CC BY
95
УДК 658.562:615.07
С. В. Портнова, М. Р. Мцариашвили, С. Н. Егорова, С. Ю. Гармонов
ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИННАРИЗИНА В СМЫВАХ
Ключевые слова: валидация, лекарственные средства, фармацевтическое производство, валидационные характеристики,
циннаризин, спектрофотометрия.
Представлена спектрофотометрическая методика количественного определения циннаризина в смывах после промывки оборудования для производства препарата "Циннаризин таблетки 25 мг" и проведены результаты валидации данной методики.
Keywords: validation, pharmaceutical, pharmaceutical production, validation characteristics, Cinnarizinum, spectrophotometry.
Spectrophotometry quantity determination method of cinnarizine in the washings after washing equipment for the production of the drug "Cinnarizine Tablets 25 mg" was developed /and the results of the validation of the method.
Введение
Создание национальных стандартов качества лекарственных средств (ЛС) на основе объективных методов - гарантия эффективности и безопасности ЛС. Установление соответствия качества ЛС регламентируемым нормам предполагает применение различных аналитических методов. При этом окончательный вывод о качестве ЛС в значительной степени зависит от качества самого метода, который должен отвечать определенным требованиям.
Общие принятые в мире рекомендации по производству лекарств в виде вМР-правил -надлежащая практика производства - содержат требования к методам испытаний, которые используются для оценки соответствия фармацевтической продукции установленным спецификациям в отношении точности и достоверности [1]. В России имеется тождественный стандарт - ГОСТ Р 52249-2009 «Правила производства и контроля качества ЛС» [2]. Данный стандарт распространяется на все виды ЛС и устанавливает общие требования к производству отдельных видов ЛС.
Поэтому необходимо оценить пригодность тех или иных аналитических методов для предполагаемого их применения в оценке качества ЛС.
В основных требованиях вМР, предъявляемых к производству ЛС, является предотвращение их перекрестного загрязнения. ЛС могут быть загрязнены другими препаратами или активными фармацевтическими субстанциями (АФС), моющими или дезинфицирующими средствами, микроорганизмами, частицами пыли, смазочными материалами, вспомогательными веществами, промежуточной продукцией и др. В тоже время во многих случаях при производстве различных препаратов используется одно и то же оборудование. Поэтому для предотвращения контаминации каждого последующего препарата предыдущим или предыдущей серией того же наименования очень важным является проведение эффективной процедуры очистки оборудования, с обязательной оценкой степени его чистоты [3].
Обычно допустимые пределы остаточных количеств АФС на поверхностях фармоборудования рассчитывают, исходя из критериев риска, связанного с остатками данных ингредиентов. Согласно рекомендациям PIC/S (система сотрудничества всех фармацевтических инспекций -Pharmaceutical inspection cooperation scheme) допустимое количество остатков препарата должно соответствовать следующим критериям:
- после завершения процедур очистки на оборудовании не должно быть видимых следов,
- в максимальной суточной дозе препарата может содержаться не более 0,1 % средней терапевтической дозы любого произведенного перед ним препарата,
- в препарате не должно содержаться более 10 ppm любого другого препарата.
Для определения остаточных количеств АФС используют методы, обладающие селективностью по отношению к аналиту и примесям - продуктам деградации, возникающим в процессе отмывки, а также высокой чувствительностью. К таким методам, как правило относятся высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ),
люминесценция и УФ-спектроскопия [4].
Целью данной работы была валидация методики количественного определения циннаризина в смывах после промывки оборудования для производства препарата "Циннаризин таблетки 25 мг".
Циннаризин - 1-(дифенилметил)-4-(3-фенил-2пропенил)пиперазин.
Циннаризин положительно влияет на мозговое, периферическое и коронарное кровообращение: улучшает микроциркуляцию. Повышает способность эритроцитов к деформации и уменьшает повышенную вязкость крови. Повышает устойчивость тканей к гипоксии. Препарат оказывает непосредственное спазмолитическое действие на кровеносные сосуды, уменьшает их реакцию на биогенные сосудосуживающие вещества (ангиотензин и др.)
Методика анализа
Отбираем пробу ватным тампоном, смоченным спиртом этиловым 95%, с поверхности, соприкасающейся с препаратом (смеситель,
лопасти, питатель, ротор и т.д.), площадью 25 см2 (5х5 см). Ватный тампон с пробой помещаем в коническую колбу вместимостью 100 мл. Отобранную пробу можно хранить в закрытой таре, при температуре не выше 250 °С. Срок годности такой пробы 1 сутки.
В колбу с пробой прибавляем 10 мл хлороформа и извлекаем 10 мин. Полученное извлечение переносим в мерную колбу вместимостью 25 мл. Извлечение повторяем дважды по 5 мл, присоединяя полученные извлечения к предыдущим. Объединенные извлечения доводим хлороформом до метки, перемешиваем и фильтруем через фильтр "синяя лента", отбрасывая первые порции фильтрата.
Измеряем оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 284 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.
В качестве раствора сравнения используем хлороформ.
Параллельно измеряем оптическую плотность стандартного раствора (СО) циннаризина.
Если оптическая плотность испытуемого раствора более 1,0, испытуемый раствор необходимо разбавить хлороформом, чтобы оптическая плотность раствора находилась в пределах 0,270-0,750.
Для приготовления раствора СО циннаризина около 0,05 г (точная навеска) циннаризина помещаем в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляем 25 мл хлороформа, взбалтываем в течение 10 мин, доводим объем раствора хлороформом до метки и перемешиваем (раствор А). Срок годности такого раствора 1 месяц.
5 мл раствора А помещаем в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводим хлороформом до метки (раствор Б).
Содержание циннаризина в смыве в граммах (Х) рассчитывают по формуле:
D ■ а ■ V
Х — исп "с у м .к.
~ D ■ 500 ■ V '
пип .
где Dj^n - оптическая плотность испытуемого раствора, Dсо - оптическая плотность стандартного образца раствора циннаризина, а0 - навеска стандартного образца циннаризина, в граммах, ¥м.к. -объем мерной колбы, взятый при разведении испытуемого образца, Упип, - объем пипетки, взятый при разведении испытуемого образца.
Содержание циннаризина в смывах должно быть не более 0,1% от дозировки последующего препарата.
Анализ проводили на спектрофотометре (080010) типа СФ-56.
В работе использованы весы аналитические (Д 44911462) типа Shimadzu AUW 120D.
Для проведения анализа применяли следующие материалы:
- Циннаризин («Флеминг Лабораториз Лимитед», Индия), соответствующий требованиям НД 4211672-06;
- хлороформ («Merck»), соответствующий EP;
- спирт этиловый 95 % (ОАО «Татхимфармпрепараты»), соответствующий ЛСР-00633/08-070808.
Валидация методики
Описанную выше методику тестировали по следующим показателям: специфичность, линейность, предел обнаружения, повторяемость, воспроизводимость [5-6].
При испытании на специфичность методики определяют влияние растворителя. Готовят два раствора: растворитель - хлороформ и испытуемый - раствор СО циннаризина. На спектре растворителя не должно быть максимума поглощения в области поглощения циннаризина (рис. 1, 2).
- Б
Г~ 1
1 1 1 1 Длина волны, нм
250 260 270 280 290 300 310 320
Рис. 1 - УФ-спектр растворителя
D
Длина волны, rat
270 275 280 285 290 295 300 305
Рис. 2 - УФ-спектр испытуемого раствора
На рис. 1 приведен полученный спектр растворителя, на котором отсутствует максимум поглощения, принадлежащий циннаризину, что соответствует заявленному критерию
приемлемости.
Определение линейности проводили на 5 уровнях концентраций от теоретического содержания циннаризина в смывах препарата "Циннаризин таблетки 25 мг". Для анализа помещаем около 0,05 г (точная навеска) циннаризина в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляем 25 мл хлороформа, перемешиваем в течение 5 мин, доводим объем раствора хлороформом до метки и перемешиваем (раствор А). Далее в 5 пронумерованных мерных колб вместимостью 50 мл вносим по 3,0 мл, 4,0 мл, 5,0 мл, 6,0 мл, 7,0 мл раствора А, что соответствует 60%, 80%, 100%, 120% и 140% от содержания
анализируемого препарата в растворе СО. Растворы во всех 5 колбах доводим до метки хлороформом и перемешиваем. Измеряем оптическую плотность каждого из полученных растворов на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 284 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Мерой линейности является коэффициент корреляции и если его величина близка единице, то совокупность данных можно описать прямой линией. Величина коэффициента корреляции должна быть не ниже 0,995. Коэффициент корреляции составил 0,998582 (рис.2).
Таблица 2 - Оптическая плотность для 10 измерений
Рис. 2 - График линейности
Для определения предела обнаружения готовим испытуемые растворы: около 0,05 г циннаризина помещаем в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляем 25 мл хлороформа, взбалтываем в течение 10 мин, доводим объем раствора хлороформом до метки и перемешиваем (раствор А). Из раствора А готовим растворы с концентрацией 1-10-4 г/мл, 1-10-5 г/мл, 1-10-6 г/мл. Определяем наличие циннаризина в растворах, начиная с концентрации 1-10-4 г/мл и последовательно уменьшая концентрацию. Устанавливают концентрацию, при которой на спектре испытуемого раствора будет наблюдаться отсутствие максимума поглощения циннаризина при длине волны 284 нм.
Таблица 1 - Зависимость оптической плотности циннаризина от концентрации последнего в растворе
Концентрация цин-наризина в растворе, г/мл Оптическая плотность
110-4 0,5169
1-10-5 0,0523
1-10-6 0,0049
Сходимость методики определяем с помощью определения повторяемости и воспроизводимости методики.
Повторяемость методики определяли на одном образце сырья в 10 повторностях. Критерий приемлемости выражался величиной коэффициента вариации. Коэффициент вариации не должен превышать 2,0 %. Он составил 0,58 % (табл. 2), что соответствует заявленному критерию.
№ измерения Оптическая плотность
1 0,5172
2 0,5132
3 0,5218
4 0,5178
5 0,5188
6 0,5154
7 0,5139
8 0,5208
9 0,5189
10 0,5212
% отклонения 0,58
Определение воспроизводимости методики проводили на 3 образцах в двух повторностях (выполняли 2 химика) (табл. 3).
Таблица 3 - Результаты двух серий измерений
Первая серия измерений
№ образца 1 2 3
Химик № 1 0,5154 0,5114 0,5180
Химик № 2 0,5123 0,5146 0,5184
Вторая серия измерений
№ образца 1 2 3
Химик № 1 0,5127 0,5188 0,5170
Химик № 2 0,5135 0,5141 0,5162
Критерий приемлемости выражался величиной коэффициента вариации. Коэффициент вариации не должен превышать 3 %. Для 6 параллельных измерений он составил 0,56 % и 0,45 % для первой и второй серии измерений соответственно, что соответствует заявленному критерию
приемлемости.
Выводы
Была проведена валидация методики количественного определения циннаризина в смывах препарата "Циннаризин таблетки 25 мг".
Тестирование методики проводилось по показателям:
- "Специфичность";
- "Линейность";
- "Предел обнаружения";
- "Повторяемость";
- "Воспроизводимость".
По всем вышеперечисленным показателям в результате тестирования были получены значения, соответствующие заявленным критериям, что свидетельствует о воспроизводимости данной методики.
Литература
1. А. П. Арзамасцев, Н. П. Садчикова, Ю. Я. Харитонов, Фармация, № 4, 8-12 (2006).
2. ГОСТ Р 52249-2009. «Правила производства и контроля качества лекарственных средств».
3. С. Ю. Гармонов, Г. Р. Нурисламова, Р. Р. Фатхуллин, С. М. Горюнова. Вестник Казанского технологического университета, № 6, 294-305 (2006).
4. А. В. Егорова, А. А. Федосенко, Е. О. Витюкова, С. Н. Кашуцкий, Г. В. Мальцев, Вестник Одесского национального университета. Химия, Т. 19, вып. 3, 4051 (2014).
5. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения.
6. В. В. Береговых, Основные принципы проведения валидации на фармацевтическом производстве. Издательский дом «Русский врач», Москва, 2005, С. 73-97.
© С. В. Портнова - магистрант каф. аналитической химии, сертификации и менеджмента качества КНИТУ, [email protected]; М. Р. Мцариашвили - аспирант той же кафедры, [email protected]; С. Н. Егорова - д-р фарм. наук, проф., зав. каф. фармации факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки специалистов КГМУ, [email protected]; С. Ю. Гармонов - д.х.н., нроф. каф. аналитической химии, сертификации и менеджмента качества КНИТУ, [email protected].
© S. V. Portnova - undergraduate of the department of Analytical chemistry, certification and quality management, KNRTU, [email protected]; M. R., Mtsariashvili - graduate student of the department of Analytical chemistry, certification and quality management, KNRTU, [email protected]; S. N. Egorova - doctor of pharmaceutical sciences, professor, manager of department of pharmacy of faculty of professional development and professional retraining of specialists of the Kazan state medical university, [email protected]; S. Yu. Garmonov - doctor of Chemical Sciences, professor of the department of Analytical chemistry, certification and quality management, KNRTU, [email protected].
