CC BY
23
УДК 578.832.1 А : 598.2 (571.1)
Ключевые слова: вирус гриппа А, субтип, дикие птицы, экологические группы, Западная Сибирь
Key words: influenza A virus, subtype, wild birds, ecological groups, the Western Siberia
Сивай М. В., Шаршов К. А., Прокудин А. В., Лайшев К. А., Шестопалов А. М.
ВИРУС ГРИППА А В ПОПУЛЯЦИЯХ ДИКИХ ПТИЦ ЮГА ЗАПАДНОЙ СИБИРИ (2009-2010 ГГ.)
INFLUENZA A VIRUS IN WILD BIRD POPULATIONS IN THE SOUTH OF WESTERN SIBERIA (2009-2010)
'ФГБНУ «Научно-исследовательский институт экспериментальной и клинической медицины» Адрес: 630117, Россия, г. Новосибирск, ул. Тимакова, д. 2
1 Research Institute of Experimental and Clinical Medicine, Federal State Budgetary Scientific Institution Address: 630117, Russia, Novosibirsk, Timakov street, 2 2ФГБНУ «Научно-исследовательский институт сельского хозяйства и экологии Арктики» Адрес: 663302, Россия, г. Норильск, ул. Комсомольская, д. 1 2Research Institute of Agriculture and Ecology of the Arctic, Federal State Budgetary Scientific Institution Address: 663302, Russia, Norilsk, Komsomolskaya street, 1 3ФГБНУ «Северо-Западный центр междисциплинарных исследований проблем продовольственного обеспечения» Адрес: 196608, Россия, г. Санкт-Петербург - Пушкин, шоссе Подбельского, д. 7 3 Northwest Center for Interdisciplinary Studies of Food Security, Federal State Budgetary Scientific Institution Address: 196608, Russia, Saint-Petersburg - Pushkin, Podbel'skiy street, 7
Сивай Мария Владимировна, к. б. н., мл. научн. сотрудник1
Sivay Mariya V., PhD in Biological Sciences, Junior Researcher1 Шаршов Кирилл Александрович, к. б. н., ст. научн. сотрудник1 Sharshov Kirill A., PhD in Biological Sciences, Senior Researcher1 Прокудин Александр Викторович, к. в. н., ст. научн. сотрудник2 Prokudin Alexander V., PhD in Veterinary Science, Senior Researcher2 Лайшев Касим Анверович, д. в. н., член-корр. РАН, гл. научн. сотрудник3 Laishev Kasim A., Doctor of Veterinary Medicine, Corresponding Member of the Russian Academy of Sciences, ChiefResearcher3 Шестопалов Александр Михайлович, д. б. н., гл. научн. сотрудник1. E-mail: [email protected] Shestopalov Alexander M., Doctor of Biological Sciences, Chief Researcher1. E-mail: [email protected]
Аннотация. Представлены результаты изучения вируса гриппа А в популяциях диких птиц юга Западной Сибири в 2009-2010 гг. Показана актуальность и важность изучения вируса гриппа у диких птиц юга Западной Сибири для оценки эпизоотологической ситуации. Наши исследования указали на важность различных отрядов диких птиц в персистенции различных вариантов вируса гриппа в Западной Сибири. Показано широкое разнообразие субтипов, циркулирующих среди диких птиц на данной территории. Были изучены редкие субтипы вируса, изучены их молекулярно-биологические свойства. Филогенетический анализ выделенных штаммов показал экологическую связь вирусов юга Западной Сибири с отдаленными географическими районами.
Summary. The results of the study of influenza A virus in wild bird populations in the south of Western Siberia in 2009-2010 are presented. The urgency and importance of study of influenza virus in wild birds in the south of Western Siberia is shown to assess the epidemiological situation. Our research marked the importance of different groups of wild birds in the persistence of the different influenza viruses in Western Siberia. A wide variety of subtypes was shown circulating in wild birds in the area. We studied the rare subtypes of the virus and their molecular-biological properties. Phylogenetic analysis of the isolated strains showed ecological relation of viruses from south of Western Siberia with distant geographical areas.
Введение
Естественным природным резервуаром вирусов гриппа А (семейство Онкотухоутйаг, ВГА) являются дикие птицы водно-болотной экологической
группы, преимущественно отрядов гусеобразные и ржанкообразные. Однако вирус также способен инфицировать различные виды сельскохозяйственных птиц (куры, гуси, утки, индюки) и некоторые
виды млекопитающих (свиней, лошадей, морских млекопитающих, собак, кошек), некоторые виды грызунов, а также человека. Распространение вируса в популяции диких птиц осуществляется фекаль-но-оральным путем через зараженную воду и почву [13].
Геном вируса сегментирован и представлен восемью сегментами РНК отрицательной полярности, кодирующие 13 белков [8]. Классификация вируса осуществляется на основании антигенных свойств поверхностных гликопротеидов -гемагглютинина (НА) и нейраминида-зы (ЫА). В настоящий момент выделяют 17 субтипов НА и 10 субтипов ЫА [7, 16]. Существует также классификация вируса по типу хозяина, от которого вирус был выделен. Эта классификация чаще характерна для «внутренних» генов вируса (РВ2, РВ1, РА, ЫР, МР, Ш). Например, выделяют линии генов вируса, выделенные от птиц, человека, лошадей, свиней [14]. Кроме того, вирусы также генетически разделены на две линии - ВГА евразийской линии и ВГА американской линии, характеризующиеся выделением на Восточном и Западном полушариях, соответственно.
Сезонные миграции диких птиц способствуют распространению различных вариантов ВГА в отдаленные географические регионы и обеспечивают их долговременное присутствие во многих экосистемах, что определяет важность и необходимость эпизоотологиче-ского мониторинга вируса гриппа птиц в естественных условиях. На путях миграций и в местах зимовок осуществляются контакты между популяциями птиц, изолированными друг от друга в период гнездования. Это создает предпосылки для последующего географического распространения различных вариантов вируса ВГА как внутри одного вида, так и между видами [3]. Для контроля над возбудителем необходим мониторинг и изучение вариантов вируса, циркулирующих в популяциях птиц природных биоценозов.
На севере России располагаются главные места гнездования многих мигрирующих птиц отрядов гусеобразные. Особую важность представляет территория Западно-Сибирской равнины [15]. На юге Западной Сибири расположено огромное количество рек и озер, находящихся на путях миграции многих птиц и являющихся гнездовыми ареалами большого числа видов, экологически связанных с водоемами. Территориальные связи западно-сибирских птиц, формирующиеся в процессе сезонных миграций, весьма обширны. Территорию юга Западной Сибири пересекают центрально-азиатский, западноазиатский-восточноафриканский и восточноазиатский-австралийский перелетные пути, объединяя популяции птиц, зимующих в различных регионах мира: Европе, Африке, на Ближнем Востоке и в Средней Азии, Индостане и Юго-Восточной Азии, Австралии, Океании, полуострове Аляска [6]. Экологические особенности данного региона - наличие большого количества пресных и слабосоленых водоемов, а также резко континентальный климат - создают благоприятные условия для длительного сохранения вируса в воде и почве. В связи с этим на территории юга Западной Сибири существуют благоприятные условия для распространения различных вариантов патогена, его персистенции и эволюции [17].
Таким образом, все вышеизложенное указывает на важность изучения экологии вируса гриппа А на территории юга Западной Сибири, исследование его генетического разнообразия, а также изучение биологических свойств и филогенетических связей выделенных штаммов вируса.
Материалы и методы
Биологический материал был собран от диких птиц во время весеннего и осеннего сезонов охоты на водно-болотную дичь на территории юга Западной Сибири (Новосибирская область, Омская область и Алтайский край) в 2009-2010 гг. Клоакальный смыв от птицы был собран с помощью стерильного ватного тампона
и помещен в стерильную пробирку, содержащую транспортную среду [21]. Изоляция вируса производилась путем введения первичного биологического материала в ал-лантоисную полость 10-дневных развивающихся куриных эмбрионах. Наличие вируса в аллантоисной жидкости определялось реакций гемагглютинации (РГА) и полиме-разной цепной реакцией (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени, с использованием технологии Taqman [19]. Выделение вирусной РНК осуществлялось с использованием коммерческого набора SV Total RNA Isolation Kit (Promega, США) согласно инструкции производителя.
Субтипирование вируса осуществлялось с использованием универсальных прайме-ров на гены НА и NA с дальнейшим определением первичной последовательности генов [20]. Определение первичных последовательностей осуществлялось на автоматическом анализаторе 3130xl Genetic Analyzer (Applied Biosystem, США) согласно инструкции производителя. Определение субтипа вируса производилось путем сравнения полученных первичных последовательностей генов исследуемых вирусов гриппа и последовательностей в международной базе данных GenBank.
Результаты исследований
В результате проведенной работы было собрано 2 476 образцов от диких птиц 11 отрядов. Основное количество составили образцы от птиц отрядов гусеобразные (48,99 %), ржанкообразные (11,51 %) и воробьиноо-бразные (23,3 %). На долю остальных 8 отрядов приходится 16,2 % собранных образцов.
В результате было выделено 45 изолятов вируса. Все выделенные изоляты вируса хорошо культивируются в РКЭ с максимальной продукцией гемагглютинина в аллантоисной жидкости 1280-2560 ГАЕ/мл. Методом ОТ-ПЦР с последующим определением ну-клеотидных последовательностей нами были определены субтипы генов НА и NA. У изо-лятов вируса были установлены следующие субтипы: H1N1, H3, H3N3, H3N6, H3N8, H4, H4N6, H8N8, N8. Самыми распространен-
ными субтипами ВГА явились Н3К8 (п = 18) и Н4№ (п = 8). В дальнейшем из выделенных изолятов вируса было сформировано 45 штаммов ВГА, присвоены названия штаммов согласно международной классификации, определены нуклеотидные последовательности матриксного (М) гена и депонированы в международную базу данных GenBank, а также даны основные характеристики выделенным штаммам ВГА (табл. 1).
Штаммы ВГА были выделены от птиц водно-болотной экологической группы, относящихся к отряду гусеообразные. Процент выделения вируса у птиц данного отряда составил 3,71 %. Все штаммы ВГА были выделены из образцов, собранных от диких птиц в период осенней миграции.
Был проведен филогенетический анализ М гена всех выделенных в данной работе штаммов ВГА. Все М гены исследуемых вирусов относятся к линии М гена птиц евразийской генетической линии. Евразийская клада представлена вирусами гриппа птиц, выделенных на территории стран Азии, Африки и Европы, а также Австралии, Японии и России от птиц отрядов гусеобразные (дикие утки, гуси, лебеди), ржанкообраз-ные (камнешарка, чайки, песочник), аисто-образные (цапля), курообразные (индюки, перепел), поганкообразные (поганка), пели-канообразные (большой баклан) и воробьи-нообразные (ворон). Кроме того, в данную кладу входят штаммы ВГА, выделенные от нескольких видов млекопитающих -свиньи, ондатры и человека. Интересно заметить, что один из исследуемых штаммов (A/teal/Novosibirsk/330/2010(нс)) наиболее гомологичен штамму, выделенному на территории Северной Америки (А^ойЫП/ СаШгша/33445-136/1992 (Н7Ш)), а также группируется со штаммами ВПГП суб-
типа, выделенными в 2003 г. в Нидерландах и Германии от кур и человека. Группа, состоящая из пяти штаммов ВГА, выделенных в различные годы на юге Западной Сибири, наиболее гомологична штаммам, выделенным в 2000 г. на территории Бурятии от ондатры и дикой утки. Кроме того, в данной кладе также встречаются ВГА субтипа Н5 как низкопатогенных, так и высокопато-
Таблица 1.
Штаммы ВГА, выделенные на юге Западной Сибири и их источники
№ Название штамма ВГА Субтип Объект выделения Место и год выделения
1 A/pintail/Novosibirsk/711/2009 (H3N6) Шилохвость Новосибирская область, 2009
2 A/pintail/Novosibirsk/712/2009 (H3N8) Шилохвость
3 A/shoveler/Novosibirsk/744/2009 (H3N8) Широконоска
4 A/pintail/Novosibirsk/747/2009 (H3N8) Шилохвость
5 А/ша11шй/Ака1/535/2009 (Н4Ш) Кряква Алтайский край, 2009
6 А/та11шй/Ака1/537/2009 (H4N6) Кряква
7 А/та11шй/Ака1/538/2009 (H4N6) Кряква
8 А/та11шй/Ака1/539/2009 (нс) Кряква
9 А/ tea1/Chany/407/2009 (H3N8) Чирок-свистунок Новосибирская область, 2009
10 АЛеа1/^аиу/413/2009 (Н3Ш) Чирок-свистунок
11 A/shove1er/Chany/424/2009 (Н4) Широконоска
12 А/та11а^СМиу/425/2009 (H4N6) Кряква
13 A/shove1er/Chany/429/2009 (нс) Широконоска
14 АЛеа1/^аиу/440/2009 (H3N8) Чирок-свистунок
15 АЛеа1/^аиу/444/2009 (Н8Ш) Чирок-свистунок
16 АЛеа1/^аиу/445/2009 (H3N8) Чирок-свистунок
17 АЛеа1/^аиу/451/2009 (H3N8) Чирок-свистунок
18 АЛеа1/^аиу/454/2009 (H4N6) Чирок-свистунок
19 АЛеа1/^аиу/455/2009 (нс) Чирок-свистунок
20 A/tea1/Chany/465/2009 (нс) Чирок-трескунок
21 АЛеа1/^аиу/473/2009 (Н3Ш) Чирок-свистунок
22 A/tea1/Chany/474/2009 (H3N8) Чирок-свистунок
23 A/tea1/Chany/494/2009 (H4N6) Чирок-свистунок
24 A/shove1er/Chany/304/2010 (Н4) Широконоска Новосибирская область, 2010
25 A/tea1/Chany/312/2010 (НШ1) Чирок-свистунок
26 A/tea1/Chany/317/2010 (H3N8) Чирок-свистунок
27 A/tea1/Chany/320/2010 (H3N8) Чирок-свистунок
28 A/ma11ard/Chany/337/2010 (H3N8) Кряква
29 A/tea1/Chany/363/2010 (H3N8) Чирок-свистунок
30 A/tea1/Chany/359/2010 (Н4Ш) Чирок-свистунок
31 A/tea1/Chany/371/2010 (H3N8) Чирок-свистунок
32 A/tea1/Chany/386/2010 (H3N3) Чирок-свистунок
33 A/tea1/Chany/393/2010 (H3N8) Чирок-свистунок
34 A/tea1/Chany/397/2010 (Н4) Чирок-свистунок
35 A/tea1/Chany/3117/2010 (Н4Ш) Чирок-свистунок
36 A/tea1/Chany/3147/2010 (H4N6) Чирок-свистунок
37 A/tea1/Novosibirsk/330/2010 (нс) Чирок-свистунок
38 A/tea1/Novosibirsk/420/2010 (H3N8) Чирок-свистунок
39 A/ma11ard/Novosibirsk/425/2010 (N8) Кряква
40 A/tea1/Novosibirsk/426/2010 (Н3Ш) Чирок-свистунок
41 А/та11шй/Ака1/785/2010 (нс) Кряква
42 A/shove1er/Novosibirsk/903/2010 (нс) Широконоска
43 A/tea1/Novosibirsk/948/2010 (нс) Чирок-свистунок
44 A/tea1/Chany/985/2010 (нс) Чирок-свистунок
45 A/tea1/Chany/988/2010 (нс) Чирок-свистунок
Примечание: *нс - субтип вируса не определен.
генных вариантов, выделенных в Корее, Нидерландах, Монголии, Казахстане, Китае, Бельгии, Чехии и Италии.
Относительно периода выделения все вирусы на дендрограмме М гена располагаются хаотично, что свидетельствует о персистенции различных вариантов М гена в популяции диких птиц юга Западной Сибири.
Из полученных данных филогенетического анализа можно судить о том, что на территории юга Западной Сибири среди диких птиц циркулируют различные варианты М гена. Также М ген некоторых исследуемых штаммов высоко гомологичен штаммам ВГА млекопитающих, что указывает на способность ВГА преодолевать межвидовой барьер.
Обсуждение результатов
Мониторинговые работы над вирусом гриппа у диких птиц юга Западной Сибири проводятся регулярно с 2002 г. Данный регион выбран для исследования ввиду его географических и экологических особенностей. Территория юга Западной Сибири находится в центре Евразийского континента и пересекается тремя пролетными путями диких птиц - центрально-азиатским, западноазиатским-восточноафриканским и восточноазиат-ским-австралийским, в результате чего на данной территории встречаются популяции птиц Евразии, Африки, Океании и Австралии. Более того, на территории юга Западной Сибири располагается огромное количество рек и озер, являющихся гнездовыми ареалами для птиц, экологически связанных с водоемами [6].
Важность данной территории обусловлена еще и непосредственной близостью с Юго-Восточной Азией, в настоящий момент являющейся эндемичной для вирусов высокопатогенного гриппа птиц (ВПГП) Н5№ субтипа [11]. Возможность занесения вирусов ВПГП Н5№ субтипа диким птицами на территорию России была показана в июле 2005 г., когда на юге Западной Сибири был выявлен массовый падеж домашней и дикой птицы [2].
В ходе мониторинговых работ над ВГА в августе 2002 г. на территории оз. Чаны (Новосибирская область) были выделены штаммы ВГА субтипов Н3 и Н4 от чирков-свистунков и чирков-трескунков [1]. За аналогичный период 2003 г. были выделены штаммы ВГА Н2, Н3и Н5№ субтипов от кряквы [5]. Филогенетический анализ гена НА Н3 субтипа вирусов 2002-2003 гг. показал, что выделенные штаммы высоко гомологичны друг другу, что указывает на персистенцию ВГА данного субтипа среди диких птиц на оз. Чаны. Генетический анализ гена НА Н5 субтипа показал, что данный вирус относится к низкопатогенным вирусам гриппа птиц (НПГП), а филогенетический анализ гена НА указал на родство сибирского штамма с вирусами 1997 г., выделенными в Италии. Филогенетический анализ ВГА субтипа Н2 показал их родство со штаммами с о. Хоккайдо, Япония. ВГА субтипа Н4, выделенные в 2002 г., оказались наиболее гомологичны с штаммами из Германии 2001 г. [1, 5]. Полученные в ходе этих исследований данные указывают на циркуляцию вирусов гриппа Евразийской линии на юге Западной Сибири.
Все вышеуказанные данные указывают на важную роль территории юга Западной Сибири в экологии ВГА в популяциях диких птиц.
В ходе данной работы было собрано 2 476 образцов от диких птиц, относящихся к 11 отрядам. Из собранных образцов было выделено 45 штаммов ВГА, относящихся к 9 различным субтипам (табл. 1) и изучены их основные молекулярно-био-логические свойства. Все штаммы ВГА были выделены от образцов, собранных от диких птиц в осенний период (с августа по ноябрь).
В данной работе наибольший процент вирусоносительства выявлено у птиц отряда гусеобразные (3,71 %). Вирусоноси-тельство птиц данного отряда в зависимости от региона различно и варьируется от 1,3 % до 12,5 % [9, 10, 12, 18].
Большинство исследованных нами видов птиц являются дальними мигрантами.
Так, кряквы, окольцованные на территории Западной Сибири, мигрируют к побережьям Каспийского моря, в Индию, Иран, юг Казахстана. Свиязь мигрирует на юг Каспия, в такие страны, как Италия, Франция, Испания, Пакистан, а также в Индию. Шилохвость зимует на юге Средней Азии, полуострове Индостан, по побережьям Каспийского, Черного и Средиземного морей и Персидского залива. Чирок-трескунок зимует в Узбекистане, Туркменистане, Иране, Индии, Африки. Лысухи мигрируют на зимовку в Туркмению, Индию, Иран, южный Казахстан [4]. Таким образом, данные о миграциях птиц подтверждают важную роль диких перелетных птиц в распространении различных вариантов ВГА на отдаленные географические территории.
Для изучения филогенетических связей и эволюции штаммов ВГА от диких птиц были получены нуклеотидные последовательности матриксного (М) гена. Был проведен филогенетический анализ данного гена, а также аминокислотный анализ М2 белка.
Результаты проведенного нами филогенетического анализа различных вариантов ВГА, выделенных от диких птиц на юге Западной Сибири, также указывает на то, что большинство исследованных штаммов ВГА имеют высокий процент гомологии со штаммами вирусов, выделенными на территории стран Европы, Азии и Африки. Вследствие этого изучение филогенетических связей вариантов ВГА имеет важное практическое значение -контроль за циркуляцией ВГА различных субтипов, а также возможность предотвращение распространения эпизоотии ВПГП.
Заключение
По результатам нашего исследования можно судить об актуальности и важности изучения вируса гриппа у диких птиц юга Западной Сибири. Наши исследования указали на важность различных отрядов диких птиц в персистенции различных вариантов ВГА. Также показано биологическое разнообразие вариантов
ВГА, циркулирующих среди диких птиц на территории юга Западной Сибири. Более того, нами выделены редкие субтипы ВГА, ранее не выделяемые нигде в мире, изучены их молекулярно-биологиче-ские свойства. Филогенетический анализ выделенных штаммов ВГА показал экологическую связь территории юга Западной Сибири с отдаленными географическими районами, а также способность реассор-тации ВГА в популяции диких птиц и преодоление межвидового барьера.
Данная работа поддержана проектом РФФИ № 13-04-91179-гФЕН-а, USDA № 58-0210-2-040F.
Список литературы
1. Генетическое разнообразие вируса гриппа А в популяциях диких птиц на юге Западной Сибири / Ю. В. Разумова [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2005. -Т. 50. - № 4. - С. 31-34.
2. Грипп птиц в Сибири - 2005: Лабораторные и эпидемиологические исследования, противоэпидемические и противоэпизоотические мероприятия в период эпизоотии вируса гриппа среди домашней птицы в Сибирском и Уральском федеральных округах Российской Федерации (июль - ноябрь 2005 года) / Г. Г. Онищенко [и др.]. - Новосибирск : Цэрис, 2006. - 192 с.
3. Львов, Д. К. Миграции птиц и перенос возбудителей инфекции / Д. К. Львов, В. Д. Ильичев. - М. : Наука, 1979. - 270 с.
4. Миграции птиц восточной Европы и Северной Азии: Пластинчатоклювые. Речные утки / Отв. ред. В. Б. Бианки. - М. : Наука, 1997. - 318 с.
5. Результаты мониторинга вируса гриппа А в популяциях диких птиц на юге Западной Сибири (данные 2003 г.) / Ю. В. Разумова [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2006. - Т. 51. - № 3. - С. 32-37.
6. Экология и биоценотические связи перелетных птиц Западной Сибири / Отв. ред. к. б. н. К. Т. Юрлов. - Новосибирск : Наука, 1981. - 364 с.
7. A distinct lineage of influenza A virus from bats / S. Tong [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2012. -N 109 (11). - P. 4269-74.
8. An overlapping protein-coding region in influenza A virus segment 3 modulates the host response / B.W. Jagger [et al.] // Science. - 2012. - N 337 (6091). - P. 199-204.
9. Avian influenza virus monitoring in wintering waterbirds in Iran, 2003-2007 / S. R. Fereidouni [et al.] // Virology journal. - 2010. - N. 7. - Р. 43.
10. Birds and viruses at a crossroad-surveillance of influenza A virus in Portuguese waterfowl / C. Tolf [et al.] // PloS one. - 2012. - N 7 (11). - P. e49002.
11. Characterization of highly pathogenic H5N1 avian influenza viruses isolated from poultry markets in central China / J. Chen [et al.] // Virus research. - 2009. - N 146 (1-2). - P. 19-28.
12. Detection of low pathogenic avian influenza viruses in wild birds in Castilla-La Mancha (south central Spain) / E. Perez-Ramirez, X. Gerrikagoitia, M. Barral, U. Hofle // Veterinary microbiology. - 2010. - N 146 (3-4). - P. 200-8.
13. Evolution and ecology of influenza A viruses / R. G. Webster [et al.] // Microbiological reviews. -1992. - N 56 (1). - P. 152-79.
14. Evolutionary analysis of the influenza A virus M gene with comparison of the M1 and M2 proteins / T. Ito [et al.] // Journal of virology. - 1991. - N 65 (10). -P. 5491-8.
15. Free-grazing ducks and highly pathogenic avian influenza, Thailand / M. Gilbert [et al.] // Emerging infectious diseases. - 2006. - N 12 (2). - P. 227-34.
16. Molecular characterization of a new hemagglutinin, subtype H14, of influenza A virus / Y. Kawaoka [et al.] // Virology. - 1990. - N 179 (2). - P. 759-67.
17. Persistence of avian influenza viruses in lake sediment, duck feces, and duck meat / J. Nazir, R. Haumacher, A. C. Ike, R. E. Marschang // Applied and environmental microbiology. - 2011. - N 77 (14). - P. 4981-5.
18. Surveillance of influenza A virus in migratory waterfowl in Northern Europe / A. Wallensten [et al.] // merging infectious diseases. - 2007. - N 13 (3). - P. 404-11.
19. Surveillance of Influenza A Virus in Wild Birds in the Asian Part of Russia in 2008 / M.V Sivay [et al.] // Avian Diseases. - 2011. -N 56. - P. 456-63.
20. Universal primer set for the full-length amplification of all influenza A viruses / E. Hoffmann [et al.] // Archives of virology. - 2001. - N 146 (12). -P. 2275-89.
21. WHO. Manual on animal influenza diagnosis and surveillance. / World Health Organization. - 2002. - 105 p.
11111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111111M //^
1 как оформить подписку на журнал? i
А. Через подписные каталоги
Каталог подписное агентство Индекс
Пресса России Агентство «Книга-Сервис» 29447
Газеты. Журналы Агентство «Роспечать» 33184
= Б. Через редакцию журнала =
= Банковские реквизиты для оплаты подписки по безналичному расчету =
| для юридических лиц: |
| НОУ ДО «Институт Ветеринарной Биологии» =
| ИНН 7802196720 КПП 781301001 Щ
| Р/с 40703810400000000022 в АО «Горбанк», г. Санкт-Петербург |
| К/с 30101810200000000814 БИК 044030814 |
= В поле «Назначение платежа» указать: =
«Предоплата за подписку на журнал «Актуальные вопросы
| ветеринарной биологии» на 2016 г. согласно инф. письму б/н |
= от 20.12.15 г. НДС не облагается. Адрес доставки: ...» |
| Стоимость редакционной подписки на 2016 год (четыре номера): 1600 рублей. =
учредитель и издатель: НОУ ДО «Институт Ветеринарной Биологии». Адрес: Санкт-Петербург, ул. Ораниенбаумская, 3-Б. Т./ф. (812) 232-55-92, т. 927-55-92. E-mail: [email protected]; www.invetbio.spb.ru
