CC BY
63
УДК 618.2/3:616.3-008.6:618.36:616-07:57.086.3 Иванов И.И., Загорулько А.К., Прочая E.H. УЛЬТРАСТРУКТУРНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПЛАЦЕНТЫ ПРИ ПРЕЗКЛАМПСИИ БЕРЕМЕННЫХ
ГУ «Крымский государственный медицинский университет им. С.И. Георгиевского», г. Симферополь, Украша
Преэклампсия беременных является одной из ведущих причин материнской и перинатальной смертности. Целью нашего исследования явилось изучить ультраструктурные изменения в тканях плацент родильниц с преэклампсией различной степени тяжести. Материалом для морфологических исследований явились взятые по стандартной методике фрагменты плацент, изученные в последующем методом трансмиссионной электронной микроскопии. Выявлено, что наиболее выраженные и необратимые изменения в ультраструктурной организации элементов, входящих в состав плацентарных ворсин, происходят при преэклампсии тяжёлой степени. При преэклампсии лёгкой и средней степени изменения в плаценте носят обратимый характер, следовательно, могут быть коррегированы путём назначения адекватной терапии.
Ключевые слова: беременность, преэклампсия, плацента, электронная микроскопия, морфология.
Материалы и методы исследования
Для определения изменений морфологической структуры проведены патоморфологиче-ские исследования 70 плацент. Из них 25 составили плаценты соматически здоровых родильниц, вошедших в контрольную группу. 20 плацент были взяты у женщин, у которых к моменту родоразрешения клинико-лабораторная картина соответствовала преэклампсии лёгкой степени, 15 - средней и 10 плацент - у пациенток с тяжёлой степенью преэклампсии.
Оценка степени тяжести преэклампсии проводилась согласно приказу МОЗ Украины №676 от 31.12.2004 года «Об утверждении клинических протоколов по акушерской и гинекологической помощи» в разделе «Гипертензивные расстройства во время беременности». Пациентки исследуемых групп сопоставимы по возрасту, паритету и данным акушерско-гинекологического анамнеза.
Материалом для морфологических исследований явились взятые по стандартной методике фрагменты плацент. Кусочки брали из макроскопически неизменённых очагов плаценты. Образцы фиксировали в 2,5% растворе глюта-ральдегида на фосфатном буфере (pH 7,4). Постфиксацию исследуемой ткани проводили 1% раствором четырехокиси осмия (0s04) на 1 час на холоде (+4°С), после чего проводили дегидратацию в серии этиловых спиртов возрастающей концентрации и ацетоне и заливали в смесь эпона и аралдита (эпоксидную смолу Эпон-812). Полутонкие срезы (1 мкм) изготавливали на ультратоме УМПТ-7 (Украина), окрашивали метиленовой синью и просматривали в световом микроскопе для ориентировочного определения характера материала. После этого на том же ультратоме изготавливали тонкие срезы (30-60 нм), которые после окраски по Рейнольдсу просматривали и фотографировали на электронных микроскопах ПЭМ-100 (Украина) на пленку «KODAK» при увеличении от 1000 до 30000.
* Публикация соответствует научной теме кафедры акушерства и гинекологии №2 ГУ «Крымский государственный медицинский университет им. С.И. Георгиевского» «Профилактика и лечение акушерской, экстрагенитальной и гинекологической патологии женщин» (№ гос. регистрации 0110и002967)
Несмотря на достижения современной медицины, преэклампсия беременных попрежнему является одной из ведущих причин материнской и перинатальной смертности [2, 3, 6]. Удельный вес преэклампсии в структуре осложнений беременности колеблется от 10,1% до 20,0%, а среди причин материнской и перинатальной смертности составляет соответственно 21,3% и 12,1% [4].
Анализируя многочисленные публикации, по-свящённые проблеме преэклампсии, до сегодняшнего времени не существует единственного мнения относительно этиопатогенеза данного осложнения беременности. Сам факт большого количества исследований по данной проблеме лишь указывает на фактическое отсутствие единой концепции развития данной патологии. Однако неоспоримым можно считать утверждение, что клинико-лабораторная картина, развивающаяся при преэклампсии, является результатом сложных, взаимообусловленных процессов в системе мать-плацента-плод.
Согласно одной из ведущих теорий, при беременности, осложнённой преэклампсией, характерно отсутствие или неполное вторжение трофобласта в область спиральных артерий, что приводит к сужению их просвета и последующему развитию плацентарной ишемии. На фоне нарушения кровотока развивается гипоксия, являющаяся причиной развития эндотели-альной дисфункции и деструктивных изменений в маточно-плацентарном комплексе [1, 5, 7]. В связи с этим возникает необходимость более детального изучения морфологических особенностей в тканях плаценты на фоне преэклампсии для выявления дополнительных патогенетических критериев развития данного осложнения беременности и последующего усовершенствования тактики ведения беременных с преэклампсией с целью уменьшения количества осложнений для матери и плода.
Цель исследования: изучить ультраструктурные изменения в тканях плацент родильниц с преэклампсией различной степени тяжести.
Лктуи.п.н i проблемы сучасно!' медицины
Результаты и их обсуждение В контрольной группе терминальные ворсины плаценты включают в себя следующие слои: синцитиотрофобласт, представленный соответствующими клетками, в том числе многоядерными, цитотрофобласт, базальная мембрана, соединительнотканная строма и эндотелиоциты фетальных капилляров.
Ядра синцитиотрофобластов, как правило, имеют неправильную форму с умеренным количеством гетерохроматина, частично сконденсированного по периферии кариоплазмы (рис. 1).
■мяиимиюа^.. ШЙДДИ
шшшшшшяввявш
Рис. 1. Ядра (Я) синцитиотрофобласта неправильной формы с частичной конденсацией гетерохроматина по периферии кариоплазмы.
ТЭМ. Ув. 4000.
В цитоплазме клеток характерно наличие большого числа профилей канальцев гранулярной цитоплазматической сети и множественных преимущественно мелких митохондрий с умеренно плотным матриксом и плотно упакованными параллельными кристами. Встречаются также единичные полисомы и рибосомы. Наиболее характерной особенностью ультраструктуры описываемых клеток является присутствие на их поверхности большого количества микроворсинок, количество которых в разных клетках колеблется в широких пределах.
Достаточно часто синцитиотрофобласт контактирует с клетками цитотрофобласта (клетками Лангганса), в которых имеются признаки умеренной функциональной активности: равномерное распределение эухроматина по кариоплазме, присутствие мелких митохондрий обычного вида, а также профилей канальцев гранулярной цитоплазматической сети, рибосом и полисом. Базальная мембрана, как правило, выражена четко и имеет ясные ровные контуры.
Среди капилляров ворсин встречаются как полнокровные, так и запустевшие сосуды в равной степени. Эндотелиальные клетки имеют обычный характерный для них вид, то есть вытянутой формы ядро с умеренным количеством хроматина, частично сконденсированного вблизи кариолеммы, комплекс хорошо развитых внутриклеточных органелл, сосредоточенных в центральной части клеток вблизи ядра, и длинные цитоплазматические отростки, распространяющиеся во все стороны по собственной ба-
зальной мембране и соприкасающиеся между собой в виде плотных межклеточных контактов по типу fascia occudens.
В соединительнотканной строме отмечается наличие рыхлой неоформленной соединительной ткани и небольшое количество хаотично расположенных и переплетающихся между собой коллагеновых волокон различной степени зрелости.
В плацентах родильниц с преэклампсией лёгкой степени со стороны клеток синцитиотрофобласта отмечаются явления слабо выраженного интрацеллюлярного отека, проявляющиеся в очаговых просветлениях цитоплазмы и расширении части профилей канальцев гранулярной цитоплазматической сети, которые нередко сливаются между собой. Апикальная поверхность синцитиотрофобластов выглядит сглаженной, а на ее поверхности уменьшается количество микроворсинок, отмечается их укорочение и снижение извилистости. Среди синцитиотрофобластов незначительно увеличивается количество многоядерных клеток. При этом и в одноядерных, и в многоядерных клетках ядра имеют преимущественно неправильную, слегка фестончатую форму с частичной конденсацией глыбчатого гетерохроматина по периферии кариоплазмы.
Базальная мембрана выглядит четкой и имеет ясные контуры. Сосуды ворсин в подавляющем большинстве резко полнокровны и расширены. При этом наполняющие их эритроциты нередко склеиваются между собой, что может свидетельствовать в пользу развития сладж-синдрома.
Со стороны прилегающих к сосудам клеток цитотрофобласта отмечаются признаки умеренной функциональной активности на фоне слабо выраженного внутриклеточного отека. Это выражается в очаговых просветлениях цитоплазмы, расширении профилей канальцев цитоплазматической сети, просветлении матрикса митохондрий без нарушения параллельности расположения и целостности крист. В ядрах клеток содержится обычное количество гетерохроматина, частично конденсированного вблизи кариолеммы.
Со стороны эндотелия сосудов отмечаются явления разрыхления межклеточных контактов, из-за чего проницаемость сосудистой стенки повышается, чем, повидимому, можно объяснить наличие эритроцитов, располагающихся пери-васкулярно, а также их появление вблизи поверхности клеток цитотрофобласта (рис. 2).
Определенные изменения имеют место в строме ворсин, где происходит разрастание неоформленной соединительной ткани, а также отмечается увеличение числа фибробластов, активно синтезирующих новообразованные кол-лагеновые волокна.
ШШИШ^Ш!
liilir :3aaljl|l|l|ilfi!-r:-» ......in......11|||11ИИ
Рис. 2. Полнокровие сосудов ворсины и появление эритроцитов (Э) на поверхности синцитиотрофобласта (СТБ).
ТЭМ. Ув. 1600.
При преэклампсии средней степени тяжести явления интрацеллюлярного отека в синцитио-трофобласте и клетках цитотрофобласта выражены в еще большей степени. Несмотря на то, что ядра этих клеток сохраняют характерное для них строение с умеренной конденсацией ге-терохроматина по периферии ядра, в цитоплазме отмечается тотальное расширение профилей канальцев гранулярной цитоплазматической сети, которые, часто сливаясь между собой, образуют причудливую сеть вакуолеподобных об-разсьлтм ^йс. 31.
Рис. 3. Повсеместное расширение профилей канальцев гранулярной цитоплазматической сети (ГЦС) в цитоплазме синцитиотрофобласта (Я - ядро). ТЭМ. Ув. 6400.
На апикальной поверхности клеток продолжает уменьшаться количество микроворсинок, что сопровождается их редукцией и снижением извилистости.
Обращает на себя внимание еще большее увеличение числа многоядерных клеток, со стороны ядер которых отмечаются весьма характерные изменения. В частности, во многих клетках в тесно прилегающих друг к другу ядрах, хроматин которых характеризуется резкой конденсацией, отмечаются лакунообразные, лишенные хроматина просветления различной формы и размеров, что, по нашему мнению, может указывать на развитие в этих клетках процессов дистрофического и деструктивного (кариорексис и кариолизис) характера.
Следует также отметить, что нередко между
клетками синцитиотрофобласта и цитотрофобласта появляются широкие стромальные соединительнотканные прослойки, что может свидетельствовать в пользу еще большей активизации процессов коллагенообразования в строме ворсин.
Подавляющее большинство сосудов ворсин попрежнему выглядят полнокровными, нередко с явлениями, указывающими на развитие сладж-синдрома. При этом со стороны эндоте-лиоцитов не отмечается более или менее существенных изменений ультраструктурной организации, за исключением сохраняющегося расширения межклеточных контактов и конденсации ядерного хроматина вблизи ядерной мембраны.
Вместе с тем нельзя не отметить, что в этой группе на поверхности ряда ворсин удавалось обнаружить участки без синцитиотрофобласта и цитотрофобласта, в которых под базальной мембраной обнаруживались признаки интенсивного коллагенообразования.
При преэклампсии тяжёлой степени в клетках синцитиотрофобласта и цитотрофобласта отмечаются резко выраженные признаки дистрофических и деструктивных изменений ультраструктуры. Это выражается в потере цитоплазмой гомогенности цитозоля, из-за чего в нем появляются участки различной электронно-оптической плотности. Происходит повсеместное расширение профилей канальцев гранулярной цитоплазматической сети (рис. 4), в связи с чем 1:ГРТ-:и П Л>с::ретл=ст ::П:3 М1.-СТЫ.1:: .Орлмтер.
ПК
_ [III.
Рис. 4. Повсеместное расширение профилей канальцев гранулярной цитоплазматической сети (ГЦС) в синцитиотрофобласте при преэклампсии тяжёлой степени. ТЭМ. Ув. 6400.
На апикальной поверхности синцитиотрофоб-ластов отмечаются повсеместная десквамация микроворсинок с их фрагментацией и деструкцией, что нередко является результатом разрушения апикальной плазмалеммы с выходом внутриклеточных органелл и цитоплазматиче-ского золя в окружающее пространство. Почти повсеместно по поверхности дистрофически и деструктивно измененных трофобластических клеток отмечаются наложения сгустков крови. Часть сосудов в ворсинах выглядит запустевшей, часть - полнокровной.
Выраженные изменения происходят в эндо-
Лктуи.п.н i проблеми сучасно!" медицини
телиальных клетках сосудов. В частности, в большинстве из них на фоне частичного или полного отслоения от собственной базальной мембраны отмечается появление фибриллярных структур, по-видимому, белкового характера, что свидетельствует о развитии в них глубоких дистрофических процессов по типу гиалино-во-капельной дистрофии. Во многих сосудах ворсин отмечается гибель эндотелиоцитов с развитием процессов восстановительного характера, которые, в частности, выражаются в появлении клеток кубической формы, стремящихся заполнить дефекты в эндотелиальной выстилке. Такие «юные» эндотелиоциты, как правило, имеют неправильной формы ядро с уменьшенным количеством хроматина, конденсированного по периферии кариолеммы и цитоплазму умеренной электронно-оптической плотности с небольшим количеством внутриклеточных органелл.
В строме плацентарных ворсин при тяжёлой степени преэклампсии по-прежнему отмечаются интенсивные процессы новообразования соединительной ткани.
Таким образом, основываясь на полученных в результате проведенных исследований данных, можно утверждать, что патогенетическим субстратом негативных процессов, происходящих в системе мать-плацента-плод при преэклампсии, является плацента, а выраженность морфологических изменений в ней соответствует определённой степени тяжести данного осложнения беременности.
Выводы
1. Наиболее существенные и большей частью необратимые изменения в ультраструктурной организации элементов, входящих в состав плацентарных ворсин, происходят при преэклампсии тяжёлой степени. В конечном итоге эти изменения приводят к гибели ворсин, что является причиной снижения плацентарных функций.
2. Изменения ультраструктуры при преэклам-
Реферат
УЛЬТРАСТРУКТУРН! ЗМ1НИ ПЛАЦЕНТИ ПРИ ПРЕЕКЛАМПСИ ВАГ1ТНИХ 1ванов I.I., Загорулько O.K., Прочан О.М.
Ключов1 слова: ваптнють, прееклампая, плацента, електронна м1кроскошя, морфолопя.
Прееклампая ваптних е одыею з провщних причин материнськоТ та перинатально'!' смертность Метою нашого дослщження було вивчити ультраструктурш змши в тканинах плацент породть з преек-лампаею р1зного ступеня тяжкосп. Матер1алом для морфолопчних дослщжень служили узят1 за стандартною методикою фрагменти плацент, вивчеш в подальшому методом трансмюшноТ електронноТ MiKpocKoni'i'. Виявлено, що найбтьш виражеш та необоротш змши в ультраструктурнш оргашзаци еле-мент1в, що входять до складу плацентарних ворсин, вщбуваються при прееклампси тяжкого ступеня. При прееклампси легкого i середнього ступеню змши в плацент! мають оборотний характер, отже, мо-жуть бути кориговаш шляхом призначення адекватно'!' терапи.
псии средней степени тяжести носят мозаичный и лишь частично необратимый характер, следовательно, могут быть корригированы соответствующими лечебными мероприятиями.
3. При преэклампсии лёгкой степени нарушения в ультраструктурной организации компонентов ворсин носят преимущественно реактивный характер и могут быть легко устранены, не отразившись существенным негативным образом на функциях плаценты.
Перспективы дальнейших исследований
Выявленная зависимость между выраженностью деструктивных изменений в плаценте и степенью тяжести преэклампсии диктует необходимость разработки и проведения лечебно-профилактических мероприятий, направленных на восстановление маточно-плацентарно-плодового кровотока и улучшение исходов для новорожденных и матерей.
Литература
1. Айламазян Э.К. Гестоз: теория и практика / Айламазян Э.К., Мозговая Е.В. // М.: МЕДпресс-информ, 2008. - 272 с.
2. Баев O.P. Профилактика и лечение нарушений в системе гемостаза при гестозе / O.P. Баев, A.A. Чурганова // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. - 2008. - Т. 7, № 5. -С. 59-67.
3. Белокриницкая Т.Е. Роль вазоактивных веществ в формировании нарушений в фетоплацентарной системе у пациенток с ге-стозами / Т.Е. Белокриницкая, Ю.А. Битковский, Е.В. Казанцева // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. - 2006. -Т. 5, №1,-С. 56-60.
4. Бипвська Л.А. Визначення фактора Бтлебранта з метою про-гнозування тяжкосп прееклампси у ваптних групи ризику // Проблемы, достижения и перспективы развития медико-биологических наук и практического здравоохранения : сборник трудов Крымского государственного медицинского университет им. С.И. Георгиевского. - 2007. - Т. 143, Ч. III. - С. 35-37.
5. Климов В.А. Стадии эндотелиальной дисфункции в фетопла-центарном комплексе при осложнённом течении беременности / В.А. Климов // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. - 2008. - Т. 7, №4. - С. 25-28.
6. Кулида Л.В. Клиническое значение плацентарных факторов в генезе перинатальной патологии при беременности, осложненной гестозом / Л.В. Кулида, И.А. Панова, Л.П. Перетятко // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. - 2007. - Т. 7, №2.-С. 25-28.
7. Сидорова И.С. Роль нейроспецифических белков плода в развитии гестоза / И.С. Сидорова, Т.Б. Дмитриева, В.П. Чехонин [и др.] // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. -2005.-Т. 4, №3.
Summary
ULTRASTRUCTURAL PLACENTAL CHANGES IN PREECLAMPSIA Ivanov 1.1., Zagorulko A.K., Prochan E.N.
Key words: pregnancy, preeclampsia, placenta, electronic microscopy, morphology.
Preeclampsia is among the main causes of maternal and perinatal mortality. The purpose of our research is to study ultrastructural changes in placental tissues of women with different severity of preeclampsia. The material for morphological study was placental fragments taken according to standard techniques and then studied by transmission electronic microscopy method. It was revealed the most expressed and irreversible changes of ultrastructural organization of elements composing placental cilia occurred in severe preeclampsia. In cases of either mild or moderate preeclampsia placental changes are reversible, and, consequently, may be corrected with the adequate therapy.
УДК: 616-001.17-092.9:612.017.1
Звягинцева Т.В., Кривошапка A.B., Миронченко С.И. ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ЦИТОКИНЫ В РАЗВИТИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ОЖОГА
Харьковский национальный медицинский университет, Украина
Показано, что течение раневого процесса у крыс с термическим ожогом характеризовалось повышением уровня провоспалителъных цитокинов в сыворотке крови - ИЛ-lß на протяжении 3-х недель наблюдения, ИЛ-8 и ФНО-а в течение всего времени наблюдения (28 суток), что свидетельствует о хронизации процесса, удержании раневого процесса в стадии персистирующего воспаления.
Ключевые слова: провоспалительные цитокины, ожоговая рана, раневой процесс В связи с повышением частоты возникнове- ожога.
ния ожогов и смертности пациентов актуальной для комбустиологии остается проблема лечения ожогов [1]. Выявление механизмов, ответственных за дисфункцию иммунной системы после ожоговой травмы, имеет важное значение для разработки более совершенных методов лечения [2].
Развитие воспалительных и репаративных процессов в ране обусловлено функционированием и взаимодействием разных видов клеток. Активность и последовательность клеточного состава раны отражают как скорость ее заживления, так и направленность раневых процессов [3]. На сегодняшний день в регуляции процессов заживления ключевую роль отводят межклеточным взаимодействиям, которые реализуются с помощью цитокинов [4]. Цитокины регулируют все последовательные этапы развития воспаления и иммунного ответа. Усиление продукции провоспалительных цитокинов (хемокинов, ФНО-а, ИЛ-1 (3, ИЛ-6, фибринопептидов, кини-нов и др.) является необходимым в начальных фазах воспаления и носит патологический характер, если их активация сохраняется в течение всего заболевания [5].
Однако исследований, посвященных изучению продукции цитокинов в динамике формирования и заживления раны вследствие термического ожога, проведено недостаточно.
Поэтому целью настоящего исследования явилось изучение провоспалительных цитокинов в динамике развития экспериментального
Материалы и методы
Эксперименты по моделированию ожогов выполнены на 30 крысах популяции WAG массой 200-250 г. На выстриженном участке спины под барбамиловым наркозом вызывали термический ожог площадью 400мм2 [6]. Для этого использовали прибор с установленной температурной шкалой и электропаяльником, на конце которого крепится съемная металлическая насадка [6]. Время экспозиции нагретой до 200°С контактной пластинки составляло 10 сек. При соблюдении этих условий ожог кожи у крыс соответствовал IIIA степени клинической классификации ожогов. Данный метод позволяет получить стандартные по площади и глубине всей толщи кожи ожоги. Наблюдения за процессами заживления ожоговых ран проводили на 3, 7, 14, 21, 28 сутки. В эти сроки регистрировали состояние раны и проводили измерение ее площади [6]. О темпах заживления судили по скорости уменьшения раневой поверхности, которую вычисляли по формуле [7]:
(S-Sn )
v = -
-хЮО
где V - скорость уменьшения раневой поверхности
Б - площадь раны при предыдущем измерении
Бп - площадь раны в день измерения Об общем состоянии экспериментальных животных судили на основании поведенческих ре-
* «Создание, изучение и патогенетическое обоснование применения новых комбинированных лекарственных средств и лекарственных средств политропного действия», государственный регистрационный номер 010911001748
