CC BY
74
УДК 658.562:615.07
М. Р. Мцариашви. ni, С. В. Портнова, С. Н. Егорова, С. Ю. Гармонов
РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИДРОКОРТИЗОНА,
НИПАГИНА И ЕЁ ВАЛИДАЦИЯ
Ключевые слова: валидация, лекарственные средства, фармацевтическое производство, валидационные характеристики,
хроматография, гидрокортизон, нипагин.
Разработана хроматографическая методика количественного определения гидрокортизона и нипагина в препарате "Гидрокортизон, мазь глазная 0.5 %" и проведена её валидация.
Keywords: validation, pharmaceutical, pharmaceutical production, validation characteristics, chromatography, hydrocortisonum,
nipagin.
Chromatographic quantity determination method of hydrocortisonum and nipagin in the preparation of "Hydrocortisone, eye ointment 0.5%" was developed and held its validation.
Введение
Гидрокортизоновая глазная мазь применяется для лечения воспалительных заболеваний глаз. Мазь оказывает противовоспалительное,
противоаллергическое, противозудное и противоотечное действия. Уменьшает
воспалительные клеточные инфильтраты, снижает миграцию лейкоцитов и лимфоцитов в область воспаления. Назначается при неповрежденном эпителии роговицы [3, 4].
К фармацевтической продукции предъявляются очень высокие критерии безопасности. Обеспечить их можно, только предъявляя соответствующие требования к активным фармацевтическим ингредиентам (АФИ) и к вспомогательным веществам [1]. Поэтому для осуществления контроля качества лекарственных препаратов количественное определение гидрокортизона ацетата и нипагина в мази является актуальной задачей. Все большее практическое значение находят хроматографические методы анализа, в том числе высокоэффективная жидкостная
хроматография (ВЭЖХ), которая обеспечивает высокую чувствительность, специфичность и экспрессность анализа и во многих случаях альтернативы этому методу нет. ВЭЖХ позволяет одновременно определять несколько соединений, отличается достаточной точностью и воспроизводимостью, легко автоматизируема [2].
Цель данной работы: разработка хроматографической методики количественного определения гидрокортизона ацетата и нипагина в препарате «Гидрокортизон, мазь глазная 0.5 %» и её валидация.
Методика анализа
1.000 г препарата помещают в делительную воронку, растворяют в 50 мл подогретого триметилпентана, прибавляют 15 мл смеси растворителей метанол - вода (8:2) и интенсивно встряхивают на механическом встряхивателе в течение 30 мин. После расслаивания жидкостей нижний слой сливают в мерную колбу вместимостью 50 мл. Повторяют извлечение по 15
мл той же смесью растворителей дважды. Извлечения объединяют, доводят объем раствора тем же растворителем до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор не более 0.45 мкм (испытуемый раствор).
По 20 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения попеременно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором.
Условия хроматографирования:
- колонка Zorbax ODS C18 размером 150 х 4.6 мм, заполненная сорбентом с размером частиц 5 мкм, или аналогичная;
- подвижная фаза: метанол Р - вода Р (6.5 : 3.5), дегазированная любым удобным способом;
- скорость подвижной фазы - 1.0 мл/мин;
- детектирование - при длине волны 240 нм;
- температура колонки - от 17 ШС до 23 ШС;
- время хроматографирования - 15 мин.
Содержание гидрокортизона ацетата (нипагина)
(Х) в 1 г препарата, в граммах, вычисляют по формуле:
X =
Sx * т0 *2 *50 *Р
S1 * т0*Р
Sn * m, * 100 *25 * 100 5П * тЛ * 2500'
где 51 - среднее значение площадей пиков гидрокортизона ацетата (нипагина), вычисленное из хроматограмм испытуемого раствора; - среднее значение площадей гидрокортизона ацетата (нипагина), вычисленное из хроматограмм раствора сравнения; то - масса навески СО гидрокортизона ацетата (нипагина), в граммах; /771 - масса навески препарата, в граммах; Р - содержание гидрокортизона ацетата (нипагина) в СО гидрокортизона ацетата (нипагина), в процентах.
Раствор сравнения готовят следующим образом: 0.125 г СО гидрокортизона ацетата и 0.050 г СО нипагина, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 60 мл метанола, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. 2.0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора смесью растворителей
метанол Р - вода Р (8:2) до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.
Анализ проводят на ВЭЖХ (L20155075144US) типа LC-20AD.
В работе использованы весы аналитические (D449911076) типа AUW120D.
Для проведения анализа применяли следующие материалы: гидрокортизона ацетат ("Yangzhou Pharmaceutical Co.,Ltd", Китай), соответствующий требованиям ЛС-002006-280911;
метилпарагидроксибензоат ("UENO FINE CHEMICALS INDUSTRY,LTD ", Япония), соответствующий требованиям USP28-NF23 page 3358; метанол (Merck); триметилпентан (ЗАО "Экос"), соответствующий требованиям ГОСТ 12433-83.
Валидация методики
Описанную методику тестировали по показателям: специфичность, линейность, сходимость, воспроизводимость [5, 6].
При испытании на специфичность методики определяют влияние подвижной фазы и плацебо. Готовят раствор плацебо и раствор СО согласно методике. На хроматограммах подвижной фазы и раствора плацебо не должно быть пиков с временами удерживания, соответствующего временам удерживания гидрокортизона ацетата и нипагина на хроматограмме СО (рис. 1-3).
Рис. 1 - Хроматограмма подвижной фазы
Рис. 3 - Хроматограмма раствора СО
На хроматограммах подвижной фазы, раствора плацебо отсутствуют пики с временами удерживания, соответствующего временам удерживания пиков гидрокортизона ацетата и нипагина на хроматограмме раствора стандартного образца, что соответствует заявленному критерию.
Определение линейной зависимости проводили на 5 уровнях концентраций гидрокортизона ацетата и нипагина в растворе: 50 %, 75 %, 100 %, 125 %, 150 %. Коэффициент корреляции должен быть не менее 0,995. Он составил 0,999264 и 0,999131 (табл. 1, табл. 2).
Таблица 1 - Зависимость площади пика от концентрации гидрокортизона ацетата
Концентрация, % Объем раствора, мл Площадь пика
50 1,0 2228426
75 1,5 3281224
100 2,0 4345050
125 2,5 5613861
150 3,0 6792849
Коэффициент корреляции 0,999264
Таблица 2 - Зависимость площади пика концентрации нипагина
Концентрация, % Объем раствора, мл Площадь пика
50 1,0 1503632
75 1,5 2200829
100 2,0 2894352
125 2,5 3748945
150 3,0 4522864
Коэффициент корреляции 0,999131
Рис. 2 - Хроматограмма плацебо
Сходимость оценивается по результатам 10 параллельных определений содержания
гидрокортизона ацетата и нипагина в одном образце. Для этого готовят испытуемые растворы и раствор СО гидрокортизона ацетата и нипагина в соответствии с методикой. Коэффициент вариации для 10 измерений должен быть не более 2%, в нашем случае он составил 0,51 % для
гидрокортизона ацетата и 0,42 % для нипагина (табл. 3, табл. 4).
Таблица 3 - Количественное содержание гидрокортизона ацетата в растворах препарата «Гидрокортизон мазь глазная 5 мг/г"
№ измерения Площадь Количественное
пика содержание
1 4328058 0,00491
2 4367529 0,00495
3 4409930 0,00500
4 4381511 0,00497
5 4373156 0,00496
6 4375422 0,00496
7 4381247 0,00497
8 4354478 0,00494
9 4345287 0,00493
10 4382466 0,00497
% отклонения 0,51
Таблица 4 - Количественное содержание нипагина в растворах препарата «Гидрокортизон мазь глазная 5 мг/г"
№ измерения Площадь Количественное
пика содержание
1 2907940 0,00201
2 2903814 0,00200
3 2919437 0,00202
4 2918967 0,00202
5 2925379 0,00202
6 2905477 0,00201
7 2936524 0,00203
8 2925766 0,00202
9 2907432 0,00201
10 2918653 0,00202
% 0,42
отклонения
Воспроизводимость оценивается по результатам 3-х анализов, выполняемых параллельно двумя химиками в разные дни (табл. 5, табл. 6).
Таблица 5 - Количественное содержание гидрокортизона ацетата в препарате "Гидрокортизон, мазь глазная 5 мг/г"
Первая серия измерений
Номер образца 1 2 3
Химик №1 0,00489 0,00490 0,00491
Химик №2 0,00490 0,00490 0,00489
Среднее значение (п=6) 0,00490
% ЯШ (п=6) 0,15
Вторая серия измерений
Номер образца 1 2 3
Химик №1 0,00491 0,00492 0,00490
Химик №2 0,00489 0,00491 0,00492
Среднее значение (п=6) 0,00491
% ИЗБ (п=6) 0,24
Таблица 6 - Количественное содержание нипагина в препарате "Гидрокортизон, мазь глазная 5 мг/г"
Первая серия измерений
Номер образца 1 2 3
Химик 0,00202 0,00204 0,00200
№1
Химик 0,00201 0,00203 0,00205
№2
Среднее 0,00203
значение
(п=6)
% ИБО 0,92
(п=6)
Вторая серия измерений
Номер образца 1 2 3
Химик 0,00200 0,00204 0,00201
№1
Химик 0,00202 0,00203 0,00200
№2
Среднее 0,00202
значение
(п=6)
% ИБО 0,81
(п=6)
Величина критерия вариации для 6 параллельных измерений должна быть не более 2%.
Критерий вариации для 6 - параллельных измерений гидрокортизона ацетата составил 0,15 % и 0,24 % для первой и второй серии измерений соответственно и 0,92 % и 0,81 % для первой и второй серии измерений нипагина, что соответствует заявленному критерию.
Выводы
Разработана хроматографическая методика количественного определения гидрокортизона ацетата и нипагина в препарате "Гидрокортизон, мазь глазная 0.5 %".
Проведена валидация методики по следующим показателям:
- "Специфичность";
- "Линейность";
- "Сходимость";
- "Воспроизводимость".
По всем вышеперечисленным показателям в результате тестирования были получены значения, соответствующие заявленным критериям, что свидетельствует о воспроизводимости данной методики.
Литература
1. Материенко, А. С. Разработка методик определения тартразина и кармуазина в сиропе «Грипаут Бэйби» / А. С. Материенко, В. А. Грудько, В. А. Георгиянц // Научные ведомости. Серия медицина, фармация. - 2013. - № 25. - С. 232-238.
2. Кузнецова, А. Н. Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе таблеток «Тержинан» / А. Н.
Кузнецова, Е. А. Илларионова, Г. А. Федорова // Сибирский медицинский журнал. - 2013. - № 1. -С. 68-71.
3. Гидрокортизон, мазь глазная [Электронный ресурс] // Татхимфармпрепараты: сайт ОАО «Татхимфармпрепараты». - Режим доступа: http://www.tatpharm.ru/cgi-in/go.pl?a=1&i=408
4. Гидрокортизоновая глазная мазь [Электронный ресурс] // Про Глаза: сайт про глаза и их заболевания. - 2016. -Режим доступа:
http://proglaza.ru/drugs/mazi/gidrokortizonovaya-glaznaya-maz-e.html
5. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Ч.1. Основные положения и определения. - Введ. 2002-1101. - М. : Изд-во стандартов, 2002. - 24 с.
6. Береговых, В. В. Основные принципы проведения валидации на фармацевтическом производстве / В. В. Береговых. - М.: Издательский дом «Русский врач», 2005. - С. 73-97.
© М. Р. Мцариашвили - аспирант каф. аналитической химии, сертификации и менеджмента качества КНИТУ, [email protected]; С. В. Портнова - магистрант той же кафедры, [email protected]; С. Н. Егорова - д-р фарм. наук, проф., зав. каф. фармации факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки специалистов КГМУ, [email protected]; С. Ю. Гармонов - д.х.н., проф. каф. аналитической химии, сертификации и менеджмента качества КНИТУ, [email protected].
© M. R., Mtsariashvili - graduate student of the department of Analytical chemistry, certification and quality management, KNRTU, [email protected]; S. V. Portnova - undergraduate of the department of Analytical chemistry, certification and quality management, KNRTU, [email protected]; S. N. Egorova - doctor of pharmaceutical sciences, professor, manager of department of pharmacy of faculty of professional development and professional retraining of specialists of the Kazan state medical university, [email protected]; S. Yu. Garmonov - doctor of Chemical Sciences, professor of the department of Analytical chemistry, certification and quality management, KNRTU, [email protected].
