CC BY
27
Литература: 1. Новик Т.С., Бару Р.В., Рябова В.А. и др. //Экспериментальная и клиническая фармакология. -Т. 64, № 2. - С. 64-66. 2. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ//Москва. -2005. 3. Ступников А.А. Токсичность гербицидов и арборицидов и профилактика отравлений //«Колос», -1975.
Acute toxicity of substance of novel agent aversect forte at peroral and dermal administration on rats. Semenova M.V., Drinjev V.A., Mosin V.A., Kruglyak E.B.,Tibaeva V.N. All-Russian K.I.Skryabin Institute of Helminthology, “Pharmbiomed”
Summary. LD50 values of new avermectin substance at peroral and dermal administration to rats appear to be 100(65^134) mg/kg and more 10000 mg/kg
ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА ИЗ ЛИЧИНОК ANISAKIS SIMPLEX НА ФОРМИРОВАНИЕ МНОГОЯДЕРНЫХ КЛЕТОК В СЕМЕННИКАХ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
Сивкова Т.Н.
ФГОУ ВПО «Пермская ГСХА»
Введение. Формирование многоядерных клеток возможно при развитии различных патологических процессов, обуславливающих как онкологические [9; 10], так и гранулематозные заболевания [4,8]. В связи с важным социальным значением данных патологий изучение вопросов механизмов появления многоядерности является актуальным.
В настоящее время выделяют четыре основных механизма формирования полинуклеаров: в результате слияния одноядерных клеток [7], блокады цитокенеза [13], вследствие многополюсных митозов [12] и при амитотическом делении ядра [11]. Целью данной работы было установление причин формирования полинуклеарных клеток в семенниках лабораторных грызунов после внутрибрюшинного введения соматического экстракта из личинок Anisakis simplex.
Материалы и методы. Извлеченных из тушек рыбы личинок A.simplex 3й стадии тщательно многократно промывали проточной водой, обрабатывали растворами антибиотиков (пенициллин, стрептомицин и нистатин), стерильным физиологическим раствором и замораживали. После многократного замораживания и оттаивания личинок гомогенизировали, заливали стерильным забуференным физиологическим раствором (рН 7,2) и экстрагировали при температуре +4ОС в течение 24 часов. Полученный биоматериал хранили в замороженном состоянии при температуре -100С.
427
Для обнаружения контаминации бактериями пробу экстракта из личинок анизакид высевали на МПА, МПБ и МППБ. Для выявления грибковой контаминации антиген высевали на агар Сабуро. На микоплазменную контаминацию пробу антигена высевали на универсальной плотной среде для выделения микоплазм согласно инструкции. При обнаружении хотя бы одного из контаминантов партию экстракта считали нестерильной, и в дальнейшей работе не использовали.
Концентрацию белка в полученном экстракте определяли на биохимическом полуавтоматическом анализаторе StatFax 1904+ (AWARENESS technology inc) с использованием набора реактивов Spinreact, S.A. согласно инструкции, при длине волны 540 нм. В качестве контроля использовали фосфатно-солевой буферный раствор.
Для изучения патогенного действия белковый экстракт анизакид однократно внутрибрюшинно вводили нелинейным белым мышам - самцам массой 18-22 г в дозе 100 мкг. Контрольной группе животных внутрибрюшинно вводили 0,1мл забуференного физиологического раствора. Убой мышей проводили через 4; 12; 24; 48 и 72 часа.
Из семенников готовили мазки-отпечатки, которые фиксировали по Май-Грюнвальду, а затем окрашивали азур-эозином по Романовскому. При микроскопировании подсчитывали количество делящихся клеток, учитывали форму, размеры и окраску ядер. Отмечали количество цитопатических и кариопатических нарушений в опытных и контрольных группах животных.
Результаты и обсуждение. Общее состояние контрольных и опытных животных оставалось удовлетворительным на протяжении всего периода эксперимента.
В семенниках животных после введения соматического экстракта из личинок анизакид увеличение количества делящихся клеток отмечали, начиная с 4 часов, при этом доля патологий находилось на уровне 2,0%. Через 12 часов произошло значительное увеличение количества профаз, что свидетельствует о значительной антимитотической активности экстракта A.simplex. К наиболее распространенным патологиям деления относились преждевременное расхождение отдельных хромосом в метафазе, неравнополюсные анафазы, а также 3-х и 4-х-полюсные анафазы. Максимальное количество патологических фигур деления сперматоцитов отмечали через 24 часа - 2,9%.
Подобные изменения свидетельствуют, прежде всего, о блокировании активными компонентами соматического экстракта A.simplex системы микротрубочек делящихся половых клеток, а также о патологии
формирования центросом.
Кроме того, в семенниках мышей опытных групп появлялись гигантские клетки с количеством ядер от 2 до 9, каждое из которых, в свою очередь, находилось в состоянии деления (рис.). Наибольшее количество
многоядерных клеток зафиксировали через 72 часа после введения биоматериала - 4,7%.
428
Рис. Семенник. Многоядерная клетка. Окраска азур-эозином.
Увел. 10Х100.
Формирование полинуклеаров в данном случае может проходить с помощью нескольких механизмов. Во-первых, под воздействием различных химических соединений происходит слияние одноядерных клеток. Этот процесс ферментативно связан с разрушением элементов цитоплазматической мембраны, в частности, ее липидного слоя [2].
Во-вторых, причиной многоядерности может быть блокада цитокенеза, которая происходит в результате нарушения функций микротрубочек, что обусловлено нарушением работы структурных элементов цитоскелета и цитоплазматической мембраны [3], что является признаком внутриклеточной патологии. В связи с тем, что в клетках сперматогенного эпителия отмечали другие нарушения деления, связанные именно с патологией микротрубочек и клеточных центров, не исключено их первостепенное значение в развитии данного патологического процесса.
В-третьих, полинуклеары формируются в результате многополюсного веретена деления, при котором нарушается связь между микротрубочками и центриолями и между микротрубочками и кинетохорами [1]. Многополюсные митозы индуцируются различными физическими, химическими и биологическими факторами, в том числе и в результате развития воспаления [6].
В-четвертых, образование многоядерных клеток возможно в результате амитоза - процесса, при котором происходит сначала растяжение ядра, затем инвагинация кариолеммы, после чего ядро разделяется на отдельные части с неравномерным распределением хромосомного материала [5,11].
Для успешной разработки эффективных и обоснованных методов диагностики и лечения заболеваний, связанных с патологиями клеточного деления, необходимо дальнейшее изучение этиологии и механизмов развития многоядерныъх клеток.
429
Литература: 1. Алиева И.Б, Воробьев И.А. // Цитология. - 1989. - T. 31. -№ 6. - С. 633-641. 2. Жданов В.М., Букринская А.Г. Репродукция миксовирусов (вирусов гриппа и сходных с ними), Москва, Медицина - 1969, 280с. 3. Ильин Д.А. //«Актуальные проблемы инфекционной патологии» -Томск -2009. - С.15-17. 4. Basta P.C., Coimbra C.E., Camacho L.A., Santos R.V. // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. - 2006. - V. 10. - № 12. - Р. 1354-1359. 5. Kuhn E.M., Therman E., Susman B. // Placenta. - 1991. - V. 12. - № 3. - P. 251-261. 6. Lothschutz D., Jennewein M., Pahl S., Lausberg H.F., Eichler A., Mutschler W., Hanselmann R.G., Oberringer M. // Inflamm. Res. - 2002. - V. 51. - № 8. - P. 416422. 7. Murch A.R., Grounds M.D., Marshall C.A., Papadimitriou JM. // J. Pathol. -1982. - V. 137. - № 3. - P. 177-180. 8. Ohse H., Ishii Y., Saito T., Watanabe S., Fukai S., Yanai N., Tamai N., Monma Y., Hasegawa S. // Kekkaku. - 1995. - V. 70. - № 6. - P. 385-388. 9. Paoli J., Smedh M., Wennberg A.M., Ericson M.B. // J. Invest Dermatol. - 2008. - V.128. - № 5. - P. 1248-1255. 10. Tashiro T., Kawakita C., Takai C., Yoshida T., Sakiyama S., Kondo K., Sano N. // Acta. Cytol. - 2007. -V. 51. - № 5. - P. 820-824. 11. Walen K.H. // In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim. -
2004. - V. 40. - № 5-6. - P. 150-158. 12. Yun C., Cho H., Kim S.J., Lee J.H., Park S.Y., Chan G.K., Cho H. // Mol. Cancer Res. - 2004. - V. 2. - № 3. - P. 159-169. 13. Zhu J., Beattie E.C., Yang Y., Wang H.J., Seo J.Y., Yang L.X. // Anticancer Res. -
2005. - V. 25. - № 3B. - P. 1919-1925.
Effects of Anisakis simplex larvae on formation of multinuclear cells in testis of laboratory animals. Sivkova T.N. Perm State Agricultural Academy.
Summary. One noted the increase of dividing cells in testis of animals beginning from 4 hours post administration of somatic extract; the ratio of pathologic mitotic figures was 2,0%. The significant increase of prophases occurred post 12 hours what evidenced about antimitotic action of A. simplex extract. The most spread pathologic mitotic figures were premature separation of individual chromosomes at metaphase, non-equipolar anaphases as well as 3- and 4-polar anaphases. The peak number of pathologic mitotic figures in spermatocytes was noted following 24 hours (2,9%).
ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА DIPHYLLOBOTHRIUM LATUM НА МОРФОЛОГИЮ ОРГАНОВ МЫШЕЙ
Сивкова Т.Н.
ФГОУ ВПО «Пермская ГСХА»
Введение. Дифиллоботриоз является одним из социально опасных цестодозов, широко распространенных в Пермском крае. Результаты исследования [1] показывают, что в районе Воткинского водохранилища
430
