CC BY
55
УДК 615.31:547.582.52].015:616.133.333-001-092.9 © Л.Е. Назарова, И.Н. Дьякова, 2011
Л.Е. Назарова, И.Н. Дьякова ВЛИЯНИЕ ФЕРУЛОВОЙ КИСЛОТЫ НА ЗОНУ НЕКРОЗА, ВОЗНИКАЮЩЕГО В РЕЗУЛЬТАТЕ ОККЛЮЗИИ СРЕДНЕЙ МОЗГОВОЙ АРТЕРИИ
ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Росздрава»
Исследовали способность феруловой кислоты в дозе 30 мг/кг уменьшать зону некроза при фокальной ишемии головного мозга. Фокальную ишемию создавали путем постоянной окклюзии правой средней мозговой артерии. Исследования проводили на крысах самцах, которые были разделены на четыре группы. Первая группа получала физиологический раствор, вторая - феруловую кислоту, третья и четвертая - препараты сравнения: кавинтон и циннаризин. Все исследуемые вещества вводили через час после окклюзии правой средней мозговой артерии.
Феруловая кислота уменьшает зону некроза в три раза, превосходя по эффекту препараты сравнения.
Ключевые слова: феруловая кислота, зона некроза, окклюзия средней мозговой артерии
L.Ye. Nazarova, I.N. D’yakova EFFECTS OF FERULIC ACID ON THE NECROSIS AREA CAUSED BY THE MIDDLE CEREBRAL ARTERY OCCLUSION
An ability of ferulic acid in the dose of 30mg/kg to reduce the necrosis area in case of focal cerebral ischemia has been studied. Focal ischemia was simulated by permanent middle cerebral artery occlusion. Male rats, divided into four groups, were utilized in the research. The first group mice were infused with physiological solution, the second -ferulic acid, the third and the forth - comparison drugs: cavinton and cinnarizine. All of the investigated substances were introduced in an hour after the middle cerebral artery occlusion. Ferulic acid induced a three-fold reduction in the necrosis area, exceeding by its effect the comparison drugs.
Key words: ferulic acid, necrosis area, middle cerebral artery occlusion.
В России регистрируется более 450 000 инсультов ежегодно. Инсульт в большинстве развитых стран занимает 2-3-е место в структуре общей смертности (в России - второе место после кардиоваскулярных заболеваний), а также первое место как причина стойкой утраты трудоспособности [1]. Среди выживших больных 75-80% становятся инвалидами, причем 1/3 из них полностью зависит от помощи окружающих, нуждается в длительной дорогостоящей реабилитации. Среди всех видов инсульта преобладают ишемические поражения головного мозга. По данным международных мультицентровых исследований, соотношение ишемического и геморрагического инсультов составляет 5,0-5.5/1 (80-85% и 1520%) [1].
Распространенность заболевания и недостаточная эффективность современного лечения обуславливает актуальность проблемы поиска новых фармакологически активных веществ.
Проведенные ранее исследования выявили кардиопротекторную активность феру-ловой кислоты [2], а также её способность уменьшать проявления постишемического повреждения мозга [3]. Это дает основание предположить, что введение феруловой кислоты будет уменьшать зону некроза при фокальной ишемии мозга. Для подтверждения этих предположений нами было проведено данное исследование. Препаратами сравнения были выбраны кавинтон и циннаризин.
Материал и методы
Эксперимент проведен на крысах самцах массой 200-230 г, которых подвергали
окклюзии правой средней мозговой артерии. Животных разделили на 4 группы по 6 особей. Исследуемые вещества вводили через час после окклюзии правой средней мозговой артерии интраперитонеально. Первая группа -контрольная. Животным этой группы вводили 1 мл физиологического раствора. Животные второй группы получали феруловую кислоту в дозе 30 мг/кг, третьей группы - раствор ка-винтона в дозе 3,2 мг/кг, четвертой группы -раствор циннаризина в дозе 5,6 мг/кг.
Для создания модели фокальной ишемии использовали методику постоянной окклюзии правой средней мозговой артерии [6]. В качестве наркозного средства применяли хлоралгидрат в дозе 350 мг/кг. У животного выстригали шерсть ниже и правее глаза на участке кожи площадью 1,5 см2, делали надрез на коже, разделяли мышцы и удаляли скуловой отросток. Специально сконструированным бором высверливали костную ткань над местом пересечения правой средней мозговой артерии с обонятельным трактом. Пережигали правой среднюю мозговую артерию под пересечением с обонятельным трактом до пересечения с нижней мозговой веной (рис. 1).
Л ' Б
Рис. 1. Норма (А) и окклюзия правой средней мозговой артерии (Б).
Мягкие ткани восстанавливали. Рану обрабатывали йодом. До пробуждения животных оставляли под согревающей лампой.
В результате окклюзии средней мозговой артерии возникает зона некроза, захватывающая значительиую часть полушария (рис. 2).
ІЖ#
Рис. 2. Зона некроза при окклюзии правой средней мозговой артерии.
Зону некроза оценивали трифенилтетра-золиевым методом. Для этого был впервые применен незначительно модифицированный метод, использовавшийся ранее для определения зоны некроза при экспериментальном инфаркте миокарда [4,5]. Сущность метода заключается в том, что неповрежденные, сохранившие дегидрогеназную активность ткани мозга восстанавливают трифенилтетразо-лия хлорид в красный формазан и окрашиваются, в то время как в некротизированных тканях красный формазан не образуется и окрашивания не происходит. Затем формазан экстрагируется хлороформом, а его концентрация в растворе определяется колориметрическим методом. В каждом эксперименте ин-тактная половина мозга служит контролем, этим удается уменьшить вариабельность результатов, связанных с индивидуальными особенностями тканей мозга у разных животных, а также избежать иные, не поддающиеся контролю, случайные отклонения.
Через сутки после операции животных декапитировали. Быстро извлекали мозг. Отсекали мозжечок и прилегающую к нему часть ствола мозга. Оставшуюся часть по средней линии разделяли на равные половины (с зоной фокальной ишемии и интактную) и взвешивали. Обе половины гомогенизировали и помещали в отдельные бюксы, куда добавляли 10 мл 1% раствора трифенилтетразолия хлорида в фосфатном буфере (рН 7,4). Затем бюксы помещали в водяной термостат на 20 минут при температуре 37°С. При этом участки интактной ткани окрашивались в яркокрасный цвет за счет образующегося форма-зана. Некротизированная ткань цвет не изменяла. Ткань осаждали центрифугированием 10 минут при 5000 оборотов в минуту. Надоса-дочную жидкость аккуратно удаляли. К осадку добавляли 3 мл фосфатного буфера, встряхивали. Затем добавляли 3 мл охлажденного хлороформа. Пробирки встряхивали 2 мин (обе пробирки одной рукой). Экстракцию формазана хлороформом проводили в течение
15 мин при 4°С, встряхивая смесь каждые 5 мин по 30 с.
Окрашенный хлороформ отделяли центрифугированием (в том же режиме) и, после предварительного разведения хлороформом в соотношении 1:5, измеряли оптическую плотность при длине волны 492 нм против чистого хлороформа.
Размер зоны некроза рассчитывали в процентах к общей массе полушарий по следующей формуле:
х = 100 -ЄіМі + 82М 2100
Є1(М1 + М 2)
[5]
где х - размер зоны некроза в процентах к общей массе мозга; 81 - экстинкция пробы с неповрежденным полушарием; 82 -экстинкция пробы с поврежденным полушарием; М1 - масса неповрежденного полушария; М2 - масса поврежденного полушария.
Результаты и обсуждение
При фокальной ишемии головного мозга с помощью методики постоянной правой окклюзии средней мозговой артерии размер зоны некроза в контрольной группе животных достигла 24,24±1,71%. Введение феруловой кислоты уменьшило зону некроза в три раза и составило 8,12±1,48% (Р<0,001 относительно контроля). На фоне действия кавинтона и циннаризина размер зоны некроза достоверно снизился до 15,56±2,13% (Р<0,02) и
12,48±2,34% (Р<0,01) относительно контроля, соответственно (рис. 3).
Рис. 3. Объем зоны некроза в процентах к массе полушарий.
Зона некроза в группе, получавшей феруловую кислоту, была достоверно меньше
(Р<0,05) показателей группы кавинтона и не но уменьшает зону некроза при фокальной
имела достоверных отличий от значений ишемии мозга, вызванной окклюзией правой
группы, получавшей циннаризин. средней мозговой артерии, что, безусловно,
Заключение позволяет отнести данное соединение к груп-
Результаты исследования показали, что пе веществ, обладающих церебропротектор-
феруловая кислота в дозе 30 мг/кг значитель- ной активностью.
Сведения об авторах статьи:
Назарова Любовь Ефимовна - доцент, заведующая кафедрой биологии, физиологии и патологии ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия». г.Пятигорск, проспект Калинина, 11. Тел. 8(928)363 82 82.
Дьякова Ирина Николаевна - кандидат фармацевтических наук, преподаватель кафедры биологии, физиологии и патологии ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая», г.Пятигорск, проспект Калинина, 11. Тел. 8(928)353 17 98.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. - Е.И. Гусев,. - М. Медицина, - 2001. - 328 с.
2. Дьяков А. А. Кардиопротекторные свойства феруловой кислоты: Дис. ... канд. мед. наук. - Волгоград, 2002. - 141 с.
3. Назарова, Л.Е. Дьякова И.Н.. Влияние кислоты феруловой на развитие ишемического отека, активность каталазы и содержание малонового диальдегида в мозге крыс / Л.Е.Назарова, И.Н. Дьякова // Известия высших учебных заведений. Северо-кавказский регион. Естественные науки. Фармакология. 2006 (Спецвыпуск). - С. 74-76.
4. Сернов Л.Н., Гацура В.В. Элементы экспериментальной фармакологии. - М., 2000. - 352 с.
5. Bernauer W. Inhibiting effect of dexamethasone on evolving myocardial necrosis in coronary-ligated rats, with and without reperfusion / W. Bernauer // Pharmacology. - 1985.- Vol. 31(6). - P. 328-336.
6. Rat Middle Cerebral Artery Occlusion: Evaluation of the Model and Development of a Neurologic Examination / D.B. Joshuua, M.D.
Bederson, H. Pitts Lawrense at al. // Stroke. - 1986. - Vol. 17, N. 3. - Р. 472- 476.
