CC BY
13
УДК 543.48:543.89:54.061: 54.062 DOI: 10.33184/bulletin-bsu-2022.1.8
2-БЕНЗОИЛ-1,1,3,3-ТЕТРАЦИАНОПРОПЕНИД ФЕНИЛДИАЗОНИЯ КАК АНАЛИТИЧЕСКИЙ РЕАГЕНТ ДЛЯ ФОТОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЛАВОНОИДОВ
© Н. Н. Ященко*, И. Н. Бардасов, С. В. Житарь, А. Ю. Алексеева, С. В. Карпов, Е. Г. Зиновьева
Чувашский государственный университет имени И. Н. Ульянова Россия, Чувашская Республика, 428015 г. Чебоксары, пр. Московский, 15.
Тел.: +7 (8352) 45 24 68 доп. 2301.
*Email: n.yashenko.n@mail.ru
В данной работе впервые показана возможность применения 2-бензоил-1,1,3,3-тетрацианопропенида фенилдиазония (ЦПФД) для количественного определения полифенолов (флавоноидов) в лекарственных препаратах на примере таблеток «Аскорутин». Фотометрическое определение рутина, относящегося к группе растительных полифенолов, в таблетках «Аскорутин» проводили по реакции азосочетания с реагентом ЦПФД в щелочной среде. Выявлено, что предлагаемый нами реагент отличается продолжительной стабильностью как в индивидуальном состоянии, так и в водных и водно-спиртовых растворах, в отличие от других солей диазония, применяемых в фотометрии. Содержание рутина определяли по градуи-ровочному графику, построенному по измерению оптической плотности растворов рутина различной концентрации с реагентом ЦПФД (при длине волны X = 430 нм). Опытным путем найден условный молярный коэффициент светопоглощения, который равен 3,3103 [л/(мольсм)]. Для исключения возможного влияния аскорбиновой кислоты, содержащейся в «Аскорутине», на реакцию азосочетания с ЦПФД были изучены спектры поглощения реагента в присутствии аскорбиновой кислоты. Как показали экспериментальные данные, внесение аскорбиновой кислоты в водно-спиртовый раствор реагента не влияет на вид его спектра поглощения. Установлено, что предел обнаружения фенольных соединений в препарате «Аскорутин» в пересчете на рутин составляет 310-6 моль/л. Предложенный нами метод является простым и удобным, обладает высокой чувствительностью и селективностью определения флавоноидов в лекарственных препаратах.
Ключевые слова: флавоноиды, рутин, фотометрический анализ, азосочетание, тетра-цианопропениды.
Введение пать в реакцию азосочетания с фенольными соеди-
Среди веществ, обладающих биологической активностью, широко распространены фенольные соединения (флавоноиды), представляющие собой один из наиболее распространенных и многочисленных классов природных соединений. Многие растения синтезируют и накапливают большое количество соединений, относящихся к продуктам фенольной природы. Лекарственно-растительное сырье, содержащее флавоноиды, используется в качестве противомикробных, противовоспалительных, кровоостанавливающих, желчегонных, тонизирующих, вяжущих и слабительных средств [1-6]. Содержание полифенольных соединений в сырье и лекарственных препаратах можно определять различными методами физико-химического анализа (хроматография, фотометрия, титриметрия, спектроскопия, кулонометрия и др.), среди которых отдельно следует выделить спектрофотометриче-ский метод, характеризующийся высокой точностью, чувствительностью, селективностью, экс-прессностью, надежностью и простотой. Известно, что соли диазония (например, диазотированная сульфаниловая кислота, тетрафтороборат 4-нитро-фенилдиазония, 4-(2-пиридилазо)резорцин, диазо-тированный пенополиуретан и др.) способны всту-
нениями с образованием ярко окрашенных азосо-единений (азокрасителей), которые можно с легкостью количественно определить спектрофотомет-рическим методом. Однако зачастую большинство солей диазония являются не стабильными при хранении и склонны к разложению в растворах, что сдерживает их применение в фотометрии [7-19]. Поэтому целью данной работы является изучение возможности применения впервые синтезированного нами 2-бензоил-1,1,3,3-тетрацианопропенида фенилдиазония (ЦПФД) в качестве устойчивого реагента для фотометрического определения феноль-ных соединений по реакции азосочетания.
Экспериментальная часть
Спектры ЯМР 1Н зарегистрированы на спектрометре Bruker DRX-500 (США) в ДМСО^б, внутренний стандарт ТМС. Определение оптической плотности проводили на спектрофотометре СФ-2000 с использованием градуировочного графика.
2-Бензоил-1,1,3,3-тетрацианопропенид фенилдиазония (ЦПФД) получали следующим образом: 1 г 2-бензоил-1,1,3,3-тетрацианопропенида растворяли в небольшом количестве воды, затем полученный раствор добавляли в раствор соли диазо-
ния, предварительно охлажденный до 0 °С; далее полученный осадок отфильтровывали на воронке Шотта и промывали последовательно сначала водой, а затем этиловым спиртом. ЦПФД представляет собой кристаллическое вещество зеленовато-коричневого цвета, хорошо растворимое в органических растворителях; устойчив как в сухом виде, так и в растворе; при температуре выше 60 оС плавится с разложением. Полученный реактив хранили в эксикаторе в темном месте. Строение ЦПФД подтверждено методом ЯМР 1Н-спектроскопии. Спектр ЯМР 1Н (ДМСО^б), 8, м.д.: 6.75 д (2Н, СвН5, 3 8.0 Гц), 7.15 т (1Н, С6Н5, 3 8.2 Гц), 7.63 т (2Н, С6Н5, 3 7.8 Гц), 7.78 т (1Н, С6Н5, 3 7.4 Гц), 7.93 д (2Н, С6Н5, 3 8.1 Гц). Исходные вещества для синтеза ЦПФД, а именно 2-бензоил-1,1,3,3-тетра-цианопропенид, синтезировали из 3-бензоилцик-лопропан-1,1,2,2-тетракарбонитрила [20], а соль фенилдиазония - из анилина [21].
Для спектрофотометрического определения фенольных соединений готовили насыщенный вод-но-спиртовый раствор реагента ЦПФД и стандартный раствор рутина с концентрацией 0.5 мг/мл. Реакцию азосочетания между ЦПФД и флавонои-дами проводили в слабощелочной среде в присутствии гидроксида натрия.
В качестве объекта исследования для определения флавоноидов был выбран лекарственный препарат «Аскорутин» производства ОАО «МАРБИОФАРМ», содержащий равное количество аскорбиновой кислоты и флавоноида рутина в качестве основных веществ. Для количественного определения рутина в препарате растирали в ступке до порошкообразного состояния 10 табл. «Аскру-тина»; затем навеску, соответствующую массе одной таблетки (100 мг), растворяли в этиловом спирте в мерной колбе вместимостью 50 см3. Объем
аликвотной части, отобранной для получения фо-тометрируемой формы, составлял 1.00 см3.
Результаты и их обсуждение
Реакция азосочетания, открытая впервые П. Гриссом в 1864 г., широко применяется в производстве азокрасителей и относится к типичным реакциям электрофильного ароматического замещения. Предполагаемая реакция рутина с синтезированным ЦПФД показана на схеме.
Предварительно нами были подобраны оптимальные условия фотометрического определения флавоноидов по реакции азосочетания с ЦПФД. Для этого были получены спектры поглощения водно-спиртового раствора ЦПФД и продукта его азосочетания с рутином в слабощелочной среде.
Экспериментально установлено, что максимум поглощения реагента ЦПФД наблюдается при 390 нм, а для продукта азосочетания - при 430 нм.
но
Рис. 1. График зависимости оптической плотности продукта азосочетания рутина с ЦПФД от содержания рутина.
Далее нами было изучено изменение оптической плотности азокрасителя от содержания рутина при длине волны 430 нм и получена линейная зависимость (рис. 1).
Схема
ЦпфД но-
где Я
но
N
он
о CN
ЦПФД -
он
А
С, мг
0,5
1.5
2,5
Таблица
Результаты фотометрического определения флавоноида рутина по реакции азосочетания с ЦПФД в таблетках «Аскорутин»
№ образца А X ±дх, мг/мл Sr, % Сст, мг/мл Ах+ст X ±дх, мг/мл Sr, %
1 0.350 0.905±0,023 2.50 0.2 0.431 1.115±0,054 4.84
2 0.364 0.941±0,010 1.06 0.2 0.445 1.152±0,035 3.00
3 0.358 0.926±0,016 1.72 0.2 0.440 1.139±0,050 4.39
Здесь & - относительное отклонение, Сст - концентрация стандартного раствора, Ах+ст - оптическая плотность раствора после внесения добавки.
На основе полученных данных был рассчитан условный молярный коэффициент светопоглоще-ния, который равен 3,3• 103 [л/(моль-см)]. Предел обнаружения фенольных соединений в пересчете на рутин составляет 3-10-6 моль/л.
Известно, что практически во всех растительных объектах полифенолы присутствуют совместно с аскорбиновой кислотой и вместе принимают участие в различных окислительно-восстановительных процессах, тормозят действие гиалуронидазы и т.д. При фотометрии с фосфорномолибденовой кислотой и ее натриевой солью дубильные вещества и флавоноиды завышают результаты количественного определения аскорбиновой кислоты [22-25]. В связи с этим необходимо учитывать сложность состава лекарственных растительных препаратов при подборе метода определения какого-либо из его компонентов.
Рис.
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6
2. Градуировочный график для фотометрического определения рутина с ЦПФД в присутствии аскорбиновой кислоты.
Для исключения возможного влияния аскорбиновой кислоты на реакцию азосочетания с ЦПФД были изучены спектры поглощения реагента в присутствии аскорбиновой кислоты. Как показали экспериментальные данные, внесение аскорбиновой кислоты в водно-спиртовый раствор ЦПФД не влияет на вид спектра поглощения реагента. Однако на практике было замечено, что при добавлении аскорбиновой кислоты в раствор азо-красителя ЦПФД с рутином происходит усиление окраски растворов. Поэтому при получении исследуемых фотометрируемых форм азокрасителя в каждую колбу добавляли раствор аскорбиновой кислоты концентрацией 1 мг/мл в таком объеме, чтобы и в холостой, и в контрольной пробах аскорбиновая кислота была в одинаковом количестве. Граду-
ировочный график для определения рутина в присутствии аскорбиновой кислоты представлен на рис. 2.
Полученный график использовали для количественного определения рутина в таблетках «Аскорутин». Результаты представлены в табл. Статистическую обработку результатов проводили для трех измерений при доверительной вероятности
0.95. Результаты представляли в виде X±AX, где Х - среднее значение содержания полифенолов в пробе, АХ - доверительный интервал.
Как показали экспериментальные исследования при спектрофотометрии с использованием в качестве реагента ЦПФД содержание рутина в препарате «Аскорутин» в одной таблетке составляет (46.32±2.40) мг; достоверность определения была подтверждена также методом «добавок».
Таким образом, синтезированный нами 2-бен-зоил- 1,1,3,3-тетрацианопропенид фенилдиазония можно рекомендовать в качестве устойчивого реагента для фотометрического определения феноль-ных соединений в различных лекарственных объектах по реакции азосочетания.
ЛИТЕРАТУРА
1. Тараховский Ю. С., Ким Ю. А., Абдрасилов Б. С., Муза-фаров Е. Н. Флавоноиды: биохимия, биофизика, медицина. Пущино: Sj'nchrobook, 2013. 310 с.
2. Корулькин Д. Ю. Природные флавоноиды. Новосибирск: Академ. изд-во «Гео», 2008. 232 с.
3. Зайнуллин Р. А., Хуснутдинова Э. К., Ильина А. Д., Куна-кова Р. В., Ялаев Б. И. Влияние флавоноидов на экспрессию генов человека // Вестник Башкирского университета. 2018. Т. 23. №2. С. 395-405.
4. Онина С. А., Никонова Н. А. Физико-химический анализ флавоноидов растительного сырья // Национальная ассоциация ученых. 2016. №10-2(26). С. 84-85.
5. Борисова В. Л. Флавоноиды в питании человека // Между-нар. журнал теории и научной практики. 2019. Т. 2. №3. С. 168-171.
6. Хатамов Х. М., Суяров А. А., Киреев В. В., Зиядулла-ев Ш. Х., Мухторов Ш. М., Алимжанова Л. И. Эффективность густого экстракта суммы флавоноидов в виде мази при лечении контактного аллергического дерматита в эксперименте // Иммунология. 2020. Т. 41. №3. С. 269-273.
7. Масленников П. В., Чупахина Г. Н., Скрынник Л. Н. Содержание фенольных соединений в лекарственных растениях ботанического сада // Известия РАН. Сер. Биологическая. 2013. №5. С. 551-557.
8. Yaschenko N. N., Zhitar S. V., Zinovjeva E. G. Determination of phenolic compounds in medicinal preparations by galvanos-tatic coulometry // Chimica Techno Acta. 2021. Vol. 8. No 1. №20218110. Рр. 1-3. DOI: 10.15826/chimtech.2021.8.1.10.
9. Кудринская В. А., Дмитренко С. Г., Золотов Ю. А. Спек-трофотометрическое определение флавоноидов по реак-
А
С, мг
ции азосочетания с тетарфтороборатом 4-нитрофенил-диазония // Вестник Московского ун-та. Сер. 2. Химия. 2010. Т. 51. №4. С. 296-301. 18.
10. Макарова Н. В., Валиулина Д. Ф., Кирюшина В. А. Исследование содержания фенолов, флавоноидов, антиокси-дантной силы и антирадикальной активности листьев шалфея рода SALVIA TESQUICOLA (СЕМЕЙСТВА ЯСНОТКОВЫЕ) // Химия растительного сырья. 2020. №1. 19 С.125-131.
11. Кутовая А. М., Давыдова В. Н., Перова И. Б., Эллер К. И. Определение профиля флавоноидов в гипогликемическом сборе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии // Тонкие химические технологии. 2020. Т. 15. №3. С. 39-46.
20
12. Бубенчиков Р. А., Кулик О. Н., Бубенчикова К. Р. Разработка методик идентификации и количественного определения флавоноидов в траве чины клубненосной (LATHYRUS TUBEROSUS L.) // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2020. Т. 23. №б. С. 22-27.
13. Гаврилова Н. А., Шурыгина М. С., Курдюков Е. Е., Водо- 21. пьянова О. А., Кривов Д. В. Новая методика количественного определения флавоноидов в цветках липы // Известия 22. высших учебных заведений. Поволжский регион. Естественные науки. 2020. №2(30). С. 5-13.
14. Куркин В. А., Лапина А. С. Обоснование методик качественного и количественного определения флавоноидов в траве видов рода монарда // Химия растительного сырья. 2020. №2. С. 159-169.
15. Куркин В. А., Правдивцева О. Е., Шайхутдинов И. Х., Куркина А. В., Волкова Н. А. Количественное определение суммы флавоноидов в плодах боярышника кроваво-красного // Химико-фармацевтический журнал. 2020. Т. 54. №1. С. 14-18.
16. Елунина Е. Н., Полудина Н. В., Ревков О. А., Воронина С. Г., Перкель А. Л. Определение фенола в продуктах окисления ароматических сложных эфиров // Вестник Кузбасского гос. техн. ун-та. 2006. №1. С. 120-122.
17. Денисенко Т. А., Вишникин А. Б., Цыганок Л. П. Особенности взаимодействия 18-молибдодифосфата и реактива Фолина-Чокальтеу с фенольными соединениями // Анали-
тика и контроль. 2015. Vol. 19. No. 4. Pp. 373-380. Russian. DOI: 10.15826/analitika. 2015.19.4.012. Бойко М. Я., Врубленская Т. Я., Коркуна И. Я., Котюм-бас Г. Ю. Спектрофотометрическое определение сульфаниламида и его производных с использованием 4-(2-пири-дилазо)резорцин // Вопросы химии и химической технологии. 2012. №2. С. 116-126.
Апяри В. В. Новые подходы в анализе методами оптической молекулярной абсорбционной спектроскопии с использованием гетерогенных аналитических систем: дис. ... д-ра хим. наук. 02.00.02 - Аналитическая химия. М.: МГУ, 2016. 391 с.
Бардасов И. Н., Каюкова О. В., Каюков Я. С., Ершов О. В., Насакин О. Е., Тафеенко В. А. Синтез 2,2,3,3-тетрациано-циклопропилкетонов и взаимодействие их с O-нуклео-филами // Журнал органической химии. 2009. Т. 45. Вып. 9. С. 1340-1351.
Сидорина Н. Е., Климочкин Ю. Н. Диазо- и азосоединения: практикум. Самара: Самар. гос. техн. ун-т, 2009. 118 с. Федосеева Л. М., Тимохин Е. В. Изучение флавоноидов красных листьев бадана толстолистного (BERGENIA CRASSIFOLIA (L.) FITSCH, произрастающего на Алтае // Химия растительного сырья. 1999. №4. С. 81-84. Зыкова Е. В., Зайцев В. Г., Островский О.В., Дудченко Г.П. Влияние химических веществ, содержащихся в биологических пробах и лекарственных препаратах, на результаты количественного определения аскорбиновой кислоты // Вестник Волгоградского гос. мед. ун-та. 2009. Вып. 4(32). С. 103-105.
Карпова Е. А., Храмова Е. П., Фершалова Т. Д. Флавоноиды и аскорбиновая кислота у некоторых представителей рода Begonia L. // Химия раст. сырья. 2009. №2. С. 105-110.
Тринеева О. В. Методы определения антиоксидантной активности объектов растительного и синтетического происхождения в фармации (обзор) // Разработка и регистрация лекарственных срелств. 2017. №4(21). С. 180-197.
Поступила в редакцию 27.08.2021 г.
ISSN 1998-4812
BecTHHK EamKHpcKoro yHHBepcHTeTa. 2022. T. 27. №1
49
DOI: 10.33184/bulletin-bsu-2022.1.8
THE PHENYLDIAZONIUM 2-BENZOYL-1,1,3,3-TETRACYANOPROPENIDE AS AN ANALYTICAL REAGENT FOR PHOTOMETRIC DETERMINATION OF FLAVONOIDS
© N. N. Yaschenko*, I. N. Bardasov, S. V. Zhitar, A. Yu. Alekseeva, S. V. Karpov, E. G. Zinovjeva
Chuvash State University named after I. N. Ulyanov 15 Moskovsky Avenue, 428015 Cheboksary, Chuvash Republic, Russia.
Phone: +7 (8352) 45 24 68.
*Email: n.yashenko.n@mail.ru
In this work for the first time the possibility of using phenyldiazonium 2-benzoyl-1,1,3,3-tetracyanopropenide (PDCP) for the quantitative determination of polyphenols (fla-vonoids) in medicinal products is shown using the "Ascorutin" tablets as an example. Photometric determination of rutin belonging to the group of plant polyphenols in "Ascorutin" tablets was carried out via the azocoupling reaction with the PDCP reagent in an alkaline medium. It was revealed that the reagent has long-term stability both in the solid state and in aqueous and aqueous-alcoholic solutions, in contrast to other diazonium salts used in photometry. The amount of rutin was determined according to a calibration graph constructed by measuring the optical density of solutions of rutin of various concentrations with the PDCP reagent (at a wavelength of 1 = 430 nm). Experimentally, the molar absorptivity of light absorption was found, which is 3.3-103 [l/(mol-cm)]. To exclude the possible influence of the ascorbic acid contained in "Ascorutin" on the azocoupling reaction with PDCP, the absorption spectra of the reagent in the presence of ascorbic acid were studied. As shown by experimental data, the introduction of ascorbic acid into the aqueous-alcoholic solution of the reagent does not affect the form of its absorption spectrum. It was found that the detection limit of phenolic compounds in the preparation "Ascorutin" in terms of rutin is 3-10-6 mol/l. The proposed method using the synthesized PDCP reagent is simple and convenient, has high sensitivity and selectivity, and can be recommended for the determination of phenolic compounds in pharmaceuticals.
Keywords: flavonoids, rutin, photometric analysis, azocoupling, tetracyanopropenides.
Published in Russian. Do not hesitate to contact us at bulletin_bsu@mail.ru if you need translation of the article.
REFERENCES
1. Tarakhovskii Yu. S., Kim Yu. A., Abdrasilov B. S., Muzafarov E. N. Flavonoidy: biokhimiya, biofizika, meditsina [Flavonoids: biochemistry, biophysics, medicine]. Pushchino: Sunchrobook, 2013.
2. Korul'kin D. Yu. Prirodnye flavonoidy [Natural flavonoids]. Novosibirsk: Akadem. izd-vo «Geo», 2008.
3. Zainullin R. A., Khusnutdinova E. K., Il'ina A. D., Kunakova R. V., Yalaev B. I. Vestnik Bashkirskogo universiteta. 2018. Vol. 23. No. 2. Pp. 395-405.
4. Onina S. A., Nikonova N. A. Natsional'naya assotsiatsiya uchenykh. 2016. No. 10-2(26). Pp. 84-85.
5. Borisova V. L. Mezhdunar. zhurnal teorii i nauchnoi praktiki. 2019. Vol. 2. No. 3. Pp. 168-171.
6. Khatamov Kh. M., Suyarov A. A., Kireev V. V., Ziyadullaev Sh. Kh., Mukhtorov Sh. M., Alimzhanova L. I. Immunologiya. 2020. Vol. 41. No. 3. Pp. 269-273.
7. Maslennikov P. V., Chupakhina G. N., Skrynnik L. N. Izvestiya RAN. Ser. Biologicheskaya. 2013. No. 5. Pp. 551-557.
8. Yaschenko N. N., Zhitar S. V., Zinovjeva E. G. Chimica Techno Acta. 2021. Vol. 8. No 1. No. 20218110. Pp. 1-3. DOI: 10.15826/chimtech.2021.8.1.10.
9. Kudrinskaya V. A., Dmitrenko S. G., Zolotov Yu. A. Vestnik Moskovskogo un-ta. Ser. 2. Khimiya. 2010. Vol. 51. No. 4. Pp. 296-301.
10. Makarova N. V., Valiulina D. F., Kiryushina V. A. Khimiya rastitel'nogo syr'ya. 2020. No. 1. Pp. 125-131.
11. Kutovaya A. M., Davydova V. N., Perova I. B., Eller K. I. Tonkie khimicheskie tekhnologii. 2020. Vol. 15. No. 3. Pp. 39-46.
12. Bubenchikov R. A., Kulik O. N., Bubenchikova K. R. Voprosy biologicheskoi, meditsinskoi i farmatsevticheskoi khimii. 2020. Vol. 23. No. 6. Pp. 22-27.
13. Gavrilova N. A., Shurygina M. S., Kurdyukov E. E., Vodop'yanova O. A., Krivov D. V. Izvestiya vysshikh uchebnykh zavedenii. Pov-olzhskii region. Estestvennye nauki. 2020. No. 2(30). Pp. 5-13.
14. Kurkin V. A., Lapina A. S. Khimiya rastitel'nogo syr'ya. 2020. No. 2. Pp. 159-169.
50
XHMHtf
15. Kurkin V. A., Pravdivtseva O. E., Shaikhutdinov I. Kh., Kurkina A. V., Volkova N. A. Khimiko-farmatsevticheskii zhurnal. 2020. Vol. 54. No. 1. Pp. 14-18.
16. Elunina E. N., Poludina N. V., Revkov O. A., Voronina S. G., Perkel' A. L. Vestnik Kuzbasskogo gos. tekhn. un-ta. 2006. No. 1. Pp. 120-122.
17. Denisenko T. A., Vishnikin A. B., Tsyganok L. P. Analitika i kontrol'. 2015. Vol. 19. No. 4. Pp. 373-380. Russian. DOI: 10.15826/analitika.2015.19.4.012.
18. Boiko M. Ya., Vrublenskaya T. Ya., Korkuna I. Ya., Kotyumbas G. Yu. Voprosy khimii i khimicheskoi tekhnologii. 2012. No. 2. Pp.116-126.
19. Apyari V. V. Novye podkhody v analize metodami opticheskoi molekulyarnoi absorbtsionnoi spektroskopii s ispol'zovaniem getero-gennykh analiticheskikh sistem: dis. ... d-ra khim. nauk. 02.00.02 - Analiticheskaya khimiya. Moscow: MGU, 2016.
20. Bardasov I. N., Kayukova O. V., Kayukov Ya. S., Ershov O. V., Nasakin O. E., Tafeenko V. A. Zhurnal organicheskoi khimii. 2009. Vol. 45. No. 9. Pp. 1340-1351.
21. Sidorina N. E., Klimochkin Yu. N. Diazo- i azosoedineniya: praktikum [Diazo and azo compounds: workshop]. Samara: Samar. gos. tekhn. un-t, 2009.
22. Fedoseeva L. M., Timokhin E. V. Khimiya rastitel'nogo syr'ya. 1999. No. 4. Pp. 81-84.
23. ZykovaE. V., Zaitsev V. G., Ostrovskii O.V., Dudchenko G.P. Vestnik Volgogradskogo gos. med. un-ta. 2009. No. 4(32). Pp. 103-105.
24. Karpova E. A., Khramova E. P., Fershalova T. D. Khimiya rast. syr'ya. 2009. No. 2. Pp. 105-110.
25. Trineeva O. V. Razrabotka i registratsiya lekarstvennykh srelstv. 2017. No. 4(21). Pp. 180-197.
Received 27.08.2021.
