CC BY
61
и постепенным, применение же «Эслана» не позволяет получить оптимальных результатов.
На основании проведенных исследований можно сделать следующие выводы:
1. Воспалительная реакция более выражена на протяжении всего периода наблюдения при имплантации сетки «Эслан». Морфологическое исследование демонстрирует существенный «разрыв» между устаревшим и новым материалом для эндопротезирования в плане биосовместимости.
2. Содержание элементов соединительнотканой капсулы при имплантации эндопротеза «Унифлекс» без введения культуральных фиб-робластов на сроке 60 суток в 1,8 раза больше, чем при использовании протеза «Эслан».
3. При использовании материала «Унифлекс» на всех сроках при однократном и двукратном введении культуральных фибробластов их количество превышает аналогичный показатель для «Эслана» более чем на 20%.
4. Результаты морфологического исследования ставят под сомнение целесообразность производства и применения эндопротеза «Эслан» в клинической практике.
ЛИТЕРАТУРА
1. Аллопластика брюшной стенки при грыжах с использованием лавсанового или фторлонового протеза: методич. письмо МЗ СССР. - М., 1971. - 13 с.
2. Грубник В.В., Лосев А.А., Баязитов Н.Р., Парфентьев Р.С. Современные методы лечения брюшных грыж. - Киев: Здоровья, 2001. - 280 с.
3. Егиев В.Н. Герниопластика без натяжения тканей в лечении послеоперационных вентральных // Хирургия. - 2000. - № 6. - С. 18-22.
4. Жебровский В.В. Хирургия грыж живота. - М.:
ООО «Медицинское информационное агентство», 2005. - 384 с.
5. Крымов А.П. Учение о грыжах. - СПб.: «Практическая медицина», 1911. - 510 с.
6. Лукомский Г.И., Шулутко А.М., Антропова Н.В. и др. Частные аспекты хирургического лечения послеоперационных вентральных грыж // Хирургия. -1995. - № 1. - С. 51-53
7. Саенко В.Ф. Выбор метода лечения грыжи брюшной стенки // Клиническая хирургия. - 2002. -№ 1. - С. 5-9.
8. Суковатых Б.С. Современные полимерные материалы в пластической хирургии послеоперационных и рецидивных вентральных грыж // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2006. - № 1 - С. 45-51.
9. Тимошин А.Д., Юрасов А.В., Шестаков А.Л. Хирургическое лечение паховых и послеоперационных грыж брюшной стенки. - М.: Триада-Х, 2003. -144 с.
10. De Bord J.R. The historical development of prosthetics in hernia surgery // Surg. Clin. N. Amer. - 1998. -Vol. 78. - P. 1089-1102.
11. Hebda P.A., Dohar J.E. Transplanted fetal fibroblasts: survival and distribution over time in normal adult dermis compared with autogenic, allogenic, and xeno-genic adult fibroblasts // Otolaryngol. Head Neck Surg. - 1999. - Vol. 121, N 3. - P. 245.
12. Sciaky D., Brazer W., Center et al. Cultured human fibroblasts express constitutive IL-16 mRNA: cytokine induction of active IL-16 protein synthesis through a caspase-3-dependent mechanism // J Immunol. - 2000. - Vol. 164, N 7. - P. 3806.
УДК 616.36
ВЛИЯНИЕ ФАКТОРА РОСТА ГЕПАТОЦИТОВ НА СТРЕСС-ИНДУЦИРОВАННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ
СТРУКТУРЫ ПЕЧЕНИ
© Корозин В.И., Ляшев Ю.Д., Шевченко Н.И., Бровкина И.Л.
Кафедра ортопедической стоматологии, кафедра патофизиологии Курского государственного медицинского университета, Курск
E-mail: medps@yandex. ru
Исследовано влияние фактора роста гепатоцитов на нарушение структуры печени при иммобилизационном стрессе. Установлено, что воздействие стрессорного фактора вызывает появление зон гидропической дистрофии, уменьшение количества нормальных клеток и содержание коллагена в ткани печени. Введение изучаемого пептида снижает выраженность деструктивных процессов (уменьшение удельных объемов некроза и гидропической дистрофии) и усиливает регенерацию гепатоцитов, что проявляется увеличением доли мелких клеток в разные сроки после стрессорного воздействия.
Ключевые слова: стресс, фактор роста гепатоцитов, печень, гепатоциты.
THE INFLUENCE OF HEPATOCYTE GROWTH FACTOR ON STRESS-INDUCED CHANGES IN LIVER
STRUCTURE
Korozin V.I., Lyashev Yu.D., Shevchenko N.I., Brovkina I.L.
Department of Orthopedic Stomatology, Pathophysiology Department of the Kursk State Medical University, Kursk
The influence of hepatocyte growth factor (HGF) on the damages of liver structure was investigated in immobilized stress. It was established that stress factor action causes the appearance of hydropic dystrophy zones, the decrease in the number of normal cells and collagen content in the liver tissue. The injection of the investigated peptide decreases the expression of destructive processes (the decrease in necrosis and hydropic dystrophy zones) and reinforces the hepatocytes regeneration, manifesting itself with the increase in small cells number in different periods after stress.
Keywords: stress, hepatocyte growth factor, liver, hepatocytes.
В последние годы теория стресса, предложенная Г. Селье, получила дальнейшее развитие. Показано, что длительная циркуляции возбуждения по замкнутым кругам гипоталамо-лимбико-ретикулярных структур мозга вызывает развитие комплекса сомато-вегетативных нарушений [7]. Одним из органов-мишеней для развития пост-стрессорных нарушений является печень, что сопровождается нарушением практически всех видов обмена [5]. В связи с этим особую актуальность приобретает поиск эффективных средств для коррекции стрессорных повреждений печени.
Перспективным направлением таких исследований является использование регуляторных пептидов, которым присущи уникальная полифункциональность и выраженный модулирующий эффект при различных патологических состояниях. Установлено, что пептид глицин-гистидин-лизин, получивший название фактор роста гепатоцитов (ГФР), обладает широким спектром физиологических эффектов, что делает перспективным его использование для коррекции постстрессорных нарушений печени.
Целью нашей работы явилось изучение влияния ГФР на развитие нарушений структуры печени при иммобилизационном стрессе.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Работа выполнена на 80 крысах-самцах линии Вистар. Животные были разделены на 10 групп по 8 крыс в каждой. 8 животных оставались ин-тактными. Остальным моделировали 6-часовой иммобилизационный стресс путем фиксации животного на спине на специальном столике. Животных выводили из эксперимента спустя 39 часов, 4 и 7 суток после окончания иммобилизации. Выбор указанных сроков обусловлен данными литературы о том, что максимальные повреждения внутренних органов развиваются в конце стадии тревоги (39 часов после стресса), а в начале стадии резистентности (на 4 сутки) и через 7 суток после окончания иммобилизации наглядно проявляются компенсаторные процессы в поврежденных органах [2]. На гистологических препаратах ткани печени, окрашенных гематоксилин-эозином и суданом черным, с помощью окулярной микрометрической линейки и сетки Автандилова определяли объемные доли участков некроза, сосудистого русла, дистрофически измененных клеток и нормальных гепатоцитов, а также измеряли диаметр клеток. С помощью окраски по Маллори оценивали общее количество коллагена
в строме печени, а по методу ван Гизона - объем новообразованного коллагена.
ГФР вводили внутрибрюшинно ежедневно
1 раз в сутки в течение 5 дней после проведения иммобилизации в дозах 2 или 10 мкг на кг массы тела в объеме 0,2 мл. Контрольным животным аналогично вводили физраствор.
Исследования проводили с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986).
Результаты исследования обработаны статистически с использованием критерия Стьюден-та [4].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В наших экспериментах установлено, что развитие стресса сопровождается значительными изменениями структуры тканей печени. Отмечается увеличение объемной доли внутридольковых синусов по сравнению с группой интактных животных (табл. 1). Такие изменения являются отражением развития застойных явлений в паренхиме печени. Наблюдается разрушение отдельных капилляров. В междольковых структурах также выражено венозное полнокровие, которое сопровождается периваскулярной лейкоцитарной инфильтрацией и диапедезом эритроцитов.
Нарушение микроциркуляции вызывает дистрофические изменения в гепатоцитах. В них развивается выраженная гидропическая дистрофия, объемная доля таких измененных клеток превышает аналогичный показатель в группе интактных крыс (рис. 1). При этом вакуоли в цитоплазме ге-патоцитов крупные, неправильной формы, часто заполняющие всю цитоплазму. Появляются очаги некроза, которые в отдельных случаях инфильтрированы лейкоцитами. Количество нормальных клеток существенно снижается. Уменьшается также число двуядерных гепатоцитов в центральных и в периферических зонах печеночных долек. Через 39 часов и 4 суток после иммобилизации понижается объемная доля клеток, подвергшихся жировой дистрофии.
Развитие деструктивных процессов в печени проявляется разрушением соединительнотканой стромы. Объемная доля коллагена снижается. Нарушается синтез вновь образованного белка.
К концу стадии тревоги отмечается активация репаративных процессов в паренхиме печени. И в центральных, и в периферических частях долек появляются мелкие гепатоциты диаметром до 10 мкм и 10-20 мкм. В то же время клетки, име-
ющие нормальные размеры, составляют около одной трети от общего объема.
Через 4 и 7 суток после моделирования иммо-билизационного стресса сохраняются нарушения микроциркуляции в паренхиме печени, зоны некроза гепатоцитов и клеток с гидропической дистрофией по-прежнему обширные (табл. 2 и 3). Однако отмечается увеличение объемной доли нормальных гепатоцитов и числа двуядерных клеток.
На 4 и 7 сутки эксперимента продолжается снижение содержания новообразованного коллагена в междольковых перегородках.
В эти сроки отмечается активация репаратив-ных процессов в печеночной паренхиме. Это проявляется увеличением числа клеток нормального размера.
Введение ГФР оказывало существенное влияние на изменение структуры печеночных тканей. Следует отметить, что не установлено существенных дозозависимых различий в эффектах пептида в наших экспериментах.
На всех сроках после моделирования стресса ГФР вызывал статистически достоверное уменьшение зоны некроза (p<0,05-0,001), увеличение числа нормальных и двуядерных клеток (p<0,05-0,001). Существенное снижение объемной доли гепатоцитов, подвергшихся гидропической дистрофии, установлено на 4 и 7 сутки (p<0,01-
0,001). Не выявлено изменений объемной доли внутридольковых синусов и клеток, подвергшихся жировой дистрофии, по сравнению с контрольной группой.
Показано, что под влиянием пептида увеличивается количество клеток, имеющих нормальные размеры от 20 до 30 мкм, на всех сроках наблюдения. При этом количество мелких гепа-тоцитов размером до 10 мкм и от 10 до 20 мкм не отличается от аналогичных показателей в контрольной группе (через 39 часов) или достоверно ниже (на 4 и 7 сутки). По нашему мнению, такие данные указывают на ускорение созревания гепа-тоцитов, что проявляется быстрым их ростом и большими размерами.
Содержание общего коллагена и новообразованного коллагена статистически достоверно превышает аналогичные показатели у контрольных крыс на 4 и 7 сутки эксперимента.
Полученные нами данные о характере стресс-индуцированных изменений структуры клеток печени подтверждают данные литературы [2]. Указанные изменения связаны, прежде всего, с нарушениями микроциркуляции и развитием тканевой гипоксии [6]. Гипоксия сопровождается оксидативным стрессом, который характеризуется значительным усилением перекисного окисления липидов (ПОЛ) клеточных мембран, что яв-
Таблица 1
Влияние фактора роста гепатоцитов на структурные изменения в ткани печени через 39 часов после моделирования иммобилизационного стресса
Группа Показатель Интактные Контрольная группа Группа, получавшая фактор роста гепатоци-тов в дозе 2 мкг/кг Группа, получавшая фактор роста гепатоци-тов в дозе 10 мкг/кг
Доля области сосудов, % V 25,8+1,0*** 41,5+1,2 40,6+1,4 40,5+1,3
Доля области некроза, % V 0*** 13,8+0,6 8,5+0,6*** 9,3+0,7**
Количество клеток с гидропи-ческой дистрофией, % 8,3+0,7*** 55,5+1,7 51,5+2,0 52,6+1,2
Количество клеток с жировой дистрофией, % 10,8+0,7*** 4,5+0,4 5,1+0,4 4,9+0,3
Количество нормальных клеток, % 81,0+0,6*** 26,1+1,4 34,9+1,8** 33,1+1,6**
Количество клеток диаметром до 10 мкм, % Центральные зоны 0*** 26,6+2,0 24,4+0,9 25,1+1,2
Периферические зоны 0*** 28,9+1,8 25,8+1,6 25,5+1,2
Количество клеток диаметром 10-20 мкм, % Центральные зоны 5,0+0,3*** 36,6+1,7 34,1+1,2 36,1+1,1
Периферические зоны 55+0,4*** 39,0+1,8 35,3+1,4 36,4+1,0
Количество клеток диаметром 20-30 мкм, % Центральные зоны 84,5+0,7*** 29,0+0,7 34,0+1,2** 33,4+0,6**
Периферические зоны 85,2+0,7*** 25,2+1,0 32,1+1,3** 32,3+1,2**
Количество клеток диаметром больше 30 мкм, % Центральные зоны 10,5+0,6** 7,9+0,3 7,5+0,4 7,5+0,3
Периферические зоны 9,3+0,7* 6,9+0,3 6,9+0,3 8,0+0,4
Количество двуядерных клеток, % Центральные зоны 16,1+0,6*** 11,3+0,5 12,5+0,5 10,9+0,7
Периферические зоны 19,3+0,5*** 8,4+0,6 12,9+0,5*** 10,9+0,6*
Общее содержание коллагена, % V 10,3+0,5*** 3,1+0,4 3,5+0,4 3,4+0,3
Содержание новообразованного коллагена, % V 4,3+0,3 1,1+0,2 1,3+0,2 1,1+0,2
Примечание: * - р<0,05 по сравнению с контрольной группой;
** - р<0,01 по сравнению с контрольной группой; *** - р<0,001 по сравнению с контрольной группой.
ляется ведущим механизмом повреждения клеток [1]. Именно этим и объясняется формирование обширных очагов некроза и дистрофии в печеночной ткани, установленное нами спустя 39 часов после окончания воздействия стрессорного фактора.
Литературные данные подтверждают протек-тивное действие ГФР и его аналогов при ишеми-
ческих и реперфузионных поражениях различных органов [10, 11]. Этот пептид также уменьшает выраженность послеоперационного повреждения печени [3]. Показана эффективность ГФР при ферритин-зависимой активации ПОЛ [9].
Как установлено в нашем исследовании, гепа-топротективное действие ГФР при его длительном введении наблюдается и при стрессе. Это
Таблица 2
Влияние фактора роста гепатоцитов на структурные изменения в ткани печени через 4 суток после моделирования иммобилизационного стресса
Группа Показатель Интактные Контрольная группа Группа, получавшая фактор роста гепатоцитов в дозе 2 мкг/кг Группа, получавшая фактор роста гепатоцитов в дозе 10 мкг/кг
Доля области сосудов, % V 25,8+1,0** 32,4=1,1 28,1+1,5* 31,9+1,5
Доля области некроза, % V 8,1+0,4 55+0,4** 6,1+0,4**
Количество клеток с гидропической дистрофией, % 8,3+0,7*** 32,5+0,8 25,4+1,4** 22,5+0,9***
Количество клеток с жировой дистрофией, % 10,8+0,7** 6,3+0,5 7,5+0,5 6,3+0,4
Количество нормальных клеток, % 81,0+0,6*** 53,3+1,2 61,5+1,7** 65,1+1,2***
Количество клеток диаметром до 10 мкм, % Центральные зоны 0*** 25,1+1,2 19,5+1,1** 20,8+0,8*
Периферические зоны 0*** 26,6+1,5 20,3+0,9** 20,9+0,9*
Количество клеток диаметром 10-20 мкм, % Центральные зоны 5,0+0,3*** 27,8+1,6 26,8+1,1 25,8+1,6
Периферические зоны 5.5+0,4*** 28,5+1,1 27,3+1,3 25,8+1,2
Количество клеток диаметром 20-30 мкм, % Центральные зоны 84,5+0,7*** 40,8+2,1 47,1+1,4* 47,1+1,1*
Периферические зоны 85,2+0,7*** 40,1+1,7 46,4+1,2* 46,3+1,4*
Количество клеток диаметром больше 30 мкм, % Центральные зоны 10,5+0,6*** 6,3+0,3 6,3+0,4 6,4+0,4
Периферические зоны 9 3+0 7*** 4,8+0,3 6,4+0,4* 7,1+0,3***
Количество двуядерных клеток, % Центральные зоны 16,1+0,6* 14,1+0,6 16,1+0,5* 16,1+0,7
Периферические зоны 19,3+0,5** 15,8+0,6 16,3+0,5 15,8+0,7
Общее содержание коллагена, % V 10,3+0,5*** 2,4+0,2 3,1+0,3 4,6+0,3***
Содержание новообразованного коллагена, % V 4,3+0,3*** 0,5+0,1 0,9+0,1 * 1,6+0,2**
Примечание: * - р<0,05 по сравнению с контрольной группой; ** *** - р<0,001 по сравнению с контрольной группой.
р<0,01 по сравнению с контрольной группой;
Рис. 1. Гидропическая дистрофия гепатоцитов у крыс контрольной группы через 39 часов после моделирования иммобилизационного стресса.
а - центральная вена, б - гепатоциты с признаками гидропической дистрофии. Окраска гематоксилином и эозином, х 140.
Таблица 3
Влияние фактора роста гепатоцитов на структурные изменения в ткани печени через 7 суток после моделирования иммобилизационного стресса
Группа Показатель Интактные Контрольная группа Группа, получавшая фактор роста ге-патоцитов в дозе 2 мкг/кг Группа, получавшая фактор роста ге-патоцитов в дозе 10 мкг/кг
Доля области сосудов, % V 25,8+1,0 27,4+1,6 26,8+1,8 27,4+1,7
Доля области некроза, % V 0*** 4,5+0,3 2,9+0,4* 2,8+0,4*
Количество клеток с гидропиче-ской дистрофией, % 8,3+0,7** 12,9+0,9 7,9+0,4*** 7,1+0,5***
Количество клеток с жировой дистрофией, % 10,8+0,7 8,9+0,7 6,8+0,4* 9,1+0,6
Количество нормальных клеток, % 81,0+0,6*** 73,7+1,4 82,3+0,8** 81,0+0,9***
Количество клеток диаметром до 10 мкм, % Центральные зоны 0*** 10,9+0,7 8,6+0,5* 7,9+0,4**
Периферические зоны 0*** 12,9+0,3 9,3+0,5*** 8,0+0,6***
Количество клеток диаметром 10-20 мкм, % Центральные зоны 5,0+0,3*** 28,4+1,7 19,6+0,7** 18,4+0,9***
Периферические зоны 55+0,4*** 28,8+2,0 20,0+0,6** 19,0+1,0**
Количество клеток диаметром 20-30 мкм, % Центральные зоны 84,5+0,7*** 55,4+1,8 61,4+1,2* 64,0+0,9**
Периферические зоны 85,2+0,7*** 53,7+1,9 60,3+1,2* 63,1+1,0**
Количество клеток диаметром больше 30 мкм, % Центральные зоны 10,5+0,6*** 5,3+0,3 10,4+0,5*** 9,8+0,7***
Периферические зоны 9,3+0,7*** 4,6+0,3 10,5+0,5*** 9,9+0,7***
Количество двуядерных клеток, % Центральные зоны 16,1+0,6 17,8+0,7 21,6+0,7** 20,4+0,9
Периферические зоны 19,3+0,5 20,4+0,6 21,3+0,7 20,4+0,9
Общее содержание коллагена, % V 10,3+0,5*** 2,4+0,2 5,1+0,2*** 6,4+0,3***
Содержание новообразованного коллагена, % V 4,3+0,3*** 0,4+0,04 1,8+01*** 2,6+0,2***
Примечание: * - р<0,05 по сравнению с контрольной группой;
** - р<0,01 по сравнению с контрольной группой; *** - р<0,001 по сравнению с контрольной группой.
2. Выборова И.С., Ханджав Удвал, Васильева Л.С., Макарова Н.Г. Структура печени в динамике иммобилизационного стресса // Сибирский медицинский журнал. - 2005. - № 3. - С. 30-33.
3. Гальперин Э.И., Абакумова О.Ю., Платонова Л.В. и др. Термостабильный фактор роста гепатоцитов и энергетический обмен после частичной гепатэк-томии у крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1999. - Т. 127, № 1. -С. 53-56.
4. Гублер Е.В., Генкин А.А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-
открывает новые возможности применения регуляторных пептидов для предупреждения стресс-индуцированных повреждений, поскольку ГФР не только уменьшает тканевую деструкцию, но и усиливает регенерацию тканей [8].
ЛИТЕРАТУРА
1. Буеверов А.О. Оксидативный стресс и его роль в повреждении печени // Гепатология сегодня. -2002. - № 4. - С. 21-25.
