CC BY
18
НАРОДНЫЙ КОМИССАРИАТ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР
ГИГИЕНА и -САНИТАРИЯ
Отв. редактор А. Я. КУЗНЕЦОВ, Зам. отв. ред. Н. А. БАРАН, С. И. КАПЛУН Члени редколлегии-. Г. А. БАТКИС, Ф. Е. БУДАГЯН, А. В. \ЮЛЬКОВ, Н. А. СЕМАШКО, А. Н. СЫСИН, Т. Я. ТКАЧЕВ Отв. секретари: Р. М. БРЕЙ НИ НА, Ц. Д. ПИК
1943 8-й год издания № / "fU
С
_АЯЬИАЯ"Л flSOW! I 4tA<4t4**L* ЫИ*»* - A I '
Л«мм. (' WM Mllpi mil I { Проф. M. К. КРОНТОВСКАЯ
_ _с» e p ■ 1
Вакцинация против сыпного тифа
Из отдела риккетснозов ЦИЭМ ^/S ^ ^ '
Само собой разумеется, что основной профилактикой сыпного тифа является проведение твердо установленных санитарно-гигиенических мероприятий. Однако это вовсе не снимает вопроса о возможности эффективного использования (в некоторых случаях для уменьшения опасности заражения, а в других — для облегчения течения заболевания) и активной иммунизации. »
Правильное разрешение вопроса о 'вакцинации против сыпного тифа надолго затормозилось после безуспешных попыток применять убитые вакцины из органов морских свинок, больных сыпным тифом. Николль пришел к выводу, что постоянный и прочный иммунитет появляется лишь в результате перенесенной инфекции. Исходя из этой установки, Николль и Легре, а также Блан предложили в 1934 г. метод иммунизации живым, «о ослабленным вирусом. Этот метод был широко использован для целей, иммунизации учениками Николля во время эпидемических вспышек сыпного тифа среди туземного населения в Алжире, Тунисе и Марокко (Легре, Дюран, Бэльфор и Лафошер, Блан и Бальтазар) и расположенных там европейских гарнизонов. Они применяли живой вирус, обработанный in vitro желчью или предварительно высушенный и эмульгированный в желтке и прованском масле.
По данным указанных авторов, во всех очагах вакцинация останавливала вспышки примерно в две недели, а при госпитализации — еще быстрее.
Несмотря на бесспорную эффективность вакцины Николля и его учеников, применение ее на людях опасно и должно считаться неприемлемым, так как вирус в ней остается живым. Действительно, согласно указаниям Блана и Бальтазара, эта вакцина вызывала заболевания как среди туземного населения, так и среди европейцев. Кроме того, по сообщению Суареца, применение данной вакцины в Чили закончилось весьма трагически: из 550 вакцинированных заболело 227 и умерло 5.
Поэтому понятно, что в лабораториях всех стран не прекращались поиски метода, который обеспечил бы получение препарата не только эффективного, но практически приемлемого.
С тех пор как риккетсии Провачека были признаны возбудителями исторического сь пного тифа, делались многочисленные попытки культивирования их как in vivo, так и in vitro для приготовления вакцины. Не останавливаясь на громадной литературе по этому вопросу, укажу лишь на некоторые способы получения риккетсии Провачека "в достаточных для приготовления вакцины количествах.
Вши, естественные передатчики сыпного тифа, представляют собой среду, где риккетсии сильно размножаются (по данным Вейгля, один кишечник зараженной сыпным тифом вши содержит от 10 до 100 млн. риккетсий). Исходя из этого, Вейгль разработал методику искусственного заражения вшей вирусом сыпного тифа путем введения его при помощи клизм. Такой метод применим не только для пассирования вируса, но и в целях получения материала для изготовления убитой фенолом вакцины. Последняя является уже всемирно признанной я апробированной. Она широко .применялась в Польше, Китае и Абиссинии (Вейгль, Герциг, Мозивг, Магомед Шагин Паша, Марианн и др.), сообщая напряженный иммунитет и не вызывая сильных реакций. Однако метод получения этой вакцины чрезвычайно сложен, кропотлив и поэтому не может быть использован в широком масштабе. Вследствие этого в течение ряда последних лет в различных лабораториях проводились многочисленные исследования для изыскания других, более простых методов. ,
Риккетсия Провачека, будучи облигатным паразитом, не может быть культивирована на искусственных питательных средах. Поэтому после опубликования данных, полученных прл культивировании вируса сыпного тифа при помощи метода культуры тканей (Кронтовский и Гах, Кучинский), открылась новая возможность для получения и накопления риккетсий.
Ряд исследователей (Кронтовская, Савицкая, Солитерман и Швед-кова-Роше, Левкович и Зак, Нигг и Ландштейнер, Пинкертон и Гесс, Клиглер и Ашнер и др.), используя методику культивирования тканей для получения риккетсий in vitro, доказал, что в культурах происходит значительное размножение риккетсий. Кроме того, по их данным, вакцина, приготовленная из культур, обработанных фенолом или формалином, способна предохранять морских свинок от заражения сыпным тифом.
Таким образом, было доказано, что можно создать активный иммунитет и при сыпным тифе путем применения убитых вакцин, приготовленных в достаточно большом количестве из риккетсий Провачека. Однако возможность широкого применения полученной таким образом вакцины ограничивалась некоторой сложностью методики культивирования тканей.
После того как был разрешен ряд принципиально весьма важных эпидемиологических вопросов (об этиологической роли риккетсий Провачека, о возможности получения активного иммунитета при сыпном тифе путем применения убитых вакцин), многие исследователи снова начали поиски метода, обеспечивающего накопление риккетсий в количествах, достаточных для массового изготовления вакцины. С 1939 г. стали появляться работы о массовом культивировании риккетсий Провачека in vivo в ряде органов: в желточной оболочке куриного зародыша (Кокс и Бэлл), в легких мышей, крыс и кроликов (Кастанеда), в оболочках яичка морских свинок (Кронтовская и Савицкая, Вейнтемил-лас).
В результате серии проведенных мной совместно с Савицкой исследований в 1940 г. был предложен оригинальный метод накопления риккетсий Провачека in vivo в tunica vaginalis морских свинок. Нам удалось показать, что и при так называемом «историческом» сыпном тифе
(можно вызывать у морских свинок скрбтальный феномен (Нейль-Мусс-ра) с явлением экссудата между обоими листками оболочек яичка к при наличии большого количества риккетсий Провачека, находимых как внутри-, так и внеклеточно. При этом выяснилось, ч'то приготовленная из данного материала, обработанного формалином, вакцина способна вызвать напряженный иммунитет как у животных, так и у людей (Крон-товская и Савицкая, Кронтовская, Савицкая и Яременко).
После того уже как наша вакцина была апробирована НКЗдравом СССР, появилась работа Дюрана и Спарро, которым удалось, применяя метод массового введения риккетсий (путем интраназального заражения), вызывать у белых мышей экспериментальную специфическую пневмонию с накоплением, большого количества риккетсий Провачека в клетках легких и вне их. Так как этот способ экономически выгоднее нашего, мы решили использовать в лаборатории экспериментальные данные учеников Николля для разработки метода, обеспечивающего возможность изготовления вакцины в массовом масштабе.
Настоящая работа проведена коллективом лаборатории в очень короткое время. Экспериментальная часть на мышах и морских свинках проведена Маевоким, испытание вакцины на добровольцах и в небольшом эпидемиологическом опыте — мной, Савицкой, Солитерман и Бочаровой, клинические наблюдения — Билибиным.
Нами был выделен штамм вируса сыпного тифа на белых мышах путем заражения их материалом, полученным из смыва tunica vaginalis морских свинок, у которых по разработанному нами прежде методу был вызван скротальный феномен и было обнаружено в экссудате громадное количество риккетсий Провачека.
Полученный таким образом материал вводился мышам под эфирным наркозом интраназально. На 5—6-е сутки у них развивается специфическая пневмония. В легких появляются отдельные опеченевшие участки доли или же легкое опеченевает полностью. В мазках, приготовленных из соскобов, надрезов либо из поверхности пораженных участков и окрашенных по Гимза, Кастанеда или Маккиавелло, обнаружено очень много риккетсий, расположенных главным образом внеклеточно.
К этому времени у мышей появляются внешние признаки заболевания: взъерошенная шерсть, тяжелое, учащенное дыхание, светобоязнь, скачкообразные движения и резко выраженная гипотермия (кончик хвоста наощуль холодный). Измерение температуры при помощи термопары показывает резкое падение ее. В то время как у здоровых мышей температура колеблется в пределах нескольких* десятых градуса, при заболевании она сразу падает на 1—2°, а в отдельных случаях даже на 3—4°.
Для дальнейших пассажей и приготовления вакцины мы отбирали на основании измерения температуры или внешних проявлений больных мышей, которые затем убивались при помощи глубокого эфирного наркоза. После этого мыши вскрывались и у них" асептично извлекались легкие. По окончании микроскопического исследования отбирались легкие животных с большим количеством внеклеточных риккетсий, но без посторонних микробов. Часть легких шла на изготовление эмульсии, которой заражались мыши для йоддержания штамма пассажами от одного животного к другому, а из остальных приготовлялась вакцина. Эмульсия из растертых легких с добавлением формалинизированного (0,2%) физиологического раствора подвергалась дробному центрифугированию, в результате чего получалась взвесь из чистых отмытых риккетсий Провачека. Разведенная по стандарту физиологическим раствором с тем ¿ке процентом формалина, эта суспензия риккетсий и является вакциной. Пятисуточное выдерживание ее с формалином вполне до-
статочно для уничтожения всех риккетсин, что нами доказано на мирских свинках и опытами катафореза. »
Иммунологическая эффективность вакцины была испытана «а морских свинках. Свинки вакцинировались подкожно троекратно с интервалами в 5 дней дозами 0,5, 1 и 1 см8. Спустя месяц животные испы-тывались на иммунитет путем внутрибрюшинного введения им больших доз (100 инфекционных единиц) вирулентного мозга морской свинки, причем 87% свинок оказались полностью иммунными.
Для выяснения реактивности и безвредности вакцины одновременно с опытами на морских свинках было провакцинировано 12 сотрудников нашей лаборатории. Вакцина вводилась подкожно троекратно через 5 дней по 0,5, 1 и 1 см3. У всех вакцинированных спустя 24 часа наблюдалась местная реакция (гиперемия, инфильтрат и болезненность), обычно угасавшая уже через 48 часов. Общая реакция — разбитость, головная боль, повышение температуры на 1—2°—отмечалась у 3 сотрудников также в первые 24 часа после инъекции.
Для изучения серологической эффективности вакцины было провакцинировано -1 12 добровольцев" ранее не болевших сыпным тифом. До вакцинации, спустя 2 недели, а также через 1 и 3 месяца у вакцинированных бралась кровь и проводился ряд исследований: на наличие агглютининов с риккетсиями Провачека (реакция Вейгля), агглютининов к Proteus Xi» (реакция Вейль-Феликса), связывающих комплемент антител (по методу Иоффе), нейтрализующих вирус антител (по Бальта-зару и Жиру) и опсонинов (по Кастанеда). В результате в крови вакцинированных были обнаружены все специфические антитела, причем нарастание их отмечалось уже к концу- второй недели после вакцинации, к концу же третьего месяца титр их оставался без изменений или несколько снижался.
Гуморальные факторы не являются .точным отражением того имму-нобиолагического состояния организма, которым он защищается от инфекции. Так, по данным Цинсера и Бэтчельдера, нейтрализующие вирусы антитела сохраняются в организме не более 3 недель, титр пара-агглютининов к Proteus Хю (Фитцпатрик и Гэмпилл) начинает резко снижаться к концу первого месяца после перенесенной инфекции. Тем не менее известно, что напряженный иммунитет обычно более длителен и длительность его зависит, повидимому, от резистентности ткани, а не от циркулирующих в крови антител. Все же нужно считать, что агглютинины к риккетсиям, нейтрализующие .вирус антитела, комплементсвя-зывающие антитела, опсонияы и лизины,являются строго специфичными и принимают также активное участие в механизме защиты организма от инфекции сыпного тифа. Поэтому на основании количественных сдвигов указанных антител в сыворотке вакцинированных можно судить о том или ином профилактическом препарате как о полноценном антителе.
По результатам опытов на морских свинках и проведенных серологических исследований у людей можно считать, что изготовленная нами вакщина представляет собой вызывающий незначительные местные и общие реакции несомненно безвредный препарат, эффективность которого выражается в значительном нарастании специфических антител в сыворотке вакцинированных.
Эпидемиологическими наблюдениями над очень ограниченной группой лиц, провакцинированных 3 месяца назад, проверена иммунологическая эффективность вакцины. Эта группа состояла из 17 одновременно провакцинированщых человек и контрольной группы в 5 лиц, не вакцинированных и никогда не болевших сыпным тифом. Все они по условиям работы находились в совершенно одинаковой обстановке и
подвергались значительной опасности заражения сыпным тифом вследствие повседневного контакта с сыпнотифозным вирусом.
Все заболевшие, находились под особым наблюдением с самого момента заражения. Тщательные клинические исследования, проведенные в течение всего периода от начала внедрения инфекции (эпидемиологическим анализом точно устанавливался день инфекции) и до полного выздоровления, позволяют считать, что заболевания у привитых'резко отличались по ряду клинических признаков от заболеваний у непривитых. У невакцинированных они протекали в форме сыпного тифа средней тяжести с наличием всех кардинальных его -признаков, как-то: status typhosus, обильная розеолезно-петехиальная сыпь, жестокие головные боли, бессознательное состояние с бредом, осложнения в форме пневмонии и бронхитов с длительной постепенной реконвалесценцией. Заболевания же у вакцинированных характеризовались сглаженностью всех симптомов, начиная со значительного удлинения инкубационного периода (вплоть до 23 дней). Лихорадочный период был короче по сравнению с заболеванием у непривитых на 5 суток. Сыпь, весьма редкая розеолезная, ни разу не переходила в петехиальную. Status typhosus отмечен только в одном случае. Потери соАания, бреда и осложнений не было ни разу. Общее состояние больных за весь период болезни оставалось хорошим, головная боль отсутствовала, потери аппетита не наблюдалось. С падением температуры быстро восстанавливались силы и работоспособность.
Таким образом, можно считать, что сыпной тиф у вакцинированных протекал в стертой, митигярованной форме. Исследование реакции Вейль-Феликса в динамике показало нарастание титров у обеих групп заболевших: и вакцинированных, и невакцинированных.
Итак, мы можем притти к выводу, что разработанный нами метод получения больших количеств риккетсий Прова чека в легких белых мышей для массового приготовления вакцины прост, доступен и может быть освоен любой лабораторией. Полученная вакцина создает у животных напряженный иммунитет. Серологические исследования, проведенные у большой группы людей, указывают на появление специфических антител в сыворотке вакцинированных.
В настоящее время еще нельзя сказать, насколько вакцинация снижает процент заболеваемости,— это покажут в будущем результаты больших эпидемиологических наблюдений, проведенных на десятках тысяч лиц. Но даже наблюдавшееся нами снижение заболеваемости, появление легких и стертых форм тифа говорят о происходящих в организме специфических иммунобиологических сдвигах, которые вызываются введением вакцины. Здесь уместно напомнить, что все прививки, которые в настоящее время широко приняты при различных заболеваниях, дают свое отражение в клинике протекания инфекции (прививки против брюшного тифа, дизентерии, дифтерии,« столбняка и т. д.); если же в течение заболевания у привитых не наблюдается никаких отклонений от нормы, то и в эпидемиологическом отношении эффективность, таких прививок остается спорной.
ЛИТЕРАТУРА 4
1. Иоффе В., ЖЛЭИ, 1940 —2. К р о н т о в с к а я íM. и Савицкая К. ЖМЭИ (в печати).—3. Кронтовская Л>„ Савицкая К. и Я р е м е н к о В. ЖМЭИ (в печати).—4. Baltazard М., Bull. de la Soc. path. exot., 31, 186, 1938—
5. BelfordJ. ei'LafaucheurJf., Arch. de l'Inst. Pssteur de Tunis, 26, 453, 1937-
6. Blanc G. et Baltazard M., Revue d'Hvg., 61,593,1939—1940,—7. Castañeda R., iourn. of Infect. Dis., 47, 416, 1930,— 8. Castañeda R., J. of Immunol., 31,227. 1936,—9, С a s t a n e d a R., Amer. Journ. of Path., 16, ,467, 1939. 10. Coi H. and BellJ., Publ. Health Rep., 55,110, ¡940.- 11. Durand p. et Spairow H., Arch. de l'Inst. Pasteur de Tunis, 29, 1, 1940.— 12. F i t z p a t г I с 1: F. ánd H a m p i 1 1 В., Amer.
Journ. of Publ. Health, 31, 1301, 1941.— 13. Giroud P., Bull, de la Soc. de Path, exot., 31, 245, 1938.— 14. Herzig A., Presse med., 30, 571, 1939.—15. Macchia-vello A., Zbl. f. Bakter. Rep., 139, 291, 1941.—16. Mariani G., Ann. d'Hyg., p. 316, 1939,— 17. Mohamed Shahin Pacha, Office Intern. d'Hyg. Publ., 27, 481, 1935.— 18. Mo sing H„ Med. Dosw. i Spot., 23, 213, 1938.— 19. Z I n s s e r H. and Batchel-der, Journ. exper. Med., 51, 847, 1930.— 20. V e i n t e m i 11 a s F., J. of Immunol., 36, 339, 1939.
Проф. В. А. БАШЕНИН, М- А. ЗЕРЧ АНИНОВА, E. M. СКРИПОВ A
Опыт организации прививок против сыпного тифа
Из Центральной научно-исследовательской лаборатории гигиены и эпидемиологии
НКПС
Борьба^ € классическим вшивым сыпным тифом основана на санитарных мероприятиях и ¡при правильном их проведении всегда приводит к успешному результату. Однако иногда для тех групп населения, которые по роду своей деятельности неизбежно соприкасаются с сыпно-ч тифозной инфекцией, показана также искусственная иммунизация; во всяком случае, эффективная вакцина будет положительным иммуно-генным фактором.
История вакцинации против сыпного тифа начинается с применения гретой крови сыпнотифозных больных, что у нас практиковалось в период гражданской войны, - но ни в СССР, ни за границей этот метод не оправдал надежд эпидемиологов.
Применение в качестве вакцины мозга морских свинок, зараженных сыпнотифозным вирусом, не дало положительных результатов на людях. Когда был окончательно разрешен вопрос о риккетсиях как возбудителе сыпного тифа, многие исследователи стали Сработать над изысканием возможностей вакцинации. Предложенный Вейглем метод иммунизации посредством убитой 5"/о фенолом вакцины из кишечников вшей, искусственно зараженных сыпным тифом, оказался достаточно эффективным. Однако уже самая сложность приготовления вакцины (150 вшей составляют доЗу для одного прививаемого) не позволила сделать этот метод массовым. Использование риккетсий в культурах тканей, естественно, также не может иметь существенного практического значения.
Цинсеру и Кастанеда удалось добиться размножения риккетсий * эндемического * сыпного тифа в брюшной полости морских свинок и белых крыс, а также дальнейшего использования смытого физиологическим раствором и обработанного формалином' заразного начала для вакцинации людей.
Работы советски^ микробиологов (ом. статью проф. Кронтоаской) были основаны на другом' методе, дающем возможность поставить производство сыпнотифозной вакцины на практическую почву, организовав прививки в широком масштабе.
Настоящая статья 'излагает результаты первого опыта применения на железнодорожниках в целях иммунизации против сыпного тифа вакцины, приготовленной в Центральном институте эпидемиологии и микробиологии НКЗдрава СССР проф. Кронтовской.
При выборе контингентов для прививок (пока еще в порядке изучения эффективности последних) мы остановились на тех группах, которые в силу своего постоянного общения с потоками пассажиров наиболее подвержены опасности заражения сыпным тифом. Было отобрано 4 группы: 1) проводники поездов дальнего и ближнего следования; 2) работники вокзалов (носильщики, перронные контролеры, уборщики вокзальных помещений); 3) железнодорожная милиция; 4) медицинские и санитарные работники вокзальных участков.
Весь период вакцинации (трехкратной), считая промежутки между прививками в 5—7 дней, продолжается 12—15 дней. Если принять, по аналогии с подкожными прививками против брюшного тифа, срок наступления иммунитета через 2 недели по окончании вакцинации, то для
