CC BY
15
УДК: 619:617:619:613.165
Мисак А.Р., доцент кафедри хiрурril © Льетський нащональний утеерситет еетеринарног медицины та бютехнологт
¡мет С.З.Гжицького
ВИГОТОВЛЕННЯ ТА ЗАСТОСУВАННЯ ПРЕПАРАТУ КРОВ1
«ГЕМАТОН»
Застосуеання кроег, актиеоеаног дкю ультрафюлетоеих промете, е одним гз ефектиених метода гемотератг. На кафедр1 хгрургИ ЛНУВМтаБ ¡мет С.З.Гжицького створено прилад, за допомогою якого е можлиекть еиконуеати триеале опромтення крое¡ поза оргатзмом теарини, а також розроблено методику еиготоелення та споЫб застосуеання опромтеног ¡ люфыьно еисушеног крое¡ коня. Впродоеж 10-ти роюе проведено ряд досл^жень, результати яких серчать про широкий спектр терапеетичног дп таког крое¡ на оргатзм рЪних еидт теарин.
Ключовi слова: еелика рогата худоба, гетерогенна крое, ультраф¡олетое¡ промет, препарат «Гематон»
У ветеринарнш медициш, як i в медициш гуманнш, поряд iз застосуванням медикаментозно! терапи, невщкладною частиною у лжувальнш робой е використання неспецифiчноl стимулюючо! терапп, яка передбачае регулювання реактивност хворого оргашзму через iмунну, нервову та ендокринну системи. В результат такого лжування тдвищуеться iмунний статус та активiзуються захисш мехашзми оргашзму, що безперечно позитивно впливае на переб^ захворювання та сприяе швидшому видужанню тварин [1,2].
Важливо вщм^ити, що серед значно! кiлькостi засобiв неспецифiчно! стимулюючо! терапи уже впродовж багатьох десятилт широкого застосування набуло використання кровi та препаратiв, виготовлеш iз не!. Хоча численними дослщженнями встановлено безперечний позитивний терапевтичний ефект вщ застосування гемотерапи (у видi ауто, гомо- чи гетеро терапш), на сьогоднiшнiй день науковi дослщження щодо застосування препаратiв кровi, все ж таки, залишаються актуальними [2, 3]. Так, за останш роки у лiтературi висвiтлюються повiдомлення щодо застосування кров^ яка опромiнена ультрафюлетовими променями. В основному, це стосуеться використання кровi фотомодифковано! методами аутотрансфузп (АУФОК), решфузи (РЕФОК) чи внутршньо судинно! фотомодифжаци (ВФОК) [4, 5, 6]. Однак, у ветеринарнш практищ широке застосування фотогемотерапи мае певш обмеження, оскiльки впровадження такого методу потребуе забезпечення лiкарiв ветеринарно! медицини вщповщною апаратурою (апарати "1зольда" МД-73 М, МД-73В, БОП-4, УФОК-3, "Флора" та ш) та набуття навиюв роботи з даними приладами. Крiм цього, застосування юнуючо! апаратури вимагае шдив^ального пiдходу до кожного пащента, так як опромiнення кровi здшснюеться тiльки за умови
© Мисак А.Р., 2008
239
безпосереднього контакту приладу iз окремо взятою твариною i пов'язане, в основному, з проведенням аутогемотерапп.
Враховуючи вище сказане, перед нами постало завдання розробити ефективний i доступний, економiчно вигiдний i зручний у використаннi спосiб отримання препарату кровi, який би не спричиняв явищ анафiлактичного шоку в тварин при парентеральному введенш i забезпечував стимулювання механiзмiв неспецифiчного захисту, клiтинного i гуморального iмунiтету при л^ванш та профiлактицi незаразних та шфекцшних захворювань у тварин. При цьому передбачалось для отримання препарату використовувати як ауто-чи донорську iзогенну, так i гетерогенну кров, причому обробку тако! кровi (активащю бiологiчних властивостей, досягнення стерильностi та втрати анафшактогенноси) проводити в умовах лаборатори, використовуючи опромiнення И ультрафюлетовими променями.
З цieю метою на кафедрi хiрурги ЛНУВМтаБ iменi С.З. Гжицького розроблено прилад для довготривалого опромiнення кровi та запропоновано техшку опромiнення i методику застосування тако! кровi шляхом гемотерапи [7, 8]. Впродовж останнiх 20-ти рокiв фотомодифжовану кров, отриману вiд велико! рогато! худоби, було апробовано на телятах i поросятах в господарствах Львiвськоl, Рiвненсько!, Чернiвецько! та Закарпатсько! областей. Багаторiчними дослiдженнями встановлено ряд позитивних моменив у застосуваннi тако! кровi з метою профiлактики i лжування молодняку за респiраторних й шлунково-кишкових захворювань, особливо у випадках «хлiвноl шфекцп», а також у випадках iмунодефiцитного стану тварин, досягнуто позитивних результат у профiлактицi алiментарно! анеми, збереженi приплоду та збiльшеннi приросив молодняку велико! рогато! худоби на вирощуванш та вiдгодiвлi тощо [9, 10, 11, 12, 13].
Однак, при широкомасштабних виробничих випробуваннях о^м встановлених значних позитивних моментiв виявилися i слабкi мiсця у застосуванш даного препарату, а саме: досить короткий термш придатностi й використання рщко! субстанцi! препарату (впродовж 20 - 30 дшв), а також незручност транспортування й зберiгання, що потребують дотримання температурних умов +2 - + 4ОС. I хоча данi недолжи можна б було характеризувати, в основному, як техшчш, вони все ж таки мали суттевий вплив на впровадження даного препарату кровi у широку ветеринарну практику. Слщ вiдмiтити, що на сьогоднiшнiй день використання кровi велико! рогато! худоби е можливим тiльки для проведення аутогемотерапп. А використання тако! кров^ як сировини для виготовлення препарату для шших видiв тварин, заборонено згщно iз запровадженням в Укра!ш заходiв профiлактики губчасто! форми енцефалопати рогато! худоби [14].
З метою лжвщаци вищевказаних недолiкiв, останнiм часом для виготовлення препарату нами використовуеться кров вщ коней, яка стабшзуеться глюкозо-цитратним розчином "Глюгщир" у сшввщношенш 1:4, а пiсля опромiнювання УФ променями тддаеться лiофiльному висушуванню. В результат лiофiльного висушування рiдко! форми препарату в максимальнш мiрi збер^аеться вихiдний об'ем й початковi властивост опромiнено! кровi i, в першу чергу, специфiчнi властивостi бiлкiв, а також полегшуються умови
240
збер^ання, транспортування та застосування препарату, що дозволяе широко використовувати данай препарат у повсякденнш ветеринарнш практищ.
Враховуючи вище вказаш нововведення, пов'язанi iз удосконаленням технологи виготовлення i застосування "Гематону", виникла необхiднiсть у проведенi додаткових дослщжень щодо встановлення терапевтично! ефективностi за використання його, як препарату гетерогенно! кровi з метою неспецифiчно! патогенетично! терапi!.
Встановлення впливу препарату на корекцш iмунного статусу та стимуляцш гемопоезу проводили в експериментi на 12 головах молодняку велико! рогато! худоби, вжом 1 рш, що належали навчально-науковому виробничому центру «Комаршвський» ЛНУВМтаБ iменi С.З.Гжицького. Препарат кровi «Гематон», що представляе собою суху пористу масу св^ло-коричневого кольору, перед застосуванням розчиняли 0,9% розчином №С1 або 0,5% розчином новока!ну в спiввiдношеннi 1:1, що вщповщае початковому об'ему кровi. Наприклад, у флакон, в якому до люфшьного висушування знаходилось 50 мл цшьно! кровi, додають 50 мл розчинника. Через 1-2 хвилини, тсля легкого струшування флакона, кров готова для парентерального використання. Вводили таку кров тваринам пщшюрно в середнiй дшянщ ши!, у дозi 0,1 мл на кшограм живо! ваги. Таю ш'екци проводили один раз на добу, трьохразово iз iнтервалом у три дш.
Впродовж дослiду проводили щоденне загальне обстеження тварин з метою вивчення загально!, мiсцево! i локально! реакцi! тварин на введення препарату. А також брали кров iз яремно! вени до введення препарату та на 3, 6, 9 i 14 добу. Морфолопчш, бiохiмiчнi та iмунологiчнi показники кровi дослiдних тварин визначали згiдно iз загальноприйнятими методиками.
За результатами клшчного обстеження, пiсля пiдшкiрного введення препарату «Гематон» проявiв анафiлактично! реакцi! та суттевих змiн у загальному сташ i поведiнцi тварин не спостер^али: апетит залишався збереженим, пригнiчення - вщсутне. У 58,3% тварин тсля першого ведення препарату було вiдмiчено незначне тдвищення загально! температури тша в межах 0,2 - 0,60С та незначне зростання частоти пульсу. Проте, даш показники впродовж доби нормалiзувались i при наступних ш'екщях препарату не пiдвищувалися. У жодно! iз дослiдних тварин не спостер^алось i явно виражено! мiсцево! реакци, як пiсля першо!, так i пiсля наступних iн'екцiй. Вiдсутнiсть в дшянщ введення препарату тдвищення температури, набряку чи явно виражено! больово! реакци, можна пояснити тим, що пщдослщш тварини були клшчно здоровими i доза препарату гетерогенно! кров^ що застосовувалася, була оптимальною. Крiм цього, слабо вираженi змiни загального стану тварин, в деякiй мiрi, пояснюються i видовою специфiкою реактивност велико! рогато! худоби.
Незважаючи на вщсутшсть явно виражених змiн у загальному сташ тварин тсля введення препарату, нами були виявленш динамiчнi змши морфологiчних та iмунологiчних показниюв кровi. Основнi результати дослiджень представленш у таблицi 1.
Враховуючи результати дослщжень, представлених в таблицi 1, тсля трьохразового введення препарату у дослщних тварин вiдмiчено динамiчне
241
зростання вмюту гемоглобiну кровi на 20,6 % та вмшту загального бшка у сироватщ кровi на 9,2 %.
Таблиця 1.
Показники ¡мунного статусу та морфологiчнi показники кров1 молодняку
велико! рогато!' худоби тсля застосування препарату «Гематон»
Показники до введення шсля 1-го введення п1сля 2-го введення п1сля 3-го введення на 14 добу
Еритроцити, Т/л 5,42 ± 0,1 4,87± 0,19 5,26 ± 0,1 5,73 ± 0,2 6,09± 0,2"
Лейкоцити, Г/л 9,82 ± 0,2 9,49± 0,18 10,0 ± 0,19 10,35 ± 0,15 10,31±0,24
Гемоглобш, % 91,9 ± 3,5 92,5± 3,84 96,9 ± 2,82 104,2 ± 2,66 112,5±3,3 *
Загальний бшок, г/л 68,0 ± 1,6 71,2± 1,21 72,8 ± 1,26 76,2 ± 1,61 74,9 ± 1,99'
Альбумши % 39,3 ± 1,6 38,4 ± 1,1 39,5 ± 1,4 43,4 ± 1,5 43,6 ± 0,4*
а-глобулши, % 19,6 ± 1,4 27,8 ± 0,9 29,3 ± 0,2 22,7 ± 1,2 16,1 ± 1,4
в глобулши, % 16,4 ± 1,0 12,9 ± 0,8 10.4 ± 1,3 10,5 ± 1,2 11,0± 0,7 ' *
у глобулши, % 24,7 ± 1,0 20,9 ± 0,8 20,8 ± 0,9 23,4 ± 1,54 29,3 ± 1.24'
Фагоцитарна актившсть, % 42,9 ± 0,6 42,8 ± 1,2 56,9 ± 0,6 55,3 ± 0,9 52,6± 0,8***
Бактерицидна актившсть, % 39,8 ± 0,5 44,1 ± 1,8 55,2 ± 1,7 62,0 ± 0,7 62,5± 0,7***
Л1зоцимна активн1сть, % 18,2 ± 0,9 20,3 ± 0,8 21.7 ± 1,1 22,4 ± 1,3 22,7± 0,5***
*Р < 0,05,**Р < 0,01, ***Р < 0,001
Пщвищення загального бшка вщбулося за рахунок збiльшення кiлькостi альбумiнiв та гамма-глобулмв, причому альбумiно-глобулiновий коефiцiент змiнився iз 0,64 до 0,77. Слiд вщм^ити, що зростання iмунологiчно! реактивностi тварин вщбулось не тiльки за рахунок зростання вмюту гамма-глобулiнiв, а й у зв'язку iз пщвищенням показникiв неспецифiчного захисту (фагоцитарно! активност лейкоцитiв, бактерицидно! i лiзоцимно! активност сироватки кровi). Як можна бачити, зростання вищевказаних бiохiмiчних i iмунологiчних показникiв кровi характеризуеться позитивною динамiчнiстю впродовж усього перiоду дослiджень.
Згщно з результатами морфологiчних дослiджень, незважаючи на кiнцевий стимулюючий вплив на функщю кровотворних органiв, пiсля першого введення препарату кровi, у 75 % дослщних тварин нами рееструвався прояв негативно! фази, тривалiсть яко! сягала до 72 годин. Як можна бачити iз таблицi даний перюд супроводжуеться зменшенням кiлькостi еритроциив в межах 10 % та незначним зменшенням кшькост лейкоцитiв. При аналiзi лейкоцитарно! формули нами встановлювався вiдносний лiмфоцитоз та незначне зростання кшькост еозинофiлiв. I тiльки починаючи iз третьо! доби у тварин вiдмiчено стiйке зростання кiлькостi лейкоциив та еритроцитiв. При цьому серед популяцш еритроцитiв вiдмiчаеться зростання кшькост «молодих» та зменшення кiлькостi «старих» клiтин. Кольоровий показник становив 1,0; вмют гемоглобiну в еритроцитi (ВГЕ) - 18,5 пг. У лейкоцитарнш формулi вiдмiчено незначне зростання кшькост сегментоядерних лейкоцитiв при незмiненiй кшькост еозинофiлiв i лiмфоцитiв. Аналiз вищевказаних морфолопчних показникiв кровi свiдчив про активацш гемопоезу.
Пiдсумовуючи результати проведених дослщжень можна зробити висновок, що препарат «Гематон» (опромшена ультрафiолетовими променями i лiофiльно висушена кров коня) у запропонованих дозах може застосуватися, як метод неспецифiчноl патогенетично! терапи з метою корекци у тварин
242
MexaHi3MiB неспецифiчного захисту, кл^инного й гуморального ÎMymTeTy та стимулювання гемопоезу.
Л1тература:
1. Калашник И. А. Стимулирующая терапия в ветеринарии. - Киев, «Урожай», 1990. - 160 с.
2. Патогенетична тератя при запальних процесах у тварин Л.С.Панько, В.М.Власенко, В.I. Левченко та ш. - К.: Урожай, 1994. - 256 с.
3. Передера Б.Я. Препараты крови. -К.: Урожай, 1980. - 104 с.
4. Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на организм человека и животных: Сб. науч. тр. /Под ред. И.Е.Ганелиной, К.А.Самойловой. -Л.: Наука, 1986. - 264 с.
5. Костиков В.В. Фотогемотерапия домашних животных. Ветеринарная Практика № 2 (5), 1988. - С. 31 - 36.
6. Дудкевич И.Г., Марченко А.В. Новые методы фотогемотерапии, СПб, 1993, - 43 с.
7. Мисак А.Р. Завiрюха В.1., Крупник Я.Г. Споаб усунення сенсибшзуючо! властивост кровг Декларацшний патентУкраши № 12585 А61М 1/38. - Бюл. №2. 15.02.2006.
8. Мисак А.Р. Завiрюха В.1., Мисак Х.А. Пристрш для ультрафюлетового опромшювання бюлопчних рщин. Декларацшний патент Украши № 13639 A61N 5/00. - Бюл. №4. 17.04.2006.
9. Мисак А.Р., Крупник Я.Г. Профшактика захворювань молодняку на вiдгодiвлi опромшеною кров'ю. Матерiали конференци молодих вчених i спещалкив "Наyковi розробки АПК". Нижш Ворота, 1993. - С. 137.
10. Застосування препарату iз кровi опромiненоï yльтрафiолетовими променями / Я.Г Крупник, В.1. Завiрюха, А.Р. Мисак, Й.Й Шутко. Iнформацiйний листок № 042-93. Львiв ЦЕНТ1, 1993. - 4 с.
11. Продуктившсть та окремi показники обмiнy речовин у бугайщв при iн'eкцiях кров'ю, опромшеною ультрафюлетовими променями i збагаченою вгтамшами // В.1. Завiрюха. Я.Г. Крупнк, А.Р. Мисак, М.1. Грабовенський, М.О Драбик / Мiжвiдомчий тематичний збiрник. Випуск 3, Нижнi Ворота, 1994, с. 196-203.
12. Мисак А.Р., Крупник Я.Г. Стимулююча актившсть кровi опромiненоï yльтра-фiолетовими променями. «Сyчаснi проблеми ветеринарноï медицини». Матерiали Всеyкраïнськоï конференцiï молодих вчених. Кшв, 1994, с. 49 - 50.
13.3авiрюха В.1., Крупник Я.Г., Мисак А.Р. Терапевтична ефектившсть кров^ опромiненоï УФ-променями //Наyково-технiчний бюлетень /1нститут бiологiï тварин. ДНДК1 ветпрепараив та кормових добавок. - Випуск 6. № 3,4. -Львiв, 2005. - С. 123 - 127.
14.1нструкщя щодо дiагностики, профшактики та боротьби з гyбчастоподiбною енцефалопаиею велико1' рогато1' худоби/ П.1. Вербицький, В.М. Горжеев, О.О. Кучерявенко та ш. - К., 2002.- 7с.
Summary
The results of conducted researches show, that drugs "Hematon" (expose to ultraviolet rays and lyophilic anhydrated blood of horse) in recommended doses cud be used like the method of nonspecific pathogenetic therapy for correcting the mechanisms of nonspecific protecting, cellular, humeral immunity and stimulation of haemopoesis in animals.
Стаття надшшла до редакци 9.04.2008
243
