Влияние антиоксидантного препарата U-74389G на концентрацию магния при гипоксии-реоксигенации у крыс Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

DOI: 10.15690/vramn.v70.i4.1405

К. Цомпос1, К. Панулис2, K. Тутузас2, Д. Зографос2, A. Папалос3

1 Окружная больница Миссолонги, Этолоакарнания, Греция 2 Афинский университет, Аттика, Греция 3 Экспериментальный научно-исследовательский центр «ELPEN Фармацевтика», S.A., Inc., Co., Греция

Влияние антиоксидантного препарата U-74389G на концентрацию магния при гипоксии—реоксигенации у крыс

Цель исследования: изучить влияние антиоксидантного лекарственного средства U-74389G на содержание магния (Mg2+) в сыворотке крови на примере крысиной модели гипоксии—реоксигенации, используя ранее установленный протокол. Методы: проведено сравнительное нерандомизированное исследование. Эффективность лечения оценивали на основании данных о содержании Mg2+ в сыворотке крови. Концентрацию Mg2+ измеряли после эпизодовреоксигенации длительностью 60 (группы А и С) и 120мин (группы B и D). Согласно протоколу, группам С и D вводили U-74389G, группам A и B не назначали никаких препаратов. Результаты: в исследовании использовали 40 крыс в возрасте 16—18 нед со средней массой тела 231,875 г. Назначение U-74389G существенно не повлияло на концентрацию Mg2+ (отмечено снижение его содержания на 0,28±2,75%; p =0,917). Увеличение длительности эпизода реоксигенации несущественно повышало уровень Mg2+ (на 4,27±2,66%; p =0,107). Одновременное введение U-74389G и увеличение длительности эпизода реоксигенации незначительно увеличивали концентрацию Mg2+ (на 0,36±1,64%;p =0,823). Заключение: применение препарата U-74389G или единов-408 ременное его назначение вместе с процессом реоксигенации не оказывают существенного влияния на содержание Mg2+ в крови у крыс после экспериментальной гипоксии.

Ключевые слова: гипоксия,реоксигенация, U-74389G, магний.

(Для цитирования: Цомпос К., Панулис К., Тутузас K., Зографос Д., Папалос A. Влияние антиоксидантного препарата U-74389G на концентрацию магния при гипоксии-реоксигенации у крыс. Вестник РАМН. 2015; 70 (4): 408-412. Doi: 10.15690/vramn.v70.i4.1405)

Обоснование

Гипоксия—реоксигенация (ГР) определяется по конкретным реакциям, которые проявляются после поражения тканей, и общим признакам и симптомам, связанным с повреждением и восстановлением тканей. Важным достижением данного эксперимента является углубленное изучение процесса восстановления поврежденных тканей тела с помощью антиоксидантных веществ. Несмотря на значимость эксперимента и прогресс в его исследовании, остались невыясненными следующие практические вопросы:

• насколько мощным должен быть антиоксидант;

• когда должен быть введен препарат;

• какая доза препарата считается оптимальной для назначения.

Перспективный эффект антиоксиданта, аминостеро-идного препарата U-74389G, как средства защиты тканей продемонстрирован в нескольких исследованиях [1]. Препарат U-74389G, который относится к аминостеро-идам (лазароидам), часто используют в экспериментах, связанных с ГР (табл. 1). U-74389G (или 21- [4- (2,6-ди-1-пирролидинил-4-пиримидинил) -1-пиперазинил] пре-

C. Tsompos1, C. Panoulis2, K. Toutouzas2, G. Zografos2, A. Papalois3

1 Mesologi County Hospital, Etoloakarnania, Greece 2 Aretaieion Hospital, Athens University, Attiki, Greece 3 Exprerimental Research Center ELPEN Pharmaceuticals, S.A. Inc., Co.

The Effect of the Antioxidant Drug U-74389G on Magnesium Levels During Hypoxia—Reoxygenation Injury in Rats

Objective: The aim of this experimental study was to examine the effect of the antioxidant drug U-74389G in a rat model of hypoxia — reoxy-genation using the previously established protocol. Effects of treatments were evaluated by magnesium (Mg2+) levels in blood. Methods: Nonrandomized controlled study was performed. Mg2+ levels were determined in 60 min (groups A and C) and 120 min (groups B and D) after starting the reoxygenation. Groups A and B received no drugs, whereas rats from groups C and D were administered with U-74389G. Results: 40 rats 16—18 weeks old of a mean weight of 2312 g were employed in the study. It is demonstrated that U- 74389G administration did not alter the Mg2+ levels (decrease in Mg2+ concentration was 0.28+2.75%;p =0.917). Reoxygenation non-significantly increased the Mg2+ levels by 4.27+2.66% (p =0.107). Together, the U-74389G administration and reoxygenation non-significantly increased the Mg2+ levels by 0.36+1.64% (p =0.823). Conclusion: U- 74389G administration, alone or in concert with reoxygenation did not significantly affect Mg2+ level in blood after experimental hypoxia in rats.

Key words: hypoxia, reoxygenation, U-74389G, magnesium.

(For citation: Tsompos C., Panoulis C., Toutouzas K., Zografos G., Papalois A. The Effect of the Antioxidant Drug U-74389G on Magnesium Levels During Hypoxia - Reoxygenation Injury in Rats. Vestnik Rossiiskoi Akademii Meditsinskikh Nauk = Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2015; 70 (4): 408-412. Doi: 10.15690/vramn.v70.i4.1405)

гна-1,4,9 (11) триен-3,20-диона малеат [1]) представляет собой антиоксидант, который предотвращает как индуцированное арахидоновой кислотой, так и железозави-симое перекисное окисление липидов. Доказано благоприятное воздействие препарата на некоторые ткани органов животных (сердце, печень и почки ГР-моделей), а также на уменьшение проницаемости монослоев эндо-телиальных клеток микрососудов [2].

Целью исследования было изучить применение анти-оксидантного лекарственного средства U-74389G на примере крыс в условиях ГР на основе оценки содержания магния в сыворотке крови как возможного биомаркера эффекта препарата.

Методы

Дизайн исследования

Проведено сравнительное нерандомизированное исследование.

Критерии соответствия

Для участия в исследовании отбирали самок белых крыс породы Wistar со средним весом 231,9 г.

Условия проведения

Исследование выполнено на базе Экспериментального научно-исследовательского центра «ELPEN Фармацевтика», S.A., Co. Inc. (Пикерми, Аттика, Греция). Все необходимое для проведения исследования, в т.ч. расходные материалы, вещества и оборудование, было любезно предоставлено указанным центром.

Продолжительность исследования

Эксперимент длился 15 сут.

Описание медицинского вмешательства

Животные (крысы-самки) были размещены в лаборатории за 7 сут до начала эксперимента, им был обеспечен

постоянный доступ к воде и пище. Исследование проведено в соответствии с нормами вивисекции, т.е. участие животных в эксперименте было завершено в указанный период без пробуждения в течение эксперимента и с последующим усыплением грызунов.

Доза препарата U-74389G составила 10 мг/кг массы тела животных.

Эксперимент начинали с премедикации с последующим наркозом. Подробная анестезиологическая техника описана нами ранее [3—5]. Непрерывную подачу кислорода обеспечивали в течение всего хода эксперимента. Также осуществляли непрерывный контроль ЭКГ и аци-дометрию. Гипоксия была осуществлена путем зажима пинцетом нижней аорты почечных артерий в течение 45 мин после того, как был обеспечен доступ к брюшной полости. Реоксигенация была вызвана удалением зажима и восстановлением проходимости нижней аорты. После перекрытия кровотока протокол ГР соблюдали в соответствии с описанными ниже условиями для каждой группы. Введение препарата U-74389G осуществляли в период реперфузии в нижнюю полую вену путем катетеризации.

Анализ в подгруппах

Контрольная группа включала 20 крыс со средней массой тела 252,5+39,3 г, которых подвергли гипоксии в течение 45 мин с последующей реоксигенацей.

Лазароидную (экспериментальную) группу — 20 животных со средней массой 211,25+17,5 г — подвергли гипоксии в течение 45 мин с последующей реоксигенацией, перед которой крысам ввели внутривенно 10 мг U-74389G на 1 кг массы тела.

Крысы в случайном порядке были распределены на 4 группы (по 10 животных в каждой группе) с использованием следующих протоколов ГР:

• гипоксия в течение 45 мин с последующей реок-сигенацией в течение 60 мин (группа А — средняя масса животных 243+45,8 г, среднее содержание Мя2+ 2,98+0,20 мг/дл; табл. 2);

409

Таблица 1. Влияние U-74389G (M ± SD) на сывороточные показатели [3] в зависимости от длительности реоксигенации

Показатель Реоксигенация 1 ч Р Реоксигенация 1,5 ч Р Реоксигенация 2 ч Р U-74389G + реоксигенация Р

Эритроциты, 106/мм3 + 1,39+0,71% 0,716 +0,64+0,32% 0,811 -0,10+0,05% 0,976 +1,05+0,53% 0,491

Общий белок, г/дл -5,48+2,99% 0,066 -7,34+1,76% <0,001 -9,20+2,16% <0,001 -4,08+1,10% <0,001

Щелочная фосфатаза, МЕ/л +22,66+12,37% 0,066 +31,91+7,69% <0,001 +41,16+9,65% <0,001 +17,75+4,79% 0,001

Натрий,ммоль/л + 1,22+0,66% 0,071 +0,17+0,61% 0,771 -0,87+1,03% 0,400 -0,32+0,36% 0,369

Хлор, моль/л -0,58+0,77% 0,453 -0,97+0,53% 0,088 -1,36+0,76% 0,111 -0,75+0,38% 0,016

Кальций, г/дл 0+1,75% 1 -0,14+1,10% 0,878 -0,28+1,54% 0,849 +0,14+0,64% 0,825

Фосфор, г/дл -2,23+5,51% 0,797 -1,61+3,32% 0,579 -1+4,48% 0,813 -1,09+2% 0,577

Среднее значение +2,42+9,22% 0,453 +3,23+12,92% 0,447 +4,05+16,67% 0,450 +1,81+7,20% 0,325

Таблица 2. Вес (г) животных и содержание магния (Mg2+, мг/дл), M +SD

Группа Показатель M SD

А Вес 243 45,78

А Mg2+ 2,9 0,20

B Вес 262 31,11

B Mg2+ 3,18 0,27

C Вес 212,5 17,83

C Mg2+ 3,02 0,25

D Вес 210 18,10

410

• гипоксия в течение 45 мин с последующей реокси-генацией в течение 120 мин (группа В — средняя масса животных 262±31,1 г, среднее содержание Mg2+ 3,18+0,27 мг/дл; см табл. 2);

• гипоксия в течение 45 мин с последующим незамедлительным внутривенным введением U-74389G и реоксигенацией в течение 60 мин (группа С — средняя масса животных 212,5+17,8 г, среднее содержание Мя2+ 3,02+0,24 мг/дл; см. табл. 2);

• гипоксия в течение 45 мин с последующим незамедлительным внутривенным введением U-74389G и реоксигенацией в течение 120 мин (группа D — средняя масса животных 210+18,1 г, среднее содержание Мя2+ 3,12+0,41 мг/дл; см. табл. 2).

Методы регистрации исходов

Измерение содержания Mg2+ проводили по истечении 60 мин после начала реоксигенации (для групп А и С) и по истечении 120 мин после начала реоксигенации (для групп В и D).

Этическая экспертиза

Исследование лицензировано решениями Ветеринарного комитета префектуры Восточной Аттики № 3693/1211-2010 и 14/10-1-2012. При содержании животных и проведении эксперимента соблюдали общепринятые стандарты гуманного ухода за животными.

Статистический анализ

Каждую группу крыс сопоставляли с остальными по весу и содержанию магния в сыворотке крови на основе статистического парного 1-теста Стьюдента (табл. 3).

Применяли обобщенные линейные модели (glm) с зависимыми (концентрация Mg2+) и независимыми (препарат U-74389G) переменными или без применения лекарственного средства, с различной длительностью реоксигенации и сочетанием переменных. В работе было использовано статистическое программное обеспечение STATA 6.0 (Stata Corp., США).

Результаты

Объект исследования

В исследовании было использовано 40 белых крыс-самок линии Wistar весом от 165 до 320 (средний вес 231,9+36,9) г в возрасте 16—18 нед. Животные были распределены на 4 группы.

Основныерезультаты исследования

Введение препарата U-74389G способствует незначительному снижению содержания Mg2+ — на 0,01 (-0,20— -0,18; р =0,916) мг/дл. Эти данные соответствуют результатам парного ^теста Стьюдента (р =0,919). Длительность реоксигенации несущественно повышает концентрацию Mg2+ — на 0,15 (-0,03- -0,33; р =0,106) мг/дл, что также соответствует результатам парного ^теста Стьюдента (р =0,109). Одновременное введение препарата U-74389G и увеличение длительности процесса реоксигенации незначительно увеличивали содержание Mg2+ — на 0,01 (-0,10—0,13; р =0,823) мг/дл. Анализируя вышеуказанные данные и показатели табл. 3, в табл. 4 резюмировали эффект действия препарата U-74389G относительно длительности реоксигенации. При рассмотрении веса животного в

Таблица 3. Статистическая значимость разницы средних при сравнении групп между собой (DG) после применения парного ^теста Стьюдента

DG Показатель Разница Р

А-В Вес, г -19 0,242

А-В Mg2+, мг/дл -0,2 0,101

А-C Вес, г 30,5 0,067

А-C Mg2+, мг/дл -0,04 0,711

А-D Вес, г 33 0,057

А-D Mg2+, мг/дл -0,14 0,427

В-C Вес, г 49,5 0,002

В-C Mg2+, мг/дл 0,16 0,175

В-D Вес 52 <0,001

В-D Mg2+, мг/дл 0,06 0,728

C-D Вес 2,5 0,704

Таблица 4. Абсолютные и относительные (%) показатели изменения влияния U-74389G в зависимости от длительности реоксигенации

Изменение, мг/дл 95% ДИ Длительность реоксигенации, ч t-тест glm

+0,04 (+1,33%) -0,17- -0,25 (±3,59%) 1 0,711 0,696

-0,01 (-0,28%) -0,20- -0,18 (±2,75%) 1,5 0,919 0,916

-0,06 (-1,90%) -0,39- -0,27 (±5,28%) 2 0,728 0,704

+0,15 (+4,27%) -0,03- -0,33 (±2,66%) Только длительность реоксигенации (1,5) 0,109 0,106

+0,01 (+0,36%) -0,10- -0,13 (±4,58%) Взаимодействие препарата и длительности реоксигенации - 0,823

качестве независимой переменной в обобщенном анализе линейных моделей (я1ш) обнаружили незначительную взаимосвязь данного условия с изменением концентрации Мя2+ (р =0,495), что не предполагает дальнейших исследований в данном направлении.

Обсуждение

Сведения об исследованиях случаев возможного влияния гипоксии на содержание магния в крови в опубликованных источниках обнаружены нами не были. Однако имеется много докладов о влиянии изменения содержания магния на функции различных органов. Тем не менее изолированное введение Mg2+ невозможно, что в свою очередь означает, что другой препарат или ион, вводимый с Mg2+, может повлиять на его содержание. J.E. Siegler и соавт. [6] обнаружили незначительную разницу при неблагоприятных исходах (неврологические нарушения, смерть, изменение состояния при выписке или краткосрочные функциональные нарушения) у пациентов, перенесших ишемический инсульт, чей уровень Mg2+ снизился исходя из первоначальных показателей в течение первых 24 ч после поступления, по сравнению с пациентами, у которых концентрация Mg2+ осталась без изменений или выросла. K.C. Lee и соавт. [7] считают безопасным сочетание кар-диоплегии, вызванной раствором Св. Томаса, с раствором гистидин-триптофан-кетоглутарата при условии средней краткосрочной выживаемости после ишемического инсульта порядка 225 мин (почти как и при использовании других методов) при низком перфузионном давлении для сохранения сердца донора. W.M. van den Bergh и соавт. [8] пытались предотвратить или обратить замедленную ишемию головного мозга после субарахноидального кровоизлияния с образованием аневризмы путем внутривенного введения Mg2+ как нейропротективного лекарственного средства в постоянной дозировке 64 ммоль/л в сут, что поддерживало концентрацию Mg2+ в сыворотке крови в диапазоне 1—2 ммоль/л в течение 14 сут. A. Whitelaw и соавт. [9] лечили гипоксически-ишемическую энцефалопатию новорожденных сульфатом магния. H. Ichiba и соавт. [10] установили, что в группе детей с диагнозом «Тяжелая асфиксия» при рождении (оценка по шкале Апгар на 5-й мин <7), получавших после родов инъекции MgSO4, было больше выживших младенцев в возрасте 14 сут, чем в контрольной группе. I.A. Khan и соавт. [11] лечили приобретенную форму синдрома длительного интервала Q—T, причиной которого были инсульт, ишемия миокарда и фосфорорганические соединения, путем внутривенного введения магния. E.M. Hoenicke и соавт. в результате проведения испытаний на сердце кролика [12] установили, что забуференный раствор Кребса—Хенселейта эквивалентен раствору Св. Томаса, но уступает раствору Университета Висконсина. Y. Yano и соавт. [13] остановили разрушение кальция с помощью ограниченной магниевой кардиопле-гии, восстановив кровоток аорты у 79% крыс контрольной группы с ишемией—реперфузией сердца. S. Krause и со-авт. [14] добились значительного угнетения активности Mg^-зависимой АТФазы собаки, возникшего в результате ишемии головного мозга и ацидоза.

C. Heim и соавт. [15] установили нарушение способности к обучению спустя 1 нед после 60-минутного олигемического эпизода ишемии—реперфузии среднего отдела головного мозга взрослых крыс с помощью инъекций дозой 0,3 либо 0,06 мкг хлорида железа (FeCl3). Лазароид U-74389G, мощный ингибитор железоинду-цируемого перекисного окисления липидов, полностью

предотвращает нарушения функций обучения животных как среднего возраста, так и старых. Таким образом, можно предположить, что железоиндуцируемое пере-кисное окисление липидов является причиной трудностей в обучении взрослых животных. Однако, если применять только препарат U-74389G в течение 1 нед после олигемического эпизода, способности к обучению у животных также ухудшаются. R.M. Moore и соавт. [16] поставили эксперимент на лошадях, в котором снизили кровоток ободочной артерии на 20% от исходного показателя на 3 ч. В течение следующих 3 ч толстую кишку подвергли реперфузии. Введение 21-аминостероида U-74389G (10 мг/кг внутривенно) за 30 мин до ободочной реперфузии привело к значительному увеличению средних показателей давления в легочной артерии и правом предсердии, а также к снижению сопротивляемости ободочной артерии по крайней мере в течение 3 ч процесса ишемии—реперфузии. Представленные данные демонстрируют возможность влияния 21-амино-стероидного U-74389G на процесс реперфузии, при этом концентрация Mg2+ в сыворотке крови может считаться биомаркером воздействия препарата в процессе ИР.

Как многократно сообщалось, влияние ишемии на содержание Mg2+ в крови неизвестно. Тем не менее внутривенные инъекции Mg2+ оказывают благоприятное воздействие на защитные функции нервной и сердечной мышечной ткани, а также в отношении развития респираторного ацидоза [9, 10]. Несмотря на то, что U-74389G усиливает процесс реперфузии, он не стимулирует защитные функции нервной ткани, если критерием является способность к обучаемости, и, конечно, неизвестно его влияние на концентрацию магния в крови. Несмотря на то, что в нашем исследовании была предпринята попытка определить непосредственное воздействие препарата U-74389G на уровень Mg2+ в сыворотке крови, результат оказался незначительным и нечетким.

Заключение

Назначение препарата U-74389G, длительность реок-сигенации и взаимосвязь данных условий вызывают статистически несущественные краткосрочные изменения содержания магния в сыворотке крови. Таким образом, концентрация магния не может рассматриваться в качестве биомаркера эффективности применения U-74389G, по крайней мере в указанной в данном эксперименте дозе. Данное исследование предполагает, что увеличение длительности эксперимента или дозы препарата может привести к значительному изменению последствий ги-поксии—реоксигенации.

Источник финансирования

Исследование профинансировано грантами Экспериментального научно-исследовательского центра «ELPEN Фармацевтика» (ЕРЦЭ; Афины, Греция). Научно-исследовательская база для выполнения данного проекта была предоставлена вышеупомянутым учреждением.

Конфликт интересов

Авторы данной статьи подтвердили отсутствие финансовой поддержки исследования / конфликта интересов, о которых необходимо сообщить.

411

ЛИТЕРАТУРА

412

1. Li C., Jackson R.M. Reactive species mechanisms of cellular hypoxia-reoxygenation injury. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2002; 282 (2): 227-241.

2. URL: https://www.caymanchem.com/app/template/Product.vm/ catalog/75860 (Available: 13.06.2015).

3. Shi F., Cavitt J., Kenneth L. 21 aminosteroid and 2 (aminomethyl) chromans inhibition of arachidonic acid-induced lipid peroxida-tion and permeability enhancement in bovine brain microvessel endothelial cell monolayers. Free Radical Biol. Med. 1995; 19 (3): 349-357.

4. Tsompos C., Panoulis C., Toutouzas K., Zografos G., Papalois A. The Effect of the Antioxidant Drug «U-74389G» on Haemoglobin Levels Following a Hypoxemia / Re-oxygenation Protocol in Rats. J. Crit. Care Med. 2015; 1 (3): 102-106.

5. Tsompos C., Panoulis C., Toutouzas K., Zografos G., Papalois A. The acute effect of the antioxidant drug «U-74389G» on mean corpuscular hemoglobin levels during hypoxia reoxygenation injury in rats. Med. Jad. 2015; 45 (1-2): 17-24.

6. Siegler J.E., Boehme A.K., Albright K.C., Bdeir S., Kar A.K., Myers L., Beasley T.M., Martin-Schild S. Acute decrease in serum magnesium level after ischemic stroke may not predict decrease in neurologic function. J. Stroke Cerebrovasc. Dis. 2013; 22 (8): 516-521.

7. Lee K.C., Chang C.Y., Chuang Y.C., Young M.S., Huang C.M., Yin W.H. Combined St. Thomas and histidine tryptophan ketoglu-tarat solutions for myocardial preservation in heart transplantation patients. Transplant Proc. 2012; 44 (4): 886-889.

8. van den Bergh W.M., Albrecht K.W., Berkelbach van der Sprenkel J.W., van Gijn J. Magnesium therapy after aneurysmal subarach-

noid haemorrhage a dose finding study for long term treatment. Acta Neurochir (Wien). 2003; 145 (3): 195-199.

9. Whitelaw A., Thoresen M. Clinical trials of treatments after perinatal asphyxia. Curr. Opin. Pediatr. 2002; 14 (6): 664-668.

10. Ichiba H., Tamai H., Negishi H., Ueda T., Kim T.J., Sumida Y. Randomized controlled trial of magnesium sulfate infusion for severe birth asphyxia. Pediatr. Int. 2002; 44 (5): 505-509.

11. Khan IA. Clinical and therapeutic aspects of congenital and acquired long QTsyndrome. Am. J. Med. 2002; 112 (1): 58-66.

12. Hoenicke E.M., Peterseim D.S., Ducko C.T., Sun X., Damiano R.J. Donor heart preservation with the potassium channel opener pinacidil: comparison with University of Wisconsin and St. Thomas' solution. J. Heart Lung Transplant. 2000; 19 (3): 286-297.

13. Yano Y., Milam D.F., Alexander J.C. (Jr.). Terminal magnesium cardioplegia: protective effect in the isolated rat heart model using calcium accentuated ischemic damage. J. Surg. Res. 1985; 39 (6): 529-534.

14. Krause S., Hess M.L. Characterization of cardiac sarcoplasmic reticulum dysfunction during short-term, normothermic, global ischemia. Circ. Res. 1984; 55 (2): 176-184.

15. Heim C., Kolasiewicz W., Sontag K.H. The effects of the 21 aminosteroid «U-74389G» on spatial orientation in rats after a cerebral oligemic episode and iron-induced oxidative stress. J. Neural. Transm. 2000; 107 (1): 95-104.

16. Moore R.M., Muir W.W., Bertone A.L., Muir W.W., Stromberg P.C., Beard W.L. Effects of dimethyl sulfoxide, allopurinol, 21 aminosteroid «U-74389G» and manganese chloride on low flow ischemia and reperfusion of the large colon in horses. Am. J. Vet. Res. 1995; 56 (5): 671-687.

КОНТАКТНАЯ ИНФОРМАЦИЯ Цомпос Константинос, консультант кафедры акушерства и гинекологии Окружной больницы Миссолонги Адрес: Nafpaktou strv Миссолонги 30200, Этолоакарнания, Греция, тел.: 00302631360237, e-mail: Constantinostsompos@yahoo.com

Панулис Константинос, доцент кафедры акушерства и гинекологии больницы Aretaieion Афинского университета Адрес: 76 Vassilissis Sofias Avenue, Афины 11528, Аттика, Греция, тел.: 00302107286283, e-mail: Kwn.panoulis@gmail.com

Тутузас Константинос, доцент кафедры хирургии больницы Ippokrateion Афинского университета

Адрес: 114 Vassilissis Sofias Avenue, Афины 11527, Аттика, Греция, тел.: 00302132088000, e-mail: Tousur@hotmail.com

Зографос Джордж, профессор кафедры хирургии больницы Aretaieion Афинского университета

Адрес: 76 Vassilissis Sofias Avenue, Афины 11528, Аттика, Греция, тел.: 00302132088000, e-mail: Gzografo@med.uoa.gr

Папалос Апостолос, директор Экспериментального научно-исследовательского центра «ELPEN Фармацевтика», SA. Inc., Co.

Адрес: 95 Marathonos Avenue, Пикерми, 19009, Аттика, Греция, тел.: 003021060393269, e-mail: Apapalois@elpen.gr