CC BY
42
2) to determine regional specificity of the spread of the disease.
The prevalence of rabies in the animal population of Ukraine during the period of 2005-2013 was investigated. In 2005-2013, a total of 1 040 cases of rabies were diagnosed in Dnipropetrovsk Region and wild animals were infected more often than domestic animals.
According to the records, in 2008-2013 mostly cats and dogs were infected. It is shown that the peak incidence of rabies accounted for 2005 and 2010, respectively - 162 and 157 cases.
The immunofluorescence method and the mouse inoculation test were used to diagnose the disease. Rabies was diagnosed in 18.18% of domestic and in 18.64% of wild animals. The disease was found to be spread in all regions of Dnipropetrovsk Region. The largest centers of rabies infection were determined to be in the districts of Mahdalynivka, Vasylkivka, Piatykhatky, Tsarychanka, Mezhova. The highest number of rabies cases 66 was recorded in the Mahdalynivka district. Our results indicate a very uneven distribution of rabies infections and show that during 2005-2013 rabies was registered in the entire territory of Dnipropetrovsk Region.
The spread of rabies in the animal population creates a great danger to the public health. The results are a scientific basis for monitoring viral rabies and can be useful in the development of measures and to prevention the spreading of rabies.
Keywords: rabies, spreading, mouse inoculation test, immunofluorescence.
Рецензент — проф. Лихолат Ю. В. Стаття надшшла 25.01.2017 року
© Полянська В. П., Саргош О. Д., Полянський О. О. УДК 579. 61
Полянська В. П., Саргош О. Д., Полянський О. О.
ВИЗНАЧЕННЯ ФУНГ1ЦИДНИХ ВЛАСТИВОСТЕЙ ЕФ1РНО1 ОЛИ
ЕВГЕНОЛУ ДЛЯ КУЛЬТУРИ ГРИБ1В ВИДУ ASPERGILLUS NIGER
ВДНЗУ «Укра'Гнська медична стоматолопчна академ1я»
(м. Полтава)
microbiolumsa@gmail.com
Доотдження виконан в межах НДР кафедри ппени, екологи та охорони прац в rary3i ВДНЗУ «Укра!нська медична стоматолопчна академiя» м. Полтави «Наукове обфунтування профтактики негативного впливу окремих чинниюв довюлля на яюсть життя i стан здоров'я дггей в умовах геохiмiчноI провшцп», № державно! реестрацп 0111U008522.
Вступ. Патогены гриби роду Aspergillus широко розповсюджен у природг Вони колоызують рiзно-манггы еконш i мешкають у природних репонах земно! кул на уЫх материках. Асперпли, у широкому ро-зумЫы роду можуть бути ункальними патогенами i у той же час е сапробами. Вони е досить стмю до таких факторiв, як УФ-опромЫення, висок чи низьк тем-ператури [9,13]. Для боротьби i3 спорами патоген-них грибiв використовуються токсичн для людини i тварин речовини, що можуть акумулюватися в орга-нiзмi i забруднювати навколишне середовище. За-стосування таких засобiв може сприяти виникненню патолопй, як пов'язан з еколопчними порушеннями i появою збудникiв стiйких до лкарських хiмiопрепа-ратiв. Тому прюритетним i актуальним залишаеться пошук нових, ефективних, екологiчно безпечних ком-позицм рослинного походження, до яких належать ефiрнi олi!. Речовини рослинного походження не викликають резистентностi мiкроорганiзмiв, алер-гiчних, iмунотоксичних i мутагенних ефекпв навiть у разi тривалого застосування [6,7,9]. Так, В.В. Нкола-евський всебiчно дослiдив бiльшiсть вiдомих ефiрних олiй не лише з точки зору !х бактерицидно! дi!, а й з боку впливу на макрооргаызм. Було виявлено, що найбтьш виражена антимiкробна активнiсть при-
таманна ефiрнiй олi! монарди дудчасто! та базил^ евгенольного, а також експериментально було доведено вщсутнють негативного !х впливу на макроор-гаызм [6]. Встановлено фунгiцидний вплив водного екстракту з надземно! частини Monarda didyma вщ-носно фiтопатогенного гриба Fusarium oxysporum. Антигрибковi властивостi екстрак™ рослин обумов-ленi передусiм ктьюсним i якiсним складом ефiрних олм, якi синтезують рослини [3]. Евгенол i карвакрол - скJlадовi багатьох ефiрних олiй, видiленi як окремi препарати й рекомендованi для л^вання орального кандидозу. Необхiднi подальшi до^дження !х фар-макокiнетичних i токсиколопчних властивостей. Евгенол i карвакрол не викликають отруення в щурiв у терапевтичних дозах [12].
Мета дослщження. Визначення мiнiмально! пригнiчуючо! концентрацi! ефiрно! олi! евгенолу для культури грибiв виду Aspergillus niger.
Об'ект i методи дослiдження. В якостi основно! дослiджувано! речовини використовували ефiрну олiю евгенолу (виробник ЗАО «О6З ВладМиВа», Россия). Видiлення та щентифкацю грибiв Aspergillus niger, проводили за загальноприйнятими методиками. Визначення чутливос^ грибiв до евгенолу здiйснювали диско-дифузiйним методом. Ктьюсне визначення мiнiмально! пригнiчуючо! концентрацп (МПК) ефiрно! олi! евгенолу для культури грибiв дослiджували за допомогою метода послщовних макророзведень [5]. Протигрибкову дт ефiрних олiй краще оцЫювати у рiдких середовищах, оскiльки гщрофобна природа бiльшостi компонентiв ефiрно! оли перешкоджае однорiдному
розповсюдженню цих речовин в arapi. Окремо визначали чутливiсть штaмiв A. niger до спиртового розчину у розведеннях даного дослщження. Суспензiю спор культури гpибiв готували на бульйон Сабуро, концентpaцiю колонieутвоpюючих одиниць в 1 мл суспензи визначали стандартним методом за допомогою камери Горяева. Кон щи обережно збирали бaктеpiологiчною петлею з поверхн колонiй (2-3 бaктеpiологiчних петл на 7-10 мл бульйону) та вносили у бульйон Сабуро, ретельно перемшуючи, аби «розбити» ланцюжки конщй. Перед кожним вщ-бором суспензи для пщрахунку спор II ретельно пе-pемiшувaли, оскiльки спори швидко осiдaють на дно пpобipки. Пщраховували кiлькiсть спор мiнiмум у п'яти великих квадратах камери Горяева по дiaгонaлi або у кутах сггки та в II сеpединi при збтьшены мiкpоскопa 15 х 10. Готували два препарати. Пщрахунок спор у першому пpепapaтi проводили в обох сггках камери, у другому препарат - в однiй iз сiток. Таким чином, пiдpaхунок проводили у трьох сггках. Вираховували середню юльюсть спор n. Сiткa камери Горяева складаеться з 225 великих квадра^в, об'ем 1 квадрата доpiвнюе 0,004 мм3. Якщо в 1 квадрат (в 0,004 мм3) виявлено n колоыеутворюючих одиниць, то в 1 мл (в 1000 мм3) 1х юльюсть Х доpiвнюе:
Х = n х 1000:0,004;
Х = n х 250000, отже Х = n х 2,5 х
106
Було досягнуто необхщно! для методу сеpiйних розведень концентраци спор Aspergillus niger у ктькост 2 х 106 КУО/мл, що вщповщае оптичному стандарту мутностi 0,5 за McFarland [12].
Посiви спор гpибiв iнкубувaли при темпеpaтуpi 26°С протягом 72 годин [1]. Через 72 годин шкубацп з пpобipок, у яких немае ознак росту проводили поЫв на середовище Сабуро у чашки Петpi для визначення фунгщидного та фунгiостaтичного ефекту. Через 72 години Ыкубацп при оптимaльнiй темпеpaтуpi вiдмiчaли ту найменшу концентpaцiю препарату у пpобipцi, посiв з яко1 не давав росту на щтьному aгapi Сабуро. II вважали м^мальною фунгiцидною концентpaцiею.
Результати дослiдження та Ух обговорення. При вивченн впливу евгенолу на видгпену культуру гpибiв виду A. niger показано здатнють препарату пpигнiчувaти II piст на щтьному живильному середовищг Характер росту культури у поpiвняннi з контролем неоднорщний, колонiI плоскi, утворення конщальних голiвок не спостеpiгaлось у дтянках, безпосередньо прилеглих до межi зони пригычення росту. Метод
паперових дисюв показав, що ефiрна олiя евгенолу проявила виражен фунгiциднi властивостi по вщношенню до дослiдженоI культури Aspergillus niger, про що свщчив показник дiаметру затримки росту культури (39±0,8 мм). Результати дослiдження мiнiмальноI пригычуючо! концентрацiI ефiрноI олiI евгенолу для грибiв виду Aspergillus niger представлен в таблицях 1 i 2.
Як свщчать результати, вiдображенi у таблицях 1 i 2, пригычення росту грибiв виду A. niger спостер^алось у живильних середовищах з концентращею ефiрноI ол iI евгенолу у дiапазонi 267,4 мг/мл - 16,7 мг/мл пюля 72 години i мiнiмальна пригнiчуюча концентрацiя евгенолу для A. niger становила 16,7 мг/мл.
Результати дослщження м^мально! фунгiцидноI концентраци олп евгенолу для культури грибiв виду Aspergillus niger представленi в таблиц 3.
При аналiзi результа^в, вiдображених у таблицi 3, встановлено, що м^мальна фунгiцидна
Таблиця 1.
Визначення м1н1мально'Г пригшчуючо'Г концентрацГГ еффно'Г олГГ евгенолу методом сер1йних розведень
Дослщжувана культура Концентра^я евгенолу
контроль 1 2 3 4 5 6 7
Aspergillus niger 267,4 133,7 66,8 33,42 16,7 8,35 4,17
Облк через 72 год рiст - - - - - рют рют
Таблиця 2.
Особливост1 росту тест-культури при культивуванн1 з еф1рною ол1ею евгенолу в р1дкому поживному середовищ1
Концентращя е<^рно1 олп (мг/мл) Тривалють шкубацп (години)
72
контроль Помутншня середовища, поверхневий рют культури бархатистого вигляду, з добре розвиненим тгментованим мiцелi-ем сiро-зеленуватого кольору, наявнi конiдiальнi голiвки
267,4 Ознаки росту вiдсутнi, суспензiя без змш
133,7 Ознаки росту вiдсутнi, суспензiя без змiн
66,8 Ознаки росту вщсутш, суспензiя без змiн
33,42 Ознаки росту вщсутш, суспензiя без змiн
16,7 Ознаки росту вщсутш, суспензiя без змш
8,35 Активний рют культури, помутнiння середовища, поверхневий рют культури бархатистого вигляду, з добре розвиненим тгментованим мiцелiем сiро-зеленуватого кольору, наявнi конiдiальнi голiвки
4,17 Активний рiст культури, помутнiння середовища, поверхневий рют культури бархатистого вигляду, з добре розвиненим тгментованим мiцелiем сiро-зеленуватого кольору, наявнi конiдiальнi голiвки
Таблиця 3.
Визначення фунпцидно'Г концентрацГГ еф1рно'Г олГГ евгенолу
Тривалiсть шкубацп (години) Концентращя ефiрноí олй' в пробiрцi, з яко'|' виконано пересiв на щтьне середовище Сабуро, мг/мл
контроль 267,4 133,7 66,8 33,42 16,7 8,35 4,17
72 рют рют рiст
концентра^я ефiрно! олi! евгенолу через 72 години шкубацп становить 16,7 мг/мл. При цьому, фунгютатична дiя евгенолу на гриби виду Aspergillus niger за даних розведень не спостерталась.
На думку дослiдникiв [2,11] фунпцидну активнiсть ефiрних олiй, можна пояснити залежить вщ !х здатност розчинятися у жирах, що обумовлюе !х проникнiсть через бiологiчнi мембрани. Вщомо, що структура евгенолу мютить лiпофiльнi молекули, якi здатнi проникати мiж ацiльними ланками жирних кислот, тим самим порушуючи текучiсть i проникнiсть мембран. Це впливае на регуля^ю i функцiю мембрано-асоцiйованих ферменпв, якi каталiзують синтез основних полюахаридних компонентiв кJliтинно! стiнки, у тому чи^ бета-глiкану, хiтину, маннану, що призводить до порушення росту ктмтин i морфогенезу оболонки
Висновки
1. Ефiрна олiя евгенолу володiе вираженою фун-гiцидною активнютю щодо культури грибiв виду Aspergillus niger.
2. М^мальна пригнiчуюча концентращя ефiрно,i олi! евгенолу становила 16,7 мг/мл.
3. М^мальна фунгiцидна концентра^я ефiрно! олi! евгенолу становила 16,7 мг/мл.
4. Фунпостатична активнiсть евгенолу щодо культури грибiв виду Aspergillus niger не встановлена.
5. Ефiрна олiя евгенолу може бути використана як протигрибковий заЫб.
Перспективи подальших дослiджень. У пер-спективi плануеться продовжити вивчення фунп-цидних властивостей ефiрних олiй щодо збудникiв опортунютичних мiкозiв.
Лiтература
1. Билай В.И. Основы общей микологии: Учеб. пособие для вузов. - 2-е изд., перераб. и доп. / В.И. Билай. - К.: Вища шк.: Главное изд-во, 1980. - 360 с.
2. Брага П.С. Эвгенол и тимол по отдельности и в сочетании вызывают морфологические изменения оболочки Candida albicans / П.С. Брага, М. Даль Сассо, М. Альфири // Физиотерапия. - 2007. - Т. 78, № 6. - С. 396-400.
3. Котюк Л.А. Фунпцидна активнють екстракпв ефiроолiйних рослин родини Lamifceae Lindl. вщносно Fusarium Oxysporum / Л.А. Котюк, 1.В. 1ващенко // Бюлопчний вюник Мелггопольського державного педагопчного ушверситету iм. Богдана Хмельницького. - Мелггополь, 2013. - Вип. 3 (9), Т. 3. - С. 70-82.
4. Методы экспериментальной микологии. Справочник / Под. общ. ред. В.И. Билая. - К.: Наук. думка, 1982. - 551 с.
5. Наказ МОЗ УкраУни за № 167 вщ 05.04.2007 р. «Про затвердження методичних вказiвок «Визначення чутливост мiкроорганiзмiв до антибактерiальних препара^в». - К., 2007. - 52 с.
6. Николаевский В.В. Биологическая активность эфирных масел / В.В. Николаевский, А.Е. Еременко, И.К. Иванов. - М.: Медицина, 1987. - С. 144.
7. Николаевский В.В. Аромотерапия: Справочник / В.В. Николаевский. — М.: Медицина, 2009. - 197 с.
8. Сергеев А.Ю. Грибковые инфекции: Рук. для врачей / А.Ю. Сергеев, Ю.В. Сергеев. - М.: Бином-Пресс, 2003. - 439 с.
9. Солдатенко С.С. Аромотерапия. Профилактика и лечение эфирными маслами / С.С. Солдатенко, Г.Ф. Кащенко, А.В. Пи-даев. - Симферополь: Таврида, 1999. - 206 с.
10. Челпаченко О.Е. Микробиологические аспекты антимикотической фитотерапии (Обзор) / О.Е. Челпаченко, Н.Б. Перунова, Е.В. Иванова, С.В. Андрющенко, Е.И. Данилова, Л.П. Федотова // Проблемы медицинской микологии. - 2014. - Т 16, № 3. - С. 13-18.
11. Aspergillosis: From Diagnosis to Prevention / Edited by Alessandro C. Pasqualotto. - Springer Science+Business Media B.V., 2010. - 1027 p.
12. Chami N. Antifungal treatment with carvacrol and eugenol of oral candidiasis in immunosuppressed rats / N. Chami, F. Chami, S. Bennis, J. Trouillas, А. Remmal // Brazilian Journal of Infectious Diseases. - 2004. - V. 8, № 3. - Р. 217-226.
13. Polianska V.P. Medical mycology textbook / V.P. Polianska, N.P. Kovalenko, I.A. Kovalenko. - Poltava: PUET, 2012. - 80 p.
УДК 579. 61
ВИЗНАЧЕННЯ ФУНГ1ЦИДНИХ ВЛАСТИВОСТЕЙ ЕФ1РНОТ ОЛИ ЕВГЕНОЛУ ДЛЯ КУЛЬТУРИ ГРИБ1В ВИДУ ASPERGILLUS NIGER
Полянська В. П., Саргош О. Д., Полянський О. О.
Резюме. У статт наведен результати експериментального доотдження фунпцидно! активност ефiрноi оли евгенолу щодо грибiв виду Aspergillus niger. За результатами дослщження встановлена фунпцидна дiя евгенолу у дiапазонi 267,4-16,7 мг/мл, визначена м^мальна фунпцидна активнють евгенолу щодо грибiв виду Aspergillus niger, яка становила 16,7 мг/мл. Фунпостатична активнють евгенолу не була встановлена. Ефiрна олiя евгенолу може бути використана як дезшф^ючий заЫб.
Ключовi слова; ефiрна олiя, евгенол, гриби виду Aspergillus niger, м^мальна пригычуюча концентра^я, м^мальна фунпостатична концентра^я, м^мальна фунпцидна концентра^я.
УДК 579. 61
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФУНГИЦИДНЫХ СВОЙСТВ ЭФИРНОГО МАСЛА ЭВГЕНОЛА ДЛЯ КУЛЬТУРЫ ГРИБОВ ВИДА ASPERGILLUS NIGER
Полянская В. П., Саргош О. Д., Полянский А. А.
Резюме. В статье приведены результаты экспериментального исследования фунгицидной активности эфирного масла по отношению к грибам вида Aspergillus niger. По результатам исследования установлено фунгицидное действие эвгенола в диапазоне 267,4-16,7 мг/мл, определена минимальная фунгицидная активность эвгенола по отношению к грибам вида Aspergillus niger, которая составляла 16,7
мг/мл. Фунгиостатическая активность эвгенола не была установлена. Эфирное масло эвгенола может бать использовано как дезинфицирующее средство.
Ключевые слова: эфирное масло, эвгенол, грибы вида Aspergillus niger, минимальная угнетающая концентрация, минимальная фунгиостатическая концентрация, минимальная фунгицидная концентрация.
UDC 579. 61
SPECIFICATION OF THE FUNGICIDAL PROPERTIES OF EUGENOL ESSENTIAL OIL FOR THE FUNGI CULTURE SPECIES ASPERGILLUS NIGER
Polianska V. P., Sarhosh O. D., Polianskyi O. O.
Abstract. Pathogenic fungi of genus Aspergillus are widely spread in nature. They colonize various environmental niches and live in natural areas of the globe on all the continents. Aspergilli, in the broadest sense of the genus can be unique pathogens but at the same time they are saprobes. They are resistant to such factors as UV irradiation, high or low temperatures. The toxic substances harmful to humans and animals that can be accumulated in the organism and pollute the environment are used to fight with the pathogenic fungi spores. Therefore, the development of new, effective, environmentally safe compositions of plant origin, which include essential oils is the priority and currently important task. Substances of plant origin do not cause microbial resistance, allergic, immunotoxic and mutagenic effects even in long-term use. According to the literature data the use of eugenol (4-allyl-2-methoxyphenol) which belongs to the phenol group is widely applied in medicine and has anti-bacterial, anti-inflammatory, pain-relieving properties.
Therefore, the aim of our study was to determine the minimal inhibitory concentration of eugenol essential oil for the culture of fungi species Aspergillus niger. While studying the effect of eugenol on the selected culture of fungi species A. niger the drug efficiency inhibiting its growth on the dense nutrient medium was presented. The paper disc method determined that the eugenol essential oil represented pronounced antifungal properties against the studied Aspergillus niger culture, that was stated by the diameter index of growth inhibition of culture (39±0.8 mm). The growth inhibition of the fungi species A. niger was observed in the nutrient medium with concentration of eugenol essential oil in the range of 267.4 mg/ml - 16.7 mg/ml after 72 hours and the minimal inhibitory concentration of eugenol for A. niger was 16.7 mg/ml. It was determined that the minimal fungicidal concentration of eugenol essential oil after 72 hours of incubation amounts to 16.7 mg/ml. Thus, the fungistatic eugenol effect on fungi of the species Aspergillus niger according to given dilutions was not observed. The fungicidal activity of essential oils depends on their ability to dissolve in fats, which causes their permeability through biological membranes. It is known that the structure of eugenol contains lipophilic molecules that are able to penetrate between acyl links of fatty acids, thereby disrupting fluidity and permeability of membranes. This affects the regulation and functioning of membrane-associated enzymes that catalyze synthesis of the major polisaharid components of cell wall, including beta-glycan, chitin, mannan, which causes the disruption of cell growth and membrane morphogenesis.
Consequently, the eugenol essential oil can be used as disinfectant.
Keywords: essential oil, eugenol, fungi of species Aspergillus niger, minimal overwhelming concentration, minimal fungistatic concentration, minimal fungicidal concentration.
Рецензент — проф. Лобань Г. А.
Стаття надшшла 26.01.2017 року
