диета, (п=5) 47,8(43,1-54,3) 42(37-47)
2.Высокожировая диета, (п=5) 54,1(48,3-61,4) 113 (2-1) Р2 _ 1 <0,05 68,7(60,7-78) 163 (2-1) Р2 _ 1 <0,005
3.Стандартная диета и аэробные нагрузки, (п=5) 50,1(45-56,7) 14 (3-1) 39,1(34,7-43) 17 (3-1)
4.Стандартная диета и анаэробные нагрузки, (п=5) 48(44,1-52,3) 42,7(38,2-47,8)
5.Высокожировая диета и аэробные нагрузки, (п=5) 48,4(43,8-54,3) 111 (5-2) р5 _ 2 <0,05 47,1(42,8-52) 132 (5-2) р5 _ 2 <0,005
6.Высокожировая диета и анаэробные нагрузки, (п=5) 52,7(47,7-58,2) 13 (6-2) 55,5(50,2-61,8) 119 (6-2) Рб _ 2 <0,01
Примечание: п - число животных в группе; р - уровень статистической значимости
Рис. 1. Влияние высокожировой диеты и физических нагрузок на распределение по размеру адипоцитов мезентериальной жировой ткани крыс; А - стандартная диета, (n=5); В - высокожировая диета, (n=5); С - стандартная диета и аэробные нагрузки, (n=5); D - высокожировая диета и аэробные нагрузки, (n=5); E - стандартная диета и анаэробные нагрузки, (n=5); F - высокожировая диета и анаэробные нагрузки, (n=5)
Рис. 2. Влияние высокожировой диеты и физических нагрузок на распределение по размеру адипоцитов подкожной жировой ткани крыс; А - стандартная диета, (n=5); В - высокожировая диета, (n=5); С - стандартная диета и аэробные нагрузки, (n=5); D - высокожировая диета и аэробные нагрузки, (n=5); E - стандартная диета и анаэробные нагрузки, (n=5); F - высокожировая диета и анаэробные нагрузки, (n=5)
Литература
1. Абдоминальное ожирение: клинико-социальные аспекты проблемы / В.Б. Гриневич [и др.] // Ожирение и метаболизм. - 2012. - №2. - С. 28-32.
2. Бутрова А.С. Висцеральное ожирение
- ключевое звено метаболического синдрома / А.С. Бутрова, Ф.Х. Дзгоева // Ожирение и метаболизм. - 2004. -№1. - С. 10-16.
3. Корнеева О.Н. Регуляция чувствительности к инсулину: диета и физическая нагрузка / О.Н. Корнеева // Российские медицинские вести. -2007. - Т. 2. - С. 36-44.
4. Криволапов Ю.А. Морфологическая диагностика лимфом / Ю.А. Кривола-пов, Е.Е. Леенман. - СПб.: Издатель-ско-полиграфическая компания «КОСТА», 2006. - 208 с.
5. Методический подход к изучению ожирения в эксперименте / А.А. Ни-коноров [и др.]. - Оренбург: ОАО "ИПК "Южный Урал", 2013. - 240 с.
6. Ожирение: молекулярные механизмы и оптимизация таргетной терапии / М.А. Пальцев [и др.] // Молекулярная медицина. - 2013. - № 2. - С. 3-12.
7. Basal lipolysis, not the degree of insulin resistance, differentiates large from small isolated adipocytes in high-fat fed mice / S. Wueest [et al.] // Diabetologie - 2009 . - Vol. 52, №3. - P. 541-546.
8. Collins T.J. // Image J for microscopy / T.J. Collins // Biotechniques. - 2007. -Vol. 43, №1 (Suppl.). - P. 25-30.
9. Dynamics of fat cell turnover in humans / K.L. Spalding [et al.] // Nature. - 2008. -Vol. 453, №7196. - P. 783-787.
10. Müller Günter. Take-over: multiple mechanisms of inter-adipocyte communication / Günter Müller // Journal of Molecular Cell Biology. - 2011. -Vol. 3, №2.
- P. 81-90.
11. Heterogeneity among white adipose tissue depots in male C57BL/6J Mice / Lucila Sackmann-Sala [et al.] // Obesity. -2010 . - Vol. 20, №1. - P. 101-111.
12. High local concentrations and effects on differentiation implicate interleukin-6 as a paracrine regulator / V.R. Sopasakis [et al.] // Obesity reviews. - 2004. - Vol. 12, №3. - P. 454-460.
13. Ibrahim M.M. Subcutaneous and visceral adipose tissue: structural and functional differences / M.M. Ibrahim // Obesity reviews. - 2010. - Vol. 11, №1. - P. 11-18.
14. Lundgren M. No in vitro effects of fatty acids on glucose uptake, lipolysis or insulin signaling in rat adipocytes / M. Lundgren, J.W. Eriksson // Horm Me-tab Res. - 2004. - Vol. 36, №4. - P. 203209.
15. Margos F. Exercise and sensitivity -where do we stand? You'd better run! / F. Margos, Labros S. Sidossis // US Endocrinology. - 2008. - Vol. 4, №1. -P. 23-26.
16. Maximal lactate steady state in rats submitted to swimming exercise / C.A. Go-batto [et al.] // Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. - 2001. -Vol. 130, №1. - P. 21-27.
17. Maximal lactate steady state in obese rats of both genders / G.G. Araujo [et al.] // Brasilian Journal of Sports Medicine. -2009. - Vol. 15, №1. - P. 46-49.
18. Physical activity and exercise in the regulation of human adipose tissue physiology / Dylan Thompson [et al.] // Physiological Reviews. - 2012. - Vol. 92. -P. 157-191.
19. Qualitative regional differences in adipose tissue growth and cellularity in male Wistar rats fed ad libitum / M. DiGirolamo [et al.] // Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. - 1998. - Vol. 274. - P. 1460-1467.
20. Regional differences in cellular mechanism of adipose tissue gain with overfeeding / Y.D. Tchoukalova [et al.] // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2010. - Vol. 107, №42. - P. 18226-18231.
21. Tchemof Andre. Pathophysiology of human visceral obesity: an update / Andre Tchemof, Jean-Pierre Despres // Physiol. Rev. - 2013. - Vol. 93, №1. -P. 359-404.
INFLUENCE OF PHYSICAL ACTIVITIES ON MORPHOMETRIC PARAMETERS OF THE MESENTERIC AND SUBCUTANEOUS TISSUE OF RATS WITH OBESITY,
HIGH-FAT DIET INDUCED
I.Yu. Yakimovich, D.A. Borodin, I.K. Podrezov, V.V. Ivanov, V.N. Vasilyev, M.Yu. Kotlovsky, L.V. Borisova
White adipose tissue (WAT) distribution (visceral fat predomination) and amount (adipose cell hypertrophy) may be a crucial risk factor of metabolic disorders. Present study shows effects of aerobic and anaerobic exercises on morphometric characteristics of mesenteric and subcutaneous WAT in hi-fat diet induced obese rats.
The study found that animals, received hi-fat diet, demonstrate prevalence of small-size adi-pocytes. Probably it protects ectopic tissues from lipotoxic effects.
Anaerobic physical exercises reduce amount of mesenteric WAT in normal rats received standard chow.
Applied with hi-fat diet, anaerobic physical exercises reduce amount and size of fat cells in mesenteric WAT, but aerobic physical exercises reduce the same characteristics in subcutaneous WAT.
Keywords: adipose tissue, adipocytes, high-fat diet, exercise.
Якимович И.Ю. - к.м.н., доц. кафедры физической культуры и здоровья ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России.
634050, г. Томск, Московский тракт, 2.
E-mail: iness2501@yandex.ru
Бородин Д.А. - ст. преп. кафедры физической культуры и здоровья ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России.
634050, г. Томск, Московский тракт, 2.
E-mail: bda1911 @yandex.ru
Подрезов И.К. - ст. преп. кафедры физической культуры и здоровья ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России.
634050, г. Томск, Московский тракт, 2.
E-mail: ksaru@yandex.ru
Иванов В.В. - к.б.н., доц. кафедры биохимии и молекулярной биологии ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России.
634050, г. Томск, Московский тракт, 2.
E-mail: ivanovvv1953@gmail.com
Васильев В.Н. - д.б.н., проф., зав. кафедрой физической культуры и здоровья ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России.
634050, г.Томск, Московский тракт, 2.
E-mail: vas11@yandex.ru
Котловский М.Ю. - к.м.н., зам. зав. по науке ЦНИИЛ ГБОУ ВПО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России.
660022, г. Красноярск, улица Партизана Железняка, 1.
E-mail: Misha11443@rambler.ru
Борисова Л.В. - студентка 4 курса медико-биологического факультета ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России.
634050, г. Томск, Московский тракт, 2.
E-mail: LuciBor@yandex.ru
