CC BY
10
3. Sjatynja, M. L., Popovych, V. P., Glushhenko O. M. et. al. (2011). Indyvidual'ne vygotovlennja likiv v aptekah. Farmacevtychnyj chasopys, 4, 90-95.
4. Carvalho, M., Tuleu, C., Taylor, K. (2008). Current Compounding Practices in Europe. International Journal of Pharmaceutical Compounding, 2, 94-99.
5. Vail, J., Naddeo, A. M., Kinget, R. et. al. (2008). Compounding Around the World. International Journal of Pharmaceutical Compounding, 2, 102-115.
6. Kolesnik, M. (2007). Jekstemporal'naja receptura: re-alii i perspektivy. Provizor, 19, 57-60.
7. Kolesnik, M. (2007). Jekstemporal'noe proizvodstvo: byt' ili ne byt'? Provizor, 3, 8-12.
8. Kosjachenko, K. L., Nemchenko, A. S. (2011). Analiz suchasnyh organizacijno-ekonomichnyh problem vygotovlennja likars'kyh zasobiv v umovah apteky. Upravlinnja, ekonomika ta zabezpechennja jakosti v farmacii', 2 (16), 34-39.
9. Krasnjuk, I. I., Sboev, G. A. (2006). Problemy gar-monizacii aptechnoj praktiki s mezhdunarodnoj sistemoj farma-cevticheskoj pomoshhi. Remedium, 8, 38-40.
10. Kryvov'jaz, O. V., Golod, A. S. (2011). "Personal'ni liky" jak racional'nyj shljah vidrodzhennja ekstemporal'noi' receptury v Ukrai'ni. Aktual'ni pytannja farmacevtychnoi' i medychnoi' nauky ta praktyky, 24 (2), 81-83.
11. Ponomareva, E. A., Tjurenkov, I. N. (2010). Realii aptechnogo izgotovlenija lekarstvennyh sredstv. Remedium, 11, 47-48.
12. PIC/S Guide to good practices for the preparation of medicinal products in healthcare establishments. PE 010-3, 1 October 2008. Available at: http://www.picscheme.org/
13. A guide for compounding practitioner USP 35 - NF 30 / The United States Pharmacopeial Convention (2012). Rock-ville, 317.
14. Jevtifjejeva, O. A. (2013). Analitychnyj ogljad systemy zabezpechennja jakosti ekstemporal'nyh likars'kyh zasobiv u rozvynutyh krai'nah svitu. Visnyk farmacii', 1, 9-18.
15. Sabirzhan, R. R. (2012). Aptechnoe izgotovlenie lekarstvennyh form dlja lechebno-profilakticheskih uchre-zhdenij: izuchenie sovremennoj nomenklatury. Nauchnye ve-domosti BelGU. Serija: Medicina. Farmacija, 10-2 (129), 31-35.
16. Tihonov, A. I. (Ed.) (1999). Spravochnik jekstem-poral'noj receptury. Kyiv: MORION, 496.
17. Foppe vann Mil, Dzh. V., Dzh. Mak Elni, T. F. (2001). Obshhestvennaja farmacija v mire. Farmac. zhurn., 6, 27-32.
18. World Health Organization official website. Available at: http://www.who.int/en/
19. Schotik, D. (2001). Stability Issues for Compounding Extemporaneously Prepared Oral Formulations for Pediatric Patients. Int J Pharm Compd., 1, 9.
20. Zdoryk, O. A. (2013). Svitovyj dosvid vyznachenn-ja terminu prydatnosti likars'kyh zasobiv aptechnogo vygo-tovlennja. Farmac. zhurn., 6, 42-47.
Дата надходження рукопису 19.10.2015
Валieв Абдуджаббор Халкуллойович, кандидат фармацевтичних наук, заыдуючий кафедрою, кафедра фармацевтично! технологи, Таджицький державний медичний ушверситет iMeHi Абуалi i6H CiHO, пр. Ру-даки, 139, м. Душанбе, Таджикистан, 734003 E-mail: valizoda83@gmail.com
Здорик Олександр Анатолшович, кандидат фармацевтичних наук, доцент, кафедра фармацевтично! xi-ми, Нацюнальний фармацевтичний Унiверситет, вул. Пyшкiнська, 53 м. Харшв, Укра!на, 61002 E-mail: oleksandr_zdoryk@ukr.net
УДК 547.792:547.865.5
Б01: 10.15587/2313-8416.2015.54989
ВИЗНАЧЕННЯ ЦИТОТОКСИЧНОСТ1 ПОХ1ДНИХ [1,2,4] ТРИАЗОЛО [4,3-а] П1РАЗИНУ © К. Ю. Куликовська, I. О. Журавель
За допомогою тест-системи CellTiter-Glo було визначено цитотоксичшстъ ряду Ы7-арил/бензил-3-тiоксо-2,3-дигiдро-7Н-[1,2,4]триазоло-[4,3-а]пiразин-8-онiв, Их 3-S-ацетамiдiв та 3-S-бензилпохiдних. Синтез сполук здтснено на основi ратше розроблено'1' та опублковано'1' схеми. Будова та чистота спо-лук доведена методами 'Н-ЯМР та елементного аналiзу.
Методи до^дження. Метод базуетъся на визначенш кiлъкостi життездатних клтин в кулътурi за iнтенсивнiстю люмiнесценцii сумiшi клтинноИ суспензи раку передмiхуровоi залози Du145, розчину досл^ джувано'1 речовини та CellTiter-Glo реагенту. Як препарати порiвняння використовували туберцидин i таксол. Встановлений за результатами параметр ЦК50 характеризуе здатнiстъ аналгзованих речовин викликати загибелъ клтин.
Результати. Цитотоксична концентраця синтезованих нами 3-замщених N7-арил/бензил-2,3-дигiдро-7Н-[1,2,4]триазоло-[4,3-а]пiразин-8-онiв не перевищувала максималъно'1' концентраций яка тестувалася, i була вища за 30 мкМ. Це свiдчитъ про повну вiдсутнiстъ негативного впливу зазначених речовин на клтини раку передмiхуровоi залози Du145.
Висновки. Виявлено, що дан сполуки не проявляютъ токсично'1' дп на живу клтину, що робитъ актуа-лъною можливiстъ розробки нових ефективних i безпечних лтарсъких засобiв на 1'х основi. Також недощ-лъним е пошук протипухлинних засобiв серед похiдних N7-арил/бензил-2,3-дигiдро-7Н-[1,2,4]триазоло-[4,3-а]пiразин-8-онiв
Ключовi слова: [1,2,4]триазоло[4,3-а]пiразини, цитотоксичнктъ, цитотоксична концентрацiя, тест-система CellTiter-Glo, кулътура клтин, туберцидин, таксол
With test systems CellTiter-Glo was determined the cytotoxicity of series N7-aryl/benzyl-3-tioxo-2,3-dihydro-7H-[1,2,4]triazolo-[4,3-a]pyrazin-8-ones, their 3-S- acetamides and 3-S-benzyl derivatives. The synthesis of the compounds performed based on the previously developed and published scheme. Structure and purity of the compounds proved with 1H-NMR and element analysis.
Methods. The method is based on determining the number of viable cells in culture by intensity of luminescence mixture of cell suspension of prostate cancer Du145, solution of the substance and CellTiter-Glo reagent. Tubercidin and taxol were used as reference drugs. The parameter CK50, that has been set according to a study, describes the ability of analyzed substances induce cell death.
Results. Cytotoxic concentration of synthesized 3-substituted N?-aryl/benzyl-2,3-dihydro-7H-[1,2,4]triazolo-[4,3-a]pyrazine-8-ones not exceed the maximum concentration of compounds, which were tested, and was above 30 mkM. This demonstrates the complete absence of negative impact of these substances on cells of prostate cancer Du145.
Conclusions. Found that these compounds do not exhibit toxic effects on living cells, making the actual possibility of developing new effective and safe drugs on their base. Also inappropriate to search anticancer drugs among of the N?-aryl/benzyl-2,3-dihydro-7H-[1,2,4]triazolo-[4,3-a]pyrazine-8-one derivatives Keywords: [1,2,4]triazolo[4,3-a]pyrazines, cytotoxicity, cytotoxic concentration, test system CellTiter-Glo, cell culture, tubertsydyn, taxol
1. Вступ
Дослвдження токсичносп речовин мае важливе значения у виршенш питань, пов'язаних з охороною здоров'я. Особливо актуальним е вивчення токсич-них властивостей потенцшних лжарських субстан-цш, яш у майбутньому можуть бути впроваджеш на фармацевтичний ринок. Проведення таких випробу-вань, по-перше, убезпечуе пащенпв ввд небажаних поб1чних ефекпв, по-друге, надае можливють отри-мати ввдповщ щодо мехашзм1в розвитку негативних реакцш та вар1аш1в 1х усунення.
Визначення токсично! ди лшарських субстан-цш проводять на етапах доклшчних i клшчних дос-лвджень. За останш роки значно зрю арсенал методiв доктшчно! оцшки активносп та токсичностi лжар-ських засобiв та розширено перелiк параметрiв, за якими проводять випробування [1].
2. Постановка проблеми у загальному ви-глядi, актуальнiсть теми та li зв'язок i3 важливи-ми науковими чи практичними питаннями
В крашах Свропи на сьогоднi система доклшь чних випробувань фармацевтичних препаратiв вклю-чае обов'язкове вивчення впливу даних речовин на живу клiтину, що встановлюють за низкою парамет-рiв [2]. Один iз критерив, на який звертають особли-ву увагу - рiвень цитотоксичностi дослщжувано! субстанций Вiн мае як позитивне значения (пошук ль карських субстанцiй для терапи онкозахворювань), так i негативне (прояв негативних реакцiй на окремi органи та системи оргаиiв).
3. Анат останнiх дослiджень i публжацш, в яких започатковано розв'язання дано! проблеми i на якi спирасться автор
До основних переваг використання методiв in vitro слiд ввднести економiчнiсть, високу бюдоступ-нiсть, точнють дозування, низьку iнвазивнiсть, стати-стичну достовiрнiсть, точнiсть i швидк1сть визначення, гуманнють i можливiсть масового скриншгу.
Однiею з таких моделей е постановка бюлогь чних дослщв на культурах клiтин [3-8]. Культури клiтин людини та тварин в якосп бiологiчних тест -
систем все частше використовуються дослiдниками через простоту 1х культивування, можливiсть контролю та велику стутнь вщгворюваносп у порiв-ияннi iз тест-системами in vivo. На протязi всього експерименту збержаеться можливiсть вiзуального нагляду за клiтинами за допомогою мжроскопу, що в рядi випадкiв мае принципове значення . Також важливу роль вiдiграе скорочення часу та собiвар-тостi експерименту. Сдиний нюанс - вимоги до ста-ндартизаци якостi культури клiтин i тканин. В останне десятирiччя розробленi i впровадженi принципи GLP для альтернативних методiв: на 3-му Мiжиародному Конгреа, який присвячений альтер-нативним методам використання тварин в наукових цiлях, висунута iнiцiатива створення Good Cell Culture Practice (GCCP), проект яко! розроблений i роз-глядаеться Свропейським центром валщаци альтернативних методiв [9].
4. Видiлення iiciui|)iiiiciiii\ рашше частин загально! проблеми, якiй присвячена стаття
На вiдмiну ввд бiльшостi фундаментальних i прикладних дослщжень у бюлоги, медицинi та фар-маци, як1 тим чи шшим чином пов'язанi iз дослiдами на тваринах, при вивченш токсичностi рiзноманiтних препаратiв i сполук, починаючи з 80-х рошв ХХ сто-лггтя, широко використовують альтернативнi бюло-пчш моделi. Впровадження таких пiдходiв дозволяе мiнiмiзувати к1льк1сть пiддослiдних тварин або пов-нiстю вилучити 1х iз експерименту та автоматизувати процес, що значно прискорюе процедуру визначення.
Метод визначення цитотоксичносп на клггин-нш культурi на сьогоднi широко використовуеться в США i Gвропi як експес-метод в токсикологи, фармакологи, косметологи.
5. Формулювання цшей (завдання) статт
Метою роботи стало дослщження цитотоксич-ностi вперше синтезованих Ж7-арил/бензил-3-тюксо-2,3-дипдро-7Я-[1,2,4]триазоло[4,3-а]тразин-8-ошв, 1х 3-S-ацетамiдiв та 3^-бензилпохщних на культури клiтин раку передмiхуровоl залози лши Dui45 за до-помогою тест-системи CellTiter-Glo.
6. Виклад основного матерiалу дослвдження (методiв та об'eктiв) з обгрунтуванням отриманих результат
Для проведення експерименту використову-вали культуру клiтин раку передмiхурово! залози лШП DUl45.
Культивування клiтин проводили в середовищi ДМЕМ (подвiйна модифiкацiя середовища 1гла), що мiстигь 10 % фетально! бичачо! сироватки, 2 мМ глу-тамшу, 1 % замiннi амiнокислоти, 0.2 мг/мл трувату натрiю, 100 од/мл пенщилшу i 100 мкг/мл стрептомь цину при температурi 37 °С, повiтря 95 %, С02 5 %, достатньому зволоженнi.
Субкультивування клгган. Нарощували клгга-ни у 175 см2 флаконах до ~ 90 % моношару. Далi вщ-бирали культуральне середовище iз флакону. Кль тинний шар промивали два рази розчином Версена (~10 мл на флакон) для видалення залишк1в сироватки. Додавали розчин аккутази (~2 мл на флакон) i ставили в СО2-шкубатор на 3-5 хв при 37 °С для вь докремлення клiтин. Пiсля повного ввдокремлення клiтин вiд флакону додавали культуральне середовище i акуратно диспергували клiтини. Шдраховува-ли клiтини, використовуючи автоматичний клиин-ний лiчильник i пiдготовлювали суспензш необхвд-но! концентраций
Клiтинну суспензш готували як описано для культивування клгган, клiтини рахували за допомо-гою автоматичного клгганного лiчильника, i доводили концентрацш клiтин до 2 105 клiтин/мл (4000 кль тин на лунку). Клггани висаджували у 384-лунковi плашки за допомогою Вютек 384 NX по 20 мкл кль тинно! суспензп в кожну лунку. У контрольш лунки додавали по 20 мкл середовища. Плашки вщцентри-фуговували при 180g 1 хвилину i залишали шкубува-тися при 37 °С, 5 % СО2 на 24 години.
Дослвджуваш речовини розчиняли у ДМСО в концентраци 6 мМ. У якостi контрольних iнгiбiторiв використовували туберцидин i таксол, вихiднi концентрацп яких були 20 мМ i 200 мкМ вiдповiдно. Готували 200-разовi серiйнi розведення дослщжува-них речовин в ДМСО iз шагом 3.16 за допомогою Бюшес 2000.
Дослвджуваш речовини розводили в середо-вищi 100 разiв. В кожну лунку промiжних 384-лункових плашок вносили по 99 мкл середовища за допомогою Вютес 384 NX i додавали по 1 мкл се-рiйних розведень дослщжуваних речовин в ДМСО за допомогою Вютес 384 NX. Далi в кожну лунку у двох повторах, тобто кожну концентрацш речовини, яка тестуеться, додавали 2-разовi сершш розведення дослiджуваних речовин в середовищi по 20 мкл. До контрольних лунок додавали по 20 мкл середовища, що мютить 1 % ДМСО зашсть дослiджуваних речовин. Плашку вщцентрифуговували при 180g 1 хвилину i iнкубували при 37 °С, 5 % СО2 на 24 годин.
CellTiter-Glo буфер i СеПТйег^о реагент ро-змороджували, пiдiгрiвали до шмнатно! температу-
ри i акуратно змiшyвали у спiввiдношеннi 1:1. Шсля 24 годин шкубацд з речовинами в кожну лунку плашки додавали по 10 мкл отриманого CellTiter-Glo розчину за допомогою Biomec 384 FX. Плашку ввд-центрифуговували при 180g 1 хвилину i залишали iнкyбyватися при кiмнатнiй температyрi на 10 хви-лин. Шсля 10 хвилин шкубацд з CellTiter-Glo, штен-сивнiсть люмшесценци вимiрювали на люмшесцент-ному рiдерi Wallac 1420 VictorLight.
У наш час використовуеться великий арсенал добре вивчених стандартизованих методiв для оцiнки цитотоксичностi синтетичних речовин з використан-ням культур клгган рiзного органного походження [10]. В данш робот нами розглянуто метод визна-чення цитотоксичносп ряду Ж7-арил/бензил-3-тюксо-2,3-дипдро-7Я-[1 ,2,4]триазоло [4,3 -а]шразин-8-ошв, !х 3-S-ацетамiдiв та 3-8-бензилпохвдних за допомогою тест-системи CellTiter-Glo (Promega).
Даний метод дозволяе оцшити вплив досль джуваних речовин на життездатшсть клгган. В якосп тест-систем можуть бути обранi як yмовно-нормальнi клггани печшки людини лши HepG2, яш дозволяють передбачити гепатотоксичнiсть речовин in vitro, так i клггани пухлин людини рГзного походження. В да-ному експериментальному дослiдженнi нами викори-станi клггани раку передмixyровоi залози Du145.
В рамках представленого дослвдження проведено визначення як цитотоксичносп речовин, так i здатностi речовин впливати на пролТферацш ракових клгган. Отримана iнформацiя може бути використана для оцшки перспективностi дослiджyваниx речовин в розробщ нових протипухлинних препарата, а також для розумшня того, чи може бути речовина цитоста-тиком, та насшльки специфiчно вона зупиняе рют клгган пухлини, що дае можливють оцшити специфь чнють протипухлинно! дд за типами раку.
В якосп к1льк1сного параметру для оцшки цитотоксичносп використовували параметр ЦК50, що вiдповiдае концентраци речовини, коли гине 50 % клгган.
Значення ЦК50 розраховували за допомогою про-грами GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, Inc.) за кри-терiем мiнiмiзацii квадратiв ввдхилення експеримента-льних точок ввд теоретичноi криво! (табл. 1).
Як об'екти дослщження нами обраш ранiше синтезованi Ж7-арил/бензил-3 -тюксо-2,3-дигвдро-7Я-[1,2,4]триазоло[4,3-а]шразин-8-они, !х 3-S-ацетамiди та 3-8-бензилпохвдш [11], як1 отримували за наступ-ною синтетичною схемою (схема 1). В якосп вих1д-них сполук використовували Ж1-арил-3-пдрази-но-шразин-2(1Я)-они 1{1-5}, яш отримували на основГ моноестерiв оксаламових кислот [12]. Як циктзую-чий агент нами використаний арковуглець в присут-носп надлишку триетиламiнy. АлшлуючГ агенти -бензо!лхлориди та ариламвди хлороцтово! кислоти, як найбiльш поширеш реагенти для введения рiзноманi-тних замюнишв до структури бюлопчно активних речовин.
Rk
N
O O
H
N-NH2 CS2, n(C2h5)^ Rb-N ДМФА
O
N
R2-C1
R1-
N
2(1-5}
N4
S
NH
N(C H ) ДМФА, t
N
T УN^
I I /]
3(1-9} R2
Схема 1
N S
R1 = Ph; 3-OMePh; 4-OMePh; 4-OEtPh; 3-FPh; 4-FPh. R2 = 4-MePhCH; 4-C1PhCH2; 4-C1PhNHCOCH2.
За допомогою зазначено! синтетично! модел отримано 14 сполук, яю вивчали на цитотоксичшсть в бюлопчному експерименп. Дослвджуваш речовини розчиняли в ДМСО в концентрацл 6 мМ. Як контро-льш 1нг1б1тори використовували туберцидин i таксол, вихвдш концентраци яких становили 20 мМ i 200 мкМ ввдповвдно. Рiвень цитотоксичносп визначали люмь несцентним методом. Метод базуеться на визначеннi кiлькостi життездатних клiтин в культурi на основi
параметру iнтенсивностi люмшесценци, що характе-ризуе здатнiсть дослiджуваних речовин викликати загибель клiтин. Результати наведенi в табл. 1.
Як видно з табл.1, синтезоваш сполуки не про-являють цитотоксично! активностi, тому можуть бути використанi, як перспективнi субстанцп для пошуку безпечних лiкарських засобiв. Також слiд вiдмiтити, що серед сполук зазначених рядiв не доцшьно прово-дити пошук речовин з протипухлинною активнiстю.
Таблиця 1
Цитотоксичнiсть ^-арил/бензил-3-тюксо-2,3-дипдро-7Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]шразин-8-ошв, !х 3-S-ацетамiдiв _та 3-S-бензилпохiдних_
Код сполуки R1 R2 Максимальна концентрацiя, яка тестуеться, мкМ Цито-токсична концентращя, ЦК50, мкМ % токсичносп при максимально концентраци
Туберцидин 100 0.232 95
Таксол 1 0.013 71
O I 1 NH S
2{1} 3-OMePh - 30 >30 нетоксична
2{2} 4-OMePh - 30 >30 нетоксична
2{3} 4-OEtPh - 30 >30 нетоксична
2{4} 3-FPh - 30 >30 нетоксична
2{5} 4-FPh - 30 >30 нетоксична
O I 1 NH S^R2
3{1} Ph 4-MePhCH2 30 >30 нетоксична
3{2} 4-OMePh 4-MePhCH2 30 >30 нетоксична
3{3} 4-FPh 4-MePhCH2 30 >30 нетоксична
3{4} Ph 4-ClPhCH2 30 >30 нетоксична
3{5} 4-OMePh 4-ClPhCH2 30 >30 нетоксична
3{6} 4-FPh 4-ClPhCH2 30 >30 нетоксична
3{7} Ph 4-ClPhNHCOCH2 30 >30 нетоксична
3{8} 4-OMePh 4-ClPhNHCOCH2 30 >30 нетоксична
3{9} 4-FPh 4-ClPhNHCOCH2 30 >30 нетоксична
7. Висновки
Дослвджуваш Ж7-арил/бензил-3 -тюксо -2,3 -ди-пдро-7Я-[1,2,4]-риазоло[4,3-а]шразин-8-ошв, ïx 3-S-ацеташди та 3-S-бензилпоxiднi при визначенш за допомогою тест-системи CellTiter-Glo не проявляють токсичного впливу на культурi тканин раку передмь xуровоï залози лши Du145, тому можуть розглядатися як перспективнi фармакологiчнi агенти.
Слад вiдмiтити, що серед сполук зазначених рядiв не доцiльно проводити пошук речовин з проти-пухлинною актившстю.
Лiтература
1. Наказ Мiнiстерства Охорони Здоров'я Украши №944 вiд 14.12.2009 «Про затвердження Порядку проведения доклшчного вивчення лiкарськиx засобш та експер-тизи матерiалiв доклiиiчиого вивчення лiкарськиx засобш» [Електронний ресурс]. - Режим доступу: http://zakon5.rada. gov.ua/laws/show/z0053-10
2. Clemedson, С. MEIC evaluation of acute systemic toxicity [Text] / С. Clemedson, E. McFarlane-Abdulla, M. An-dersson et. al. - ATLA (Alternatives to Laboratory Animals), 1996. - P. 251-311
3. Червонская, Г. П. Культура клеток - альтернативная биологическая модель в токсикологических исследованиях [Текст] / Г. П. Червонская // Тез. докл. 1 съезда токсикологов России. - М., 1998. - 328 c.
4. Дядищев, Н. Р. Биологические модели in vitro в токсикологии [Текст] / Н. Р. Дядищев, С. П. Рыбалкин, А. И. Марченко // Тез. докл. 1 съезда токсикологов России. - М., 1998. - С. 276.
5. Еропкин, М. Ю. Культуры клеток как модельная система исследования токсичности и скрининга цитопро-текторных препаратов [Текст] / М. Ю. Еропкин, Е. М. Еропкина. - СПб.: Морсар АВ, 2003. - 239 с.
6. Botham, P. Development of in vitro techniques for irritancy testing [Text] / P. Botham, R. Lewis // Hum. And Exp. Toxicol. - 1996. - Vol. 15, Issue 2. - P. 141.
7. Hurna, E. In vitro metody a ich vyuzitie v toxikologii [Text] / E. Hurna // Veterinary medicine. - 2003. - Vol. 42, Issue 7. - P. 213-215.
8. Combes, R. Ethical investment what is it, and what are the implications for industry funding of research into alternatives? [Text] / R. Combes, M. Balls // ATLA. - 2001. -Vol. 29, Issue 1. - P. 55-62.
9. Hartung, T. Good cell culture practice (GCCP) - an initiative for standardization and quality control of in vitro studies. The establishment of an ECVAM Task Force on GCCP [Text] / T. Hartung, G. Gstraunthaler, S. Coecke et al. // AL-TEX. - 2001. - Vol. 18, Issue 1. - P. 75-78.
10. Данлыбаева, Г. А. Цитотоксичность карбора-нилсодержащих соединений [Текст] / Г. А. Данлыбаева, A. A. Жылкибаев, В. А. Рыков и др. // Биотехнология. Теория и практика. - 2012. - № 3. - С. 49-53.
11. Куликовская, К. Ю. Cиитез производных N7-арил[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-3,8(2H,7H)-дионов и их 3-тиоксоаналогов как потенциальных фармацевтических аген-
тов [Текст] / К. Ю. Куликовская, С. С. Коваленко, А. Г. Друш-ляк и др. // Вестник КазНМУ. - 2014. - № 5 - С. 132-136.
12. Kovalenko, S. S. A suitable synthesis of [1,2,4]-triazolo[4,3-a]pyrazin-8(7H)-one derivatives [Text] / S. S. Kovalenko, K. Yu. Kulikovska, O. G. Drushlyak et. al. // Chemistry of Heterocyclic Compounds. - 2014. - Vol. 8. - Р. 1243-1249.
References
1. Order of the Ministry of Health of Ukraine №944 of 14.12.2009 «On approval of the pre-clinical study of medicinal products and expert evaluation of pre-clinical study of medicinal products». Available at: http://zakon5.rada.gov.ua/ laws/show/ z0053-10
2. Clemedson, С., McFarlane-Abdulla, E., Andersson M. et. al. (1996). MEIC evaluation of acute systemic toxicity. ATLA (Alternatives to Laboratory Animals), 251-311.
3. Chervonskaya, H. P. (1998). Kul'tura kletok - al'ter-natyvnaya byolohycheskaya model' v toksykolohycheskykh yssledovanyyakh [Cell culture - alternative biological model in toxicology studies]. Abstracts of the 1st Russian Congress of Toxicologists (Moscow), 328.
4. Dyadyshchev, N. R., Rybalkyn, S. P., Marchenko, A. Y. (1998). Byolohycheskye modely in vitro v toksykolohyy [Biological in vitro model in toxicology]. Abstracts of the 1 st Russian Congress of Toxicologists (Moscow), 276.
5. Eropkyn, M. Yu., Eropkyna, E. M. (2003). Kul'tury kletok kak model'naya systema yssledovanyya toksychnosty y skrynynha tsytoprotektornykh preparatov [Cell cultures as a model system toxicity studies and screening of cytoprotective drugs]. St. Petersburg: Morsar AB, 239.
6. Botham, P., Lewis, R. (1996). Development of in vitro techniques for irritancy testing. Human and Experimental Toxicology, 15 (2), 141.
7. Hurna, E. (1997). In vitro metody a ich vyuzitie v toxikologii [In vitro methods and their use in toxicolo-gy].Veterinary medicine, 42 (7), 213-215.
8. Combes, R., Balls, M. (2001). Ethical investment what is it, and what are the implications for industry funding of research into alternatives? ATLA, 29 (1), 55-62.
9. Hartung, T., Gstraunthaler, G., Coecke, S. et. al. (2001). Good cell culture practice (GCCP) - an initiative for standardization and quality control of in vitro studies. The establishment of an ECVAM Task Force on GCCP. ALTEX, 18 (1), 75-78.
10. Danlybaeva, H. A., Zhylkybaev, A. A., Rikov, V. A. et. al. (2012). Tsytotoksychnost' karboranylsoderzhashchykh soedynenyy [The cytotoxicity of carbonyl compounds]. Biotechnology. Theory and practice, 3, 49-53.
11. Kulykovskaya, K. Yu., Kovalenko, S. S., Drushlyak A. H. y dr. (2014). Cyntez proyzvodnykh N7-aryl[1,2,4]try-azolo[4,3-a]pyrazyn-3,8(2H,7H)-dyonov y ykh 3-tyoksoanalohov kak potentsyal'nykh farmatsevtycheskykh ahentov [Synthesis of N7-aryl[1,2,4]triazolo[4,3-a]pyrazine-3,8(2H,7H)-dione derivatives and 3-tioksoanalogues as potential pharmaceutical agents]. Bulletin KazNMU, 5, 132-136.
12. Kovalenko, S. S., Kulikovska, K. Yu., Drushlyak, O. G. et al. (2014). A suitable synthesis of [1,2,4]tria-zolo[4,3-a]pyrazin-8(7H)-one derivatives. Chemistry of Heter-ocyclic Compounds, 8, 1243-1249.
Дата надходження рукопису 12.10.2015
Журавель 1рина Олександрiвна, доктор xiмiчниx наук, професор, кафедра токсикологiчноï xiмiï, Нащ-ональний фармацевтичний ушверситет, вул. Пушшнська, 53, м. Харшв, Украша, 61002 Е-mail: irina_zhuravel@inbox.ru
Куликовська Кристина Юрй'вна, кандидат фармацевтичних наук, асистент, кафедра токсикологiчноï xiмiï, Нацюнальний фармацевтичний ушверситет, вул. Пушшнська, 53, м. Харшв, Украша, 61002 Е-mail: kulikovskaja.k@gmail.com
