CC BY
80
7) толщина скорлупы увеличилась на 3,2-13 %; прочность - 6,8-35,6 %;
содержание белка - 2,2-9,1 %. При этом влага яиц изменилась незначительно.
* * *
Добавка к корму пасечной мервы, гумата калия и натрия оказывает положительное влияние на продуктивность, биохимические и особенно на биофизические свойства яиц. Повышение биофизических свойств положительно повлияло на снижение боя и насечки яиц, как при сборе, так и при их транспортировке.
УРОВЕНЬ НСТ-ТЕСТА В КРОВИ КРУПНОГО
РОГАТОГО СКОТА ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ВОСПАЛЕНИИ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ
© Надеин К.А.*
Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины,
г. Санкт-Петербург
Произведено исследование НСТ-теста в крови клинически здоровых и животных с хроническим воспалением соединительной ткани. Выявлено достоверное увеличение НСТ-теста у больных коров, что говорит об активное вовлечение нейтрофилов в воспалительный процесс.
Соединительная ткань (СТ) - один из четырех главных типов тканей организма животных и человека. Данный вид ткани включает в себя клетки и межклеточное вещество. Межклеточное вещество состоит из коллагеновых, эластических, ретикулярных волокон и основного вещества - бесструктурного вещества с большим количеством мукополисахаридов. СТ выполняют опорную функцию, защитную (механическую) функцию (плотная волокнистая соединительная ткань, хрящ, кость), трофическую (питательную) функции (рыхлая волокнистая и ретикулярная соединительная ткань, кровь и лимфа). В организме она выполняет механическую, трофическую, защитную, пластическую функции [1], а также структурно - образовательную, репара-тивную, гомеостатическую, регуляторную, транспортную функцию [2].
Наиболее часто в ветеринарной практике встречаются диффузные болезни соединительной ткани (ДБСТ или старое название - коллагенозы). Эта группа заболеваний, характеризующаяся системным поражением соединительной ткани, в том числе волокон, содержащих коллаген. Выраженность основных клинических и морфологических проявлений коллагенозов при различных коллагеновых заболеваниях может широко варьировать [4]. Все болезни этой группы характеризуются воспалением различных органов и
* Старший преподаватель кафедры Оперативной хирургии, кандидат ветеринарных наук.
тканей и прежде всего СТ, развитием аутоиммунных и иммунокомплексных процессов, избыточным образованием фиброзной ткани. У крупного рогатого скота преимущественно поражается голеностопный (тарсальный) сустав. Особенно часто данная патология наблюдается у животных с высокой молочной продуктивностью, что ведёт к значительному экономическому ущербу
При повреждении ткани нейтрофилы первыми концентрируются в зоне воспаления, и проникая через стенку кровеносного сосуда, выходят в экст-равазальное пространство. В нём скапливается значительное количество нейтрофилов, мигрирующие клетки подвергаются активации, секретируя комплекс эффекторных молекул. Именно сочетание этих факторов предопределяет деструктивный оттенок миграции нейтрофилов в очаг формирующегося воспаления, а также повреждение эндотелиоцитов и базальной мембраны. Накопление нейтрофилов в очаге воспаления и освобождение ими указанных биологически активных веществ вызывают гибель или ограничение жизнедеятельности микроорганизмов, разрушение и лизис омертвевших тканей, очищение зоны повреждения. За счет нейтрофилов вокруг очага воспаления формируется нейтрофильный защитный барьер, который отграничивает зону повреждения (совместно с моноцитарным и фибробла-стическим) от здоровой ткани и препятствует распространению инфекции и токсических повреждающих факторов [1].
По наблюдениям ряда ученых при стимуляции нейтрофилов резко возрастают энергетические затраты, потребляется цитоплазматический резерв гликогена и отмечается его перераспределение в сторону зон, прилегающих к псевдоподиям [10]. Нейтрофильным лейкоцитам принадлежит важная роль в поддержании неспецифической резистентности организма и в кооперации многих функций иммунной системы. Это явилось основанием для сравнительного исследования фагоцитарной активности нейтрофилов у больных и клинически здоровых животных. Для оценки функционального состояния нейтрофильных лейкоцитов был использован спонтанный НСТ-тест, позволяющий выявить наличие метаболических изменений, возникающих в поли-нуклеарных лейкоцитах при различных патологических состояниях
Материалом является кровь крупного рогатого скота, полученная от больных - опытная группа (30 голов) и здоровых - контрольная группа (30 голов) животных, подобранных по принципу аналогов.
НСТ-тест определяли по методу B.N. Park et al. в модификации М.Д. Ви-лушкиной (1981). Его сущность состоит в способности активированных лейкоцитов крови к восстановлению бесцветного красителя нитросинего тетразолия (НСТ) в нерастворимый диформазан тёмно-синего цвета в процессе фагоцитоза под влиянием лизосомального фермента НАДФ-оксидазы. Приготовление раствора красителя НСТ: 0,2 %-ный раствор красителя готовят растворением 200 мг сухого вещества в 100 мл изотонического раствора хлорида натрия, рН = 7,2. Хранят в холодильнике. В реакции используют краситель тетразолий нитросиний фирма «Serva» (Heidelberg / New York).
Смесь равных объёмов лейковзвеси или гепаринизированной крови и 0,2 %-ного водного раствора красителя нитросинего тетразолия инкубируют в пробирке в термостате при 37 °С с увлажнением в течение 20 мин. Делают мазки, высушивают и фиксируют спирт-формалиновым раствором (1:9). Промывают, высушивают и докрашивают ядра клеток 0,1 %-ным водным раствором красителя нейтрального красного в течение 15 мин. Для до-краски ядер может быть также использован 2 %-ный раствор метилового зелёного или сафронина (10 мин.).
Мазки оценивают в иммерсионной системе микроскопа. Подсчитывают 100 нейтрофильных гранулоцитов, обращая внимание на содержание глыбок восстановленного красителя тёмно-синего цвета внутри клеток и наличие голубоватого окрашивания по периферии клетки (признак «респираторного взрыва»).
Количественный результат пробы определяется процентом нейтрофи-лов из 100 клеток, содержащих гранулы восстановленного диформазана (НСТ-позитивные клетки).
Среди 100 клеток подсчитывали долю активированных нейтрофилов (ДАН, %), содержащих гранулы диформазана. По количеству отложившегося в клетках диформазана оценивали их активность в условных единицах и рассчитывали индекс активации нейтрофилов (ИАН) [1]:
ИАН = (0 х Н0 + 1 х Н1 + 2 х Н2 + 3 х Н3) / 100
где Н0, Н1, Н2, Н3 (%) - количество нейтрофилов с активностью 0, 1, 2 и 3 балла соответственно.
При этом субпопуляцию нейтрофилов Нк составляют клетки Н0 (неактивированные Нк) и Н3 (активированные Нк, Нка), а Нс - Н1 и Н2.
При исследовании выявлено достоверное (р < 0,05) увеличение НСТ -теста у коров с хроническим бурситом (у клинически здоровых животных 0,33 ± 0,01у.е., 0,46 ± 0,01у. е. - у больных). Полученные данные говорят о том, что характеризует активное вовлечение нейтрофилов в воспалительный процесс.
Цитохимические методы изучения спонтанного НСТ-теста позволяет на клеточном уровне выявить состояние неспецифической реактивности организма, а также определить механизмы функционирования активности нейтрофильных лейкоцитов при хроническом воспалении у животных. Эти данные необходимы для выбора тактики лечения больных животных.
Список литературы:
1. Ахмалетдинов А.С. Некоторые аспекты изучения становления соединительнотканных структур // Микроциркуляторное русло соединительнотканных образований: сб. научн. трудов. - Уфа, 1988. - С. 42-49.
2. Виноградов В.В. Системные реакции соединительной ткани в процессе индивидуальных и видовых адаптаций. // Физиология и патология
соединительной ткани: тезисы докладов V Всесоюзной конференции (г. Новосибирск 14-18 октября 1980 г.,). Т. 1. - С. 9-11.
3. Бережная Н.М. Нейтрофилы и иммунологический гомеостаз. - Киев: Наук.думка, 1988. - 187 с.
4. Кармолиев Р.Х. Клинико-биохимическая оценка патологических процессов в организме животных. - М.: МГАВМиБ, 1997. - 49 с.
5. Герасимов И.Г. Функциональная неоднородность нейтрофилов // Клин. лаб. диагн. - 2006. - № 2. - С. 34-36.
6. Долгушин И.И., Зурочка А.В., Чукичев А.В. Роль нейтрофилов в регуляции иммунной реактивности и репаративных реакций поврежденной ткани // Вестн. Рос. ак. наук. - 2000. - № 2. - С. 14-19.
7. Маянский А.Н., Невмятуллин А.Л., Маянский Н.А. Проблемы управления фагоцитарными механизмами иммунитета // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1995. - № 3. - С. 21-26.
8. Мищенко В.А., Мищенко А.В. Болезни конечностей у высокопродуктивных коров // Вет. патол. - 2007. - № 2. - С. 138-143.
9. Потапнев М.П. Цитокиновая сеть нейтрофилов при воспалении // Иммунология. - 1995. - № 4. - С. 34-40.
