CC BY
22УДК: 616.596:612.017
влияние антигенов trichophyton rubprum на рецепторную активность лимфоцитов
Г. А. Винцерская, Марван Якин Нажи Мараках
Кафедра кожно-венерических болезней, Медицинская академия им. С.И. Георгиевского
ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В. И. Вернадского»
Адрес переписки: бул. Ленина 5/7, г. Симферополь, 295006, Республика Крым, Российская Федерация
E-mail: bulovich31@mail.ru
influence of antigenes trichophyton rubprum on reception activity lymphocytes
G. A. Vintserskaya, Y. N. Marwan Maraqah
SUMMARY
In article the data on influence of antigenes of fungis Tr. rubrum on reception activity T- lymphocyte are considered. It is established, that rubromycoses antigenes of mushroom Tr. rubrum cause in patients with chronic forms i/rnn^i^moOnhibiteur) receptors to С5 to a component compliment on lymphocytes, cause redistribution recepteur fields and decrease E- rosettes arising, and such patients have initial depression reception activity of lymphocytes, that can have the important value in an explanation pathogenetics mechanisms of the given disease and further can serve as a starting point in tactics of treatment of such patients.
РЕЗЮМЕ
В статье рассмотрены данные о влиянии антигенов гриба Tr. rubrum на рецепторную активность Т-лимфоцитов. Установлено, что у больных хроническими формами рубромикоза антигены гриба Tr. rubrum вызывают ингибицию рецепторов к С5 компоненту комплемента на лимфоцитах, вызывают перераспределение рецепторного поля и снижение E- розеткообразования. У таких больных существует исходная депрессия рецепторной активности лимфоцитов, что может иметь важное значение в объяснении патогентических механизмов данного заболевания и в дальнейшем послужить отправной точкой в тактике лечения таких больных.
ключевые слова: микоз стоп, антигены гриба, рецепторы лимфоцитов
Актуальность проблемы грибковых инфекций обусловлена их высокой распространенностью. В настоящее время насчитывается около 500 видов грибов, патогенных для животных и человека. Микозами стоп поражено от 15 до 25% всего населения Земли, в Европе эта цифра достигает 40%.
На протяжении длительного времени подход к лечению микоза стоп ограничивался рамками местного применения антифунгицидных средств, и лишь в случаях развития системных микозов прибегают к внутривенному введению лекарственных средств[1, 2, 3].
Особое значение микозы стоп имеют в Крымском регионе в связи с его климатогеографически-ми особенностями: жарким климатом, миграцией и скученностью населения в летний период времени на пляжах морского побережья.
В структуре всех грибковых заболеваний наибольший удельный вес приходится на долю микозов стоп. В 60-80% случаев микоз стоп и онихоми-коз вызывает гриб Trichophiton rubrum (Tr. rubrum) [6, 7].
Патогенез рубромикоза обусловленного грибами Tr. rubrum до настоящего времени окончательно не выяснен. Не вызывает сомнения роль макроорганизма в патогенезе развития рубромико-за. Особое место отводится функциональным нарушениям нервной, эндокринной и других систем
организма у таких больных, расстройствам кровообращения в нижних конечностях [3, 5].
Известно, что у большинства больных микозами стоп значительно ослаблены неспецифические факторы естественной защиты, барьерная функция эпителия, выработка медиаторов воспаления - цитокинов, функциональная активность клеток крови, системы комплемента, лизоцима, проперди-на, интерферонообразования [1, 3].
Достоверно установлено, что у больных микозами в процессе инфицирования и после выздоровления наблюдаются изменения клеточного и гуморального звеньев иммунитета, а также аллергическая перестройка организма [1, 4, 5 12].
При грибковых заболеваниях характеризующихся выраженной воспалительной реакцией, защитные иммунные механизмы включаются в патологический процесс быстро, носят нестойкий характер и иногда даже приводят к самопроизвольному выздоровлению больного. В этих случаях как правило развивается приобретенная невосприимчивость к новому заражению, особенно в первое время после выздоровления. Эта особенность отмечена у больных перенесших острые формы микозов [6, 11].
У больных хронически протекающими формами поверхностных микозов стоп (сквамозной, гиперкератотической) характеризующейся слабо
выраженной воспалительной реакцией, иммунологические изменения выражены значительно меньше [1, 9, 10]. Считается, что у больных с острыми формами дерматомикозов выражены реакции напряженности клеточного иммунитета, а у больных с хроническими формами, со слабо выраженной воспалительной реакцией со стороны кожи преобладают реакции гуморального иммунитета. Такая ситуация нередко (примерно у 75 % больных) наблюдается при микозе, обусловленном Tr. rubrum. Имеются противоречивые данные о том, что гуморальный иммунитет не играет существенной роли в механизмах защиты организма человека от условно- патогенных грибов [10]. Считается, что основную роль в защите от грибковых инфекций играет клеточный иммунитет. Между степенью напряженности клеточного иммунитета и характером воспалительной реакции существует прямая зависимость - чем выраженнее реакция гиперчувствительности, тем более остро протекает воспалительный процесс на коже.
Вирулентность грибов обусловлена различными химическими ингредиентами, входящими в состав клеток или выделяющимися ими в окружающую среду: ферменты, экзо- и эндотоксины, гли-копротеины, липиды.
Как и многим патогенным бактериям, возбудителям микозов присущи свойства адгезии к эпителиальным клеткам, колонизации их, пене-трации через эпителий, инвазии в подлежащие ткани, а также способность противостоять факторам неспецифической и специфической защиты организма.
Адгезины патогенных грибов представлены преимущественно гликоконъюгатами, хотя у многих из них адгезины остаются мало изученными. Колонизация эпителиальных тканей во многом зависит также от присутствия бактерий, нередко проявляющих антагонистические свойства в отношении грибов. Вот почему отдельные микозы могут возникать на фоне проведения интенсивной противобактериальной химиотерапии, являясь суперинфекциями или вторичными инфекциями [1, 10].
Возможность пенетрации через эпителий и последующая инвазия подлежащих тканей зависят, как правило, от наличия и активности в клетках грибов гидролитических ферментов, разобщающих (гиалуронидаза) или/и разрушающих (карбо-гидразы, протеазы) клетки покровных тканей.
Грибы, в отличие от бактерий, содержат в клеточных стенках значительно больше углеводных компонентов, но меньше — белков и липидов. Поэтому антигенные свойства грибных клеток менее
выражены, чем бактериальных, и, как следствие, "напряженность" специфического иммунитета при грибковых инфекциях заметно меньшая; титры IgG антител в сыворотке крови больных невысокие, но, как правило, накапливаются IgE антитела (реагины) и формируется устойчивая гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ). Гликопротеины и протеогликаны клеток патогенных грибов сенсибилизируют организм, причем ответственной за ГЗТ является белковая часть гликоконъюгата (углеводная часть ответственна за гиперчувствительность немедленного типа) [1, 3, 5].
Общие иммунологические реакции, происходящие in vivo в ответ на грибные антигены, принципиально те же, что и реакции, возникающие на введение полноценных бактериальных антигенов.
Полисахаридные антигены (аллергены) грибов относят к разряду Т-независимых. Они ответственны за реакцию гиперчувствительности немедленного типа, тогда как белковые - за реакцию гиперчувствительности замедленного типа.
В случаях контакта грибкового антигена с клеточным компонентом иммунной системы при микозах развивается гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ), выявляемая через 10-14 дней после заражения, а также накапливаются иммуноглобулины различных классов. Может также активироваться комплемент по классическому или альтернативному пути [1].
Невзирая на совершенство средств и мер профилактики грибковых заболеваний, развитие фармакологических средств лечения, много аспектов этой проблемы остаются по прежнему столь же актуальными, как и до применения антифунгицидов. Одним из перспективных направлений исследований является изучение особенностей иммунного ответа макроорганизма при различных клинических формах микозов.
Цель исследования: изучение влияния антигенов Tr. rubrum на изменение рецепторной активности лимфоцитов.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Под нашим наблюдением находился 31 больной с микозом стоп в возрасте от 31 до 42 лет, с давностью заболевания от 3-х месяцев до 18 лет. Данные по клиническим формам заболевания представлены в таблице 1. У всех больных клинический диагноз был подтвержден лабораторно:микроскопически и бактериологически. В исследование включались больные у которых в культуральном исследовании был обнаружен только рост Tr. Rubrum.
Таблица 1
Распределение больных микозами стоп по преобладанию клинических проявлений
Больные микозами стоп Сква-мозная форма Сква-мозно-гипер-кера-тоти-ческая форма Интер-триги-нозная форма Дисги-дроти-ческая форма
Острые
формы - - 10 5
п=15
Хронические формы п=16 11 5 - -
Продолжение табл.2
Хрони-
ческие
формы 41,2±2,2 53,2±2,2 6,2±1,4 11,1±2,2
n=15
P, <0,001 <0,01 <0,001 <0,01
P2 <0,01 <0,001
Контр-
ольная
группа 60,2±2,7 62,3±3,1 21,3±2,7 27,4±2,2
n=20
P2 >0,5 <0,01
Лимфоциты выделяли из венозной крови больных рубромикозом методом флотации на гардиен-те фикол - верографин (r= 1,078 г/см3).
Антигены гриба Tr. rubrum получали после культивирования гриба в течение 10-12 суток, которые высушивали до постоянного веса 30° спиртом, гомогенизировали и выдерживали в 0,15 мл раствора NaCl при t=37°C в течение суток.
Постановка серий опытов:
1 серия: лимфоциты +АГ Tr. rubrum ^ отмывание ^ Е- розеткообразование (по Kamoin M. 1981)
2 серия: лимфоциты ^ отмывание ^ Е- розет-кообразование
3 серия: лимфоциты +АГ Tr. rubrum ^ отмывание ^ Е- розеткообразование с пекарскими дрожжами
4 серия: лимфоциты ^ отмывание ^ E- розет-кообразование с пекарскими дрожжами.
Полученные препараты окрашивали по Романовскому и микроскопировали.
Полученные препараты окрашивали по Романовскому и микроскопировали.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Результаты полученных данных представлены в таблице 2.
Таблица 2
Сравнительная характеристика изменения активности рецепторного поля лимфоцитов под влиянием АГ Tr. rubrum
Примечание:
Р - показатель статистической достоверности, где Р1 - показатель полученный при сравнении результатов с показателями контрольной группы; Р2 - показатель полученный при сравнении результатов опытных и контрольных исследований.
Как свидетельствуют представленные в таблице 2 данные, лимфоциты здоровых людей способны к формированию розеткообразующих лимфоцитов с пекарскими дрожжами, что является свидетельством наличия на данных иммунокомпетентных клетках рецепторов к С5 компоненту комплемента. После обработки лимфоцитов антигенами грибов Tr. rubrum, наблюдается уменьшение числа лимфоцитов, экспрессирующих рецепторы к пекарским дрожжам, что может указывать на то, что именно АГ грибов Tr. rubrum вызывают блокаду С5 компонента комплемента (27,4±2,2% без АГ и 21,3±2,7 с АГ Р<0,01).
У больных с острыми формами микоза, по сравнению с результатами исследования здоровых людей, не выявлено статистически достоверных различий, однако у больных хроническими формами наблюдается как без АГ Tr. rubrum, так и с АГ Tr. rubrum (причем в значительной степени) статистически достоверное уменьшение рецепторной активности клеток. Данное явление можно объяснить наличием у больных хроническим формами исходной блокады С5 рецепторов. Дополнительное внесение АГ Tr. rubrum не приводит к усугублению депрессии способности лимфоцитов экспрессиро-вать рецепторы к С5 компоненту комплемента.
При анализе способности лимфоцитов экс-прессировать E- рецепторы установлено, что у здоровых людей и у больных острыми формами грибковых заболеваний не наблюдается сколько-нибудь значимого влияния АГ Tr. rubrum на рецепторную активность лимфоцитов, тогда как у больных хроническими формами выявлена исходная депрессия E- розеткообразования, усиливающаяся при добавлении АГ Tr. rubrum. Чем можно объяснить данное явление? По всей видимости, длительное воздействие одного АГ Tr. rubrum приводит к пе-
Больные 1 серия 2 серия 3 серия 4 серия
Острые
формы 58,2±2,3 57,2±3,1 18,8±2,3 26,2±2,7
n=15
P1 <0,5 <0,1 >0,5 <0,5
P2 >0,5 <0,5
рераспределению активных центров рецепторного поля, и выключению рецепторов строго специфичных для субпопуляции Т- лимфоцитов.
Таким образом результаты наших исследований показали, что у больных хроническими формами микоза стоп имеет место дисфункция рецептор-ного поля лимфоцитов, которое препятствует развитию адекватного иммунного ответа, способствует хронизации кожного процесса и резистентности к традиционным терапевтическим мероприятиям.
ВЫВОДЫ:
1. Установлено, что антигены грибов Tr. rubrum вызывают ингибицию рецепторов к С5 компоненту комплемента на лимфоцитах.
2. Выявлено, что у больных хроническими формами рубромикоза существует исходная депрессия рецепторной активности лимфоцитов.
3. Зарегистрировано, что антигены грибов Tr. rubrum у больных хроническими формами ру-бромикозов вызывают перераспределение рецепторного поля и снижение E- розеткообразования.
ЛИТЕРАТУРА
1. Елинов Н.П. Особенности иммунитета при грибковых заболеваниях. В кн.: Мед. микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. Л.Б. Борисова и А.М. Смирновой. - 1994 - С.219 - 220.
2. Кашкин П.Н. Дерматомикозы - Л: Медгиз, 1950 - 227 с.
3. Кашкин П.Н., Лисин В.В. Практическое руководство по медицинской микологии. - Л., Медицина 1983, 191 с.
4. Кубанова А.А., Потекаев Н.С., Потекаев Н.Н. Руководство по практической микологии М.: 2001, 144 с.
5. Куценко А.К. Клиника, дифференциальная диагностика, патогенез, патогенетическая терапия и профилактика поражений кожи стоп. - Л.: Изд-во ВмедА, 1971. - 28 с.
6. Родионов А.Н. Грибковые заболевания кожи (Рук-во для врачей) - СПб: «Питер», 2000 - 288 с.
7. Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Основы медицинской микологии (В кн.: Медицинская микробиология, под ред. Д.К. Новикова)- Витебск: 2002
- 325 с.
8. Федотов В.П. Современные вопросы диагностики и терапии дерматомикозов // Дерматовенерология, косметология и сексопатология - № 2-3 (4)
- 2001 - С.5 - 11
9. Breitenbach M., Crameri R., Lehrer S.B. Fungal allergy and pathogenicity. Basel: karger, 2002. 310 p.
10. Calderone R.A., Cihlar R.L. Fungal pathogenesis: principals and clinical applicatios - NY: Marcel Dekker, 2002, 762 p.
11. Crissey J.T., Lang H., Parish L.C. Manual of medical mycology. Cambridge: Blackwell Science, 1995,263 p.
12. Kamoun М. Identification of a human T-lymphocyte surface protein associated with the e-rosette receptor // J.Exp.Med. - 1981, Vol. 153, P 207212.
