CC BY
240
УДК 616-006.81:615.371:611.018.83
I.N. Mikhaylova, N.N. Petenko, L.V. Demidov
DENDRITIC CELL VACCINE THERAPY OF MELANOMA
N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow
ABSTRACT
Active specific immunotherapy using dendritic cells is a new approach of cancer therapy. This paper reviews manufacture principles of dendritic cell based vaccine, clinical application in melanoma treatment, the role of immune system in cancer elimination, problems of low clinical effectiveness and optimization of dendritic cell vaccine.
Key words: vaccine, dendritic cell, melanoma, tumor antigens, immune system.
И.Н. Михайлова, Н.Н. Петенко, Л.В. Демидов
ВАКЦИНОТЕРАПИЯ МЕЛАНОМЫ ДЕНДРИТНЫМИ КЛЕТКАМИ
ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва
РЕЗЮМЕ
Активная специфическая иммунотерапия с использованием дендритных клеток представляет собой новый метод лечения злокачественных опухолей. В обзоре изложены принципы создания дендритной вакцины, возможности ее клинического применения в лечении меланомы, роль иммунной системы в элиминации опухолевых клеток, проблемы низкой эффективности и перспективы оптимизации вакцины на основе дендритных клеток.
Ключевые слова: вакцина, дендритные клетки, меланома, опухолевые антигены, иммунная система.
ВВЕДЕНИЕ
Меланома является злокачественной опухолью, развивающейся из меланоцитов, расположенных преимущественно в коже [2]. Меланома кожи является иммуногенной опухолью, т.е. способной индуцировать Т-клеточный противоопухолевый иммунитет in vivo. Иммунная реакция развивается против специфических или опухолеассоциированных антигенов (ОАА), экспрессируемых на поверхности опухолевой клетки в комплексе с молекулой MHC I типа [15; 27; 38; 47; 81; 94]. В этом отношении меланома является самой изученной опухолью, поскольку для нее идентифицировано наибольшее количество ОАА, многие из которых являются специфичными и иммуногенны-ми [15; 17; 27]. Вопреки негативной клональной селекции в тимусе, определяющей естественную толерантность к антигенам собственных тканей, в периферической крови здоровых людей обнаруживаются наивные Т-лимфоциты, рестрицированные по аутоантигенам (например, к дифференцировочным антигенам нормальных меланоцитов кожи) [24; 115].
Ярким примером эффективности противоопухолевого иммунитета in vivo является феномен спонтанной регрессии, встречающийся при меланоме наибо-
лее часто. По данным John Wayne Cancer Institute в 30 % случаев первичной меланомы отмечаются признаки некоторой регрессии, а 14 % регионарных метастазов меланомы случаются в отсутствии первичного очага (предположительно по причине спонтанной регрессии первичной опухоли) [68]. Частота спонтанной регрессии метастатической меланомы, включающая полную и частичную клиническую ремиссию, составляет по данным разных авторов от 0,25 до 1,0 % [7; 14]. Многие клинические исследования свидетельствуют о корреляции регрессии меланомы и активации опухолеспецифичных CD8+ и CD4+ Т-лимфоцитов, которые обнаруживают в периферической крови и удаленных регрессирующих метастазах [17; 35; 62; 110; 117].
ПЕРСПЕКТИВЫ ЛЕЧЕНИЯ
Несмотря на перечисленные особенности, лечение диссеминированной меланомы представляет серьезную проблему, поскольку пока не существует доказательств, что системная терапия приводит к значительному увеличению продолжительности жизни больных. Согласно клиническим рекомендациям ESMO по диагностике и лечению меланомы кожи паллиативная химиотерапия отдельными препаратами (дакарбазин,
виндезин, темозоломид) может быть рекомендована пациентам с хорошим соматическим статусом. В других ситуациях должно проводиться симптоматическое лечение. Не существует доказательств, что комбинированная химиотерапия или химиоиммунотерапия эффективнее терапии дакарбазином. В настоящее время не существует стандартной адъювантной терапии для пациентов с высоким риском рецидива заболевания [4].
В связи с этим на протяжении последнего десятилетия активно исследуются методы специфической иммунотерапии меланомы, в частности, вакцинотерапии с использованием дендритных клеток (ДК), целью которого является индукция противоопухолевого иммунитета in vivo. Аутологичные ДК онкологического больного, стимулированные опухолевыми антигенами in vitro и введенные обратно пациенту, являются основой противоопухолевой вакцины, которая будет рассмотрена ниже.
ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ
Первое упоминание о дендритных клетках относится к 1868 г., когда P. Langerhans обнаружил в поверхностных слоях кожи человека белые отростчатые эпидермоциты [59]. В 1973 г. R. Steinman и Z. Cohn выделили из селезенки мыши особый тип клеток, которые благодаря своим ветвистым отросткам назвали дендритными, и которым в дальнейшем была определена важная роль в индукции иммунного ответа [101].
ДК являются главными антиген-презентирующими клетками (АПК), способными инициировать и регулировать как первичный, так и вторичный Т- и В-клеточный иммунный ответ [6; 31; 98]. Они представляют собой гетерогенную популяцию костномозгового происхождения, принимают активное участие в противоопухолевом и инфекционном иммунитете, в реакции отторжения трансплантата, иммунологической толерантности, патогенезе некоторых клинических синдромов и заболеваний [1; 50]. По степени дифференцировки ДК делятся на зрелые, незрелые и предшественники.
Главная функция незрелых ДК состоит в захвате чужеродного антигена (АГ), его процессинге и транспортировке во вторичные лимфоидные органы, где запускается 1-й этап специфического иммунного ответа. После контакта с АГ в присутствии дополнительных костимуляторных сигналов ДК активируются и созревают. Процессинг заключается в эндосомаль-ной деградации чужеродного АГ до пептидных фрагментов, которые после образования комплекса с молекулами MHC II класса доставляются на поверхность ДК для последующей активации наивных CD4+ Т-лимфоцитов. В контексте молекулы MHC I класса ДК представляют эндогенно синтезированные пептиды, эти комплексы могут активировать наивные CD8+ Т-лимфоциты. В некоторых ситуациях экзогенные антигены, захваченные ДК, могут «кросс -
презентироваться» и попадать на поверхность вместе с молекулой MHC II класса. Для эффективной реали-
зации противоопухолевого иммунного ответа ДК должна активировать обе субпопуляции Т-лимфоцитов (CD4+ и CD8+) [1; 50]. В отсутствии необходимых костимуляторных сигналов или при недостаточном созревании ДК стимулирует иммунный ответ неполноценно.
ИСТОРИЯ ДК ВАКЦИНОТЕРАПИИ
Именно эти уникальные свойства ДК побудили многих исследователей к созданию первых предкли-нических моделей иммунотерапии рака дендритными клетками, которые предварительно стимулировали опухолевыми антигенами in vitro. Подкожное введение ДК приводило к регрессии опухолевых микрометастазов у мышей [30; 72; 116] и защищало их при последующей трансплантации слабоиммуногенной мышиной опухоли [34; 43]. Первое клиническое исследование было проведено в 1995 г. группой ученых под руководством B. Mukherji. В качестве вакцины для лечения больных метастатической меланомой использовали незрелые аутологичные ДК, полученные из мононуклеаров периферической крови (МПК), обработанные синтетическим меланомным антигеном MAGE-1. Клинической эффективности отмечено не было, но у лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль (TILs) после вакцинации, появилась способность ли-зировать аутологичные опухолевые клетки in vitro [71]. Впервые была продемонстрирована возможность индукции противоопухолевого иммунного ответа дендритными клетками у человека. Последующие клинические испытания F. Hu в 1996 г. и F. Nestle в 1998 г. свидетельствуют об иммунологической и клинической эффективности ДК вакцины в лечении меланомы [48; 75].
Однако перед исследователями оставалось еще много открытых вопросов. Способ получения и степень зрелости ДК, источник опухолевого антигена, путь введения вакцины, доза, длительность лечения и др. - каждый этап изготовления и применения ДК вакцины требовал многочисленных и длительных исследований.
К настоящему времени в мире проведено уже более 100 клинических испытаний I—II фаз с использованием ДК в лечении различных онкологических нозологий (меланома — 33 %, рак простаты — 13 %, множественная миелома — 12 %, рак толстой кишки —
11 %, молочной железы — 10 %, почки — 6 %, глиобла-стома — 5 %, рак легкого — 4 %, лимфома — 4 %, рак пищевода — 3 %, саркома 3 — %, а также отдельные исследования по раку яичников, поджелудочной железы, мочевого пузыря, печени, желудка и др. — всего 24) [88]. Следует отметить, что в настоящее время в мире проводится 49 клинических исследований ДК вакцины, причем 15 из них по меланоме [118]. Итак, меланома занимает 1/3 часть всех клинических исследований на протяжении всего периода исследования ДК вакцины.
В отсутствии выраженных побочных эффектов объективная клиническая эффективность данного ме-
тода в лечении диссеминированной меланомы у разных исследователей варьирует от 0 до 31 % [5; 45; 48; 63; 71; 75; 80; 89; 105].
ИСТОЧНИК ДК
К настоящему моменту разработаны следующие методики получения ДК:
1. In vitro трансформация предшественников ДК с помощью цитокинового коктейля, полученных (1) из малочисленных, но пролиферирующих CD34+ стволовых клеток периферической крови (+ГМ-КСФ и ФНО-а) [5; 65; 83; 102], (2) из многочисленных, но не пролиферирующих CD 14+ МПК (+ГМ-КСФ и ИЛ-4) [10; 45; 80; 89; 104].
2. Получение натуральных ДК из периферической крови, поскольку они являются очень немногочисленными и непролиферирующими, их также можно выделять после in vivo стимуляции Flt3L [66]. Все виды клеток выделяют из периферической крови пациента при помощи лейкафереза.
ДК, полученные разным способом, имеют некоторые фенотипические отличия, но практически одинаково эффективно могут как стимулировать специфический Т-клеточный иммунный ответ in vivo, так и вызывать клиническую ремиссию у онкологических больных [79]. Исследовательской группой F. Sallusto и A. Lanzavecchia установлено, что ГМ-КСФ и ИЛ-4 являются оптимальными цитокинами для культивирования ДК, на основании чего была разработана методика получения значительных количеств ДК из МНК для клинического применения [51; 95]. В большинстве современных протоколов используются ДК, выделенные из МПК.
СТЕПЕНЬ ЗРЕЛОСТИ ДК
Поскольку ДК разной степени зрелости обладают разными свойствами и функциями, в предклиниче-ских моделях и клинических исследованиях применяли как зрелые, так и незрелые ДК. Иммунологические и клинические эффекты в лечении меланомы удавалось получить при использовании обоих видов клеток [36; 45; 48; 63; 71; 75; 80; 89; 105; 112]. Однако сравнительные исследования параллельного применения незрелых и зрелых ДК показали преимущество последних [22; 51; 54; 89; 90]. Незрелые ДК являются индукторами естественной толерантности к аутологичным АГ [1; 50]. Использование ДК незрелого фенотипа, обладающих слабыми иммуногенными свойствами, приводит к абортивной пролиферации и анергии клеток эффекторов [79], индукции толерантности к опухолевым АГ в результате активации CD4+ и CD8+ регуляторных Т-клеток (Treg), секретирующих ИЛ-10 и TGFP - цитокины, которые угнетают иммунную систему [23; 53; 54]. Также было показано, что зрелые ДК обладают более активными миграционными способностями [111]. Поэтому в цитокиновый коктейль, используемый для культивирования ДК, вводят факторы, стимулирующие созревание, например, ФНО-а, ПГЕ2, ИЛ-6, ИЛ-1Р и CD40L в различных
комбинациях или кондиционную среду зрелых моноцитов [52; 104]. Зрелые ДК характеризуются экспрессией CD83 и HLA-DR, CD80, CD86, CD54, CD40, CCR7 и отсутствием CD1a [1; 50].
КОСТИМУЛЯТОРНЫЕ СИГНАЛЫ
Для эффективной генерации цитотоксических лимфоцитов (ЦТЛ) из наивных CD8+ необходимо участие CD4+ Т-хелперных клеток 1-го типа (Th1), опосредуемое через CD40-CD40L взаимодействие между ДК и Th1 [96]. CD40L является критическим фактором в индукции CD8+ клеток памяти, а также способствует дифференцировке CD4+ Т-лимфоцитов в сторону Th1-клеток. Воздействие CD40L усиливает экспрессию костимуляторных молекул CD80 и CD86 на ДК, стимулирует их дифференцировку и созревание, обеспечивает лучшее выживание клеток, улучшает миграционные способности ДК, усиливая экспрессию хемокина CRC7 на их поверхности, индуцирует синтез ИЛ-12, а также активирует «кросс-презентацию» экзогенных антигенов [11; 19; 82; 87]. Продуцируя ИЛ-6, зрелые ДК могут ингибировать натуральные регуляторные CD4+CD25+ T-лимфоциты. Наличие экспрессии CD40 на поверхности зрелых ДК определяет Т-клеточное праймирование, в противном случае индуцируется Treg-обусловленная иммуносупрессия [85; 92]. Таким образом, прямое или опосредованное регуляторное взаимодействие CD40-CD40L является неотъемлемым компонентом полноценной иммунной реакции.
В качестве дополнительных костимуляторных сигналов могут также выступать агонисты Toll-like рецепторов (TLR), индуцирующие транскрипцию генов провоспалительных цитокинов (ФНО-а, ИЛ-6, ИЛ-1Р) в ДК и физиологично стимулирующих их созревание [58].
In vivo индуцированная естественная популяция инвариантных натуральных киллерных Т-клеток (иНКТ), помимо непосредственной противоопухолевой активности, оказывает важнейшее иммунорегуля-торное воздействие на все этапы реализации специфического иммунного ответа с задействованием CD40-CD40L-взаимодействий и TM-звена [12; 16; 20; 44; 49; 57; 61; 70; 77; 78; 109].
ИСТОЧНИК АГ
Антигенная стимуляция ДК может осуществляться различными агентами, среди них: синтетические пептиды [29; 71], аутологичный или аллогенный опухолевый лизат [89; 94], апоптотические или некротические аутологичные опухолевые клетки [80; 84], ДНК или РНК [40; 108], вирусные векторы (ретровирусы, аденовирусы, птичий вирус оспы) [25; 37; 60], также использовались гибриды опухолевой и дендритной клетки [8], микросферы с синтетическими пептидами [113].
Cинтетические пептиды представляют собой опухолеассоциированные антигены (ОАА), рестрициро-ванные по MHC I или II типа (для меланомы -
MelanA, gp100, tyrosinase, Mage-A3, NY-ESO и др.), их использование позволяет мониторировать антиген-специфичный Т-клеточный иммунный ответ у пациентов при помощи тетрамерного анализа, ELISPOT и внутриклеточного окрашивания на цитокины [76]. Однако репертуар противоопухолевых Т-лимфоцитов узок, а отбор пациентов ограничен HLA фенотипом и экспрессий данного антигена в опухолевой ткани. При использовании аутологичного опухолевого лизата таких ограничений нет, однако активируются преимущественно Th1-лимфоциты с меньшим участием Т-киллеров за счет неактивной «кросс-презентации». В то же время аутолизат содержит весь спектр опухолевых АГ пациента, включая уникальные ОАА, возникшие вследствие точечных мутаций и определяющие наибольшую специфичность вакцины. Стимулируя ДК апоптотическими клетками меланомы, можно задействовать оба пути презентации АГ. Это было успешно продемонстрировано на мышиной модели: активированные противоопухолевые CD4+ и CD8+ Т-лимфоциты эффективно защищали мышей при трансплантации слабоиммуногенной мышиной меланомы [34]. M. O’Rourke использовал данный подход в лечении метастатической меланомы у людей и добился объективного ответа у 6 из 19 пациентов [80].
Аутологичный опухолевый материал содержит и неопухолевые белки, однако на сегодняшний момент индуцированных аутоиммунных заболеваний зафиксировано не было. Из аутоиммунных проявлений — витилиго, которое является положительным фактором прогноза [88]. В ситуациях, когда аутологичный материал недоступен, может быть применен аллогенный лизат от другого пациента.
ДК также могут быть активированы вирусными векторами, в геном которых введены гены ОАА. Однако высокая иммуногенность собственных вирусных продуктов, вызывающая образование цитотоксиче-ских противовирусных Т-клеток и нейтрализующих антител, приводит к скорой элиминации вирус-инфицированных клеток [13]. Также существует проблема эпидемиологической опасности. Это ограничивает широкое применение данного метода в рамках клинических исследований, на данный момент их проведено всего несколько [21; 37; 107]. Перспективным методом, лишенным подобных недостатков, является трансфекция РНК или ДНК ОАА в ДК [40; 108]. Остальные способы нагрузки ДК менее распространены, поэтому клинический опыт пока небольшой.
ПУТЬ ВВЕДЕНИЯ И ДОЗА ВАКЦИНЫ
Для реализации противоопухолевого иммунного ответа зрелые активированные ДК должны достичь Т-клеточной зоны вторичного лимфоидного органа [50] в количестве, по мнению некоторых авторов, как минимум 1000—2000 клеток [80]. В проведенных к настоящему времени клинических исследованиях применялись различные способы введения и дозовые режимы вакцинаций, среди них: внутрикожный (в/к),
подкожный (п/к), внутривенный (в/в), в лимфатический узел (л/у) или афферентный лимфатический сосуд под ультразвуковым контролем, при этом дозы варьировали от 1х105 до 1х108 клеток [88].
При изучении биораспределения ДК, меченных радиоизотопом и введенных различными способами онкологическим больным, показано [69; 86; 94]:
- при в/к введении регионарные л/у достигает около 1-2 % клеток (такого количества оказывается вполне достаточным для реализации противоопухолевого иммунного ответа);
- п/к - на порядок меньше, чем при в/к;
- при введении в л/у - до 80 %;
- в/в - сначала ДК накапливаются в легких, затем мигрируют в селезенку, печень и костный мозг.
По данным сравнительных исследований наиболее эффективными в индукции иммунного и клинического ответа признаны в/к введение и в л/у [9; 18; 32]. Введение ДК в л/у позволяет избежать миграционных трудностей и доставить к цели почти все ДК, однако технические сложности метода, нарушение структуры л/у, сопровождающее лечение, и отсутствие драматического увеличения эффективности оставляют данный подход в категории активно исследуемых, рутинно же применяется в/к введение вблизи лимфатических коллекторов [32; 86].
Эскалация дозы клеток, введенных чрескожно, не приводит к повышению частоты клинических регрессий или интенсивности Т-клеточного ответа на контрольные или меланомные АГ [5; 80; 89]. При сравнительном анализе 10 клинических исследований по меланоме зависимости доза - эффект также отмечено не было [67].
РЕЖИМ ВАКЦИНАЦИИ
По данным предклинических экспериментов установлено: частые вакцинации способствуют прайми-рованию наивных Т-лимфоцитов [64]. После сенсибилизации частые введения вакцины могут привести к обратному результату и стать причиной лизиса ДК [42]. При частых вакцинациях введенные ДК и индуцированные Т-лимфоциты могут секвестрироваться в местах инъекций вследствие выраженной РГЗТ [97]. Эти факторы необходимо учитывать при выборе лечебного режима.
Лечебный курс вакцинотерапии диссеминированной меланомы с использованием ДК в большинстве клинических исследований состоит из вводной фазы и изначально ограничен несколькими введениями с интервалом от 2 до 8 нед [88]. Лишь некоторые исследователи предусматривают поддерживающую фазу введения вакцины в менее интенсивном режиме, продолжающуюся до объективного прогрессирования заболевания [80]. Как считает крупнейший исследователь в области иммунологии Я. Zinkernagel, вакцина должна не только индуцировать противоопухолевый иммунный ответ, но и длительно поддерживать его активность на высоком уровне [114].
Резидуальные микрометастазы могут оставаться в организме и после достижения полной ремиссии, вполне вероятно, что длительное лечение может обеспечить более высокую продолжительность безреци-дивного промежутка [80].
ЭФФЕКТИВНОСТЬ
В 2004 г. S. Rosenberg, используя данные метаанализа 98 клинических исследований ДК вакцины, представленные D. Ridgway [88], опубликовал обзорную статью, критикующую данный иммунотерапев-тический подход, поскольку средний показатель клинической эффективности ДК вакцины в лечении диссеминированных злокачественных заболеваний составил только 7,6 % [91]. На наш взгляд, такое обобщение является не совсем верным.
Большая часть проведенных клинических исследований ДК вакцины являются исследованиями I фазы, которые спланированы для определения токсичности и максимально переносимой дозы исследуемого препарата, а не объективной эффективности. Исторически только у 4—6 % больных, включенных в исследование I фазы, отмечается клиническая эффективность [74]. В исследованиях в основном участвовали пациенты с большой опухолевой нагрузкой после интенсивного лекарственного лечения, скомпрометированной иммунной системой и общим статусом больного (PS по шкале ECOG > 2). Кроме того, ранние исследования носили поисковый характер (использование незрелых ДК, единичных антигенов, ассоциированных с меланомой (МАА), в/в путь введения и пр.), за весь период исследования процедура ДК вакцинотерапии значительно усовершенствовалась и упростилась.
Анализируя клинические исследования, в которых были зафиксированы объективные клинические ремиссии, важно отметить, что в основном эффект наблюдался у пациентов с умеренной опухолевой нагрузкой и хорошим соматическим статусом (PS по шкале ECOG 0—2). Регрессии чаще подвергались метастатически пораженные л/у, кожа и мягкие ткани или единичные висцеральные метастазы небольших размеров (см. таблицу). Для бурно прогрессирующих пациентов с массивными опухолевыми образованиями и PS 3-4 ECOG вакцинотерапия с использованием ДК оказывалась неэффективной [71].
M. O’Rourke в клиническом исследовании 2003 г. предпринял попытку проанализировать корреляцию клинической эффективности ДК вакцины и распространенности опухоли при лечении диссеминированной меланомы [80]. В качестве прогностического критерия оценивался сывороточный МАА S100b, уровень которого, как известно, повышается при увеличении стадии заболевания (I/II 0—12,0 %; III 8,7—31%; IV 48— 100 %) [36; 41; 55; 56; 99] и коррелирует с интенсивностью метастатической опухолевой нагрузки при меланоме [39; 99]. Используя принципы ROC-анализа [26], M. O’Rourke определил пороговое значение сывороточного S 100b <0,36 мкг/мл, определяющее с
чувствительностью 83,3 % и специфичностью 75 % эффективность проводимой вакцинотерапии. Анализ выживаемости (Kaplan-Meier) пациентов, разделенных по группам согласно пороговому уровню S 100b, показал достоверное различие (log rank p<0,001). Иными словами, у пациентов, прогрессирующих на фоне лечения, периферические и висцеральные метастазы имели более крупные размеры и уровень S100b превышал 0,36 мкг/мл по сравнению с пациентами, ответившими на лечение [80].
Самостоятельные циторедуктивные хирургические вмешательства при меланоме III и даже IV стадий способствуют улучшению общей выживаемости [3; 46]. Поэтому комбинация радикального/циторедуктивного хирургического подхода с последующей ДК вакцинотерапией представляется наиболее оптимальной в лечении метастатической меланомы.
ОПТИМИЗАЦИЯ ДК ВАКЦИНЫ
В настоящее время пока не определено, какое количество противоопухолевых Т-клеток необходимо для эффективной элиминации опухоли, однако интенсивность и продолжительность индуцированного иммунного ответа, а также клиническая эффективность современной ДК вакцины в лечении меланомы для успешного прохождения III фазы клинических испытаний должны превышать текущие показатели.
ДК являются важным связующим звеном между врожденной и приобретенной иммунными системами [100]. По мнению ряда авторов, регуляторные свойства некоторых агентов неспецифического иммунитета, в частности, натуральных киллерных Т-лимфоцитов (НКТ), могут быть эффективно использованы в качестве естественного адъюванта [12; 20; 49; 79], поскольку они являются источником мощных стимуля-торных сигналов для ДК [61; 109].
Инвариантные Va24+Vß11+ НКТ-клетки человека являются субпопуляцией Т-лимфоцитов реактивных к гликолипидам, представленных в комплексе с MHC-подобной молекулой CD1d, в крови онкологических больных их количество резко снижено [70]. Синтетическим лигандом для CD1d, активирующим иНКТ, является a-galactosylceramide (a-galcer), который представляет собой простейший гликолипид, впервые выделенный из морской губки Agelas mauritianus и выполняющий структурную функцию в миелиновых оболочках нервной системы человека. Зрелые ДК активно экспрессируют на своей поверхности CD1d, с которой a-galcer может образовывать комплекс [12].
Предклинические мышиные модели in vivo и человеческие in vitro свидетельствуют о том, что активация НКТ-клеток может способствовать индукции эффективного противоопухолевого иммунного ответа, а также активации традиционных Т- и НК-клеток и обладает терапевтическим потенциалом в лечении злокачественных опухолей человека [73; 106]. Кроме того, НКТ-клетки проявляют прямую противоопухолевую цитотоксичность и антипролифирационную активность [57; 77]. А главной регуляторной ролью
I/II фаза клинических исследований ДК вакцинотерапии диссеминированной меланомы
Автор, ссылка n* Характеристика вакцины: источник ДК, нагрузка АГ, адъювант Путь введения Эффективность
Клиническая** Иммунологическая
1998, F. Nestle, [75] 16 МонДК, аутологичный опухолевый лизат и пептиды (HLA-A1: MAGE1/ MAGE3; HLA-A2: MelanA, tyr, gp100), +KLH л/у ОО 31 % (ПО 2, ЧО 3), СО 1 + РГЗТ на KLH (n=16), + РГЗТ на ДК+пептиды (n=11)
1999, B. Thurner, [103] 13 МонДК, пептид (HLA-A1: MAGE 3) п/к, в/к, в/в ОО 15,4 % (ЧО 2), регресс отдельных мтс (n=4) + РГЗТ на ДК+пептид (n=7/11) + Elispot (n=2/11), + MAGE 3 CD8+ (n=8/11)
2001, J. Banchereau, [5] 21 CD34+ДК, пептиды (Melan A, tyr, MAGE-3, gp100), +Flu-MP, +KLH п/к ОО 19 % (ПО 3, ЧО 1), регресс отдельных мтс (n=2), СЗ 6 + РГЗТ на один из пептидов (n=10/10) + Elispot (n=16/18), витилиго (n=2)
2001, M. Toungouz, [105] 23 MoнДК, пептиды (MAGE-A1, MAGE-A3), +KLH в/в, п/к ОО 8,7 % (ЧО 2), СЗ 5 + Elispot (n=12)
2003, M. O’Rourke, [80] 19 МонДК, аутоло-личные облученные опухолевые клетки в/к ОО 31,5 % (ПО 3, ЧО 3) + РГЗТ на аутологичный опухолевый материал (n=3/10)
2006, R. Ridolfi, [89] 21 МонДК, аутологичный опухолевый ли-зат/гомогенат, +ИЛ-2, +KLH в/к ОО 9,5 % (ПО 1, ЧО 1), СО 2, СЗ 2 + РГЗТ на KLH (n=10), + РГЗТ на аутологичный опухолевый ли-зат/гомогенат (n=5), витилиго (n=3)
2006, J. W. Fay, [28] 20 МонДК, облученные аллогенные опухолевые клетки меланомы, +KLH ? ОО 10 % (ПО 1, ЧО 1) + MelanA CD8+ (n=?)
*анализ результатов по принципу Intent-to-treat; **оценка клинической эффективности по критериям RECIST; n - количество пациентов; МонДК - ДК, полученные из МПК; CD34+ДК - ДК, полученные из стволовых клеток периферической крови; Flu-MP (influenza matrix peptide) - матриксный пептид вируса гриппа; KLH (keyhole, limpet hemocyanin) - гемоцианин морского моллюска, высоко иммуногенный белковый носитель; РГЗТ - реакция гиперчувствительности замедленного типа; ОО - объективный клинический ответ (ПО+ЧО); ПО - полный ответ; ЧО - частичный ответ; СЗ - стабилизация заболевания; СО - смешанный ответ.
НКТ считается посредничество между врожденной и приобретенной иммунной системами [78].
В клинических исследованиях при использовании чистого а^аісег и в большей степени ДК, нагружен-
ных данным гликолипидом (ДК+galcer) у онкологических больных, продемонстрирована выраженная активация НКТ-клеток, которая проявлялась в количественном увеличении этой популяции клеток (>100 раз,
длительностью несколько мес), а также стимуляцией первичного и вторичного Т-клеточного иммунитета, усилением цитотоксических свойств НК-клеток, повышением сывороточных IFN-y и ИЛ-12, при этом выраженной токсичности отмечено не было [110; 111]. У пациентов с распространенной злокачественной опухолью после введения ДК+galcer при помощи методов Elispot и MHC-tetramer в периферической крови определяли повышение уровня специфических Т-клеток памяти к протеину цитомегаловируса по сравнению с контролем (ДК без galcer) [110]. Следует отметить, что у одного пациента, который предварительно рутинно вакцинировался от гриппа, после введения ДК+galcer развился интенсивный специфический CD8+ Т-клеточный ответ на матриксный пептид вируса гриппа, который является активатором гуморального иммунитета и в очень незначительной степени Т-клеточного [20].
Принципиально важными являются исследования, в которых помимо a-galcer или ДК+a-galcer вводились контрольные антигены, например, овальбумин или ОАА NY-ESO, к которым отмечался выраженный и длительный специфический CD8+ и CD4+ Т-клеточный ответ, обусловленный активацией ДК на этапе прайми-рования. Примечательно, что иммунный ответ развивался даже при введении АГ перорально [33; 44].
Итак, индуцированные НКТ-клетки способны:
1) обеспечить дополнительные стимуляторные сигналы для ДК in vivo;
2) стимулировать первичный и усиливать вторичный иммунный ответ;
3) инициировать клеточный иммунитет при введении АГ перорально;
4) сохранять свою популяцию в периферической крови в течение нескольких мес, сохраняя активные регуляторные свойства.
При использовании естественных агонистов TLR можно добиться еще большего усиления положительного влияния НКТ на ДК [16].
Таким образом, представляется чрезвычайно актуальным использование адъювантных свойств инвариантных НКТ для увеличения интенсивности и продолжительности специфического противоопухолевого иммунного ответа, индуцированного вакциной на основе дендритных клеток и как следствие клинической эффективности.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Вакцинотерапия меланомы с использованием ДК остается экспериментальным и активно исследуемым методом лечения. Благодаря последним научным достижениям разрабатываются новые оптимизированные режимы получения и применения ДК вакцины, которая в будущем, возможно, займет свое место в арсенале стандартных противоопухолевых средств.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гантиевская Ю.А., Селявко В.В. Дендритные клетки: роль в системе иммунитета // Иммунопатоло-
гия, аллергология, инфектология. - 2001. - № 4. - С. 5-23
2. Давыдов М.И. Энциклопедия клинической онкологии. - ISBN: 5-7182-0026-2 РЛС, 2004. - С. 350.
3. Демидов Л.В. Хирургическая "погоня" за метастазами меланомы // V российская онкологическая конференция, Москва, 27- 29 ноября 2001.
4. Минимальные клинические рекомендации Европейского Общества Медицинской Онкологии (ESMO). УДК 616-006.6 (Клинические рекомендации ESMO по диагностике, лечению и наблюдению при меланоме кожи), 62-66, Bristol-Myers Squibb, 2006. -С. 35-8.
5. Banchereau J., Palucka A., Dhodapkar M. et al. Immune and clinical responses in patients with metastatic melanoma to CD34(+) progenitor-derived dendritic cell vaccine // Cancer Res. - 2001. - 61(17). - P. 6451-8.
6. Banchereau J., and Steinman R. Dendritic cells and the control of immunity // Nature. -1998. - 392. - P. 245-52.
7. Baldo M., Schiavon M. Spontaneous regression of subcutaneous metastasis of cutaneous melanoma // Plast. Reconstr. Surg. - 1992. - 90. - P. 1073-6.
8. Barbuto J., Ensina L., Cicogna P. еt al. Dendritic cell-tumor cell hybrid vaccination for metastatic cancer // Cancer Immunol. Immunother. - 2004. - 53(12). - P. 1111-8.
9. Bedrosian I., Mick R., Xu S. et al. Intranodal administration of peptide-pulsed mature dendritic cell vaccines results in superior CD8+ T-cell function in melanoma patients // J. Clin. Oncol. -2003. - 21(20). - P. 3826-35.
10. Bender A., Sapp M., Schuler G. et al. Improved methods for the generation of dendritic cells from nonproliferating progenitors in human blood // J. Immunol. Methods. - 1996. - 196. - P. 121-35.
11. Bennett S., Carbone F., Karamalis F. et al. Help for cytotoxic-T-cell responses is mediated by CD40 signalling // Nature. - 1998. - 393. - P. 478-80.
12. Berkers C., Ovaa H. Immunotherapeutic potential for ceramide-based activators of iNKT cells // Trends in Pharmacological Sciences. - 2005. - 26(5). - P. 245-57.
13. Bocchia M., Bronte V. Antitumor vaccination: where we stand // Haematologica. - 2000. - 85. - P. 1172-1206.
14. Bodurtha A. Spontaneous regression of malignant melanoma. In: Clarke WH, Goldman M, Mastrangelo JM (eds) Human malignant melanoma. Grune & Stratton, New York, 1979. - 227 p.
15. Boon T., Pierre C., Benoiît J. et al. Human T-Cell Responses Against Melanoma // Annu. Rev. Immunol. - 2006. - 24. - 6.1-6.34.
16. Brigl M., Bry L., Kent S. et al. Mechanism of CD1d-restricted natural killer T cell activation during microbial infection // Nat. Immunol. - 2003. - 4. - P. 1230-7.
17. Bruggen P., Zhang Y., Chaux P. et al. Tumor-specific shared antigenic peptides recognized by human T cells // Immunol. Rev. - 2002. - 188. - P. 51-64.
18. Butterfield L., Ribas A., Dissette V. et al. Determinant spreading associated with clinical response in dendritic cell-based immunotherapy for malignant melanoma // Clin. Cancer. Res. - 2003. - 9(3). - P. 998-1008.
19. Cella M., Scheidegger D., Palmer-Lehmann K. et al. Ligation of CD40 on dendritic cells triggers production of high levels of interleukin-12 and enhances T cell stimulatory capacity: T-T help via APC activation // J. Exp. Med. - 1996. - 184. - P. 747-52.
20. Chang D., Osman K., Connolly J. et al. Sustained expansion of NKT cells and antigen-specific T cells after injection of a-galcer loaded mature dendritic cells in cancer patients // J. Exp. Medicine. - 2005. -201 (9). - P. 1503-17.
21. Di Nicola M, Carlo-Stella C., Mortarini R. et al. Boosting T cell-mediated immunity to tyrosinase by vaccinia virus-transduced, CD34(+)-derived dendritic cell // Clin Cancer Res. -2004. - 10(16). - P. 5381-90.
22. Dhodapkar M., Steinman R. Antigen-bearing immature dendritic cells induce peptide-specific CD8(+) regulatory T cells in vivo in humans // Blood. - 2002. -
100. - P. 174-7.
23. Dhodapkar M., Steinman R., Krasovsky J. et al. Antigen-specific inhibition of effector T cell function in humans after injection of immature dendritic cells // J. Exp. Med. -2001. - 193. - P. 233-8.
24. Dutoit V., Rubio-Godoy V., Pittet M. et al. Degeneracy of antigen recognition as the molecular basis for the high frequency of naive A2/Melan-A peptide mul-timer+ CD8+ T cells in humans // J. Exp. Med. - 2002. -196. - P. 207-16.
25. Engelmayer J., Larsson M., Lee A. et al. Mature dendritic cells infected with canarypox virus elicit strong anti-human immunodeficiency virus CD8+ and CD4+ T-cell responses from chronically infected individuals // J. Virol. -2001. - 75. - 2142-53.
26. Erkel A. Pattynama P. Receiver operating characteristic (ROC) analysis: basic principles and applications in radiology // Eur. J. Radiol. - 1998. - 27. - P. 88.
27. Eynde B.J., Bruggen P. T cell defined tumor antigens // Curr. Opin. Immunol. - 1997. - 9(5). - 684-93.
28. Fay J.W., Ueno H., Connolly J. et al. Durable clinical responses in patients with metastatic melanoma vaccinated with dendritic cells loaded with killed allogeneic melanoma cells // American Society of Clinical Oncology. - 2006. - 24 (18S). - 2576 (Abstract).
29. Fay J., Palucka A., Paczesny S. et al. Long-term outcomes in patients with metastatic melanoma vaccinated with melanoma peptide-pulsed CD34+ progenitor-derived dendritic cells // Cancer Immunol. Immunother. -2005. - 6. - P. 1-10.
30. Fields R., Shimizu K., Mule J. Murine dendritic cells pulsed with whole tumor lysates mediate potent antitumor immune responses in vitro and in vivo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1998. - 95. - P. 9482-7.
31. Fong L., Engleman E. Dendritic cells in cancer immunotherapy // Annu. Rev. Immunol. - 2000. - 18. - P. 245-73.
32. Fong L., Brockstedt D., Benike C. et al. Dendritic cells injected via different routes induce immunity in cancer patients // J. Immunol. - 2001. - 166. - P. 4254-9.
33. Fujii S., Shimizu K., Smith C. et al. Activation of natural killer T cells by a-galactosylceramide rapidly induces the full maturation of dendritic cells in vivo and thereby acts as an adjuvant for combined CD4 and CD8 T cell immunity to a coadministered protein // J. Exp. Med.
- 2003. - 198. - P. 267-79.
34. Goldszmid R., Idoyaga J., Bravo A. et al. Dendritic cells charged with apoptotic tumor cells induce long-lived protective CD4+ and CD8+ T cell immunity against B16 melanoma // J. Immunol. - 2003. - 171. - P. 5940-7.
35. Griffioen M., Borghi M., Schrier P. et al. Detection and quantification of CD8+ T cells specific for HLA-A*0201 -binding melanoma and viral peptides by the IFN-y-ELISPOT assay // Int. J. Cancer. - 2001. - 93. - P. 549-55.
36. Guo H., Stoffel-Wagner B. Clinical significance of serum analyses of S100beta protein in malignant melanoma // Eur. J. Cancer. - 1995. - 31A. - P. 924-8.
37. Haluska F., Linette G., Jonasch E. et al. Immunologic gene therapy of melanoma: phase I study of therapy with autologous dendritic cells transduced with recombinant adenoviruses encoding melanoma antigens // Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. - 2000. - 19. - 453a (abstr).
38. Hanagiri T., Baren N., Neyns B. et al. Analysis of one of the rare melanoma patients with a spontaneous CTL response to a MAGE-A3 peptide presented by HLA-A1 // Cancer Immunol Immunother. - 2006. - 55(2). - P. 178-84.
39. Hauschild A., Michaelsen J., Brenner W. et al. Prognostic significance of serum S100B detection compared with routine blood parameters in advanced metastatic melanoma patients // Melanoma Res. - 1999. - 9. -P. 155-61.
40. Heiser A., Coleman D., Dannull J. et al. Autologous dendritic cells transfected with prostate specific antigen RNA stimulate CTL responses against metastatic prostate tumors // J. Clin. Invest. - 2002. - 109. - P. 409-17.
41. Henze G., Dummer R., Joller-Jemelka H. et al. Serum S100 - a marker for disease monitoring in metastatic melanoma // Dermatology. - 1997. - 194. - P. 208-12.
42. Hermans I., Ritchie D., Yang J. et al. CD8+ T cell-dependent elimination of dendritic cells in vivo limits the induction of antitumor immunity // J. Immunol. -2000. - 164. - P. 3095-101.
43. Hermans I., Daish A. Tumor-peptide-pulsed dendritic cells isolated from spleen or cultured in vitro from bone marrow precursors can provide protection against tumor challenge // Cancer Immunol. Immunother. - 1997.
- 44(6). - P. 341-7.
44. Hermans I., Silk J., Gileadi U. et al. NKT cells enhance CD4+ and CD8+ T cell responses to soluble antigen in vivo through direct interaction with dendritic cells // J. Immunol. - 2003. - 171. - P. 5140-7.
45. Hersey P., Menzies S., Halliday G. et al. Phase I/II study of treatment with dendritic cell vaccines in pa-
tients with disseminated melanoma // Cancer Immunol. Immunother. - 2004. - 53. - P. 125-34.
46. Holland-Frei. Cancer Medicine 6th edition: by Donald W., Kufe M. et al. - April 2003. - P. 3291-4
47. Houghton N., Gold J., Blachere N. et al. Immunity against cancer: lessons learned from melanoma. // Curr. Opin. Immunol. - 2001. - 13(2). - P. 134-40.
48. Hu X., Chakraborty N., Sporn J. et al. Enhancement of cytolytic T lymphocyte precursor frequency in melanoma patients following immunization with the MAGE-1 peptide loaded antigen presenting cell-based vaccine // Cancer Res. - 1996. - 56. - P. 2479-83.
49. Ishikawa A., Motohashi Sh., Ishikawa E. et al. Phase I Study of a-galcer (KRN7000) - Pulsed Dendritic Cells in Patients with Advanced and Recurrent NonSmall Cell Lung Cancer // Clin. Cancer Research. - 2005.
- 11. - P. 1910-7.
50. Janeway Ch. Immunobiology 5E: The immune system in health and disease. - Garland Publising, 2001. -P. 307-9.
51. Jonuleit H., Giesecke-Tuettenberg A., Tüting T. et al. A comparison of two types of dendritic cell as adjuvants for the induction of melanoma-specific T-cell responses in humans following intranodal injection // Int. J. Cancer. - 2001. - 93. - P. 243-51
52. Jonuleit H., Kuhn U., Müller G. et al. Pro-inflammatory cytokines and prostaglandins induce maturation of potent immunostimulatory dendritic cells under fetal calf serum-free conditions // Eur.J. Immunol. - 1997. -.27. - P. 3135-42
53. Jonuleit H, Schmitt E. The regulatory T cell family: distinct subsets and their interrelations // J Immunol. -
2003. - 171. - P. 6323-7.
54. Jonuleit H., Schmitt E., Schuler G. et al. Induction of interleukin 10-producing, nonproliferating CD4(+) T cells with regulatory properties by repetitive stimulation with allogeneic immature human dendritic cells // J. Exp. Med. - 2000. - 192. - P. 1213-22
55. Jury CS, McAllister E., Mackie R. et al. Rising levels of serum S100 protein precede other evidence of disease progression in patients with malignant melanoma // Br. J. Dermatol. - 2000. - 143. -P. 269-74.
56. Kaskel P., Berking C., Sander S. et al. S-100 protein in peripheral blood: a marker for melanoma metasta-ses: a prospective 2-center study of 570 patients with melanoma // J Am Acad Dermatol. - 1999. - 41. -P. 962-9.
57. Kikuchi A., Nieda M., Schmidt C. et al. In vitro antitumour activity of a-galcer stimulated human invariant Valpha24+ NKT cells against melanoma // Br. J. Cancer. - 2001. - 85. - P. 741-6.
58. Kopp E., Medzhitov R. Recognition of microbial infection by Toll-like receptors // Curr. Opin. Immunol. -
2003. - 15. - P. 396-401.
59. Langerhans P. Über die Nerven der menschlichen Haut // Virchows Arch. - 1868. - 44. - P. 325-37
60. Lapointe R., Royal R., Reeves M. et al. Retrovirally transduced human dendritic cells can generate T cells recognizing multiple MHC class I and class II epi-
topes from the melanoma antigen glycoprotein 100 // J. Immunol. - 2001. - 167. - P. 4758-64.
61. Leslie D., Vincent M., Spada F. et al. CD1-mediated y/8 T cell maturation of dendritic cells // J. Exp. Med. - 2002. - 196. - P. 1575-84.
62. Lonchay C., Bruggen P., Connerotte T. et al. Correlation between tumor regression and T cell responses in melanoma patients vaccinated with a MAGE antigen // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2004. -101(Suppl. 2). - P. 14631-8.
63. Lotze M., Shurin M., Esche C. et al. Interleukin-2: developing additional cytokine gene therapies using fibroblasts or dendritic cells to enhance tumor immunity // Cancer J. Sci. Am. - 2000. - 6 Suppl 1. - S61-6.
64. Ludewig B., Odermatt B., Landmann S. et al. Dendritic cells induce autoimmune diabetes and maintain disease via de novo formation of local lymphoid tissue // J. Exp. Med. - 1998. - 188. - P. 1493-1501.
65. Mackensen A., Herbst B. Chen J. et al. Phase I study in melanoma patients of a vaccine with peptide-pulsed dendritic cells generated in vitro from CD34(+) hematopoietic progenitor cells // Int. J. Cancer. - 2000. -
86. - P. 385-92.
66. Maraskovsky E., Daro E., Roux E. et al. In vivo generation of human dendritic cell subsets by Flt3 ligand // Blood. - 2000. - 96. - P. 878-84.
67. Mcllroy D., Gregoire M. Optimizing dendritic cell-based anticancer immunotherapy: maturation state does have clinical impact // Cancer Immunol. Immunother. - 2003. - 52(10). - P. 583-91.
68. Morton D., Barth A. Vaccine Therapy for Malignant Melanoma // CA Cancer J. Clin. - 1996. - 46(4). - P. 225-44.
69. Morse M., Coleman R., Akabani G. et al. Migration of human dendritic cells after injection in patients with metastatic malignancies // Cancer Res. - 1999. - 59.
- P. 56-8.
70. Motohashi S., Kobayashi S. Preserved IFN-gamma production of circulating Va24+ NKT cells in primary lung cancer patients // Int. J. Cancer. - 2002. -
102. - P. 159.
71. Mukherji B., Chakraborty N., Yamasaki S. et al. Induction of antigen-specific cytolytic T cells in situ in human melanoma by immunization with synthetic peptide-pulsed autologous antigen presenting cells // Proc. Natl. Acad. Sci. - 1995. - 9. - P. 8078-82.
72. Nair S., Snyder D. Rouse B., et al. Regression of tumors in mice vaccinated with professional antigen-presenting cells pulsed with tumor extracts // Int. J. Cancer. - 1997. - 70(6). - P. 706-15.
73. Nakagawa R., Motoki K., Ueno H. et al. Treatment of hepatic metastasis of the colon-26 adenocarcinoma with an alpha-galactosylceramide, KRN7000 // Cancer Res. - 1998. - 58. - P. 1202-7.
74. Lewis N., Louis M. Weiner. The Cancer Handbook (Translational research (Overview of phase I, II and
III clinical trials)). 102. - P. 1569-77.
75. Nestle F., Alijagic S., Gilliet M. et al. Vaccination of melanoma patients with peptide- or tumor lysate
pulsed dendritic cells // Nat. Med. - 1998. - 4. - P. 328-32.
76. Nestle F., Farkas A., Conrad C. Dendritic-cell-based therapeutic vaccination against // Current Opinion in Immunology. - 2005. - 17. - P. 163-9.
77. Nieda M., Nicol A., Koezuka Y. et al. TRAIL expression by activated human CD4(+) V alpha 24+ NKT cells induces in vitro and in vivo apoptosis of human acute myeloid leukemia cells // Blood. - 2001. - 97. - P. 2067-74.
78. Nishimura T., Kitamura H., Iwakabe K. et al. The interface between innate and acquired immunity: gly-colipid antigen presentation by CD1d-expressing dendritic cells to NKT cell induces the differentiation of antigen-specific cytotoxic T-lymphocytes // Int. Immunol. -2000.
- 12. - P. 987-94.
79. O’Neill D., Adams S., Bhardwaj N. Manipulating dendritic cell biology for the active immunotherapy of cancer // Blood. - 2004. - 104(8). - P. 2235-46.
80. O’Rourke M., Johnson M., Lanagan C. et al. Durable complete clinical responses in a phase I/II trial using an autologous melanoma cell/dendritic cell vaccine // Cancer Immunol. Immunother. - 2003. - 52. - P. 387-95.
81. Osanto S. Vaccine Trials for the Clinician: Prospects for Tumor Antigens // The Oncologist. - 1997. - 2.
- P. 284-99
82. Ostrowski M., Justement S., Ehler L. et al. The role of CD4_ T cell help and CD40 ligand in the in vitro expansion of HIV-1-specific memory cytotoxic CD8+ T cell responses // J. Immunol. - 2000. - 165. - P. 6133-41.
83. Palucka A., Dhodapkar M., Paczesny S. et al. Boosting vaccinations with peptide-pulsed CD34+ progenitor-derived dendritic cells can expand long-lived melanoma peptide-specific CD8+ T cells in patients with metastatic melanoma // J. Immunother. - 2005. - 28(2). -P. 158-68.
84. Palucka A., Ueno H., Connolly J. et al. Dendritic cells loaded with killed allogeneic melanoma cells can induce objective clinical responses and MART-1 specific CD8+ T-cell immunity // J. Immunother. - 2006. - 29(5).
- P. 545-57.
85. Pasare C., Medzhitov R. Toll pathway-dependent blockade of CD4+CD25+ T cell-mediated suppression by dendritic cells // Science. - 2003. - 299. - P. 1033-6.
86. Quillien V., Moisan A., Carsin A. et al. Biodistribution of radiolabelled human dendritic cells injected by various routes // Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. -2005. - 32(7). - P. 731-41.
87. Ridge J., Di Rosa F., Matzinger P. et al. A conditioned dendritic cell can be a temporal bridge between a CD4+ T-helper and a T-killer cell // Nature. - 1998. -393. - P. 474-8.
88. Ridgway D. The First 1000 Dendritic Cell Vac-cinees // Cancer Investigation. - 2003. - 21(6). - P. 873-86.
89. Ridolfi R., Petrini M., Fiammenghi L. et al. Improved overall survival in dendritic cell vaccination-induced immunoreactive subgroup of advanced melanoma patients // Journal of Translational Medicine. - 2006. - 4.
- P. 36.
90. Roncarolo M., Levings M., Traversari C. Differentiation of T regulatory cells by immature dendritic cells // J. Exp. Med. - 2001. - 193. - F5-F9.
91. Rosenberg S., Yang. J, Restifo P. Cancer immunotherapy: moving beyond current vaccines // Nat. Med. -
2004. - 10(9). - P. 909-15.
92. Rosenberg S. Cancer immunotherapy comes of age // Nat. Clin. Pract. Oncol. - 2005. - 2(3). - P. 115.
93. Ruggero R., Riccobon A., Galassi R. et al. Evaluation of in vivo labelled dendritic cell migration in cancer patients // Journal of Translational Medicine. -
2004. - 2. - P. 27.
94. Salcedo M., Bercovici N., Taylor R. et al. Vaccination of melanoma patients using dendritic cells loaded with an allogeneic tumor cell lysate // Cancer Immunol. Immunother. - 2006. - 55. - P. 819-29.
95. Sallusto F., Lanzavecchia A. Efficient presentation of soluble antigen by cultured human dendritic cells is maintained by granulocyte/macrophage colony-stimulating factor plus interleukin-4 and downregulated by tumor necrosis factor alpha // J. Exp. Med. - 1994. -179. - P. 1109-18.
96. Schoenberger S., Toes R., Ellen I. et al. T-cell help for cytotoxic T lymphocytes is mediated by CD40-CD40L interactions // Nature. - 1998. - 393. - 480-3.
97. Schrama D., Pederson L., Keikavoussi P. et al. Aggregation of antigen-specific T cells at the inoculation site of mature dendritic cells // J. Invest. Dermatol. -2002. - 119. - P. 1443-8.
98. Schuler G., Schuler-Thurner B., Steinman R. The use of dendritic cells in cancer immunotherapy // Curr. Opin. Immunol. - 2003. - 15(2). - P. 138-47.
99. Schultz E., Diepgen T. Clinical and prognostic relevance of serum S-100 beta protein in malignant melanoma // Br. J. Dermatol. - 1998. - 138. - P. 426-30.
100. Steinman R, Hemmi H. Dendritic cells: translating innate to adaptive immunity // Curr. Top. Microbiol. Immunol. - 2006. - 311. - P. 17-58.
101. Steinman R., Cohn Z. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice I. morphology, quantitation, tissue distribution - IV. Identification and distribution in mouse spleen // Journal of experimental medicine. - 1973-1975. - P. 137-41.
102. Strunk D., Rappersberger K., Egger C. et al. Generationof human dendritic cells/Langerhans cells from circulating CD34+ hematopoietic progenitor cells // Blood. - 1996. - 87. - P. 1292-1302.
103. Thurner B., Haendle I. Vaccination with mage-3A1 peptide-pulsed mature, monocyte-derived dendritic cells expands specific cytotoxic T cells and induces regression of some metastases in advanced stage IV melanoma // J. Exp. Med. - 1999. - 190(11). - P. 1669-78.
104. Thurner B., Roder C. Generation of large numbers of fully mature and stable dendritic cells from leu-kapheresis products for clinical application // J. Immunol. Methods. - 1999. - 223. - P. 1-15.
105. Toungouz M., Libin M., Bulte F. et al. Transient expansion of peptide-specific lymphocytes producing IFN-gamma after vaccination with dendritic cells pulsed with
MAGE peptides in patients with mage-A1/A3-positive tumors // J. Leukoc. Biol. - 2001. - 69(6). - 937-43.
106. Toura I., Kawano T., Akutsu Y. et al. Cutting edge: inhibition of experimental tumor metastasis by dendritic cells pulsed with alpha-galactosylceramide // J. Immunol. - 1999. - 163. - P. 2387-91.
107. Tozer R., McCulloch P. Vaccination with autologous CD34+ derived dendritic cells transduced with an adenovirus expressing human gp100 in patients with metastatic melanoma // Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. - 2002.
- 21 (abstr 1407).
108. Vieweg J., Coleman D., Maurice M. et al. Immunotherapy of prostate cancer using dendritic cells transfected with PSA RNA: results of a phase I trial // Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. - 2001. - 20. - 251a (abstr).
109. Vincent M., Leslie D., Gumperz J. et al. CD1-dependent dendritic cell instruction // Nat. Immunol. -2002. - 3. - P. 1163-8.
110. Vries I., Bernsen M., Lesterhuis W. et al. Immu-nomonitoring tumor-specific T cells in delayed-type hypersensitivity skin biopsies after dendritic cell vaccination correlates with clinical outcome // J. Clin. Oncol. - 2005.
- 23(24). - P. 5779-87.
111. Vries I., Krooshoop D., Scharenborg N. et al. Effective migration of antigen-pulsed dendritic cells to lymph nodes in melanoma patients is determined by their maturation state // Cancer Res. - 2003.
- 63. - P.12-7.
112. Vries I., Lesterhuis W. Maturation of dendritic cells is a prerequisite for inducing immune responses in advanced melanoma patients // Clin. Cancer Res. - 2003.
- 9(14). - P. 5091-100.
113. Waeckerle-Men Y., Scandella E., Allmen E. et al. Phenotype and functional analysis of human monocyte-derived dendritic cells loaded with biodegradable poly (lactide-co-glycolide) microspheres for immunotherapy // J. Immunol. Methods. - 2004. - 287. - P. 109-24.
114. Zinkernagel R., Hengartner H. On immunity against infections and vaccines: credo 2004 // Scand J Immunol. - 2004. -60(1-2). - P. 9-13.
115. Zippelius A., Pittet M., Batard P. et al. Thymic selection generates a large T-cell pool recognizing a selfpeptide in humans // J. Exp. Med. - 2002. - 195(4). - P. 485-94.
116. Zitvogel L., Mayordomo J., Tjandrawan T. et al. Therapy of murine tumors with tumor peptide-pulsed dendritic cells: dependence on T cells, B7 costimulation, and T helper cell 1-associated cytokines // J. Exp. Med. -1996. - 183(1). - P. 87-97.
117. Zorn E, Hercend T. A MAGE-6-encoded peptide is recognized by expanded lymphocytes infiltrating a spontaneously regressing human primary melanoma lesion. // Eur. J.Immunol. - 1999. - 29. - P. 602-7.
118. http://www.clinicaltrial.gov/
Поступила 11.12.2006.
