CC BY
46
ВЕСТНИК ПЕРМСКОГО УНИВЕРСИТЕТА
2015 БИОЛОГИЯ Вып. 4
УДК 579.22
А* В* Тюленев3, Г, В, Смирнова3, О» И, Октябрьскийа Ь
а Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермь. Россия
b Пермский национальный исследовательский политехнический университет, Пермь, Россия
ВЛИЯНИЕ ДОСТУПНОСТИ ФОСФАТА В СРЕДЕ НА ЭКСПОРТ ГЛУТАТИОНА ИЗ КЛЕТОК ESCHERICHIA COLI
Добавление фосфат- или сульфат-аниона в длительно голодающие по источнику фосфора и серы кулыуры Escherichia coli стимулнроьало рост бакгерин и бьклрын выход i лушшона (GSH) ъ среду. Уровень экстраклеточнога гл)татиона (GSIIoUt) превышал базовое значение в 11 раз поеле добавления фосфата и в 20 раз после добавления сульфата. Внесение ареената натрия в длительно голодающую по фосфату культуру Е, coli выбывало нитрирование роста и необратимый выход глутатиона в среду. Используя делеционные мутанты, было показано, что экспорт глутатиона может стимулироваться при входе фосфата по любой из известных для него транспортных систем. Не выявлено тесной связи между уровнем экстра клеточного глутатиона и скоростью входа фосфата в клетки. Экспорт GSH, вызванный добавлением фосфата, сопровождался преходящим повышением мембранного потенциала, увеличением продукции супероксидного аниона и требовал наличия на мембране электрохимического градиента прогонов (¿ЦП4")- Па основании полученных данных предположена следующая последовательность событий после добавления фосфата в голодающую культуру Е. coli: вход фосфата в цитоплазму —> изменение мембранного потенциала —> повышение уровня супероксидного аниона в периплазме —>■ стимуляция экспорта глутатиона из цитоплазмы в периплазму и среду. Результаты указывают на существование связи между трансмембранными потоками ионов и циркуляцией глутатиона.
Ключевые слова: Escherichia coli: глутатион; транспорт ионов; мембранный потенциал.
А. V. Tyulenev\ G. V. Smirnova\ О, N. Oktyabrsky*ь
а Institute of Ecology and Genetics of Microorganisms, Perm, Russian Federation
b Penn National Research Polytechnic University, Perm, Russian Federation
INFLUENCE OF THE PHOSPHATE AVAILABILITY ON GLUTATHIONE EFFLUX FROM ESCHERICHIA COLI
Addition of phosphate- or sulfate anion into Escherichia coli cultures after prolonged starvation for the source of phosphorus or sulftir led to the resumption of growth and rapid export of glutathione (GSIГ) to the medium. The level of extracellular GSH (GSH^t) was 11-told and 20-fold higher than the basal value after the addition of phosphate and sulfate, respectively. Addition of sodium arsenate into culture after prolonged starvation for the source of phosphorus caused growth inhibition and irreversible output of glutathione to medium. Using the deletion mutants, it was shown that export of glutathione can be stimulated under input by any of the known phosphate transport systems. It is not revealed a strong correlation between the level of extracellular glutathione and speed of the phosphate input into cells. Export GSH? caused by the addition of phosphate, accompanied by transient elevated in membrane potential, increased production of superoxide anion and demanded the presence of the membrane electrochemical proton gradient (ДрН). The above data suggest the following sequence of events after the addition of phosphate to the starving culture at' E. coli; the input of phosphate m the cytoplasm —* change in membrane potential—» superoxide increase in periplasm —► stimulation of export of glutathione to the environment. The results suggest the existence of the relation between transmembrane ion fluxes and glutathione cycling.
Key words: Escherichia coli; glutathione; ion transport; membrane potential.
Введение
Регу ляция жизнедеятельности бактерий является одним из актуальных направлений современной
экспериментальной биологии. В последние десятилетия все большее внимание уделяется исследованию регуляторных механизмов с участием редокс-активных соединений. В этот способ регуляции во-
С, Тюленев А. В.. Смирнова Г. В., Октябрьский О. Н.. 2015
340
влечены активные формы кислорода (АФК), в особенности супероксид и перекись водорода. В другою групп}' входят эндогенные соединения, способные к редокс-превращениям, среди них особое значение имеют соединения, содержащие тиоло-вые (SH-) группы, глутатнон (GSH). тиоредоксин. глутаредоксин и др. Взаимодействие АФК. указанных тиолов и SH- групп в белках приводит к изменению активности тгих белков, что составляет молекулярную основу редокс-регу ляции.
Хорошо известна роль глутатиона как главного цитоплазматического редокс-буфера и антиок-сиданта. имеющего большое значение в поддержании S-S/SH-равновесия в белках [Meisler. Anderson. 1983; Schafer, Buellner. 2001], Известно, что у эукариот GSH принимает у частие в антиок-сидантной защите, регуляции экспрессии генов, клеточной сигнализации, а также вовлечен в механизм программируемой клеточной смерти - апоп-тоза [Klall, Lamas. 2000], Фу нкции GSH у бактерий изучены в меньшей степени. Глутатион содержится в миллимоляриых концентрациях в большинстве грамотрицательных и в некоторых грамположи-тельных бактерий [Fahey el al„ 1978], В этих организмах он играет важную роль б защите от многих токсических соединений. Как компонент тиоловых редокс-систем глутатион вместе с глутаредоксина-ми восстанавливает окисленные SH-групиы в глобальных регуляторах OxyR и Fnr [Aslund el al. к 1999]. Мутанты Е. coli, дефицитные по синтезу глутатиона. проявляют повышенную чувствительность к гиперосмотическому и холодовому стрессам [Смирнова. Октябрьский. 2005].
Целью нас юн щей работы является изучение влияния трансмембранных ионных потоков на экспорт глутатиона у бактерий Е. coli.
Материалы и методы исследования
Штаммы бактерий и условия культивирования В качестве объекта исследований использовали штаммы Е. coli BW25113 A(araD-araB)5(>l, M?cZ4787(: rntß-3), rph-\, A{rhaD-rhaB)56% fodR514: JW3460 (Api tAl 49: :kan); JW2955 (ApiiBlßO: :kan); JW3704 Ap$tA157::km\: JW0389 (AphoB763:±m\): JW0390AphoR764::kan, получен-ные из E. coli Genetic Stock Center (CGSC).
Бактерии выращивали в аэробных условиях на синтетической минимальной среде М9 (№ьНР04 12Н20 - 15.13 г/л; КН2Р04 - 3 г/л; NR.C1 - 1 г/л: NaCl - 0.5 г/л: MgS04*7íK) - 0.246 г/л; СаС1: - 0.011 г/л) [Miller, 1972] с добавлением 0.15%-ной глюкозы или на среде MOPS (3-[№Морфолино] Пропан-сульфоновая кислота - 8.37 г/л; Трицин - 1.79 г/л; FeS(V7H20 - 0.0028 г/л; NH4CI - 0.51 г/л: К2Ю4 -0.048 г/л: СаС12 - 0.0014 г/л: MgCly6H20 - 0.107 г/л:
NaCl - 2.92 г/л) [Neidhardt et al.. 1974] с 0.15% глюкозы и заданной концентрацией фосфата.
Клетки из ночной культуры центрифугировали и ресуспендировали в 100 мл свежей среды до оптической плотности OD^oo _ 0,2 и подращивали при 37°С в колбах объемом 250 мл в термостати-руемом орбитальном шейкере при 150 об/мин. По достижении OD600 ~ 0.5 клетки разбавляли подогретой средой и выращивали в колбах объемом 250 или 50 мл в аналогичных условиях. За ростом следили путем измерения оптической плотности при длине волны 600 им (OD^oo).
Удельную скорость роста культуры (р) рассчитывали по формуле
_ 1поД0() ((-.) - \пОРм (г,)
где OD6w(^2) и OD^^) - оптическая плотность культуры, измеренная при длине волны 600 нм. во Время ¿2 и ¿1.
Колоннеобразующую способность определяли в образцах, отобранных с заданными интервалами времени. После отмывания и приготовления серии разведений в 0.9%-ном растворе NaCl клетки смешивали с расплавленным при 42°С мягким (0.8%) LB-агаром и выливали на чашки Петри, содержащие твердый LB-arap (1.5%). Количество образовавшихся колоний (КОЕ) подсчитывали через 24 ч. инкубации в термостате при 37°С.
Изменения мембранного потенциала исследовали по методу [Wickcns et al., 2000]. Для этого бактериальною культуру (180 мкл) смешивали с 20 мкл раствора DiBAC4(3) с концентрацией 100 мкг/мл и выдерживали в темноте при 37°С в течение 10 мин. Затем 10 мкл образца наносили на предметное стекло с 1%-ной агарозой и исследовали с помощью флуоресцентного микроскопа Lcica DM2000 (фильтр-система 13). Общее количество клеток подсчитывали в проходящем свете. Для каждого образца анализировали не менее 800 клеток. Эксперименты проводили 3-6 раз в различные дни.
Определение концентрации глутатиона выполняли с помощью модифицированного метода Титца [Tietze, 1969. Smirnova, Muzyka.Oktyabrsky, 2012].
Продукцию экстраклеточного су пороке ид д
определяли по восстановлению цитохрома с методом, предложенным [Korsliunov, Imlay, 2006].
Статистическую обработку экспериментальных данных осу ществляли с помощью пакета программ Microsoft Exccll и Statistica 6.0, вычис-
ляя среднее значение, стандартную ошибку и доверительный интервал. Каждый результат показан как среднее значение из трех независимых экспериментов ± стандартная ошибка среднего.
Результаты и их обсуждение
Для изучения связи между транспортом фосфата и статусом глутатиона бактерии Е. coli выращивали на среде MOPS, не содержащей фосфата. При необходимости фосфат добавляли в среду в необходимых количествах. Параллельно часть исследований проводили с использованием среды М9. содержащей 27 мМ фосфата (Р043) Ночную
культуру, выращенную при низкой концентрации
фосфата (не более 150 мкмоль). центрифугировали и переносили в колбы со средой MOPS без фосфата (Р,) или с 2 мМ КН2РО4 При отсутствии лимитации по Р, клетки родительского штамма BW25113 (wt) росли на среде MOPS с той же скоростью, как на среде М9. В то же время, базовый уровень экстраклеточного глутатиона (GSHout) на среде MOPS был в 2,5 раза выше, чем на среде М9 и сохранялся постоянным в процессе культивирования. тогда как на среде М9 по мере роста происходило накопление (GSH^) пропорционально приросту биомассы (табл. 1).
Таблица L
Уровни GSHout и GSHin в растущих и голодающих по фосфату культурах £. coli BW25113
мкМ/OD™ M9 рост MOPS рост MOPS голод
GSHou, 1,12±0.024 2.08±0,24 1,46±0.03
GSH^ 6,3±0.4 9.4±0,6 24.8±0,6
При переносе клеток из ночной культуры в среду MOPS с глюкозой, не содержащую Р„ происходило постепенное исчерпание остаточного фосфата. содержащегося в инокуляте, что приводило к постепенному снижению удельной скорости роста (С 0.5±0.03 ч"1 до 0.17±0.01 ч"1), длившемуся в течение 180 мин. По сравнению с растущей культурой уровень наружного глутатиона в этих условиях постепенно снижался в 1.4 раза, тогда как концентрация внутриклеточного GSH продолжала возрастать. Отношение уровня внутриклеточного глутатиона (GSbL) к его концентрации в среде (GSH^/GSHou,) в голодающей по фосфату культуре достигало 17. тогда как в нелимитированных по фосфату растущих культурах это соотношение было равно 5.6 на М9 и 3.4 на среде MOPS. Эти результаты показывают, что при исчерпании фосфата снижается экспорт гл)татиона в среду и увеличивается его внутриклеточный уровень.
При внесении фосфата (150 мкмоль) в виде KH-POj в длительно голодающую культуру наблюдалось возобновление роста бактерий и быстрый выход глутатиона в Среду (табл. 2). Максимальный
уровень экстраклеточного GSH, превышающий базовый уровень в 11 раз, достигался через 15 мин. после внесения Р1? через 60 мин. количество экстраклеточного GSH возвращалось к базовому значению, характерному для растущей культуры. Выход GSH в среду наблюдался и при замене КЛ2РО4 на другие источники фосфата (глюкозо-6-фосфат, фруктозо-6-фосфат и их изомеры). Возвращение GSH в цитоплазму замедлялось в мутанте JW34l2(ügg/t). дефицитном по синтезу фермента у-глутамилтранспептидазы (GGT). )*частвующего в нормальных условиях в импорте глутатиона. Это указывает на то, что в данной ситуации GGT также играет важную роль в транспорте глутатиона внутрь клеток, Следует отметить, что удельная скорость роста (¿О бактерий родительского штамма полностью восстанавливалась через 30 мин, после добавления фосфата, в то время как у мутантов JW2663(gtv/?/f), дефицитных по синтезу глутатиона, — только к 45-й мин,, что свидетельствует о вкладе глутатиона в адаптацию Е. coli к изменившимся условиям среды,
Таблица 2
Изменения количества СйН011| и удельной скорости роста при внесении Р; в голодащую по фосфору культуру Е. соИ родительского штамма и мутантов
Время 0 мин (+Pi) 15 30 45 60
GSHo,lt 0.61±0.077 6.57±0.265 4.35±0.234 2.53±0.214 1 31=t0. Ill
\i WT 0.17±0.012 0.35±0.019 0.58±0.015 0.62±0,022 0.62±0.013
\i AgshA 0.10±0.015 0.35±0.011 0.47±0.022 0.60±0,0I3 0,58±0.017
Для того чтобы исследовать связь между импортом Р; и экспортом С$Н. были использованы мутанты (рМА, рМВ, лишенные различных
транспортеров фосфата, а также мутанты по регуляторам фосфатного оперона рИоВ и рИоН. Низкоаффинные РИА и РИВ осуществляют транспорт Р{
в цитоплазм}' с высокой скоростью, тогда как комплекс PstSCAB. находящийся под контролем pho-регулона. отвечает за высокоаффинный перенос Pj С низкой скоростью. Активация pho-регулона Происходит при снижении концентрации фосфата в среде меньше 4 мкмоль [Wanner. 1997: Hsieh,
Wanner, 2010]. Интересно, что это значение близко к минимальной концентрации фосфата в среде (6 мкмоль), которая вызывала стимуляцию экспорта глутатиона в наших условиях.
Отсутствие транспортера PitA увеличивало уровень GSHollt в ответ на добавление фосфата на 25% по сравнению с родительским штаммом. Не отмечено существенной разницы по этому показателю между остальными мутантами и родительским штаммом. Таким образом, в описываемой ситуации не выявлено тесной связи между уровнем экстраклеточного глутатиона и скоростью входа фосфата в клетки, Вы\од глутатиона может стимулироваться при входе фосфата по любой из известных для него транспортных систем.
Мы также проверили влияние на экспорт глутатиона транспорта сульфат-аниона (SCXr") Для создания дефицита сульфата в среде использовали модифицированную среду М9, в которой MgSOj заменяли на эквимолярное количество MgCK Длительное голодание по источнику серы сопровождалось снижением удельной скорости роста до 0.1 ч"\ при этом уровень наружного GSH прибли-
Изменение экспорт» GSH и ростовых параметров
Е* coli
жался к нулю 0.04 мкмоль/ОО^оо) При добавлении 0.5 ммоль MgSOa к голодающим клеткам, наблюдалось быстрое возобновление роста и такой же быстрый выброс GSH в среду. Максимальный уровень GSHo,,,. в 20 раз превышающий значение в голодающей культуре, достигался через 45 мин. после добавления сульфата. Через 90 мин. количество наружного глутатиона падало вдвое и далее удерживалось на этом уровне.
Известно, что PitA, кроме фосфата, может транспортировать в клетки арсенат [Rosenberg. Gerdes, Chegwidden, 1977; Rosen. Liu, 2009]. В наших условиях внесение арсената натрия (100 мкмоль) в длительно голодающую по фосфату культуру вызывало необратимый выход глутатиона (табл. 3). Для бактерий, как и для других живых клеток, арсенат токсичен, и его внесение в культуру Е. coli вызывало ингибирование роста, которое, однако, не сопровождалось лизисом клеток. Это свидетельствует о том. что выброс глутатиона при действии арсената не являлся результатом диффузии GSH из погибших клеток.
Таблица 3
при внесении арсената в голодающую культуру (wt)
Время 0 (+As) 15 30 45 60 75
GSHotjj 0.33*0.04 0.24*0,05 1,01*0,06 1,61±0,13 2.04*0.14 2.64*0.29
м 0,162±0.018 0.165=t0,005 -0,039*0,005 -0.056*0,01 -0.027*0.004 0.053*0.006
OD600 0.684*0.013 0.714*0,012 0.705*0,011 0,698*0,008 0.693*0.007 0.683*0.007
Примечательно, что активация экспорта глутатиона происходила как при стимуляции роста после добавления фосфата или сульфата, так и при ингибировании роста при обработке культуры ар-сенатом. Поскольку все три испытанных вещества (фосфат сульфат и арсенат) транспортируются в виде анионов, их массированный вход в цитоплазму голодающих клеток может вызвать временный электрический дисбаланс. Этот дисбаланс может быть нейтрализован путем симпорта указанных анионов с каким-либо катионом (например, К ) или путем антипорта с другим анионом. Известно, что при физиологических условиях GSH является анионом. Учитывая вышесказанное, можно предположить, что в наших условиях движение аниона (фосфата, сульфата или арсената) в цитоплазму могло быть одним из стимулов к активации экспорта глутатиона. Полученные данные дают дополнительные аргументы в пользу высказанной ранее гипотезы о существования связи между трансмембранными потоками ионов и циркуляцией глутатиона fSniirnova, Muzyka. Okiyabrsky. 20121,
Добавление Pi к клеткам Е. coli, голодающим по фосфату, приводит к появлению субстрата для синтеза АТФ. что должно способствовать стиму-
ляции транспорта электронов по дыхательной цепи и изменению электрохимического градиента протонов (ÄjuH^). Известно, что у митохондрий возрастание ДрН~ выше некоторого предельного значения сопровождается резким усилением продукции супероксида [Скулачев. 1989]. Используя флуоресцентный краситель DiBAC4(3). мы проследили за изменениями мембранного потенциала и продукции супероксида у Е. coli при добавлении Pi к голодающей культуре. В наших условиях добавление фосфата в голодающую культуру по фосфату Е. coli BW25113 (w() вызывало преходящее повышение мембранного потенциала и одновременное увеличение продукции супероксида в 3 раза. На основании полученных данных можно предположить следующую последовательность событий после добавления фосс]>ата в голодающую культуру. Вход фосфата в цитоплазму —* изменение мембранного потенциала —* повышение уровня супероксида в периплазме —*• стимуляция экспорта глутатиона из цитоплазмы в периплазму и среду.
Следует обратить внимание, что все рассмотренные выше эксперименты проводились на средах. содержащих глюкозу в качестве источника углерода и энергии. Стимуляция экспорта GSH при
добавлении фосфата в голодающую по нему куль- фором карбонилцианид-мета-хлорофенил гидразо-туру отсутствовала в среде, не содержащей глюко- ном (СССР, 20 мкм), который вызывает деэнерги-зы. Этот эффект наблюдался также при предобра- заиию цитоплазматической мембраны (табл. 4). ботке голодающей по фосфату культуры протоно-
Таблица 4
Влияние протонофора СССР и ингибитора АТФ-азы DCCD на экспорт глутатиоиа у Е* coli
BW25113
Время 0 (+Pi) 15 30 45 60
Контроль 0.61±0,077 6.57±0.265 4.35±0.234 2.53±0.214 1.31±0.111
Бе з глюкозы 0.55±0.05 0.63±0.1 0.72±0.15 0.74±0,17 0.5±0.05
-HDCCD 1±0.1 13.66±0.628 11.53±0.389 10.98±0,145 10,42±0.389
+СССР 0.4±0,05 0,4±0.1 0.52±0.08 0.67±0,15 0.54±0.1
Добавление ингибитора АТФ-синтетазы ди-циклогексилкарбоднимида (DCCD) (0.1 ммоль) к голодающим по фосфату клеткам родительского штамма не приводило к существенном}7 изменению уровня экстраклеточного глутатиона. Однако после внесения фосфата в эту культуру наблюдался быстрый выход GSH. амплитуда которого в 2 раза превышала уровень, достигаемый в необработанных DCCD клетках. Этот высокий уровень сохранялся на протяжении всего эксперимента (табл. 4). Известно, что DCCD блокирует поток протонов через канал F0 АТФ-синтетазы. При работе дыхательной цепи закрытие может приводить к повышению т.е. СССР и DCCD действуют на A^iH* противоположным образом и это может объяснять различные эффекты двух соединений на экспорт глутатиона. Наши результаты указывают на то, что энергизация мембраны и наличие AjllPT являются необходимым условием экспорта GSH в ответ на добавление фосфата в голодающую по Pi культуру.
Исследования поддержаны грантом Программы МКБ Президиума РАН №12-П-4-1013 и грантом РФФИ № 13-04-00706,
Библиографический список
Скулочее В. 11. Энергетика биологических мембран. М.: Наука, 1989. 564 с. Смирнова Г.В., Окптбрьский ОН. Глутатион у бактерий // Биохимия. 2005. Т. 70, вып. 11. С. 1459-1473,
Asîund F. et al. Regulation of the OxyR transcription factor by hydrogen peroxide and the cellular thiol-disulfide status // Proc. Nail. Acad. Sei. USA. 1999. Vol. 96. P. 6161-6165. Fahev R.C. et al. Occurrence of glutathione in bacteria//J. Bacterid. 1978. Vol. 133. P. 1126-1129. Hsieh Y.-J. Warmer B.L. Global regulation by the seven-component Pi signaling svstem // Curr. Opin. Microbiol. 2010. Vol. 13. P.'l9S-203. KUitt P., Lamas S. Regulation of protein function by S-glutathiolation in response to oxidative and m-trosativc stress // Eur. J. Biochcm. 2000. Vol. 267. P. 4928-4944.
Korshunov X, Imlay JA, Detection and quantification of superoxide formed within the periplasm of Escherichia coli // J. Bactcriol. 2006. Vol. 188 P. 6326-6334.
Meister A., Anderson M.E. Glutathione // Ann. Rev.
Biochem. 1983. Vol. 52. P. 711-760. Miller J.H. Experiments in molecular genetics. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1972. Neidhardt FC., Bloch PL., Smith D.F Culture medium for Enterobacteria // J. Bacteriol. 1974. Vol. 119, №3. P. 736-747. Rosenberg H., Gerdes R.G.t Chegwidden K. Two systems for the uptake of phosphate in Escherichia cvH H J. Bacteriol. 1977. Vol. 131. P. 505-511. Rosen BP.t Liu Z. Transport pathways for arsenic and selenium: a ininireview // Environ. Int. 2009. Vol. 35. P. 512-515. Schafer F.Q.f Buettner G.R. Redox environment of the cell as viewed through the redox state of the glutathione disulfide/glutathione couple // Free Radia Biol. Med. 2001. Vol. 30. P. 1191-1212. Smirnova G.V., Muzyka KG., Oktyabrsky O.\T. Transmembrane glutathione cycling in growing Escherichia coli cells // Microbiol. Res. 2012 Vol. 167. P. 166-172. Tietze F. Enzymic method for quantitative determination of nanogram amounts of total and oxidized glutathione: applications to mammalian blood and other tissues // Anal. Biochem. 1969. Vol. 27. P. 502-522.
Wanner B.L. Phosphate signaling and the control of gene expression in Escherichia coli // Metal Ions in Gene Regulation / Silver S, William W.. editor. New York: Chapman and Half 1997. P. 104-128. Wickens H.J., Piimey R.J., Mason D.J., Gant V.A. Flow cytometric investigation of filamentation, membrane patency and membrane potential in Escherichia coli following ciprofloxacin exposure // Antimicrob. Agents Chemother. 2000. Vol. 44. P. 682-687.
References
Skulachev V.P. Energetika biologiceskich membran [Encrgctics of biological membranes]. Moscow, Nauka Publ.. 1989. 564 p. (In Russ.)
Smirnova G.V.. Oktyabrsky O.N. [Glutathione in bacteria]. Biochemistry (Moscow). 2005. Vol. 70, No, 11. pp. 1199-1211. (In Russ.)
Aslund F,. Zheng M., Beckwitli J.; Storz G. Regulation of the OxyR transcription factor by hydrogen peroxide and the cellular thiol-disulfide status. Proc. Nail. Acad. Sci. USA. 1999. Vol. 96, pp. 6161-6165.
Fahcy R. CL Brown W.C., Adams W.B.. Worsham M,B, Occurrence of glutathione in bacteria. J. BacterioL 197ST Vol. 133, pp. 1126-1129.
Hsieli Y.-J, Wanner B,L. Global regulation by the seven-component Pi signaling svstem. Curr. Opin. Microbiol. 2010, Vol. 13, pp, 198-203.
Klatt P., Lamas S, Regulation of protein function by S-glutatliiolation in response to oxidative and ni-trosative stress, Eur. J. Biochem. 2000, Vol. 267, pp. 4928-4944.
Korshunov S.. Imlay J.A, Detection and quantification of superoxide formed within the periplasm of Escherichia coli. J. BacterioL 2006. Vol. 188. pp. 6326-6334.
Meister A., Anderson M.E. Glutathione. Ann. Rev. Biochem. 1983, Vol. 52, pp, 711-760.
Miller J.H. Experiments in molecular genetics. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 1972.
Ncidhardt F.C.. Bloch P.L., Smith D,R Culture medium for Enterobacteria, J\ Bacterial. 1974. Vol. 119. No 3. pp, 736-747.
Rosenberg H., Gerdes R.G., Chegwidden K. Two systems for the uptake of phosphate in Escherichia coli. J. Bacterial. 1977, Vol. 131, pp. 505-511.
Rosen BP., Liu Z. Transport pathways for arsenic and selenium: a minireview\ Environ. Int. 2009, Vol. 35. pp. 512-515.
Schafer F.Q.. Buettner G.R. Redox environment of the cell as viewed through the redox state of the glutathione disulfide/glutathione couple. Free Raclic. Biol. Med. 2001, Vol. 30. pp. 1191-1212.
Smirnova G.V.. Muzyka N.G., Oktyabrsky O.N. Transmembrane glutathione cycling in growing Escherichia coli cells. Microbiol. Res. 2012, Vol. 167, pp. 166-172.
Tietze F. Enzymic method for quantitative determination of nanogram amounts of total and oxidized glutathione: applications to mammalian blood and other tissues. Anal. Biochem. 1969. Vol, 27, pp, 502-522.
Wanner B,L, Phosphate signaling and the control of gene expression in Escherichia coii. Silver S, William W, editor. Metal Ions in Gene Regulation. New York, Chapman and Half 1997. P. 104-128.
Wickens H J.. Pinney R.J., Mason D.J., Gant V A. Flow cytometric investigation of fi lamentation, membrane patency and membrane potential in Escherichia coli following ciprofloxacin exposure. Antimicrob, Agents Chemother. 2000, Vol. 44, pp. 682-687.
Поступила в редакцию 14.10.2015
Об авторах
Тюленев Алексей Валерьевич, ст. инженер лаборатории физиологии и генетики м икроорганшмов
ФГБУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН» 614081. Пермь, ул. Голева. 13; leksey333@yandex.ru: (342)2122086
Смирнова Галина Васильевна, доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории физиологии и генетики VI икроорганшмов
ФГБУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН» 614081. Пермь, ул. Голева, 13; Б1шг-nova@iegm.ru, (342)2122086
Октябрьский Олег Николаевич, доктор биологических наук, профессор, зав. лабораторией физиологии и генетики микроорганизмов ФГЪУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН»
614081. Пермь, ул. Голева. 13; ок1уаЬп<7^т.ги: (342)2122086
профессор кафедры химии и биотехнологии ФГЪОУ ВПО «Пермский национальный исследовательский политехнический университет». 614990. Пермь, Комсомольский пр.. 29
About the authors
Tyulenev Aleksey Vasirevicli, senior engineer; Laboratoiy of physiology7 and genetics of microorganisms
Institute of Ecology and Genetics of Microorganism UB RAS. 13, Golev str, Perm, Russia. 614081; Ieksey333(i7 yandex.ru; (342)2122086
Smirnova Galina Vasirevna, doctor of biology, leading researcher of laboratory of physiology and gcnctics of microorganisms Institute of Ecology and Genetics of Microorganism UB RAS. 13. Golev str.. Perm. Russia, 614081; smirnova^iegm.ru; (342)2122086
Oktyabrsky Olcg Nikolacvich. doctor of biology.
professor, director of laboratory of physiology and
genetics of microorganisms
Institute of ecology and genetics of microorganisms,
UB RAS. 13. Golev str.. Perm. Russia. 614081;
oktyabr@iegm.ru; (342)2122086
professor of the Department of Chemistry7 and
Biotechnology
Perm National Research Polytechnic University, Komsomolsky pr.. 29, Perm. Russia, 614990
